CN114948986A

CN114948986A - 中草药多醣及其细菌组成物改善疾病的用途

Info

Publication number: CN114948986A
Application number: CN202210149799.5A
Authority: CN
Inventors: 吴柏毅; 赖信志; 陆嘉真; 林稚容
Original assignee: Xingjufan Biotechnology Co ltd
Current assignee: Xingjufan Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-02-19
Filing date: 2022-02-18
Publication date: 2022-08-30
Also published as: TW202233209A; US20220265754A1; TWI807646B

Abstract

本发明提供一种中草药多醣及其细菌组成物改善慢性肺阻塞疾病与肥胖的用途。

Description

中草药多醣及其细菌组成物改善疾病的用途

技术领域

本发明是关于一种中草药多醣及其细菌组成物改善疾病的用途，尤其是关于一种灵芝(Ganoderma lucidum,GL)多醣、霍山石斛(Dendrobium huoshanense, DH)多醣、中华被毛孢(Hirsutella sinensis,HSM)多醣、或其任意组合及其与拟杆菌门(Bacteroidetes)细菌的细菌组成物改善慢性肺阻塞疾病与肥胖的用途。

背景技术

由于人类基因组编码的消化酶有限，所摄取食物中的多醣在到达直肠前在小肠中经常属于未被完全消化的状态，而在肠道中的微生物可以透过糖解作用分解这些多醣，并产生许多包含不同的长度、结构、及分支数量的短链寡糖，其中部分寡糖甚至可以作为益生元，以促进肠道微生物的生长；而其中较短的多醣可以进一步被消化成葡萄糖、阿拉伯糖、或鼠李糖等单醣，亦可用以促进肠道微生物的生长；这些单醣在肠道中还可以被进一步代谢成短链脂肪酸、乳酸、氢等代谢产物，而可能直接影响宿主的生理作用。

然而，由于不同种类的细菌具有不同的碳水化合物活性酶(CAZymes)，因此食物中多醣被个体的肠道细菌消化与利用的程度，以及所产生之代谢产物对于宿主生理作用的影响，甚至是对不同疾病的功效都需进一步的研究厘清。

发明内容

本发明之一目的在提供一种中草药多醣用于制备改善慢性肺阻塞疾病 (Chronicobstructive pulmonary disease,COPD)的医药组成物的用途，其中该中草药多醣是選自由以下組成的群組：灵芝(Ganoderma lucidum,GL)多醣、霍山石斛(Dendrobiumhuoshanense,DH)多醣、中华被毛孢(Hirsutella sinensis,HSM) 多醣、及其任意组合。

在本发明之一实施例中，该灵芝多醣取自灵芝的水萃取物，该霍山石斛多醣取自霍山石斛的水萃取物，且该中华被毛孢多醣取自中华被毛孢的水萃取物。

在本发明之一实施例中，该中草药多醣的有效量是一个体每周至少给予二次，且每次至少25mg/kg。

本发明之又一目的在提供一种细菌组成物用于制备改善慢性肺阻塞疾病的医药组成物的用途，其中该细菌组成物是由一细菌组及如前所述的中草药多醣所组成。

在本发明之一实施例中，改善慢性阻塞性肺病可以指改善慢性阻塞性肺病导致的一个体的体重下降、肺组织病理学异常、及/或肺功能异常。

本发明之另一目的在提供一种细菌组成物用于制备预防及/或治疗肥胖的医药组成物的用途，其中所述细菌组成物是由一细菌组及如前所述的中草药多醣所组成。

在本发明之一实施例中，该细菌组可以由一拟杆菌门(Bacteroidetes)细菌所组成；更进一步地，该细菌组可以选自由以下组成的群组：戈氏副拟杆菌 (Parabacteroidesgoldsteinii,P.goldsteinii)、狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis,P.distasonis)、木茴香拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens,B. xylanisolvens)、单形拟杆菌(Bacteroides uniformis,B.uniformis)、松脆拟杆菌 (Bacteroides fragilis,B.fragilis)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus,B.ovatus)及其组合。

在本发明之又一实施例中，该细菌组成物是减缓一个体的体重上升；且该细菌组成物是降低一个体的脂肪组织重量、三酸甘油脂、总胆固醇、及/或空腹血糖。

在本发明之一实施例中，该细菌组成物的有效量可以是一个体每周至少给予二次，且每次包含至少3×10¹⁰CFU/kg的该细菌组、及至少25mg/kg之该中草药多醣。

在本发明之一实施例中，该医药组成物进一步包括一医药学上可接受的赋形剂、载剂、辅剂及/或食品添加剂。

在本发明之一实施例中，该医药组成物的剂型为一喷雾气体、一溶液、一半固态、一固态、一明胶胶囊、一软胶囊、一锭剂、一口含片、及/或一冷冻干燥粉末制剂。

在本发明中，拟杆菌门的细菌组能够有效利用与消化本发明的中草药多醣，并证实本发明的中草药多醣、以及包含该中草药多醣的本发明细菌组成物能够有效抗发炎、改善个体的慢性阻塞性肺病，以及有效预防及/或治疗饮食引起的肥胖与代谢症候群。此外，由于先前研究显示将多醣与细菌混合以形成共生元(synbiotic)，并无法维持多醣或细菌本身的功效，然而本发明结果显示将本发明的中草药多醣与细菌组混合所形成的本发明细菌组成物却具有显著较佳的功效。

