CN101255199A - 一种从黄精中提取黄精多糖的方法 - Google Patents

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Abstract

一种从黄精中提取黄精多糖的方法，首先，将黄精药材粗粉溶于水中，加热煎煮过滤，得到黄精的水提取液；然后，将水提取液浓缩至密度1.05～1.18，加入95％的乙醇至溶液中乙醇浓度为75～85％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。本发明的不仅提取方法简单，提取率高，而且按本发明的提取方法能够从黄精中提取具有增强小鼠免疫功能的有效部位。

Description

一种从黄精中提取黄精多糖的方法
技术领域
本发明涉及一种黄精多糖的提取方法，具体一种从黄精中提取黄精多糖的方法。
背景技术
黄精(Rhizoma Polygonati)为百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatummill.)多年生草本植物，药用部分为干燥根茎。作为常用中药，黄精收载于《明医别录》、《食疗本草》、《本草纲目》、《中国药典》(2005年版)一部和卫生部公布的《既是食品又是药品的物品名单》中。黄精属植物在全世界有40余种，我国有31种。
有关黄精的研究已有多篇报道。黄精的主要化学成分有：黄精多糖、甾体皂苷、黄酮等。黄精具有降血糖功能、对心血管系统的保护功能、增强免疫功能、延缓衰老及防治肿瘤等功能。黄精在人群中已有广泛的应用，如：糖尿病、呼吸系统疾病、心血管系统疾病、消化系统疾病、白细胞减少症、外生殖器感染等疾病的治疗。
《中国药典》(2005年版)收载的黄精有：滇黄精(Polygonatumkingianum Coll.et Hemsl.)、黄精(Polygonatum sibiricum Red.)和多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。其中，滇黄精的基础研究和开发研究报道较多，而陕西产鸡头黄精(Polygonatum sibiricum Red.)的研究较少。黄精多糖是黄精中主要的功效成分，也是《中国药典》(2005年版)中规定的黄精定量指标，在以往的研究中，未见对陕西产鸡头黄精(Polygonatum sibiricum Red.)中黄精多糖的水提取和醇沉工艺的系统研究，也罕见黄精多糖对小鼠免疫功能影响的系统研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从黄精中提取黄精多糖的方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：首先，将黄精药材粗粉溶于10～14倍水中，加热煎煮0.5～1.5小时，提取1～3次，过滤，得到黄精的水提取液；然后，将水提取液浓缩至密度1.05～1.18，加入质量浓度为95％的乙醇至溶液中乙醇的质量浓度为75～85％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。
本发明的不仅提取方法简单，提取率高，而且按本发明的提取方法能够从黄精中提取具有增强小鼠免疫功能的有效部位。
具体实施方式
实施例1：首先，将陕西产黄精(Polygonatum sibiricum Red.)粗粉溶于12倍水中，加热煎煮0.5小时，提取1～3次，过滤，得到黄精的水提取液；然后，将水提取液浓缩至密度1.05，加入95％的乙醇至溶液中乙醇浓度为85％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。
实施例2：首先，将陕西产黄精(Polygonatum sibiricum Red.)粗粉溶于11倍水中，加热煎煮0.8小时，提取1～3次，过滤，得到黄精的水提取液；然后，将水提取液浓缩至密度1.10，加入95％的乙醇至溶液中乙醇浓度为80％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。
实施例3：首先，将陕西产黄精(Polygonatum sibiricum Red.)粗粉溶于14倍水中，加热煎煮1.2小时，提取1～3次，过滤，得到黄精的水提取液；然后，将水提取液浓缩至密度1.15，加入95％的乙醇至溶液中乙醇浓度为77％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。
实施例4：首先，将陕西产黄精(Polygonatum sibiricum Red.)粗粉溶于13倍水中，加热煎煮1.5小时，提取1～3次，过滤，得到黄精的水提取液；然后，将水提取液浓缩至密度1.18，加入95％的乙醇至溶液中乙醇浓度为75％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。
发明人从陕西地道药材黄精(Polygonatum sibiricum Red.)中经水提醇沉提取得到黄精多糖提取物，并通过试验证实黄精多糖提取物能够增强小鼠的免疫功能。
以下结合发明人给出的提取工艺和药效学实验对本发明作进一步的详细说明。
本发明所称的黄精多糖，是从陕西产黄精(Polygonatum sibiricum Red.)药材粗粉经水提醇沉工艺得到，提取物黄精多糖具有增强小鼠免疫的功能。
黄精多糖对小鼠免疫功能的影响：
ICR封闭群雄性小白鼠，每个实验50只，每组10只，体重18-22g，由西安交通大学实验动物中心提供。
实验指标体重；脏器/体重比值测定：胸腺/体重，脾脏/体重；细胞免疫功能的测定：迟发型变态反应实验；体液免疫功能的测定：血清溶血素测定；单核-巨噬细胞免疫功能的测定：小鼠碳廓清实验。
剂量设计给药剂量组(黄精多糖高剂量组0.72g/kg.bw、中剂量组0.36g/kg.bw和低剂量组0.18g/kg.bw，以下简称高、中、低剂量组)、阳性对照组(稀释10倍的甘露聚糖肽口服液，简称阳性对照组)和空白对照组(给生理盐水)。
