CN116003649A - 一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，包括先准备试验所需要的材料，并对材料进行处理，之后采用热水浸提法提取偏翅唐松草多糖，再利用单因素试验和正交试验对影响偏翅唐松草多糖提取率的四个影响因素进行对比研究，并以多糖提取率为参考指标，其中四个影响因素分别为料液比、提取时间、提取温度和提取次数，继而得出最佳提取工艺，再根据最佳提取工艺进行偏翅唐松草多糖提取，之后并进行抗氧化活性分析，分析出不同浓度多糖溶液对DPPH的清除能力，为偏翅唐松草多糖的药理学活性研究提供数据支持。
Description
技术领域
本发明涉及偏翅唐松草多糖提取技术领域，尤其涉及一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法。
背景技术
偏翅唐松草是四川、云南和西藏地区的一种唐松草，毛茛科唐松草属植物，清热燥湿，降火解毒，偏翅唐松草根及根茎短细，直径约1cm，表面褐色，有一层褐色的纤维，木质的中心部分是淡黄色，味道苦涩，主要用于治疗湿热泻痢、黄疸、白带、风火牙痛、眼睛红肿等。多于春秋两季挖采，清洗其身上泥沙，除去苗和茎后入药。具有多种化学成分，各有不同功效，如多糖，具有抗病毒、抗肿瘤降血糖、降血压、调节免疫力等功效，是偏翅唐松草的重要活性物质之一。
现阶段常用的植物多糖提取方法有水提醇沉、酸碱浸提、离子交换等方法，这些方法各有优劣，如酶辅助法提取条件温和，可明显提高植物成分的提取效率，但成本较高，微波辅助法能够提升释放多糖的速度，但超声作用时间过长会导致多糖的降分解，影响提取效率，因此本发明提出一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法以解决现有技术中存在的问题。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提出一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，该种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法具有成本低、制备效率高的优点，解决现有技术中存在的问题。
为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案实现：一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，包括以下步骤：
步骤一：将采集的偏翅唐松草进行风干，再通过粉碎机对风干后的偏翅唐松草进行粉碎，制得偏翅唐松草粉末，再准备提取实验相关的化学试剂，其中化学试剂包括葡萄糖标准品、苯酚、硫酸、无水乙醇、DPPH和甲醇；
步骤二：称取试验所需的葡萄糖标准品放入容器中，加入纯水并搅拌，直至完全溶解，得到葡萄糖溶液，再吸取不同容量的溶液，分别滴加于试管中，再依次滴加苯酚溶液和硫酸，之后轻微振荡混匀，制得混合溶液；
步骤三：将混合溶液通过水浴锅进行水浴，水浴后进行自然冷却，冷却后再取各试管中混合溶液置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪测定吸光度，根据测定的吸光度以及各试管中葡萄糖不同浓度值绘制标准曲线；
步骤四：称取试验所需的偏翅唐松草粉末放入容器中，加入纯水，再利用水浴锅进行反复浸提，在多次浸提后收集浸提液并进行过滤，之后使用旋蒸仪将滤液浓缩，再加入乙醇进行混合，混合均匀后静置，待多糖沉降后，进行离心，之后再将沉降物经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖粗提物；
步骤五：采用苯酚硫酸法进行偏翅唐松草多糖的含量测定；
步骤六：进行单因素试验，并以多糖提取率为参考指标，采用水提醇沉法研究料液比、提取时间、提取温度和提取次数四个影响因素对偏翅唐松草多糖提取率的影响，并利用正交设计试验优化偏翅唐松草多糖提取工艺。
进一步改进在于：所述步骤一中，对制得的偏翅唐松草粉末通过干燥机进行干燥。
进一步改进在于：所述步骤四中，在水浴锅内单次浸提时间为30-60min。
进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
在多组不同料液比(1：20，1：30，1：40，1：50，1：60)的条件下，80℃煎煮2次，每次70min，滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，温度80℃时分别煎煮30min、50min、70min、90min、110min，2次水煎，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖，测定不同煎煮时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，单次煎煮时间为70min时，将煎煮温度设置为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，煎煮2次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，水煎温度为80℃，单次煎煮时间为70min，分别提取1、2、3、4、5次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
进一步改进在于：所述步骤六中，以单因素试验结果为依据，选取最佳的单因素水平作为正交设计试验的优化条件，在此基础上采用正交表进行正交设计试验，通过对正交试验的结果进行分析，筛选出最佳提取条件。
一种翅唐松草多糖的抗氧化活性分析方法，包括以下步骤：
S1：取试验所需的偏翅唐松草多糖，分别配制20、40、60、80、100、120mg/mL偏翅唐松草多糖溶液；
S2：称取2mgDPPH粉末，再加入40mL无水乙醇摇匀配制为0.5mg/mL的DPPH溶液；
S3：吸取100μL不同浓度的偏翅唐松草多糖提取液于96孔细胞培养板中，向其中加入100μLDPPH溶液，其中空白对照组以100μL纯水替代，之后将96孔型细胞培养板放于37℃避光条件下30min，结束后于酶标仪517nm处测定光密度OD值；
