CN105106267A

CN105106267A - 苦菜单宁提取工艺

Info

Publication number: CN105106267A
Application number: CN201510546971.0A
Authority: CN
Inventors: 齐珈娆
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-08-24
Filing date: 2015-08-24
Publication date: 2015-12-02

Abstract

本发明苦菜单宁提取工艺，所属技术领域：本发明属于生物技术，是以苦菜为原料从中提取功效成分单宁的一种工艺方法。苦菜是重要的药食两用药物之一，其应用历史悠久，《神农本草经》、《千金·食治》、《本草纲目》、《全国中草药汇编》等药典中均有记载，其功效成分单宁是一种存在植物中的水溶性多酚类物质，具有较强的生理活性，对免疫缺陷病毒(HIV-1)整合酶活性具有强烈的抑制作用，即有抗爱滋病活性。苦菜单宁提取工艺未见报道，对抗爱滋病中药新药开发具有现实意义。本发明解决其技术问题采用的方案是：确定道地苦菜、试剂、仪器设备材料，确定苦菜单宁提取、含量测定方法，苦菜单宁提取单因素实验，正交试验，实验结果讨论，确定苦菜提取最佳工艺。

Description

苦菜单宁提取工艺

所属技术领域

本发明属于生物技术，是以苦菜为原料从中提取功效成分单宁的一种工艺方法。

背景技术

苦菜是重要的药食两用药物之一，其应用历史悠久，《神农本草经》、《千金·食治》、《本草纲目》、《全国中草药汇编》等药典中均有记载，分布广资源丰富，其功效成分单宁是一种存在植物中的水溶性多酚类物质，分子量大约在500-3000道尔顿，其自身的多酚羟基结构，因而具有较强的生理活性，对免疫缺陷病毒(HIV-1)整合酶活性具有强烈的抑制作用，即有抗爱滋病活性。苦菜单宁提取工艺未见报道，对抗爱滋病中药新药开发具有现实意义。

发明专利内容

本发明专利要解决的技术问题是提供一种以苦菜为原料，从中能高效提取功效成分单宁的一种工艺方法。

本发明解决其技术问题采用的方案是：确定道地苦菜、试剂、仪器材料，确定苦菜单宁提取、含量测定方法，苦菜单宁提取单因素实验，正交试验，实验结果讨论，确定苦菜提取最佳工艺。

具体实施方式

1、材料与方法

1.1、材料

新鲜苦菜，采摘自吉林市船营区。

丙酮(AR)、磷酸(AR)，浙江巨化集团公司试剂厂；无水碳酸钠(AR)，上海虹光化工有限公司；鞣酸(AR)，洪声化工有限公司；钨酸钠(AR)、磷钼酸(AR)，医药上海化学试剂站。

752紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器有限公司)，水浴锅(上海医疗器械有限公司)，离心机(北京医用离心机有限公司)，抽滤器，旋转蒸发仪，真空干燥器，天平，搪瓷盘，计时钟。

1.2、方法

1.2.1苦菜单宁提取方法

新鲜苦菜→除去杂物→称质量→移入三角瓶→按一定比例加入提取剂→在热水浴中热浸提数小时→冷却后过滤→待测的样液。

1.2.2单宁含量的测定方法

F-D(Folir-Denis)单宁测定法试剂的配制：750mL水中加入Na₂WO₄100g，磷钼酸及磷酸50mL，回流2h，放冷，并稀释为1L。

单宁酸标准曲线的绘制：称取单宁酸50mg于50mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，混匀。再用蒸馏水稀释10倍即为，0.1mg/mL标准溶液。吸取单宁标准液0，0.5，1，1.5，2.0，2.5，3，3.5mL，分别置于盛有30mL蒸馏水的50mL容量瓶中，加F-D试剂2.5mL及饱和Na₂CO₃溶液5mL，加水稀释至50mL。充分混合，并于30min后在650nm处测定光密度值。

样品测定：吸取待测的样品液，与标准溶液同法测吸光度，以标准曲线说计算单宁的含量。

1.2.3单因素实验

料液比采用1∶4、1∶10、1∶30、1∶60和1∶80五个水平，浸提温度采用30℃、45℃、60℃和70℃四个水平，浸提时间采用0.5、1、4、6、8h五个水平分别进行单因素试验。

1.2.4正交试验

选L₉(3³)做正交试验，选定提取苦菜中单宁的最佳工艺参数。用F-D法测定单宁含量，统计试验结果。

2、结果与讨论

2.1单宁的测定

测得单宁标准曲线的回归方程和苦菜中单宁的提取率(％)分别为：

Y＝1124.8X，R＝0.9997

单宁(％)＝(p×50×100)/V×W

式中Y——单宁在650nm波长处测定的吸光度；X——相当于0.1mg/mL单宁标准溶液的mL数；W——苦菜样品的质量，mg；V——比色时所吸提取液体积，mL；50——提取液总体积，mL；p——从标准曲线查得的提取液所含单宁，mg；100——换算为百分含量。

2.2热浸提工艺参数对苦菜中单宁提取率的影响

在热浸提工艺研究前，必须对提取的溶剂进行选择，单宁溶于水、甲醇、乙醇和丙酮，丙酮水溶液对单宁的溶解能力最强，所以是单宁的首选提取剂，Chavan等2001年对豌豆单宁的提取采用70％的丙酮，而Mupangwa等2000年对草料单宁的提取采用30％的丙酮，对于单宁的提取样品越新鲜提取率越高，由于鲜苦采含水率很高，因此丙酮浓度高的提取剂提取率较高，经研究纯丙酮比50％的丙酮提取率稍高。综合考虑成本等因素，本研究采用50％的丙酮作为苦菜单宁的提取剂。

热浸提工艺涉及3个关键条件：热浸提的料液比、热浸提的温度和热浸提的时间。下面就三个方面进行单因素试验。

2.2.1料液比的影响

表1是在浸提温度为30℃，浸提时间为4h时，单宁提取率随料液比变化的试验结果，料液比的上升会增加单宁的溶出量，到达一定比例后，上升的幅度明显下降。1∶60和1∶80为最佳，但1∶30和前者很接近，故选择1∶30。

表1料液比对单宁提取率的影响

料液比	单宁提取率/％
		1∶4	3.014
1∶10	3.186
		1∶30	3.486
1∶60	3.487
		1∶80	3.487

2.2.2温度的影响

表2是料液比为1∶30，浸提时间为4h时的温度单因素试验，结果表明：温度的上升伴随着单宁提取率略有下降，45℃为最佳。

表2温度对单宁提取率的影响

温度/℃	单宁提取率/％
		30	3.49
45	3.57
		60	3.51
70	3.51

2.2.3时间的影响

表3表明，是料液比1∶30，浸提温度为45℃的时间的单因素试验，随着热浸提时间的增加苦菜单宁提取率也有所增加，但增加趋势逐渐趋缓，4h和6h提取率最高。

表3时间对单宁提取率的影响

时间/h	单宁的提取率/％
		0.5	2.632
2	3.188
		4	3.415
6	3.416
		8	3.408

2.2.4热浸提苦菜中单宁提取率的正交试验

表4正交试验结果

结论：苦菜单宁提取最佳工艺为新鲜苦菜原料、浸提液丙酮浓度50％、料液比1∶60、温度45℃、时间2h，此条件苦菜单宁的得率为3.60％。

Claims

1.苦菜单宁提取最佳工艺为新鲜苦菜原料、浸提液丙酮浓度50％、料液比1∶60、温度45℃、时间2h，此条件苦菜单宁的得率为3.60％。