TWI599362B - 中華被毛孢多醣體用於抑制肥胖之用途及其製備方法 - Google Patents

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Description

中華被毛孢多醣體用於抑制肥胖之用途及其製備方法
本發明提供一種中華被毛孢多醣體之用途，特別係一種中華被毛孢多醣體用於抑制肥胖之用途。
傳統中藥在亞洲國家有悠久的歷史，可追溯至幾千年前。通常使用的一類傳統藥物是由藥用蕈類組成，例如牛樟芝(Antrodia cinnamomea)、巴西蘑菇(Agaricus blazei Murrill)、靈芝(Ganoderma lucidum)、及冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis)，這類藥物具有包含免疫調節作用在內的廣泛生物活性。藥物蕈類一冬蟲夏草用於促進健康與長壽已有數世紀之久，最近辨識出無性型(anamorphic)、菌絲體形式的冬蟲夏草菌株，即為中華被毛孢(Hirsutella sinensis)。先前研究顯示冬蟲夏草子實體與中華被毛孢菌絲體的萃取物在實驗室的動物實驗中有很多有益的功效，包括抗疲勞、抗發炎、護腎以及增強性慾之功效。
長期以來，肥胖被定義為與大多數的健康問題以及與減少壽命有關的疾病病症，越來越多臨床數據顯示，肥胖與慢性發炎症狀密切相關，且會導致胰島素抗性、第二型糖尿病、脂肪肝、心血管疾病、阻塞性呼吸暫停以及癌症。然而，肥胖的發生機率很高，目前已經成為威脅大眾 健康的主要病症之一，全球約有5億的肥胖者及14億的超重者。因此，預防肥胖已成為現今社會大眾的一大挑戰。
目前對於一些肥胖與相關代謝異常疾病，使用包含有抗生素及益菌素用於其治療，例如：在缺乏瘦素基因的小鼠(ob/ob)或以高脂飼料餵養的小鼠給予抗生素治療，可以改變腸道菌群、降低血液內毒素血症以及改善葡萄糖耐受性。此外，由於益菌素為不可消化，因此藉由增強在腸道中發現的特定有益的細菌之生長，該些益生菌可發酵腸道中的碳水化合物及纖維，達到減少體重及具有抗發炎之效果。益菌素不僅改變腸道菌群還能改善腸道緊密連接完整性，並降低脂多醣(lipopolysaccharides)引起的血液內毒素血症。在現今偏好精緻加工的飲食習慣下，對於能幫助維持腸胃道機能健康完整的益菌素，社會大眾的相關飲食常有不足。因而，對於天然安全並方便使用的益菌素之開發提供，更顯其迫切需要。
然而，基於人類肥胖發生率有越來越高的趨勢，以及肥胖在治療及預防上的困難，有需要以替代方法來預防、治療或控制此病症。新的方法可引入至飲食中，不需要在生活方式有太大的改變且不會引起毒素或對健康有不良的影響。
有鑑於此，本發明之一目的係提供一種中華被毛孢(Hirsutella sinensis)多醣體用於製備抑制肥胖之藥物的用途，其中該中華被毛孢多醣體係為中華被毛孢菌絲體的水萃取物；且其中該中華被毛孢多醣體至少包含甘露醣(mannose)、葡萄醣(glucose)及半乳醣(galactose)。
在本發明之一實施例中，其中該中華被毛孢多醣體進一步包含岩藻醣(fucose)、鼠李醣(rhamnose)、阿拉伯醣(arabinose)、葡萄醣胺(glucosamine)以及半乳醣胺(galactosamine)。
在本發明之一實施例中，其中該中華被毛孢多醣體中岩藻醣：鼠李醣：阿拉伯醣：葡萄醣胺：半乳醣：葡萄醣：甘露醣：半乳醣胺 的比例係為3~4：3~4：1~2：4~5：23~24：12~13：50~51：0.2~0.6。
在本發明之一實施例中，其中該中華被毛孢多醣體的有效劑量為0.001至1,000mg/kg。
在本發明之一實施例中，其中該中華被毛孢多醣體之重量平均分子量係為312kDa，以及範圍係介於15,776Da至1,231,969Da之間，分子量分布指數(Mw/Mn)係為7.475。
本發明之另一目的係提供一種所述中華被毛孢多醣體之製備方法，包含：係由一中華被毛孢菌絲以水萃取，並續以一醇類沉澱，再經離心分離與濾膜過濾而得，其中(a)將一中華被毛孢菌絲與水混合並以低轉速萃取一預定時間，取上清液並將該上清液濃縮，以獲得一中華被毛孢菌絲體水萃取濃縮物；(b)將該中華被毛孢菌絲體水萃取濃縮物加入一醇類靜置一段時間以沉澱出一中華被毛孢多醣體粗萃取物；以及(c)將該中華被毛孢多醣體粗萃取物離心後獲得一沈澱物；以切向流過濾系統(TFF)過濾該沈澱物，以獲得一中華被毛孢多醣體。