S4：测定空白对照在517nm处的光密度OD，测定不同浓度多糖溶液在517nm处的光密度OD0，测定DPPH溶液在517nm处的光密度OD1，再根据如下公式计算出不同浓度多糖溶液对DPPH的清除能力：
本发明的有益效果为：该种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法操作简单，成本低，通过热水浸提法提取偏翅唐松草多糖，采用单因素试验和正交试验对影响偏翅唐松草多糖提取率的四个影响因素进行对比研究，得出最佳提取工艺，再根据最佳提取工艺进行偏翅唐松草多糖提取并进行抗氧化活性分析，继而确保了偏翅唐松草多糖的提取效率，同时，抗氧化活性分析结果可为偏翅唐松草多糖的药理学活性研究提供数据支持。
附图说明
图1是本发明的流程示意图。
图2是本发明的葡萄糖浓度标准曲线示意图。
图3是本发明的不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响示意图。
图4是本发明的不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响示意图。
图5是本发明的不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响示意图。
图6是本发明的不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响示意图。
图7是本发明的偏翅唐松草多糖对于DPPH自由基的清除作用示意图。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明做进一步详述，本实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
实施例一
根据图1所示，本实施例提出了一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，包括以下步骤：
步骤一：将采集的偏翅唐松草进行风干，再通过粉碎机对风干后的偏翅唐松草进行粉碎，制得偏翅唐松草粉末，并对制得的偏翅唐松草粉末通过干燥机进行干燥，再准备提取实验相关的化学试剂，其中化学试剂包括葡萄糖标准品、苯酚、硫酸、无水乙醇、DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)和甲醇；
步骤二：称取试验所需的葡萄糖标准品放入容器中，加入纯水并搅拌，直至完全溶解，得到葡萄糖溶液，再吸取不同容量的溶液，分别滴加于试管中，再依次滴加苯酚溶液和硫酸，之后轻微振荡混匀，制得混合溶液；
步骤三：将混合溶液通过水浴锅进行水浴，水浴后进行自然冷却，冷却后再取各试管中混合溶液置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪测定吸光度，根据测定的吸光度以及各试管中葡萄糖不同浓度值绘制标准曲线；
步骤四：称取试验所需的偏翅唐松草粉末放入容器中，加入纯水，再利用水浴锅进行反复浸提，在多次浸提后收集浸提液并进行过滤，之后使用旋蒸仪将滤液浓缩，再加入乙醇进行混合，混合均匀后静置，待多糖沉降后，进行离心，之后再将沉降物经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖粗提物，其中在水浴锅内单次浸提时间为30-60min。
步骤五：采用苯酚硫酸法进行偏翅唐松草多糖的含量测定；
步骤六：进行单因素试验，并以多糖提取率为参考指标，采用水提醇沉法研究料液比、提取时间、提取温度和提取次数四个影响因素对偏翅唐松草多糖提取率的影响，并利用正交设计试验优化偏翅唐松草多糖提取工艺。
具体的研究不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
在多组不同料液比(1：20，1：30，1：40，1：50，1：60)的条件下，80℃煎煮2次，每次70min，滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
具体的研究不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，温度80℃时分别煎煮30min、50min、70min、90min、110min，2次水煎，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖，测定不同煎煮时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
具体的研究不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，单次煎煮时间为70min时，将煎煮温度设置为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，煎煮2次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
具体的研究不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，水煎温度为80℃，单次煎煮时间为70min，分别提取1、2、3、4、5次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
具体的以单因素试验结果为依据，选取最佳的单因素水平作为正交设计试验的优化条件，在此基础上采用正交表进行正交设计试验，通过对正交试验的结果进行分析，筛选出最佳提取条件。
实施例二
根据图2-图6所示，本实施例提出了一种偏翅唐松草多糖提取方法，包括以下步骤：
步骤一：偏翅唐松草采于康定市折多山(101°48E,30°4N)，将采集的偏翅唐松草进行风干，再通过粉碎机对风干后的偏翅唐松草进行粉碎，制得偏翅唐松草粉末，并对制得的偏翅唐松草粉末通过干燥机进行干燥，再准备提取实验相关的化学试剂，其中化学试剂包括葡萄糖标准品、苯酚、硫酸、无水乙醇、DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)和甲醇；
步骤二：称取葡萄糖标准品9.02mg于100mL烧杯中，加纯水搅拌直至完全溶解，定容至100mL，吸取各对照品溶液0.00(空白)mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL，分别滴加于试管中，再滴加1mL5％苯酚溶液，5mL硫酸，轻微震荡混匀，对应的，本实施例中，通过六组试管来获取对应的六组数据；