以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明之范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1为本发明的细菌组在添加本发明灵芝多醣的最低营养素培养基中随时间的生长曲线图。其中GLPS表示本发明的灵芝多醣。

图2为本发明的细菌组在添加本发明霍山石斛多醣的最低营养素培养基中随时间的生长曲线图。其中DHPS表示本发明的霍山石斛多醣。

图3为本发明的细菌组在添加本发明中华被毛孢多醣的最低营养素培养基中随时间的生长曲线图。其中HSMPS表示本发明的中华被毛孢多醣。

图4为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物促进巨噬细胞分泌IL-10的结果。其中，CTL表示仅以PBS作用的控制组；GLPS表示以本发明的灵芝多醣作用的实验组；Bacteroidetes bacteria表示以本发明的细菌组作用的实验组；Bacteroidetesbacteria+GLPS表示以包含灵芝多醣的本发明细菌组成物作用的实验组。

图5为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物促进巨噬细胞分泌IL-10的结果。其中，CTL表示仅以PBS作用的控制组；DHPS表示以本发明的霍山石斛多醣作用的实验组；Bacteroidetes bacteria表示以本发明的细菌组作用的实验组；Bacteroidetes bacteria+DHPS表示以包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物作用的实验组。

图6为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物促进巨噬细胞分泌IL-10的结果。其中，CTL表示仅以PBS作用的控制组；HSMPS 表示以本发明的中华被毛孢多醣作用的实验组；Bacteroidetes bacteria表示以本发明的细菌组作用的实验组；Bacteroidetes bacteria+HSMPS表示以包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物作用的实验组。

图7A及图7B为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的体重下降的结果。

图8A为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的组织病理学异常的组织学影像图。

图8B为图8A的组织学影像图分析结果。

图9A为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的功能性肺余容积异常现象的结果。

图9B为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的用力肺活量异常现象的结果。

图9C为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的肺部顺应性异常现象的结果。

图9D为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例异常现象的结果。

图10A及图10B为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的体重下降的结果。

图11A为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的组织病理学异常的组织学影像图。

图11B为图11A的组织学影像图分析结果。

图12A为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的功能性肺余容积异常现象的结果。

图12B为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的用力肺活量异常现象的结果。

图12C为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的肺部顺应性异常现象的结果。

图12D为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例异常现象的结果。

图13A及图13B为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的体重下降的结果。

图14A为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的组织病理学异常的组织学影像图。

图14B为图14A的组织学影像图分析结果。

图15A为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的功能性肺余容积异常现象的结果。

图15B为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的用力肺活量异常现象的结果。

图15C为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的肺部顺应性异常现象的结果。

图15D为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病个体的肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例异常现象的结果。

以上图7A至图15D中，CTL表示未以香烟烟雾亦未以任何中草药多醣、细菌组、或细菌组成物处理的控制组小鼠；CS表示以香烟烟雾处理但未以任何中草药多醣、细菌组、或细菌组成物处理的比较组小鼠；CS+Bacteroidetes bacteria表示以香烟烟雾处理且以本发明的细菌组处理的实验组小鼠；CS+ GLPS表示以香烟烟雾处理且以本发明的灵芝多醣处理的实验组小鼠；CS+ Bacteroidetes bacteria+GLPS表示以香烟烟雾处理且以包含灵芝多醣的本发明细菌组成物处理的实验组小鼠；CS+DHPS表示以香烟烟雾处理且以本发明的霍山石斛多醣处理的实验组小鼠；CS+Bacteroidetes bacteria+DHPS表示以香烟烟雾处理且以包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物处理的实验组小鼠； CS+HSMPS表示以香烟烟雾处理且以本发明的中华被毛孢多醣处理的实验组小鼠；CS+Bacteroidetesbacteria+HSMPS表示以香烟烟雾处理且以包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物处理的实验组小鼠。