动物分组和喂养每个实验用50只雄性小鼠，将小鼠随机分为5组，每组10只，三个给药剂量组、阳性对照组和空白对照组。每日灌胃给药一次，每次灌胃容量为20ml/kg·bw，自由进食和饮水，连续给药15天。
数据处理使用SPSS11.0 for window软件包对数据进行统计分析。统计学方法：one-way ANOVA。结果以平均值±标准差(Mean±SD)表示。P＜0.05表示有统计学差异。
1.小鼠细胞免疫实验方法与结果
方法黄精多糖对小鼠细胞免疫功能的测定，采用迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity，DTH)中的二硝基氟苯诱导小鼠DTH(耳肿胀法)。本法是利用二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene，DNFB)稀释液可与腹壁皮肤蛋白结合成完全抗原，由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4～7天后再将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部肿胀，一般在抗原攻击24～48h达到高峰，其肿胀程度可以反应迟发型变态反应程度。
结果实验结果显示：黄精多糖高、中、低剂量组和阳性对照组的小鼠耳肿胀程度均高于空白对照组。其中，高剂量组和阳性对照组的小鼠耳肿胀程度与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)，说明黄精多糖能显著增强小鼠迟发型变态反应强度，对小鼠细胞免疫功能具有增强作用。高剂量组与阳性对照组的小鼠耳肿胀程度无显著性差异(P＞0.05)，说明高剂量组的细胞免疫功能与阳性对照组相当。
黄精多糖高、中、低剂量组和阳性对照组的胸腺/体重比和脾脏/体重比均高于空白对照组。其中，阳性对照组的胸腺/体重比与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)；高、中、低剂量组的脾脏/体重比与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)。说明黄精多糖能提高小鼠的免疫器官与体重的比。
2.小鼠体液免疫实验方法与结果
方法黄精多糖对小鼠体液免疫功能的测定，采用血清溶血素测定中的半数溶血值(HC50)测定法。本法是利用绵羊红细胞(sheep red bloodcells，SRBC)免疫动物后，血清中出现SRBC抗体(溶血素)，在补体参与下，与SRBC一起孵育，可发生溶血反应，释放血红蛋白，通过测定血红蛋白含量反映动物血清中溶血素的含量。
结果实验结果显示：黄精多糖高、中、低剂量组和阳性对照组的HC50均高于空白对照组。高、中剂量组和阳性对照组的HC50与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，说明黄精多糖能显著增强小鼠血清中溶血素的含量，对小鼠体液免疫功能具有增强作用；随着给药剂量的增大，HC50随之增大，说明黄精多糖对小鼠体液免疫功能的增强作用具有剂量效应依赖关系。高、中剂量组与阳性对照组的半数溶血值(HC50)无显著性差异(P＞0.05)，说明高、中剂量组的体液免疫功能与阳性对照组相当。
黄精多糖高、中、低剂量组和阳性对照组的胸腺/体重比和脾脏/体重比均高于空白对照组。其中，阳性对照组的胸腺/体重比与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)，高、中、低剂量组的脾脏/体重比与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)。说明黄精多糖能提高小鼠的免疫器官与体重的比。
3.小鼠单核-巨噬细胞免疫实验方法与结果
方法黄精多糖对小鼠单核-巨噬细胞免疫功能的影响采用小鼠碳廓清实验。在一定范围内，体内碳颗粒被清除速率与血碳浓度呈指函数关系。以血碳浓度对数值为纵座标，时间为横座标，两者呈直线关系。此直线斜率(K)可表示吞噬速率。动物肝、脾重量影响吞噬速率，一般以校正吞噬指数a表示。
结果实验结果显示：黄精多糖高、中、低剂量组和阳性对照组的吞噬指数(a)均高于空白对照组，且与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，说明黄精多糖能显著增强小鼠体内碳颗粒被清除的速率，对小鼠单核-巨噬细胞免疫功能具有增强作用。高剂量组与阳性对照组的吞噬指数(a)无显著性差异(P＞0.05)，说明高剂量组的单核-巨噬细胞免疫功能与阳性对照组相当。
黄精多糖高、中、低剂量组和阳性对照组的胸腺/体重比均高于空白对照组。其中，高、中剂量组和阳性对照组的胸腺/体重比与空白对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)；高剂量组的脾脏/体重比与空白对照组比较具有显著性差异(P＜0.05)。黄精多糖能增强小鼠迟发型变态反应强度，对小鼠细胞免疫功能具有增强作用；黄精多糖能增强小鼠血清中溶血素的含量，对小鼠体液免疫功能具有增强作用，且有剂量效应依赖关系；黄精多糖能增强小鼠体内碳颗粒被清除的速率，对小鼠单核-巨噬细胞免疫功能具有增强作用。
结论：本发明所称的黄精多糖，是从陕西产黄精(Polygonatumsibiricum Red.)粗粉经以上最佳工艺条件下提得。黄精多糖为黄精的增强免疫的有效部位，黄精多糖(黄精的水提醇沉部位)为黄精具有增强小鼠细胞免疫、体液免疫和小鼠单核-巨噬细胞免疫功能的有效部位。

Claims (1)

1、一种从黄精中提取黄精多糖的方法，其特征在于：
1)首先，将黄精药材粗粉溶于10～14倍水中，加热煎煮0.5～1.5小时，提取1～3次，过滤，得到黄精的水提取液；
2)然后，将水提取液浓缩至密度1.05～1.18，加入质量浓度为95％的乙醇至溶液中乙醇的质量浓度为75～85％，沉积12～36小时，过滤，得到浅黄色沉淀，干燥后得到黄精多糖提取物。
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