CN114703241B - 一种酒制多花黄精多糖的制备方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种酒制多花黄精多糖的制备方法及其用途，所述方法包括以下步骤：将酒制多花黄精和热水混合多次热提，所得提取液浓缩后加入乙醇多次进行醇沉，得到粗多糖；在粗多糖溶解后的滤液中加入α‑淀粉酶酶解，Sevag试剂脱蛋白、透析，得到酒制多花黄精精制多糖。该用途为上述酒制多花黄精多糖在抗衰老及降糖药物中的应用。该方法采用黄酒蒸制、工艺稳定，同时能够获得高抗氧化性的多糖。

Description

一种酒制多花黄精多糖的制备方法及其用途
技术领域
本发明属于天然产物的提取与应用技术领域，具体涉及一种酒制多花黄精多糖的制备方法及其用途。
背景技术
多花黄精为一种药食两用的传统中药材，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾之功效。临床上多采用黄酒反复蒸制后的酒制黄精用于脾胃气虚、体倦乏力、胃阴不足、口干食少、肺虚燥咳、劳嗽咳血、精血不足、腰膝酸软、须发早白、内热消渴等症。多糖为多花黄精的主要且最有效的活性成分之一，具有抗氧化、抗疲劳、增强免疫力、调节血糖血脂、抗菌抗炎及调节细胞内分泌等作用。此外，酒制黄精在反复蒸制过程中，刺激性消失，补益作用增强，作为食品出现在餐桌或饮品中。
近年来，有关多花黄精多糖的研究多从多花黄精药材中获取，多花黄精药材中获取的多糖具有清除自由基能力。提取方法主要有以下几种：石油醚脱脂后，热水和不同浓度NaOH分级提取、乙醇沉淀得到精制黄精多糖；利用离子液体-微波辅助提取多花黄精药材中多糖工艺；利用超声波辅助提取多花黄精药材中多糖的方法。上述炮制工艺中，不同NaOH分级提取获得的多糖分散度高，分子链长短分布不均匀，热稳定性较差；离子液体-微波辅助提取处于实验室研究阶段，且微波提取目前在中药有效成分提取中该技术还不成熟，需进一步探索；超声波辅助提取可能会破坏多糖的结构。而黄酒蒸制多花黄精多糖制备工艺及其抗氧化能力未见报道。
因此，本发明旨在提供一种酒制多花黄精多糖的制备方法及其应用，该方法采用黄酒蒸制、工艺稳定，同时能够获得高抗氧化性的多糖。
发明内容
针对上述问题，本发明旨在本发明采用的技术方案如下：
一种酒制多花黄精多糖的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将酒制多花黄精和热水混合多次热提，所得提取液浓缩后加入乙醇多次进行醇沉，得到粗多糖；在粗多糖溶解后的滤液中加入α-淀粉酶酶解，Sevag试剂脱蛋白、透析，得到多花黄精精制多糖。
进一步地，所述热水体积与酒制多花黄精质量比为3～15；热提温度为60～ 100℃，热提时间为1～3h，提取1～4次。
进一步地，所述提取液浓度为0.2～2mL/g；所述醇沉过程中乙醇体积浓度为50％～90％。
进一步地，所述α-淀粉酶酶解为：按α-淀粉酶酶体积与酒制多花黄精质量比为1：2～5：1加入α-淀粉酶，酶解温度为30～60℃，酶解时间为0.5～10h。
进一步地，所述加Sevag试剂脱蛋白重复次数为3～20次，所述透析采用截留分子量大于3500Da的透析袋透析2～3天，续用去离子水透析12～48h。
进一步地，所述酒制多花黄精精制多糖分子量为4×103～8×104Da。
进一步地，所述酒制多花黄精精制多糖的单糖组成为果糖、阿拉伯糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸和木糖。
进一步地，将酒制多花黄精和热水混合多次热提之前，取多花黄精新鲜根茎洗去泥沙，蒸汽熏蒸至透心，取出后恒温烘干，除去须根得到生黄精个子药；
取生黄精个子药适量经黄酒拌匀、闷润至吸尽，放入蒸制容器中隔水蒸制，取出后恒温干燥，重复操作至多花黄精断面亮黑色，质地柔软滋润、粘性足；切厚片后干燥，制得酒制多花黄精样品。
进一步地，所述隔水蒸制温度为90～95℃，蒸制时间2～4h，蒸制次数4～ 6次，恒温烘干以及干切厚片后干燥温度均为40℃～70℃。
本发明的第二方面，提供一种如上述所述的方法制备得到的酒制多花黄精多糖的用途，所述用途为抗衰老及降糖药物中的应用。
与现有技术相比，本发明采用黄酒蒸制多花黄精多糖，此工艺制备的多花黄精断面亮黑色，质地柔软滋润、粘性足；有酒香气、甜味足，无麻舌感，无酸、苦味；符合“九蒸九制”传统工艺样品的标准。该制备工艺稳定，能够获得高抗氧化性的多糖。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1a示出了本发明实施例中酒制多花黄精多糖的形貌特征图；图1b示出了本发明实施例中酒制多花黄精多糖的SEM图谱；