图16A及图16B为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物减缓肥胖个体的体重上升的结果。

图17为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物降低肥胖个体的脂肪组织重量的结果。

图18A为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中三酸甘油脂水平的结果。

图18B为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中总胆固醇水平的结果。

图18C为本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中空腹血糖水平的结果。

图19A及图19B为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物减缓肥胖个体的体重上升的结果。

图20为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物降低肥胖个体的脂肪组织重量的结果。

图21A为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中三酸甘油脂水平的结果。

图21B系为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中总胆固醇水平的结果。

图21C为本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中空腹血糖水平的结果。

图22A及图22B为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物减缓肥胖个体的体重上升的结果。

图23为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物降低肥胖个体的脂肪组织重量的结果。

图24A为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中三酸甘油脂水平的结果。

图24B为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中总胆固醇水平的结果。

图24C为本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物降低肥胖个体的血液中空腹血糖水平的结果。

以上图16A至图24C中，Chow表示喂食标准食物饲料且未以任何中草药多醣、细菌组、或细菌组成物处理的控制组小鼠；HFD表示喂食高脂肪食物饲料但未以任何中草药多醣、细菌组、或细菌组成物处理的比较组小鼠；HFD +Bacteroidetes bacteria表示喂食高脂肪食物饲料且以本发明的细菌组处理的实验组小鼠；HFD+GLPS表示喂食高脂肪食物饲料且以本发明的灵芝多醣处理的实验组小鼠；HFD+Bacteroidetes bacteria+GLPS表示喂食高脂肪食物饲料且以包含灵芝多醣的本发明细菌组成物处理的实验组小鼠；HFD+DHPS表示喂食高脂肪食物饲料且以本发明的霍山石斛多醣处理的实验组小鼠；HFD+Bacteroidetes bacteria+DHPS表示喂食高脂肪食物饲料且以包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物处理的实验组小鼠；HFD+HSMPS表示喂食高脂肪食物饲料且以本发明的中华被毛孢多醣处理的实验组小鼠；HFD+Bacteroidetes bacteria+HSMPS表示喂食高脂肪食物饲料且以包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物处理的实验组小鼠。

具体实施方式

本文中所使用的所有技术性及科学术语，除非另外有所定义，皆为本发明所属技术领域中具通常知识者可共同了解的意义。

在本文中，使用Excel软体进行统计分析。数据以平均值±标准差(standarddeviation,SD)表示、或中位数±四分位距(interquartile range,IQR)显示；各组之间的差异以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析 (Newman-Keuls multiplecomparison post hoc one-way ANOVA)、或Turkey多重比较事后比对单变量变异数(Turkey’s multiple comparison post hoc one-way ANOVA)进行统计分析。

本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。

在本文中，用语「细菌组(bacterial consortium)」旨在意谓复数种细菌的混合物；而用语「细菌组成物」则旨在意谓包含该细菌组及中草药多醣的混合物。

本发明的中草药多醣或包含该中草药多醣的细菌组成物可以应用于制备一医药组成物的用途，该医药组成物是用以预防及/或治疗慢性阻塞性肺病，或者预防及/或治疗肥胖；其中，该医药组成物可以为一医药品、一营养补充品、一保健食品、或其任意组合，且可以进一步包含一医药学上可接受的赋形剂、载剂、辅剂、及/或食品添加剂。

在本发明之一较佳实施例中，将本发明的中草药多醣或包含该中草药多醣的细菌组配制于一医药学上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable vehicle) 中，并制成一适用于口服投药(oral administration)的剂型(dosage form)，且该医药组成物较佳为一选自于下列群组中的剂型：溶液(solution)、悬浮液 (suspension)、粉末(powder)、锭剂(tablet)、丸剂(pill)、糖浆(syrup)、口含锭(lozenge)、片剂(troche)、口嚼胶(chewing gum)、胶囊(capsule)、及其类似者。

依据本发明，该医药学上可接受的载剂可以包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂 (preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂 (absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似之物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

依据本发明，该医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)、及其组合。

在本发明另之一较佳实施例中，可以将本发明的中草药多醣或包含该中草药多醣的细菌组制备成一食品产品，并以可食用性材料配制成包含但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、保健食品(health foods)、营养补充品(nutritional supplement)、以及膳食补充品(dietarysupplements)。

依据本发明，有关细菌培养的操作程序与参数条件等是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

依据本发明，有关动物的腹膜内注射(intraperitoneal injection)的操作程序与参数条件等是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

据本发明，有关动物的强制肺动作系统(Buxco Research Systems)的操作程序与参数条件等是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

材料与方法

1.中草药多醣的制备

在本发明的实施例中，所使用的中草药(traditional Chinese medicine,TCM)可以是但并不限于：灵芝(Ganoderma lucidum,GL)、霍山石斛(Dendrobium huoshanense,DH)、中华被毛菌(Hirsutella sinensis,HSM)、或其任意组成物。