在本發明之一實施例中，其中該步驟(a)進一步包含將該上清液進行一高溫萃取處理步驟，該高溫萃取處理步驟係於高溫攪拌式反應器萃取一預定時間；且該上清液係以蒸發方式濃縮。
在本發明之一實施例中，其中步驟(a)該中華被毛孢菌絲與水混合的比值為5.0%(w/v)。
在本發明之一實施例中，其中步驟(b)該醇類係為95%酒精，該中華被毛孢水萃取濃縮物之濃度比值為20%(w/v)，且該20%(w/v)濃度比值的中華被毛孢菌絲體水萃取濃縮物與95%酒精混合的比例為1：5；以及該一段時間係至少十六小時。。
在本發明之一實施例中，其中步驟(c)切向流過濾系統由0.2μm中空纖維膜過濾及300kDa超限濾膜(50cm2)TFF之組合進行劃分過濾。
給予一個體本發明之中華被毛孢多醣體可減少體重、附睪脂肪及皮下脂肪的蓄積；亦能達到預防、治療肥胖及抑制脂肪堆積之功效。因此，本發明之中華被毛孢多醣體為一種預防、治療肥胖的新策略。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，以下所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
第一圖係為本發明之中華被毛孢(Hirsutella sinensis)多醣體的萃取流程圖。
第二圖係為本發明利用高效能陰離子交換色層分析儀裝配脈衝式安培檢測器(high performance anion exchange chromatography-pulsed amperometric detection，HPAEC-PAD)分析中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)中的單醣組成。
第三圖係為本發明之中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)的凝膠滲透圖譜(gel permeation chromatogram)。
第四圖係為本發明之中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)的分子量取對數(Log molecular weight)對重量分部/微分分子量取對數(weight fraction/dLogMW)的曲線圖。
第五圖係為本發明之中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)的分子量取對數(Log molecular weight)對累積重量分部(cumulative weight fraction)的曲線圖。
第六圖A至D係為本發明之中華被毛孢多醣體對高脂飲食誘導成肥胖小鼠(high-fat diet，HFD)在減輕體重及減少脂肪堆積的數據圖；C57BL/6 公小鼠(每組10隻)以普通飲食(chow；13.5%的能量來自脂肪)或是高脂飲食(HFD；60%的能量來自脂肪)，並且搭配0.001至1,000mg/kg的多醣分餾液(8%的CS-1、CS-2、CS-3或CS-4)或二次蒸餾水，以灌胃的方式給予三個月；A為體重、B為體重增加、C為皮下脂肪組織(subcutaneous adipose tissue，SAT)及D為脂肪墊(fat pad)。此結果以平均值±平均值脂標準差(standard error of the mean，SEM)表示，在數值統計分析應用上使用單因子變異數分析(one-way ANOVA)(**P<0.01,***P<0.001)。
定義
本文所述之有效劑量表示能減少動物及人類體重及脂肪堆積的中華被毛孢多醣體劑量，適當的有效劑量可依治療生物體或個體的不同而有不同，但可以包含劑量遞增之研究方式的各種實驗技術決定有效劑量。
如於本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
本發明提供一種有效減少動物及人類體重及脂肪堆積的中華被毛孢多醣體，經由實驗顯示本發明之中華被毛孢多醣體能有效減少小鼠體重及脂肪堆積。一般而言，每日給予哺乳動物或人類本發明之多醣體0.001至1,000mg/kg劑量可有效減少體重及脂肪堆積，詳細說明如下。
實施例1 本發明之中華被毛孢多醣體的製備方法