图2示出了本发明实施例中酒制多花黄精多糖的紫外光谱图；
图3示出了本发明实施例中酒制多花黄精多糖的红外光谱图；
图4示出了本发明实施例中肝脏组织HE染色切片图，其中，图4a为空白对照组肝脏组织HE染色切片图；图4b为模型组肝脏组织HE染色切片图；图 4c为阳性对照组肝脏组织HE染色切片图；图4d为酒制多花黄精多糖低剂量组肝脏组织HE染色切片图；图4e为酒制多花黄精多糖高剂量组肝脏组织HE 染色切片图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例的一方面，提供一种酒制多花黄精多糖的制备方法，该方法包括以下几个步骤：
步骤S1：制备酒制多花黄精样品。
具体地，步骤S1中，取多花黄精新鲜根茎洗去泥沙，在90℃～100℃温度下蒸汽熏蒸20～40min至透心，取出60℃恒温烘干后除去须根，得到生黄精个子药。
取生黄精个子药50Kg，经10Kg黄酒拌匀、闷润至吸尽，放入蒸制容器中隔水蒸3h，取出后置于取出60℃恒温干燥3h，至不黏手；再放入蒸制容器中 90℃～95℃隔水蒸3h，取出后置于取出60℃恒温干燥3h至不黏手；共重复操作4次至多花黄精断面亮黑色，质地柔软滋润、粘性足。切厚片后干燥，制得酒制多花黄精样品；
步骤S2：将酒制多花黄精和热水混合进行多次热提，所得提取液浓缩后加入乙醇多次进行醇沉，得到粗多糖。
具体地，步骤S2中，取步骤S1制得的酒制多花黄精1.0Kg，加6倍量水加热提取三次，每次4h，合并提取液；60℃减压回收至500mL，加乙醇至终浓度80％，静置48h，滤取沉淀；加水复溶，续用80％醇浓度沉淀，反复5次，得到粗多糖；
步骤S3：在粗多糖溶解后的滤液中加入α-淀粉酶进行二次醇沉，加Sevag 试剂脱蛋白、透析，得到酒制多花黄精多糖。
具体地，步骤S3中，粗多糖用蒸馏水溶解后过滤，滤液中加入α-淀粉酶 1mL，60℃下水浴，搅拌1h，减压回收溶剂至原体积的1/3，浓缩液离心(以 10000×g的离心力，离心15min)，上清液乙醇至终浓度为80％，在4℃冰箱过夜，收集沉淀，沉淀加水复溶，按水溶液：氯仿：正丁醇体积比为30:5:1进行剧烈振摇30min后离心(以10000×g的离心力，离心15min)，离心后脱蛋白 5次，加压除去残留的有机溶剂，用截留分子量为3500Da的透析袋流水透析 48h后，续用去离子水水透析24h，浓缩液真空冷冻干燥，得酒制多花黄精精制多糖13.56g。
通过以上步骤制备得到酒制多花黄精多糖，下面将对本发明实施例制备得到的酒制多花黄精多糖进行理化性质测定。图1a中，酒制多花黄精多糖为暗黄色粉末状；图1b中SEM扫描图片可观察其形状为表面光滑的不规则片状颗粒。图2所示为酒制多花黄精多糖的紫外光谱图，制备浓度为0.1mg/mL的酒制多花黄精多糖溶液，利用紫外可见分光光度计在190～400nm波长范围内进行扫描获得紫外光谱图，从图2可以看出，吸收曲线平滑，表明酒制多花黄精多糖中蛋白含量低。图3所示为酒制多花黄精多糖的红外光谱图，称取酒制多花黄精多糖2.0mg，加入100mgKBr干粉，在玛瑙研钵中研磨与KBr压片，置于傅里叶红外光谱扫描仪上4000cm-1～400cm-1范围内进行扫描分析。吸收峰波数分别为3420cm-1、2940cm-1、2895cm-1、1750cm-1、1620cm-1、1250cm-1、1050cm-1和889cm-1；从图3中可以看出分子结构中含有羟基、亚甲基、次甲基、羰基、醚氧基及吡喃糖环存在。
酒制多花黄精多糖的分子量测定使用日本岛津2010A高效液相色谱系统，配备岛津RID-20A检测器和TSK-gel G4000 PWXL柱(8.0mm×300mm，Borui Saccharide，Biotech.Co.Ltd)，流动相为0.05M的氯化钠水溶液，温度40℃，流速为0.6mL/min。经系列葡聚糖标准品制备的标定曲线计算分子量，得到分子量为4.2×104Da。
取酒制多花黄精多糖5mg、0.05M三氟乙酸10mL置于密闭安剖瓶中，100℃下水解30min，反应混合物用氮气干燥，用甲醇蒸发消除多余的酸。样品适量，水溶解，微孔滤膜过滤。采用美国Thermo Fisher Scientific公司生产的 HPAEC-PAD体系DionexICS-5000，100mM氢氧化钠水溶液为流动相，0.5 mL/min流经美国Dionex公司生产的carbpacTMPA20色谱柱(3mm×150mm) 分析酒制多花黄精多糖的单糖组成，结果见表1。