1.1灵芝多醣(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLPS)的制备

1.1.1灵芝发酵菌丝体水萃取浓缩物的制备

首先，将500g干燥液态发酵的灵芝菌丝与10L蒸馏水混合以形成混合液(50g/L)，其中固体与液体的比值为5.0％(w/v)，并以20公升搅拌式反应器，在转速150rpm、121℃高温的条件下萃取30分钟。接着，以离心方式去除经萃取的混合液中的固体物质以获得一灵芝水萃取物，并以蒸发方式浓缩该灵芝萃取物至体积为2.5L，且分装至20公升暗色玻璃安瓶，再经高压高温灭菌处理20分钟，以获得固体与液体比值为20.0％(w/v)的一灵芝萃取浓缩物，保存于4℃备用。

1.1.2灵芝多醣粗萃取物的制备

接着，取120mL前述20.0％(w/v)的灵芝萃取浓缩物，加入600mL(相当于灵芝萃取浓缩物的五倍体积)、及95％乙醇后混合均匀，于4℃静置16小时以沉淀出一灵芝多醣乙醇粗萃取物，接着以离心方式去除上清液，再以120mL 的70％冰乙醇清洗及离心所沉淀出的灵芝多醣乙醇粗萃取物并收集上清液共三次。接着，将三次所得的上清液混合为一乙醇沉淀灵芝多醣粗萃取物，并取 1000mL蒸馏水复溶该乙醇沉淀灵芝多醣粗萃取物，再浓缩至体积为700mL 以去除残留的乙醇，接着加入蒸馏水定量其体积至2400mL以获得一灵芝多醣粗萃取物。

1.1.3灵芝多醣粗萃取物的分离纯化

取2400mL前述的灵芝多醣粗萃取物放置于50℃水浴槽中，并以切向流超限过滤系统TFF(Spectrum公司，KrosFlo型号)组合0.2μm中空纤维膜 (1,500cm²，polyethersulfone，PES)进行划分过滤并将过膜压力(transmembrane pressure，TMP)控制在15-16psi进行划分过滤。当回流液体积剩余800至1000 mL时补入蒸馏水600mL，并继续进行过滤。重复操作补入蒸馏水600mL的步骤共三次，共计补入蒸馏水1800mL，以得到650mL的G1-1分馏液及3600 mL的过滤液。

取上述3600mL、0.2μm中空纤维膜过滤液放置于50℃水浴槽中，并以切向流过滤系统组合300kDa超限滤膜(50cm²，PES)进行划分过滤，将过膜压力控制在16-18psi。当回流液体积剩余1000至1200mL时补入蒸馏水600mL，并继续操作过滤。得到950mL的G1-2分馏液及3600mL的过滤液。合并G1-1 分馏液与G1-2分馏液得到1600mL的G1分馏液即为本发明的灵芝多醣 (GLPS)。

1.2霍山石斛多醣(Dendrobium huoshanense polysaccharides,DHPS)的制备

首先，将2000g的霍山石斛(Dendrobium huoshanense)冻干粉碎，并在索氏萃取器(Soxhlet extractor)中以石油醚脱脂二次，接着以煮沸的蒸馏水连续萃取三次，每次0.5小时。再将所得的霍山石斛水萃取物合并后，于4℃下以8000 rpm离心10分钟，并收取上清液，接着将上清液于60℃的旋转蒸发仪中减压浓缩至较小体积，再以四倍体积的无水乙醇沉淀隔夜，接着透过离心的方式收集沉淀物，并以丙酮清洗三次，再将该沉淀物重新悬浮在蒸馏水中，并以Sevag 试剂(Sevag reagent)进行脱蛋白(de-proteinized)，接着将水溶液层与无水乙醇以1:4(v:v)的比例混合后，在4℃下放置24小时沉淀，再透过离心收集所产生的沉淀物以进行透析与冻干，得到的产物即为本发明的霍山石斛多醣 (DHPS)。

1.3中华被毛孢多醣(Hirsutella sinensis polysaccharides,HSMPS)的制备

1.3.1中华被毛孢发酵菌丝体水萃取浓缩物的制备

中华被毛孢即为冬虫夏草无性生殖菌丝(anamorphic mycelium或Hirsutellasinensis mycelium)。首先，将500g干燥液态酦酵的中华被毛孢与10L蒸馏水混合以形成混合液(50g/L)，其中固体与液体比值为5.0％(w/v)，并以20公升搅拌式反应器，在转速为150rpm、121℃高温条件下萃取30分钟。接着，以离心方式去除混合液中的固体物质，以获得一中华被毛孢水萃取物，并以蒸发方式浓缩该中华被毛孢水萃取物至体积为2.5L，且分装至20公升暗色玻璃安瓶，再经高温高压灭菌处理20分钟，以获得固体与液体比值为20.0％(w/v)的一中华被毛孢萃取浓缩物，保存于4℃备用。