步骤三：将混合溶液置于85℃水浴锅中水浴30min后，取出试管，待试管温度降到室温，之后吸取各试管中溶液200μL置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪在490nm处测定吸光度，选择测定的吸光度值作纵坐标，葡萄糖不同浓度值作横坐标，绘制标准曲线，如图2所示；
步骤四：精确称取干燥的偏翅唐松草粉末5.00g放入容器中，按一定的料液比加入纯水，在水浴锅中热水浸提一定时间，其中在水浴锅内单次浸提时间为30min，多次浸提后收集浸提液并过滤，使用旋蒸仪将滤液浓缩至1g/mL，按一定比例加入95％乙醇，混匀，静置12h，待多糖沉降后，离心，沉降物经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖粗提物。
步骤五：采用苯酚硫酸法进行偏翅唐松草多糖的含量测定，具体为：
将得到的偏翅唐松草多糖放入试管中加入一定比例纯水，倍比稀释配制成0.1mg/mL的多糖溶液，再吸取1mL多糖溶液于试管中，按顺序滴加5％苯酚溶液1mL和浓硫酸5mL，轻微震荡混合，于85℃水浴30min后取出，待其温度下降，精确移取200μL溶液置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪于490nm处测定吸光度，通过葡萄糖标准曲线得到公式一，再将测得的偏翅唐松草多糖溶液吸光度进行分析计算，得到偏翅唐松草的多糖提取率，其中公式一如下：
式中m为偏翅唐松草粉末的质量(mg)；A490为稀释后的偏翅唐松草多糖溶液的吸光度；500是稀释倍数；5为偏翅唐松草多糖溶液体积(mL)；
步骤六：进行单因素试验，并以多糖提取率为参考指标，采用水提醇沉法研究料液比、提取时间、提取温度和提取次数四个影响因素对偏翅唐松草多糖提取率的影响，并利用正交设计试验优化偏翅唐松草多糖提取工艺；
具体的研究不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
在多组不同料液比(1：20，1：30，1：40，1：50，1：60)的条件下，80℃煎煮2次，每次70min，滤液浓缩后加入20mL95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
研究不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，温度80℃时分别煎煮30min、50min、70min、90min、110min，2次水煎，收集滤液浓缩后加入20mL95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖，测定不同煎煮时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
研究不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，单次煎煮时间为70min时，将煎煮温度设置为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，煎煮2次，收集滤液浓缩后加入20mL95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
研究不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，水煎温度为80℃，单次煎煮时间为70min，分别提取1、2、3、4、5次，收集滤液浓缩后加入20mL95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
以单因素试验结果为依据，选取最佳的单因素水平作为正交设计试验的优化条件，在此基础上采用L9(34)正交表进行正交设计试验，通过对正交试验的结果进行分析，筛选出最佳提取条件，具体的因素水平如下所示：
表3正交设计试验因素和水平
根据单因素实验结果，可以发现，不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响如图3所示，当料液比为1：40时，偏翅唐松草多糖提取率达到13.32％；
不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响如图4所示，当提取时间到50min时，多糖提取率达到9.49％，故判断50min提取时间为偏翅唐松草多糖的最佳提取时间；
不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响如图5所示，偏翅唐松草多糖的提取率在60-70℃时增加，在70℃以上偏翅唐松草多糖的浸出率逐渐降低，随后逐渐升高；
不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响如图6所示，当提取次数为2时，多糖提取率达到16.03％，随着提取次数的增加，偏翅唐松草多糖提取率开始增加，在提取3次时，偏翅唐松草多糖提取效果较好。
继而偏翅唐松草多糖提取的正交设计试验结果如下表所示：
多糖提取率正交设计试验结果
对应的，正交设计试验方差分析结果如下表所示：
正交设计试验方差分析结果
由上表(正交设计试验表)可知不同因素对偏翅唐松草多糖的提取率的影响效果依次为时间>次数>温度>料液比，根据结果可得最佳提取工艺为A3B2C1D3即料液比1：60，提取时间70min，提取温度50℃，提取4次，在该提取方法下提取偏翅唐松草多糖的提取效率最高为35.59％，进一步的在本实施例中，采用上述方式对偏翅唐松草多糖提取。
实施例三
根据图7所示，本实施例提出了一种翅唐松草多糖的抗氧化活性分析方法，包括以下步骤：
S1：取试验所需的偏翅唐松草多糖，分别配制20、40、60、80、100、120mg/mL偏翅唐松草多糖溶液；
S2：称取2mgDPPH粉末，再加入40mL无水乙醇摇匀配制为0.5mg/mL的DPPH溶液；
S3：吸取100μL不同浓度的偏翅唐松草多糖提取液于96孔细胞培养板中，向其中加入100μLDPPH溶液，其中空白对照组以100μL纯水替代，之后将96孔型细胞培养板放于37℃避光条件下30min，结束后于酶标仪517nm处测定光密度OD值；