本發明之中華被毛孢多醣體係為中華被毛孢菌絲體的水萃取物能有效用於預防、治療肥胖、減少脂肪蓄積以及體重管理。本發明之中華被毛孢多醣體可引入至飲食中，其可為一飲品、日常補充品或食物，不需要在生活方式有太大的改變，且不會引起毒素或對健康有不良的影響。
1.1 本發明之中華被毛孢發酵菌絲體水萃取濃縮物的製備
如第一圖所示，首先，由長庚生物科技股份有限公司(臺北，臺灣)取得之乾燥液態發酵的中華被毛孢菌絲體(500g)混合10L蒸餾水形成混合液(50g/L)，其中固體與液體比值為5.0%(w/v)，以20公升攪拌式反應器、121℃高溫以及150RPM轉速(revolution per minute)條件下萃取三十分鐘。接著，離心該萃取後混合液以去除固體物質以獲得一中華被毛孢發酵菌絲體水萃取物，並以蒸發方式濃縮該中華被毛孢發酵菌絲體水萃取物至2.5公升，並分裝至20ml暗色玻璃安瓶，接著經高壓高溫滅菌處理二十分鐘，以獲得一固體與液體比值為20.0%(w/v)的一中華被毛孢發酵菌絲體水萃取濃縮物，保存於4℃備用。
1.2 本發明之中華被毛孢多醣體粗萃取物的製備
如第一圖所示，取120ml、20.0%(w/v)的中華被毛孢發酵菌絲體水萃取濃縮物(代號為W1，含有總水溶性碳水化合物2.09g；詳見表一)，加入600ml(五倍中華被毛孢發酵菌絲體水萃取濃縮物體積)、95%酒精混合均勻，在4℃靜置十六小時以沉澱出中華被毛孢多醣體粗萃取物，接著續以離心去除上清液，並以120ml、70%冰酒精清洗及離心沈澱中華被毛孢多醣體粗萃取物三次，將三次的上清液混合為酒精沈澱上清液，體積為1,040ml(代號為CS-4，含有總水溶性碳水化合物0.83g；詳見表一)。取1,000ml蒸餾水復溶酒精沈澱中華被毛孢多醣體粗萃取物，再經濃縮至700ml以去除殘留酒精，接著加入蒸餾水定量此中華被毛孢多醣體粗萃取物至2,400ml(代號為W2，含有總水溶性粗多醣1.26g；詳見表一與表二)。
1.3 本發明之中華被毛孢多醣體粗萃取物的分離純化
取2,400ml中華被毛孢多醣體粗萃取物至50℃水浴槽，接者以切向流超限過濾系統TFF(Spectrum公司，KrosFlo型號)組合0.2μm中 空纖維膜(1,500cm2，polyethersulfone，PES)並將過膜壓力(transmembrane pressure，TMP)控制在15至16psi進行劃分過濾。當回流液體積剩餘800至1000ml時補入蒸餾水600ml，繼續操作過濾。重複操作補入蒸餾水600ml三次，共計補入蒸餾水1,800ml。得到1,250ml的CS-1-1分餾液(總水溶性粗多醣0.24g)及3,600ml過濾液。
取前步驟3,600ml、0.2μm中空纖維膜過濾液至50℃水浴槽，接者以切向流過濾系統組合300kDa超限濾膜(50cm2、PES)進行劃分過濾，將過膜壓力(TMP)控制在18至20psi。當回流液體積剩餘1,000至1,200ml時補入蒸餾水600ml，繼續操作過濾。得到1,040ml的CS-1-2分餾液(總水溶性粗多醣0.18g)以及3,600ml過濾液。合併CS-1-1分餾液與CS-1-2分餾液得到2,290ml的CS-1分餾液(代號為CS-1，總水溶性粗多醣0.42g；詳見表二)。
另取前步驟3,600ml過濾液至50℃水浴槽，接著以切向流過濾系統組合10kDa超限濾膜(50cm2、PES)進行劃分過濾，將過膜壓力(TMP)控制在18至20psi。當回流液體積剩餘1,000至1,200ml時補入蒸餾水600ml，繼續操作過濾。得到990ml的10kDa至300kDa的CS-2分餾液(總水溶性粗多醣0.64g；詳見表二)，3,600ml的10kDa過濾液，該10kDa過濾液即為小於10kDa的CS-3分餾液(總水溶性粗多醣0.16g；詳見表二)。將劃分收集到的四個CS-1至CS-4分餾液，進行濃縮至少量體積並復溶蒸餾水至體積120ml。每一分餾液分裝於20ml暗色玻璃安瓶，接著經高壓高溫中滅菌斧滅菌二十分鐘，保存於4℃備用。
1.4 本發明之中華被毛孢多醣體的總水溶性碳水化合物或總水溶性粗多醣含量分析