表1单糖的组成分析结果
单糖组成成分 果糖 阿拉伯糖 葡萄糖 葡萄糖醛酸 甘露糖醛酸 半乳糖 木糖
含量 72.7 9.52 5.78 5.08 2.85 2.33 1.76
上述过程制备得到酒制多花黄精多糖的体外药效学实验如下：
1、多糖溶液制备
取精制酒制多花黄精多糖样品适量，精密称定。用蒸馏水分别配置浓度为 0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、 3mg/mL、4mg/mL和5mg/mL，备用；抗坏血酸(Vc)为阳性对照组。
2、自由基清除率测定
DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基或ABTS自由基清除率测定采用公式(1)计算：
DPPH自由基：分别取不同浓度的多糖溶液1.0mL，加入2.0mL 0.2mM的 DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)-乙醇溶液，室温下避光反应30min，去离子水调零，517nm处测定其OD(光密度)值(记为A1)；用去离子水替代多糖溶液，测其OD值(记为A0)；用去离子水替代DPPH，测定其OD值(记为A2)。对相同浓度的抗坏血酸采用相同的方法测定其DPPH自由基清除能力作为阳性对照。
羟基自由基：分别取不同浓度的多糖溶液1.0mL，加入1.0mLFeSO4(6mmol/L)，1.0mLH2O2(6mmol/L)混合，37℃孵育10min，再加入1.0mL 水杨酸-乙醇溶液(6mmol/L)混匀，37℃孵育30min，去离子水调零，用分光光度计在510nm下测定其OD(光密度)值(记为A1)。用去离子水替代多糖溶液，测其OD值(记为A0)；用去离子水替代H2O2，测定其OD值(记为 A2)。对相同浓度的抗坏血酸采用相同的方法测定其羟基自由基清除能力作为阳性对照。
超氧阴离子自由基：利用NADH-NBT-PMS(还原型辅酶Ⅰ—吩嗪硫酸甲酯—氮蓝四唑)体系测定酒制黄精多糖清除超氧阴离子自由基能力，将1.0mL 多糖溶液与1.0mL浓度为557μmol/LNaDH(还原型辅酶I二钠盐)-Na溶液、 1.0mL浓度为45μmol/LPMS(N-甲基吩嗪甲基硫酸盐)溶液、1.0mL浓度为 108μmol/LNBT(氯化硝基四氮唑蓝)溶液混匀，于25℃下温浴5min，去离子水调零，用分光光度计在510nm下测定其OD(光密度)值(记为A1)；用去离子水替代多糖溶液，测其OD值(记为A0)；用去离子水替代NADH-NBT-PMS 反应液，测定其OD值(记为A2)。对相同浓度的抗坏血酸采用相同的方法测定其超氧阴离子自由基清除能力作为阳性对照。
ABTS自由基：7mmol/LABTS溶液(2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐与2.45mmol/L过硫酸铵溶液混合避光氧化12h得到ABTS混合液； ABTS混合液用pH为7.4的PBS溶液稀释至在734nm波长下，吸光值为0.80。取2.0mLABTS混合液与1.0mL多糖溶液混合，室温放置6min，去离子水调零，在734nm波长下测定其OD(光密度)值(记为A1)；用去离子水替代多糖溶液，测其OD值(记为A0)；用去离子水替代ABTS混合液，测定其 OD值(记为A2)。对相同浓度的抗坏血酸采用相同的方法测定其ABTS自由基清除能力作为阳性对照。按公式(1)计算清除率。
采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和EC50(半数有效浓度)计算，结果以mean±SD表示。自由基清除率测定结果见表2，结果表明酒制多花黄精多糖对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(OOH-)和ABTS自由基均有一定程度的清除作用，呈现浓度依赖性。
表2多花黄精多糖体外清除氧化自由基结果
上述过程制备得到酒制多花黄精多糖的体内药效学实验如下：
1、动物分组、模型建立及给药方案