1.3.2中华被毛孢多醣粗萃取物的制备步骤

接着，取120mL前述20.0％(w/v)的中华被毛孢萃取浓缩物，加入600 mL(相当于中华被毛孢萃取浓缩物的五倍体积)、及95％酒精混合均匀，于4℃ 静置16小时以沉淀出一中华被毛孢多醣乙醇粗萃取物。接着以离心方式去除上清液，再以120mL、70％冰乙醇清洗及离心所沉淀出的中华被毛孢多醣乙醇粗萃取物并收集上清液共三次。接着，将三次所得的上清液混合为一乙醇沉淀中华被毛孢多醣粗萃取物，并取1000mL蒸馏水复溶该乙醇沉淀中华被毛孢多醣粗萃取物，再经浓缩至体积为700mL以去除残留的乙醇，接着加入蒸馏水定量其体积至2400mL以获得一中华被毛孢多醣粗萃取物。

1.3.3中华被毛孢多醣粗萃取物的分离纯化

取2400mL前述的中华被毛孢多醣粗萃取物放置于50℃水浴槽中，并以切向流过滤系统TFF(Spectrum公司，KrosFlo型号)组合0.2μm中空纤维膜 (1,500cm2，PES)进行划分过滤并将过膜压力(transmembrane pressure，TMP) 控制在15-16psi。当回流液体积剩余800至1000mL时补入蒸馏水600mL，并继续进行过滤。重复操作补入蒸馏水600mL的步骤共三次，共计补入蒸馏水1800mL，以得到1250mL的CS-1-1分馏液及3600mL的过滤液。

取上述3600mL、0.2μm中空纤维膜过滤液放置于50℃水浴槽中，并以切向流过滤系统组合300kDa超限滤膜(50cm²，PES)进行划分过滤，将过膜压力(TMP)控制在18-20psi。当回流液体积剩余1000至1200mL时补入蒸馏水 600mL，继续进行过滤。得到回流液体积为1040mL的CS-1-2分馏液及3600 mL的过滤液。合并CS-1-1分馏液与CS-1-2分馏液得到体积为2290mL的CS-1 分馏液即为本发明的中华被毛孢多醣(HSMPS)。

2.拟杆菌门(Bacteroidetes)细菌的培养

拟杆菌门的细菌为厌氧细菌，需于37℃的无氧培养箱进行培养。在本发明的实施例中，使用Whitley DG250厌氧培养箱(Don Whitley，Bingley，英国)来培养拟杆菌门的细菌，该无氧培养箱系统包含5％的二氧化碳、5％的氢气、及90％的氮气，并使用厌氧指示剂(Oxoid，Hampshire，美国)确认厌氧条件。细菌的液态培养液为巯基乙酸培养基(thioglycollate medium)(购自BD，美国，编号为225710)，固态培养基则为厌氧血洋菜胶培养盘(Anaerobic blood agar plate，Ana.BAP)(购自启新生物科技公司，新北市，中国台湾省)。此些细菌可以长期保存于-80℃冰箱，保护液为25％的甘油，无须特殊降温处理，且可经由冷冻干燥进行保存，以稳定其活性。

3.细菌组(bacterial consortium)的制备

在本发明的实施例中使用的细菌组可以由拟杆菌门的细菌组成，更具体地，本发明的细菌组可以由戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii,P. goldsteinii)、狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis,P.distasonis)、木茴香拟杆菌(Bacteroidesxylanisolvens,B.xylanisolvens)、单形拟杆菌(Bacteroides uniformis,B.uniformis)、松脆拟杆菌(Bacteroides fragilis,B.fragilis)、及/或卵形拟杆菌(Bacteroidesovatus,B.ovatus)所组成。

在本发明的较佳实施例中，戈氏副拟杆菌可以为BCRC 910869菌株(已于专利第I706782号完成专利寄存，在本文中称为MTS01菌株)，狄氏副拟杆菌可以为ATCC8503菌株(购自美国典型培养物保藏中心，ATCC)，木茴香拟杆菌可以为DSM18836菌株(购自德国微生物菌种保藏中心，DSMZ)，单形拟杆菌可以为ATCC8492菌株(购自ATCC)，松脆拟杆菌可以为NCTC9343 菌株(购自英国国家菌种保藏中心，NCTC)、卵形拟杆菌则可以为ATCC8483 菌株(购自ATCC)。

在本发明的实施例中，可以将前述组成本发明的细菌组的细菌，利用前述拟杆菌门细菌的培养方法进行共培养后，再制备成任一施用剂型为本发明的细菌组；或者，亦可以将各个细菌分别培养后混合，再制备成任一施用剂型为本发明的细菌组。

4.细菌组成物的制备

在本发明的实施例中使用的细菌组成物可以由中草药多醣与细菌组所组成；其中的中草药多醣可以为灵芝多醣、霍山石斛多醣、中华被毛孢多醣、或其任意组合，且细菌组可以为前述拟杆菌门的细菌。