本發明利用酚-硫酸法分析20.0%(w/v)的中華被毛孢菌絲體水萃取濃縮物(代號為W1,120ml)、中華被毛孢多醣體粗萃取物(代號為W2, 2,400ml)、CS-1分餾液(2,290ml)、CS-2分餾液(990ml)、CS-3分餾液(3,600ml)及CS-4分餾液(1,040ml)的總水溶性碳水化合物或總水溶性粗多醣含量。配製0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.16、0.18與0.20mg/ml之葡萄醣標準溶液。每一濃度的葡萄醣標準溶液分別取200μl至1.5ml微量離心管，再加入200μl 5%苯酚並均勻混合。接著加入1ml硫酸並均勻混合。待靜置二十分鐘，以分光光度計(spectrophotometer)在波長490nm下測定其讀值，並以此讀值建立檢量線，檢量線之R2>0.99。待測樣品經適當稀釋後，取200μl至1.5ml微量離心管，再加入200μl 5%苯酚均勻混合均勻。接著加入1ml硫酸均勻混合。待靜置二十分鐘，以分光光度計在波長490nm下測定其讀值，將讀值帶入檢量線可以計算獲得總水溶性碳水化合物或總水溶性粗多醣的濃度。
中華被毛孢多醣體粗萃取物的總水溶性碳水化合物與總水溶性粗多醣含量分析結果如表一及表二所示，其中在表二的20%(w/v)中華被毛孢菌絲體萃取濃縮液的總水溶性粗多醣含量分布分析中，中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的總水溶性粗多醣中含有0.42克截留分子量大於300kDa的本發明之中華被毛孢多醣體(CS-1)，其佔總中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的33.3%；0.64克截留分子量10kDa至300kDa的本發明之中華被毛孢多醣體(CS-2)，其佔總中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的50.8%；0.16克截留分子量小於10kDa的本發明之中華被毛孢多醣體(CS-3)，其佔總中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的12.7%。
1.5本發明之中華被毛孢多醣體的單醣組成分析
本發明使用高效能陰離子交換色層分析儀裝配脈衝式安培檢測器(HPAEC-PAD；廠牌：Thermo Scientific；型號：Dionex ICS-5000 System)分析各中華被毛孢菌絲體分餾物中的單醣組成。岩藻醣(L-fucose)、鼠李醣(L-rhamnose)、半乳醣胺(D-galactosamine)、阿拉伯醣(D-arabinose)、葡萄醣胺(D-glucosamine)、半乳醣(D-galactose)、葡萄醣(D-glucose)與甘露醣(D-mannose)之標準混合溶液濃度為0.1、0.5、1.0、2.0與5.0mg/L。分析條件在注射體積為25μl、分析管柱為CarboPac PA1(4×250mm)、移動相為純 水(92%)與200mM氫氧化鈉水溶液(8%)經混合後組成比例為16mM氫氧化鈉水溶液、流速為1.0ml/min以及管柱烘箱溫度為30℃。注射入單醣標準品，經過三十分鐘之分析時間，可獲得單醣標準品在0.1、0.5、1.0、2.0與5.0mg/L的峰形積分面積，以此積分面積建立各別單醣之檢量線，檢量線之R2>0.99。
取1.0ml的分餾液(CS-1)(總水溶性粗多醣3mg)加入1.79ml蒸餾水以及1.33ml三氟醋酸(trifluoroacetic acid)，在112℃下加熱十二小時進行酸水解。接著將此混合物濃縮並反覆復溶蒸餾水以除酸，最後復溶蒸餾水至1mg/ml。此水解產物經稀釋4倍(0.25mg/ml)後取25μl，利用高效能陰離子交換色層分析儀搭配脈衝式安培檢測器與分析管柱分析，移動相為純水(92%)與200mM氫氧化鈉水溶液(8%)經混合後組成比例為16mM氫氧化鈉水溶液、流速為1.0ml/min以及管柱烘箱溫度為30℃。經過三十分鐘之分析時間，將樣品分析所得峰形之滯留時間與積分面積與8個標準品相比對，可經由標準品檢量線計算出分餾液(CS-1)的各別單醣濃度，進而獲得單醣組成的百分比。分餾液(CS-1)經高效能陰離子交換色層分析儀搭配脈衝式安培檢測器分析單醣組成比例，岩藻醣佔3.2%、鼠李醣佔3.4%、阿拉伯醣佔1.7%、葡萄醣胺佔4.6%、半乳醣佔23.8%、葡萄醣佔12.5%、甘露醣佔50.4%以及半乳醣胺佔0.4%(詳見第二圖、表三與表四)。
1.6本發明之中華被毛孢多醣體的分子量分佈的分析