50只实验小鼠适应一周，期间喂食普通饲料，自由饮水、觅食。适应期后，随机等分为正常对照组、D-半乳糖模型组、VC阳性对照组、酒制多花黄精多糖低剂量组、和酒制多花黄精多糖高剂量组。每组10只，除了空白对照组，其余各组每天腹腔注射0.2mL的D-半乳糖(500mg/kg)，每日给药1次，连续3 周，多花黄精多糖低剂量和高剂量组在腹腔注射D-半乳糖后的同天分别口服灌喂50mg/kg、200mg/kg多花黄精多糖水溶液，正常对照组灌喂等体积生理盐水，模型组在腹腔注射D-半乳糖后的同天灌喂等体积生理盐水。最后一次给药前，小鼠禁食不禁水12h。称重，给药后30min，眼球取血，脱臼，处死。取胸腺、脾脏、肝脏和肾脏组织，称重。
2、指标测定
全血收集于干净的1.5mL离心管中，室温放置2h，再置于4℃冰箱内过夜，待血液凝固血块，以3500×g的离心力，离心10min，分离血清。按试剂盒说明书测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 水平、丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)。
小鼠肝脏、脑和肾脏组织并将其在预冷的生理盐水中漂洗，去除血液，用滤纸吸干表面水分，称重。部分肝脏、脑和肾脏组织加入9倍0.9％质量浓度预冷的生理盐水，置于玻璃匀浆器中冰水浴迅速研磨制成组织匀浆，4℃下以 12000×g的离心力，离心15min，取上清液。按试剂盒说明书测定SOD、GSH-Px 和MDA、T-AOC水平。
3、肝脏组织学检查
取各小鼠肝脏右页相同部位约0.5cm×1cm×1cm的肝脏组织，10％福尔马林固定、乙醇脱水、石蜡包埋，切片(厚度为5μm)，苏木精和伊红染色(HE)，肝脏组织HE染色切片图如图4所示。利用日本日本尼康公司生产的Nikon Eclipse E100显微镜观察肝脏组织损伤程度。
从图4中可以看出，图4a空白对照组肝脏组织学特征正常，核结构清晰，肝细胞呈放射状排列在中央静脉周围，呈多角形，细胞核突出，细胞质均匀；图4b模型组出现严重的病理改变，肝细胞排列紊乱，胞浆内坏死、空泡，中央静脉扩张，充血；图4c阳性对照组肝细胞基本正常，无水肿变性，核膜结构完整清晰，排列稍拥挤；图4d酒制多花黄精多糖低剂量组肝细胞轻度水肿变性，肝细胞结构模糊，胞浆溶解，较模型组有所好转；图4e酒制多花黄精多糖高剂量组，病理改变明显，除部分肝细胞轻度肿胀外，其他结构接近正常。
4、统计学方法
采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)。结果以mean ±SD表示；p值小于0.05被认为有统计学意义。
5、结果分析
(1)酒制多花黄精多糖对器官指数的影响
酒制多花黄精多糖对小鼠器官指数的影响分析结果见表3，表3中##表示 p<0.01，与空白对照组相比具有显著性差异；*表示p<0.05，与模型组相比具有显著性差异，**表示p<0.01，与模型组相比具有极显著性差异。
从表3中的数据可以看出，与正常对照组比较，模型组的胸腺指数和脾脏指数显著降低(p<0.01)，模型组小鼠胸腺和脾脏萎缩；肝脏指数显著性升高 (p<0.01)；与模型组相比，多糖低剂量胸腺指数提高，但差异不显著(p>0.05)；多糖高剂量组胸腺和脾脏指数都有所提高(p<0.05)；低、高剂量组的肝脏指数较模型组明显降低(p<0.01)。肾脏指数较模型组都有一定的提高，无统计学差异(p>0.05)；结果见表3。
表3酒制黄精多糖对D－半乳糖致衰老小鼠器官指数的影响
(2)酒制多花黄精多糖对血清中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC的影响
表4为酒制多花黄精多糖对血清中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC的影响分析结果，从表4中可以看出，与正常对照组相比，模型组小鼠血清SOD和 GSH-Px、T-AOC活力显著降低(p<0.01)，MDA含量显著增加(p<0.01)。多糖低剂量组小鼠血清SOD、GSH-Px活力水平整体升高，MDA含量下降，与模型组相比均有显著性差异(p<0.05)，多糖高剂量组血清内SOD活力、GSH-Px 活力、T-AOC活力升高，MDA含量下降，与模型组相比有显著性差异(p<0.01)。
表4酒制黄精多糖对小鼠血清中T-AOC、SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响
组别/器官指数 T-AOC(U/mL) SOD(U/mL) GSH-Px(U/mL) MDA(U/mL)
正常对照组 0.7328±0.0035 170.5±6.37 94.7±2.07 1.823±0.1018