以下将详细说明：本发明的中草药多醣被细菌组利用与消化的测试、本发明的中草药多醣与细菌组成物促进抗发炎的功效测试、本发明的中草药多醣与细菌组成物改善慢性肺阻塞疾病的功效测试、以及本发明的中草药多醣与细菌组成物改善肥胖与代谢症候群的功效测试，以证实本发明的中草药多醣与细菌组成物可以应用于制备对应功效的组成物。

实施例1中草药多醣促进细菌组的生长

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的中草药多醣确实能够被本发明的细菌组利用与消化，而使用最低营养素培养基(minimal medium)并以不同的本发明的中草药多醣作为营养源，在体外(in vitro)进行本发明的细菌组的培养，以观察本发明的细菌组的生长情况。

首先，为了将本发明的细菌组培养于低营养素培养基中，将戈氏副拟杆菌 MTS01菌株、狄氏副拟杆菌ATCC8503菌株、木茴香拟杆菌DSM18836菌株、单形拟杆菌ATCC8492菌株、松脆拟杆菌NCTC9343菌株、及卵形拟杆菌 ATCC8483菌株以前述拟杆菌门细菌的培养方法进行隔夜培养后，透过离心将细菌沉淀并移除上清液，再以无菌的磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline，以下简称PBS溶液)清洗数次后，以最低营养素培养基(每公升含有：50mL的 Mineral 3B溶液(每公升含有：18g的KH₂PO₄、18g的NaCl、0.52g的CaCl₂·2H₂O、0.4g的MgCl₂·6H₂O、0.2g的MnCl₂·4H₂O、0.02g的CoCl₂·6H₂O、 10g的NH₄Cl、以及5g的Na₂SO₄)、1g的L-半胱胺酸、10mL的50mg/mL 的Hemin溶液、1mL的0.01％维生素B12溶液、1.5mL的10mM的FeSO₄溶液、以及20mL的10％的NaHCO₃溶液)重新悬浮，并将此六种细菌以等菌量的比例混合至共约2×10⁷CFU/mL的细菌，以形成本发明的细菌组，再分别于以下三种培养基中进行隔夜培养：(1)添加5mg/mL的本发明的灵芝多醣 (GLPS)的最低营养素培养基、(2)添加5mg/mL的本发明的霍山石斛多醣 (DHPS)的最低营养素培养基、以及(3)添加5mg/mL的本发明的中华被毛孢多醣(HSMPS)的最低营养素培养基，待以分光光度计(NanoPhotometer，Implen) 测量培养物的光密度(OD600)至0.1时，做为观察的起始点继续进行培养，并在培养的第0小时、第24小时、第48小时、及第72小时分别测量该些培养物的光密度(OD600)，以观察本发明的细菌组以此三种本发明的中草药多醣作为营养源的生长情况，其结果分别如图1至图3所示；其中，所有培养皆在 37℃的厌氧条件下进行，并以仅添加水的最低营养素培养基作为负控制组 (negative control)，且实验结果的数据是以三次独立实验的平均值±标准差显示。

图1为本发明的细菌组在添加本发明灵芝多醣的最低营养素培养基中随时间的生长曲线图；图2为本发明的细菌组在添加本发明霍山石斛多醣的最低营养素培养基中随时间的生长曲线图；图3为本发明的细菌组在添加本发明中华被毛孢多醣的最低营养素培养基中随时间的生长曲线图。由图1至图3可以看出，相较于仅添加水的负控制组，不论以本发明的灵芝多醣、霍山石斛多醣、或中华被毛孢多醣作为营养源，皆能够显著地促进本发明的细菌组在最低营养素培养基中的生长，此结果显示由拟杆菌门细菌所组成的本发明细菌组能够有效利用与消化本发明的中草药多醣。

实施例2中草药多醣促进抗发炎细胞激素的分泌

在本发明的一实施例中，为测试本发明的中草药多醣及包含中草药多醣的本发明细菌组成物的抗发炎功效，使用本发明的中草药多醣或包含中草药多醣的本发明细菌组成物刺激巨噬细胞，并测量分泌至培养液中介白素10 (interleukin 10,IL-10)的量，其中IL-10是用以抑制发炎反应的细胞激素。

在本发明实施例中，使用小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株(murine macrophageRAW264.7 cell line)，该小鼠巨噬细胞是购自于ATCC，细胞编号为

TIB-71^TM，该巨噬细胞是培养于含有10％的胎牛血清、及1％抗生素 -抗真菌药(antibiotic-antimycotic，购自Thermo Fisher Scientific，美国)的 DMEM细胞培养液(Dulbecco'sModified Eagle Medium，购自Gibco，美国，编号为12100-046)中，并以每孔2×10⁵个细胞的数量置于24孔培养盘中，并于37℃含有5％二氧化碳的培养箱中培养24小时，使巨噬细胞贴附在培养盘底部。

