CN110527000A - 一种多花黄精地上部分提取多糖的方法 - Google Patents

一种多花黄精地上部分提取多糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多花黄精地上部分提取多糖的方法,收集多花黄精的地上部分,将干燥后的多花黄精原料,粉碎;向多花黄精粉末中加入石油醚,摇匀后水浴回流,抽滤回收石油醚,向滤饼中加入乙醇溶液回流提取后,抽滤收集滤渣,干燥;将多花黄精地上部分滤渣与蒸馏水混合均匀,抽滤并收集滤液;向抽滤液中缓慢添加乙醇并不断揽拌,弃上清,收集沉淀,沉淀依次加入乙醇、丙酮、乙醚洗涤多次,挥干;多糖沉淀溶解在蒸馏水中,反复脱蛋白,所得粉末即为多花黄精精制多糖。本发明相较于单一的多花黄精根茎多糖提取,多花黄精地上部分可以增加多花黄精多糖40%的产出。应用本发明可更为充分地利用多花黄精资源;同时也拓宽了多花黄精多糖的供给途径。

Description

一种多花黄精地上部分提取多糖的方法
技术领域
本发明涉及一种多花黄精的提取工艺,尤其涉及的是一种多花黄精地上部分提取多糖的方法。
背景技术
多花黄精Polygonatumcyrtonema系百合科黄精属植物,与黄精P.sibiricum及滇黄精P.kingianum一并收录于2015年版《中国药典》。历史上,黄精为药食同源的多年生草本植物。其味甘、平,归脾、肺、肾经,具有补气养阴、健脾、润肺、益肾之效。现代研究表明,黄精中含有丰富的多糖、黄酮、皂苷、挥发油等成分,其主要成分多糖具有降血糖与血脂,抑菌,抗炎,抗肿瘤,增强免疫和抗病毒等作用。
当前对多花黄精多糖的提取方法,多是将多花黄精药材进行切片和粉碎后,采用适当的溶剂进行提取、精制及干燥的环节获取黄精多糖。这些方法因为使用多花黄精药材,生产成本相对较高。而同样含有丰富多糖类成分的多花黄精地上部分也可以作为多花黄精多糖的重要来源。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于:现有技术中并不采用多花黄精的地上部分来提取多糖,提供了一种多花黄精地上部分提取多糖的方法。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的,本发明包括以下步骤:
(1)干燥
收集多花黄精的地上部分,于45~60℃干燥至含水量不超过10%;
(2)粉碎
将干燥后的多花黄精原料,粉碎后过65目筛;
(3)脱脂除杂
向多花黄精粉末中加入10倍质量的石油醚,摇匀后水浴回流,抽滤回收石油醚,同时挥干滤饼中残留石油醚,向滤饼中加入10倍质量的体积分数为95%乙醇溶液回流提取后,抽滤收集滤渣,45~60℃干燥;
(4)提取
将多花黄精地上部分滤渣与15倍质量的蒸馏水混合均匀,回流提取多次,抽滤并收集滤液;
(5)浓缩沉淀
所得滤液在55~65℃条件下减压浓缩至初始滤液的1/6体积,向抽滤液中缓慢添加95%乙醇并不断揽拌,至乙醇终浓度为80%,4℃放置12h后进行离心;
(6)脱色
弃上清,收集沉淀,沉淀依次加入乙醇、丙酮、乙醚洗涤多次,挥干;
(7)脱蛋白与干燥
多糖沉淀溶解在蒸馏水中,用Sevag试剂反复脱蛋白,加入1/3体积多糖溶液的Sevag试剂,反复多次,直至水相与Sevag试剂液面无白色乳状物,水相溶液冷冻干燥,所得粉末即为多花黄精精制多糖。
所述多花黄精地上部分为其生长期内任一年采集获得。多花黄精药材常在种植后3-4年采集根茎;而多花黄精地上部分多糖提取,可在其生长期内的每一年都进行采集加工,较之于单一的根茎多糖提取,可增加效益50%。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(3)中,水浴温度为70~80℃,回流2~3h。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(4)中,回流提取2~3次,每次2~3h。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(7)中,Sevag试剂中氯仿:正丁醇=4:1。
本发明相比现有技术具有以下优点:本发明通过对多花黄精地上部分多糖的提取,可以充分利用多花黄精资源;相较于单一的多花黄精根茎多糖提取,多花黄精地上部分可以增加多花黄精多糖40%的产出。通过选择最优的加工工艺高效提取多花黄精地上部分多糖,可以充分利用多花黄精资源;同时,由于拓宽了多花黄精多糖的供给途径,可以增加市场供给,并且降低多花黄精的供货价格,让更多的消费者受益。