模型组 0.6027±0.0101## 112.4±2.54## 67.5±3.39## 3.250±0.2103##
阳性对照组 0.7164±0.0049** 155.4±4.66** 89.9±1.98** 2.046±0.02882**
多糖低剂量组 0.6753±0.0399 130.9±7.40* 77.5±2.86* 2.823±0.3315*
多糖高剂量组 0.6763±0.0148** 156.5±7.60** 88.7±3.34** 2.082±0.1743**
(3)酒制多花黄精多糖对肝脏组织中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC的影响
表5为酒制多花黄精多糖对肝脏组织中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC 的影响分析结果，从表5中可以看出，与正常对照组比较，模型组小鼠肝脏组织中SOD和GSH-Px、T-AOC活力极显著降低(p<0.01)，MDA含量显著增加(P<0.01)。多糖低剂量组SOD活力、T-AOC活力升高，与模型组比较有显著性差异(p<0.05)，SOD活力和MDA含量与模型组比较无统计学差异 (p>0.05)。多糖高剂量组小鼠肝脏中SOD、T-AOC、GSH-Px水平整体高于模型组，MDA含量显著降低(p<0.01)。
表5酒制黄精多糖对小鼠肝脏组织中T-AOC、SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响
组别/器官指数 T-AOC(U/mL) SOD(U/mL) GSH-Px(U/mL) MDA(U/mL)
正常对照组 0.07310±0.00231 370.8±13.92 412.4±21.44 0.7495±0.0863
模型组 0.03331±0.00642## 241.6±20.58## 244.3±23.23## 1.381±0.1350##
阳性对照组 0.06256±0.00473** 364.2±21.14** 386.4±23.27** 0.969±0.0873*
多糖低剂量组 0.05578±0.00238* 293.9±1.99* 313.6±41.22 1.283±0.1523
多糖高剂量组 0.06790±0.00205** 355.4±9.83** 365.0±8.14** 0.827±0.0433**
(4)酒制多花黄精多糖对脑组织中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC的影响
表6为酒制多花黄精多糖对肝脏组织中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC 的影响分析结果，从表6中可以看出，与正常对照组相比，模型组小鼠脑组织中SOD和GSH-Px、T-AOC活力显著降低(p<0.01)，MDA含量显著增加 (p<0.01)，模型构建成功。多糖低剂量脑匀浆组织内SOD活力、GSH-Px活力、T-AOC活力升高，MDA含量下降，与模型组相比有显著性差异(p<0.05)。多糖高剂量组脑匀浆内SOD活力、GSH-Px活力、T-AOC活力升高，MDA含量下降，与模型组相比有显著性差异(p<0.01)。
表6黄精多糖对小鼠肝脏组织中T-AOC、SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响
组别/器官指数 T-AOC(U/mL) SOD(U/mL) GSH-Px(U/mL) MDA(U/mL)
正常对照组 0.05988±0.00498 725.8±58.40 108.2±7.26 1.004±0.0457
模型组 0.03691±0.00196## 445.9±18.82## 71.3±2.58## 1.656±0.1195##
阳性对照组 0.05760±0.00344** 642.6±32.41** 104.0±6.55** 1.096±0.0271**
多糖低剂量组 0.04509±0.00167* 597.1±49.98** 79.6±1.35* 1.265±0.1300*
多糖高剂量组 0.05721±0.00053** 638.5±45.14** 102.0±6.67** 1.058±0.0575**
(5)酒制多花黄精多糖对肾脏组织中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC的影响