本發明使用分子篩滲透層析法(size-exclusion chromatography,SEC)搭配折射(refractive index,RI)以及光散射(light scattering,LS)二合一偵測器之高效液相色增分析儀(high performance liquid chromatography，配有Waters 2410折射率檢測器index detector，Viscotek 270雙檢測器)分析中華被毛孢多醣體體CS-1與CS-2分餾液中的多醣分子量分佈。製備濃度1.5mg/ml的分子量標準品葡聚醣(Dextran 670)進行系統校正。分析條件為注射體積100μl、分析管柱為串接2組GPC管柱TSKgel G5000PW×L(7.8×300mm)與TSKgel G6000PW×L(7.8×300mm)、移動相為純水添加0.02% NaNO3、流速為0.5ml/min以及管柱分析溫度為45℃。
取CS-1及CS-2分餾液以上述條件以OmniSEC軟體(Viscotek公司，美國)進行分析，其計算方式如下表示：Mn：數目平均分子量
Mw：重量平均分子量
Mz：較高平均分子量
Mp：最高波鋒分子量，其為分子量分布最高重量分布點的分子量
Mi：單鏈分子量(molecular weight of a chain)
Ni：單鏈的數目(number of chains of that molecular weight)
利用折射/光散射GPC/SEC系統進行CS-1分餾液(總水溶性粗多醣4.0mg/ml)的分子量分析：取得折射率(refractive index，RI)以及光散射(light scattering，LS)數據(第三圖)。多醣分子量分布以OmniSEC軟體(Viscotek公司，美國)進行分析(第四圖)，同時獲得累積重量分部(cumulative weight fraction)(第五圖)。
CS-1分餾液累積重量分部值為0.95(5%)及0.05(95%)，多醣分子量分別為15,776Da及1,231,969Da。在15,776Da及1,231,969Da之間的多醣佔有大約90%的總多醣重量。表五顯示CS-1與CS-2多醣分餾液之比較表。
實施例2 本發明之中華被毛孢多醣體對高脂飲食誘導成肥胖小鼠(High-Fat Diet，HFD)在減輕體重及減少脂肪堆積之功效
本發明以標準飼料飼養(來自脂肪能量13.5%)的C57BL/6NCrlBltw作為對照組(Chow)，以及高脂飲食誘導(來自脂肪能量60%)成肥胖小鼠作為實驗組(HFD)，每個實驗組再分為每日灌胃給予0.001至1,000mg/kg的本發明之中華被毛孢多醣體CS-1分餾液、CS-2分餾液、CS-3分餾液、CS-4餾液或二次蒸餾水之小組並持續三個月(每小組n=10)，分別為HFD+8% CS-1、HFD+8% CS-2、HFD+8% CS-3、HFD+8% CS-4、HFD、Chow+8% CS-1、Chow+8% CS-2、Chow+8% CS-3、Chow+8% CS-4及Chow小組。
如第六圖A至D顯示中華被毛孢多醣體對高脂飲食誘導成 肥胖小鼠(HFD)在減輕體重及減少脂肪堆積之功效。在體重方面如第六圖A所示，除HFD+8% CS-4外，相較於HFD組，HFD+8% CS-1、HFD+8% CS-2及HFD+8% CS-3組體重皆較輕，顯示出本發明不同分子量的中華被毛孢多醣體皆具有減輕體重的效果。在減少體重增加方面如第六圖B所示，相較於HFD組，HFD+8% CS-1、HFD+8% CS-2、HFD+8% CS-3及HFD+8% CS-4組減少體重增加效果皆佳，顯示出不同分子量的中華被毛孢多醣體皆具有減少體重增加的效果。在皮下脂肪組織(subcutaneous adipose tiusse，SAT)方面如第六圖C所示，相較於HFD組，HFD+8% CS-1、HFD+8% CS-2、HFD+8% CS-3及HFD+8% CS-4組減少皮下脂肪組織效果皆佳，顯示出不同分子量的中華被毛孢多醣體皆具有減少皮下脂肪組織的效果。在脂肪墊(fat pad)方面如第六圖D所示，相較於HFD組，HFD+8% CS-1、HFD+8% CS-2、HFD+8% CS-3及HFD+8% CS-4組減少脂肪墊效果皆佳，顯示出不同分子量的中華被毛孢多醣體皆具有減少脂肪墊的效果。因此，本發明之中華被毛孢多醣體具有良好的減輕體重、減少體重增加以及減少脂肪推積的效果。