S4：测定空白对照在517nm处的光密度OD，测定不同浓度多糖溶液在517nm处的光密度OD0，测定DPPH溶液在517nm处的光密度OD1，再根据如下公式计算出不同浓度多糖溶液对DPPH的清除能力：
偏翅唐松草多糖对于DPPH自由基的清除作用结果如图7所示，偏翅唐松草多糖在一定程度上可以清除DPPH自由基，偏翅唐松草多糖浓度越高，偏翅唐松草多糖对自由基的清除作用越强。当偏翅唐松草多糖浓度达到100mg/mL时，偏翅唐松草多糖对于DPPH自由基的清除率达到61.3％。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (9)
1.一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一：将采集的偏翅唐松草进行风干，再通过粉碎机对风干后的偏翅唐松草进行粉碎，制得偏翅唐松草粉末，再准备提取实验相关的化学试剂，其中化学试剂包括葡萄糖标准品、苯酚、硫酸、无水乙醇、DPPH和甲醇；
步骤二：称取试验所需的葡萄糖标准品放入容器中，加入纯水并搅拌，直至完全溶解，得到葡萄糖溶液，再吸取不同容量的溶液，分别滴加于试管中，再依次滴加苯酚溶液和硫酸，之后轻微振荡混匀，制得混合溶液；
步骤三：将混合溶液通过水浴锅进行水浴，水浴后进行自然冷却，冷却后再取各试管中混合溶液置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪测定吸光度，根据测定的吸光度以及各试管中葡萄糖不同浓度值绘制标准曲线；
步骤四：称取试验所需的偏翅唐松草粉末放入容器中，加入纯水，再利用水浴锅进行反复浸提，在多次浸提后收集浸提液并进行过滤，之后使用旋蒸仪将滤液浓缩，再加入乙醇进行混合，混合均匀后静置，待多糖沉降后，进行离心，之后再将沉降物经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖粗提物；
步骤五：采用苯酚硫酸法进行偏翅唐松草多糖的含量测定；
步骤六：进行单因素试验，并以多糖提取率为参考指标，采用水提醇沉法研究料液比、提取时间、提取温度和提取次数四个影响因素对偏翅唐松草多糖提取率的影响，并利用正交设计试验优化偏翅唐松草多糖提取工艺。
2.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤一中，对制得的偏翅唐松草粉末通过干燥机进行干燥。
3.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤四中，在水浴锅内单次浸提时间为30-60min。
4.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，研究不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
在多组不同料液比(1：20，1：30，1：40，1：50，1：60)的条件下，80℃煎煮2次，每次70min，滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
5.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，研究不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，温度80℃时分别煎煮30min、50min、70min、90min、110min，2次水煎，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖，测定不同煎煮时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
6.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，研究不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，单次煎煮时间为70min时，将煎煮温度设置为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，煎煮2次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
7.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，研究不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
料液比为1：20，水煎温度为80℃，单次煎煮时间为70min，分别提取1、2、3、4、5次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
8.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，以单因素试验结果为依据，选取最佳的单因素水平作为正交设计试验的优化条件，在此基础上采用正交表进行正交设计试验，通过对正交试验的结果进行分析，筛选出最佳提取条件。
9.应用于权利要求1所述的一种翅唐松草多糖的抗氧化活性分析方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：取试验所需的偏翅唐松草多糖，分别配制20、40、60、80、100、120mg/mL偏翅唐松草多糖溶液；
S2：称取2mg DPPH粉末，再加入40mL无水乙醇摇匀配制为0.5mg/mL的DPPH溶液；
S3：吸取100μL不同浓度的偏翅唐松草多糖提取液于96孔细胞培养板中，向其中加入100μL DPPH溶液，其中空白对照组以100μL纯水替代，之后将96孔型细胞培养板放于37℃避光条件下30min，结束后于酶标仪517nm处测定光密度OD值；
S4：测定空白对照在517nm处的光密度OD，测定不同浓度多糖溶液在517nm处的光密度OD0，测定DPPH溶液在517nm处的光密度OD1，再根据如下公式计算出不同浓度多糖溶液对DPPH的清除能力：
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