此外，在本发明实施例中所使用的细菌组是将戈氏副拟杆菌MTS01菌株、狄氏副拟杆菌ATCC8503菌株、木茴香拟杆菌DSM18836菌株、单形拟杆菌 ATCC8492菌株、松脆拟杆菌NCTC9343菌株、及卵形拟杆菌ATCC8483菌株以前述拟杆菌门细菌的培养方法进行隔夜培养后，透过离心将细菌沉淀并移除上清液，再以无菌的PBS溶液清洗数次后，以DMEM细胞培养液重新悬浮，并将此六种细菌以等菌量的比例混合至共含约2×10⁷CFU/mL的细菌，以形成本发明的细菌组。

2-1灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物促进抗发炎细胞激素的分泌

在以前述培养方法使巨噬细胞贴附于培养盘底部后，将巨噬细胞分成以下四组进行测试(n＝5)：(1)控制组(CTL)：仅以10μL的PBS溶液作用6小时； (2)实验组(GLPS)：以10μL的2mg/mL本发明的灵芝多醣(总浓度为200 μg/mL)作用6小时；(3)实验组(Bacteroidetes bacteria)：以10μL的2×10⁷ CFU/mL本发明的细菌组(总含量为2×10⁶CFU)作用6小时、以及(4)实验组 (Bacteroidetes bacteria+GLPS)：以10μL的包含灵芝多醣的本发明细菌组成物 (其中灵芝多醣的总浓度为200μg/mL，且细菌组的总含量为2×10⁶CFU)作用 6小时；接着，分别取出相同体积的细胞培养上清液，以酵素免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析各组中IL-10的分泌量，结果如图4所示，其中以IL-10的分泌量为2000pg/mL时为100％，以换算各组IL-10 分泌量的百分比，且实验结果的数据以五次独立实验的平均值±标准差显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中 ****表示p值<0.0001。

由图4可以看出，相较于仅以PBS溶液作用的巨噬细胞，经本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物作用后，巨噬细胞分泌的IL-10量皆会显著地上升，且包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又显著地优于单独施用本发明的灵芝多醣或细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地促进抗发炎细胞激素的分泌，以抑制发炎反应。

2-2霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的细菌组成物促进抗发炎细胞激素的分泌

在以前述培养方法使巨噬细胞贴附于培养盘底部后，将巨噬细胞分成以下四组进行测试(n＝5)：(1)控制组(CTL)：仅以10μL的PBS溶液作用6小时； (2)实验组(DHPS)：以10μL的2mg/mL本发明的霍山石斛多醣(总浓度为200 μg/mL)作用6小时；(3)实验组(Bacteroidetes bacteria)：以10μL的2×10⁷ CFU/mL本发明的细菌组(总含量为2×10⁶CFU)作用6小时、以及(4)实验组 (Bacteroidetes bacteria+DHPS)：以10μL的包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物(其中霍山石斛多醣的总浓度为200μg/mL，且细菌组的总含量为2×10⁶ CFU)作用6小时；接着，分别取出相同体积的细胞培养上清液，以ELISA分析各组中IL-10的分泌量，结果如图5所示，其中以IL-10的分泌量为2000 pg/mL时为100％，以换算各组IL-10分泌量的百分比，且实验结果的数据以五次独立实验的平均值±标准差显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中***表示p值<0.001；****则表示p值 <0.0001。

由图5可以看出，相较于仅以PBS溶液作用的巨噬细胞，经本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物作用后，巨噬细胞分泌的IL-10量皆会显著地上升，且包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又显著地优于单独施用本发明的霍山石斛多醣或细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地促进抗发炎细胞激素的分泌，以抑制发炎反应。

2-3中华被毛孢多醣多醣及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物促进抗发炎细胞激素的分泌

在以前述培养方法使巨噬细胞贴附于培养盘底部后，将巨噬细胞分成以下四组进行测试(n＝5)：(1)控制组(CTL)：仅以10μL的PBS溶液作用6小时； (2)实验组(HSMPS)：以10μL的2mg/mL本发明的中华被毛孢多醣(总浓度为 200μg/mL)作用6小时；(3)实验组(Bacteroidetes bacteria)：以10μL的2× 10⁷CFU/mL本发明的细菌组(总含量为2×10⁶CFU)作用6小时、以及(4)实验组(Bacteroidetes bacteria+HSMPS)：以10μL的包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物(其中中华被毛孢多醣的总浓度为200μg/mL，且细菌组的总含量为2×10⁶CFU)作用6小时；接着，分别取出相同体积的细胞培养上清液，以 ELISA分析各组中IL-10的分泌量，结果如图6所示，其中以IL-10的分泌量为2000pg/mL时为100％，以换算各组IL-10分泌量的百分比，且实验结果的数据以五次独立实验的平均值±标准差显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**则表示p值 <0.01。

由图6可以看出，相较于仅以PBS溶液作用的巨噬细胞，经本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物作用后，巨噬细胞分泌的IL-10量皆会显著地上升，且包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又显著地优于单独施用本发明的中华被毛孢多醣或细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地促进抗发炎细胞激素的分泌，以抑制发炎反应。