本發明估計中華被毛孢多醣體使用三個月後產生對人類有利影響的每日口服劑量：每隻小鼠給予100μl本發明之中華被毛孢多醣體，各中華被毛孢多醣體分餾液之多醣體含量分別為0.35g/100mL(CS-1)、0.53g/100mL(CS-2)、0.13g/100mL(CS-3)、0.69g/100mL(CS-4)。因此，把100μl本發明分餾液給予小鼠(體重為30g)之各中華被毛孢多醣體的劑量，係分別為0.00035g/小鼠體重(CS-1)、0.00053g/小鼠體重(CS-2)、0.00013g/小鼠體重(CS-3)、0.00069g/小鼠體重(CS-4)。經由換算，可得用以處理人類個體(體重為70kg)之各中華被毛孢多醣體分餾物的劑量係分別為0.82g/人個體體重(CS-1)、1.24g/人個體體重(CS-2)、0.30g/人個體體重(CS-3)、1.61g/人個體體重(CS-4)，亦即用於人體之劑量分別為：0.012g/kg(CS-1)、0.018g/kg(CS-2)、0.0043g/kg(CS-3)、0.023g/kg(CS-4)。
本發明提供一種中華被毛孢多醣體用於抑制肥胖之用途及其製備方法，經由本發明之特殊製備方法所萃取的中華被毛孢多醣體能有效降低哺乳動物體重及脂肪堆積。因此，本發明對於體重管理及減少體脂肪堆積提供一種新策略，該策略可有效應用於商業上體重控制及管理需求之目標族群，達到增進人類健康福祉之目的。

Claims (11)

  1. 一種中華被毛孢(Hirsutella sinensis)多醣體用於製備抑制肥胖之藥物的用途，其中該中華被毛孢多醣體係為中華被毛孢菌絲體的水萃取物；且其中該中華被毛孢多醣體萃取物至少包含甘露醣(mannose)、葡萄醣(glucose)及半乳醣(galactose)。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體進一步包含岩藻醣(fucose)、鼠李醣(rhamnose)、阿拉伯醣(arabinose)、葡萄醣胺(glucosamine)以及半乳醣胺(galactosamine)。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體中岩藻醣：鼠李醣：阿拉伯醣：葡萄醣胺：半乳醣：葡萄醣：甘露醣：半乳醣胺的比例係為3~4：3~4：1~2：4~5：23~24：12~13：50~51：0.2~0.6。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體的有效劑量為0.001至1,000mg/kg。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體之重量平均分子量係為312kDa，以及範圍係介於15,776Da至1,231,969Da之間，分子量分布指數(Mw/Mn)係為7.475。
  6. 一種如申請專利範圍第1項所述之中華被毛孢多醣體之製備方法，包含：係由一中華被毛孢菌絲以水萃取，並續以一醇類沉澱，再經離心分離與濾膜過濾而得，其中(a)將一中華被毛孢菌絲與水以5.0%比值(w/v)混合並以低轉速萃取一預定時間，取上清液並將該上清液濃縮，以獲得一中華被毛孢菌絲體水萃取濃縮物；(b)將20.0%(w/v)該中華被毛孢菌絲體水萃取濃縮物加入一95%酒精以1：5的混合比例混合，靜置一段時間以沉澱出一中華被毛孢多醣體粗 萃取物；以及(c)將該中華被毛孢多醣體粗萃取物離心後獲得一沈澱物；以切向流過濾系統(TFF)過濾該沈澱物，以獲得一中華被毛孢多醣體。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之製備方法，其中該步驟(a)進一步包含將該上清液進行一高溫萃取處理步驟。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之製備方法，其中該高溫萃取處理步驟係於高溫攪拌式反應器萃取一預定時間。
  9. 如申請專利範圍第6項所述之製備方法，其中該步驟(a)該上清液係以蒸發方式濃縮。
  10. 如申請專利範圍第6項之製備方法，其中步驟(c)切向流過濾系統由0.2μm中空纖維膜過濾及300kDa超限濾膜(50cm2)TFF之組合進行劃分過濾。
  11. 如申請專利範圍第6項所述之製備方法，其中步驟(b)該一段時間係至少十六小時。
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