附图说明
图1是葡萄糖标准曲线图。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明,本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
测定葡萄糖标准曲线。
首先精密称定无水葡萄糖对照品33mg(经105℃干燥至恒重),再置100mL量瓶中,加超纯水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(溶液中每1mL中含无水葡萄糖0.33mg)。标准曲线的制备:精密量取对浑品溶液0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL,分别置于10mL具塞刻度试管中,各加水至2.0mL,摇匀,在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度,混匀,放冷后置水浴中保温10分钟,取出,立即放置烧杯中冰水浴中冷却10分钟,取出,以相应试剂为空白对照。按照紫外-可见分光光度法,在582nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,样品浓度为横坐标,绘制标准曲线图1,即得。
实施例1
本实施例用于提取多花黄精地上部分的多糖,具体过程如下:
(1)干燥:收集多花黄精地上部分,烘箱中55℃干燥至含水量不超过10%。
(2)粉碎:取干燥后的多花黄精原料,粉碎过四号筛。
(3)脱脂与除杂:向多花黄精粉末中加入10倍量石油醚(沸程60~90℃),摇匀后75℃水浴回流2h,抽滤以回收石油醚,同时挥干滤饼中残留石油醚。向滤饼中加入10倍量的95%乙醇溶液回流提取1.5h后,抽滤收集滤渣,55℃烘箱中干燥。
(4)提取:将多花黄精地上部分滤渣与15倍量蒸馏水混合均匀,回流提取2次,每次2h,抽滤并收集滤液。
(5)浓缩沉淀:所得滤液在60℃条件下减压浓缩至初始滤液的1/6体积,向抽滤液中缓慢添加95%乙醇并不断揽拌,至乙醇终浓度为80%,4℃放置12h后进行离心。
(6)脱色:弃上清,收集沉淀,沉淀反复依次加入乙醇、丙酮、乙醚(20、10、10mL)洗涤三次,挥干。
(7)脱蛋白与干燥:多糖沉淀再溶解在适量蒸馏水(30mL),用Sevag试剂(氯仿:正丁醇=4:1)反复脱蛋白,加入1/3体积多糖溶液的Sevag试剂,反复3~5次,至水相与Sevag试剂液面无白色乳状物,水相溶液冷冻干燥,所得粉末即为多花黄精精制多糖。
实施例2
本实施例用于提取多花黄精地上部分的多糖,具体过程如下:
(1)干燥:收集多花黄精地上部分,烘箱中55℃干燥至含水量不超过10%。
(2)粉碎:取干燥后的多花黄精原料,粉碎过四号筛。
(3)脱脂与除杂:向多花黄精粉末中加入10倍量石油醚(沸程60~90℃),摇匀后75℃水浴回流2h,抽滤以回收石油醚,同时挥干滤饼中残留石油醚。向滤饼中加入10倍量的95%乙醇溶液回流提取1.5h后,抽滤收集滤渣,55℃烘箱中干燥。
(4)提取:将多花黄精地上部分滤渣与15倍量蒸馏水混合均匀,回流提取2次,每次2h,抽滤并收集滤液。
(5)浓缩沉淀:所得滤液在60℃条件下减压浓缩至初始滤液的1/6体积,向抽滤液中缓慢添加95%乙醇并不断揽拌,至乙醇终浓度为80%,4℃放置12h后进行离心。
(6)脱蛋白与干燥:多糖沉淀再溶解在适量蒸馏水(30mL),用Sevag试剂(氯仿:正丁醇=4:1)反复脱蛋白,加入1/3体积多糖溶液的Sevag试剂,反复3~5次,至水相与Sevag试剂液面无白色乳状物,水相溶液冷冻干燥,所得粉末即为多花黄精精制多糖。
实施例3
本实施例用于提取多花黄精地上部分的多糖,具体过程如下:
(1)干燥:收集多花黄精地上部分,烘箱中55℃干燥至含水量不超过10%。
(2)粉碎:取干燥后的多花黄精原料,粉碎过四号筛。
(3)提取:将多花黄精地上部分滤渣与15倍量蒸馏水混合均匀,回流提取2次,每次2h,抽滤并收集滤液。
(4)浓缩沉淀:所得滤液在60℃条件下减压浓缩至初始滤液的1/6体积,向抽滤液中缓慢添加95%乙醇并不断揽拌,至乙醇终浓度为80%,4℃放置12h后进行离心。
(5)脱色:弃上清,收集沉淀,沉淀反复依次加入乙醇、丙酮、乙醚(20、10、10mL)洗涤三次,挥干。