表7为酒制多花黄精多糖对肾脏组织中SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC 的影响分析结果，从表7中可以看出，与正常对照组相比，模型组小鼠肾脏组织中T-AOC、SOD和GSH-Px活力显著降低(p<0.05)，MDA含量显著增加 (p<0.01)，模型构建成功。多糖低剂量肾脏匀浆组织内SOD、T-AOC和GSH-Px 活力均升高，MDA含量下降，与模型组相比有显著性差异(p<0.05)。多糖高剂量组肾脏组织中内T-AOC、SOD和GSH-Px活力水平升高，MDA含量下降，与模型组比较有显著性差异(p<0.01)。
表7酒制黄精多糖对小鼠肾脏组织中T-AOC、SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响
组别/器官指数 T-AOC(U/mL) SOD(U/mL) GSH-Px(U/mL) MDA(U/mL)
正常对照组 0.09065±0.01026 256.2±7.25 251.9±16.78 2.433±0.2544
模型组 0.04256±0.00475## 213.6±11.28# 182.4±9.44# 4.098±0.2417##
阳性对照组 0.09016±0.00806** 252.7±3.76** 243.2±15.72** 2.561±0.0535**
多糖低剂量组 0.06953±0.00943** 238.5±13.16* 203.5±11.84* 3.697±0.3519**
多糖高剂量组 0.07756±0.00435** 255.4±7.49** 239.8±13.77** 2.594±0.3145**
本发明实施例的第二方面，提供一种如上述方法制备得到的多花黄精多糖的用途，该用途为抗衰老及降糖药物中的应用。
综上，本发明采用黄酒蒸制多花黄精多糖，此工艺制备的多花黄精断面亮黑色，质地柔软滋润、粘性足；有酒香气、甜味足，无麻舌感，无酸、苦味；符合“九蒸九制”传统工艺样品的标准。该制备工艺稳定，能够获得高抗氧化性的多糖。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (4)

1.酒制多花黄精多糖在制备抗氧化的药物中的应用，其特征在于，所述酒制多花黄精多糖分子量为4.2×104～8×104Da，所述酒制多花黄精多糖的单糖组成为果糖、阿拉伯糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖和木糖；
所述酒制多花黄精多糖的制备方法包括以下步骤：
取多花黄精新鲜根茎洗去泥沙，蒸汽熏蒸至透心，取出后恒温烘干，除去须根得到生黄精个子药；
取生黄精个子药适量经黄酒拌匀、闷润至吸尽，放入蒸笼中隔水蒸制，所述隔水蒸制温度为90～95℃，蒸制时间2～4h，蒸制次数4～6次，取出后40℃～70℃恒温干燥；重复操作至多花黄精断面亮黑色，质地柔软滋润、粘性足；切厚片后40℃～70℃干燥，制得酒制多花黄精；
将酒制多花黄精和热水混合多次热提，所述热水体积与酒制多花黄精质量比为3～15；热提温度为60～100℃，热提时间为1～3h，提取1～4次，所得提取液浓缩后加入乙醇多次进行醇沉，所述提取液浓度为0.2～2mL/g；所述醇沉过程中乙醇体积浓度为50％～90％，得到粗多糖；
在粗多糖溶解后的滤液中加入α-淀粉酶酶解，Sevag试剂脱蛋白、透析，得到酒制多花黄精多糖。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述α-淀粉酶酶解为：
按α-淀粉酶酶体积与酒制多花黄精质量比为1：2～5：1加入α-淀粉酶，酶解温度为30～60℃，酶解时间为0.5～10h。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述加Sevag试剂脱蛋白重复次数为3～20次，所述透析采用截留分子量大于3500Da的透析袋透析2～3天，续用去离子水透析12～48h。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酒制多花黄精多糖的单糖组成为果糖72.7份、阿拉伯糖9.52份、葡萄糖5.78份、葡萄糖醛酸5.08份、甘露糖醛酸2.85份、半乳糖2.33份和木糖1.76份。
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