(6)脱蛋白与干燥:多糖沉淀再溶解在适量蒸馏水(30mL),用Sevag试剂(氯仿:正丁醇=4:1)反复脱蛋白,加入1/3体积多糖溶液的Sevag试剂,反复3~5次,至水相与Sevag试剂液面无白色乳状物,水相溶液冷冻干燥,所得粉末即为多花黄精精制多糖。
实施例4
本实施例用于提取多花黄精地上部分的多糖,具体过程如下:
(1)干燥:收集多花黄精地上部分,烘箱中55℃干燥至含水量不超过10%。
(2)粉碎:取干燥后的多花黄精原料,粉碎过四号筛。
(3)脱脂与除杂:向多花黄精粉末中加入10倍量石油醚(沸程60~90℃),摇匀后75℃水浴回流2h,抽滤以回收石油醚,同时挥干滤饼中残留石油醚。向滤饼中加入10倍量的95%乙醇溶液回流提取1.5h后,抽滤收集滤渣,55℃烘箱中干燥。
(4)提取:将多花黄精地上部分滤渣与15倍量蒸馏水混合均匀,回流提取2次,每次2h,抽滤并收集滤液。
(5)浓缩沉淀:所得滤液在60℃条件下减压浓缩至初始滤液的1/6体积,向抽滤液中缓慢添加95%乙醇并不断揽拌,至乙醇终浓度为80%,4℃放置12h后进行离心。
(6)脱色:弃上清,收集沉淀,沉淀反复依次加入乙醇、丙酮、乙醚(20、10、10mL)洗涤三次,挥干。
所得粉末即为多花黄精精制多糖。
从实施例1~4可以看出,实施例1包含了脱色脱脂和脱蛋白的全部处理,实施例2未进行脱色处理,实施例3未进行脱脂处理,实施例4未进行脱蛋白处理。
通过测定供试品的吸光度,代入标准曲线中计算得到粗多糖及精制多糖的含量,结果见表1,从表中可以得出:实施例2与实施例1相比,其粗多糖及精制多糖含量差异不大,但实施例2(未脱色)得到的精制多糖颜色较深;实施例3与实施例1相比,实施例3(未脱脂)中粗多糖含量显著升高,说明有其他脂类等物质也被提取出来;实施例4与实施例1相比,实施例4(未脱蛋白)中精制多糖含量显著降低,说明提取液中含有蛋白等物质,导致多糖含量降低。从而,进一步证明了脱色、脱脂、脱蛋白对于多花黄精地上部分多糖的提取的必要性。
表1单因素对多糖含量的影响
注:n=3,p<0.05
计算:换算因子(F):F=W/(C×D)。
其中:W:精制多糖质量(mg);C:多糖液中葡萄糖折合浓度(mg/ml);D:稀释倍数。测得葡萄糖对供试样品多糖的换算因子。样品以葡萄糖计多糖含量乘以葡萄糖对供试样品多糖的换算因子,计算出供试样品中多糖含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种多花黄精地上部分提取多糖的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)干燥
收集多花黄精的地上部分,于45~60℃干燥至含水量不超过10%;
(2)粉碎
将干燥后的多花黄精原料,粉碎后过65目筛;
(3)脱脂除杂
向多花黄精粉末中加入10倍质量的石油醚,摇匀后水浴回流,抽滤回收石油醚,同时挥干滤饼中残留石油醚,向滤饼中加入10倍质量的体积分数为95%乙醇溶液回流提取后,抽滤收集滤渣,45~60℃干燥;
(4)提取
将多花黄精地上部分滤渣与15倍质量的蒸馏水混合均匀,回流提取多次,抽滤并收集滤液;
(5)浓缩沉淀
所得滤液在55~65℃条件下减压浓缩至初始滤液的1/6体积,向抽滤液中缓慢添加95%乙醇并不断揽拌,至乙醇终浓度为80%,4℃放置12h后进行离心;
(6)脱色
弃上清,收集沉淀,沉淀依次加入乙醇、丙酮、乙醚洗涤多次,挥干;
(7)脱蛋白与干燥
多糖沉淀溶解在蒸馏水中,用Sevag试剂反复脱蛋白,加入1/3体积多糖溶液的Sevag试剂,反复多次,直至水相与Sevag试剂液面无白色乳状物,水相溶液冷冻干燥,所得粉末即为多花黄精精制多糖。
2.根据权利要求1所述的一种多花黄精地上部分提取多糖的方法,其特征在于,所述多花黄精地上部分为其生长期内任一年采集获得。
3.根据权利要求1所述的一种多花黄精地上部分提取多糖的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,水浴温度为70~80℃,回流2~3h。
4.根据权利要求1所述的一种多花黄精地上部分提取多糖的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,回流提取2~3次,每次2~3h。
5.根据权利要求1所述的一种多花黄精地上部分提取多糖的方法,其特征在于,所述步骤(7)中,Sevag试剂中氯仿:正丁醇=4:1。
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