实施例3灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性肺阻塞疾病

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的灵芝多醣、及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物于改善一个体的慢性肺阻塞疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的症状的功效，使用经香烟烟雾(Cigarette smoke,CS) 诱导的慢性阻塞性肺病的小鼠模型进行测试。

在本发明实施例中，此处所使用的实验动物系为8至10周龄的C57BL/6 小鼠，该小鼠购自中国台湾省实验研究院中国台湾省实验动物中心，且饲养在无菌条件下，以遵循12小时的光/暗循环，并以此条件进行为期一周的饲养适应期，且在整个试验的过程中，小鼠皆喂食一般食物饲料(normal chow diet，购买自LabDiet，美国，编号为LaboratoryAutoclavable Rodent Diet 5010)。

在本发明实施例中，用于动物实验的灵芝多醣是于100μL的5mg/mL本发明的灵芝多醣中，加入100μL的PBS溶液所配制而成。

在本发明实施例中，用于动物实验的细菌组是将戈氏副拟杆菌MTS01菌株、狄氏副拟杆菌ATCC8503菌株、木茴香拟杆菌DSM18836菌株、单形拟杆菌ATCC8492菌株、松脆拟杆菌NCTC9343菌株、及卵形拟杆菌ATCC8483 菌株以前述拟杆菌门细菌的培养方法进行隔夜培养后，透过离心将细菌沉淀并移除上清液，再以无菌的PBS溶液清洗数次后，以PBS溶液重新悬浮，并将此六种细菌以等菌量的比例混合至共含约6×10⁸CFU/100μL的细菌(其中各菌株分别为1×10⁸CFU)，再于其中加入100μL的PBS溶液所配制而成。

在本发明实施例中，用于动物实验的包含灵芝多醣的细菌组成物则是于上述6×10⁸CFU/100μL的细菌(其中各菌株分别为1×10⁸CFU)中，加入100μL 的5mg/mL本发明的灵芝多醣所配制而成。

此外，在本发明实施例中，用于动物实验的灵芝多醣、细菌组、及包含灵芝多醣的细菌组成物，皆先于37℃的厌氧环境下培养6小时后，再喂食给实验动物。

待实验小鼠的饲养适应期结束后，将8至10周龄的C57BL/6小鼠分为以下五组进行试验(各组n＝5)：(1)控制组(CTL)：仅使小鼠暴露于室内空气中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共12周；(2)比较组(CS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支(即每日共24支)3R4F卷烟(肯塔基大学)的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共12周； (3)实验组(CS+GLPS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支 3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200 μL上述的本发明灵芝多醣(25mg/kg，每只小鼠约为0.5mg)，如此持续共12 周；(4)实验组(CS+Bacteroidetesbacteria)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明细菌组(3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为 6×10⁸CFU)，如此持续共12周；以及(5)实验组(CS+Bacteroidetes bacteria+GLPS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的包含灵芝多醣的本发明细菌组成物(灵芝多醣25mg/kg，每只小鼠0.5mg；细菌组3×10¹⁰ CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共12周。

3-1灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的体重下降

在前述各组小鼠分组操作的12周中，每周监测各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图7A所示，实验结果的数据以平均值 ±标准差显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中**表示p值<0.01；***表示p值<0.001；****则表示p值<0.0001。再者，在各组小鼠分组操作的第12周，测量各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图7B所示，实验结果的数据以中位数±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中**表示p值<0.01；***表示p值<0.001；****则表示p值<0.0001。

由图7A及图7B可以看出，相较于暴露于室内空气中的控制组小鼠，经香烟烟雾诱导为慢性阻塞性肺病的比较组小鼠的体重增加百分比会显著地降低且甚至为负值，亦即比较组小鼠的体重随着实验进行反而会低于第0周的起始体重；然而，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的体重增加百分比则会显著地提高，其中施用包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的灵芝多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地改善慢性阻塞性肺病导致的个体体重下降的问题，且在本发明的细菌组成物中灵芝多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

3-2灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的肺组织病理学异常

在本发明实施例中，为了更直接地观察本发明的灵芝多醣、及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物是否能够改善慢性阻塞性肺病个体的组织病理学异常的现象，在前述各组小鼠分组操作12周后牺牲，并将各组小鼠的肺脏组织取出后，以福马林液进行固定后包埋于石蜡中，接着以4mm的厚度制作组织切片，并以苏木精(Hematoxylin)及曙红(Eosin,H&E)进行染色，再以光学显微镜(Olympus，日本)观察与记录各组小鼠肺脏组织染色切片，结果如图8A所示，接着再使用Image J软体(National Institutes of Health，美国)分析各组组织学影像，以判别线性截距(linear intercept，图8B中以Lm表示)量化肺组织病理学异常的严重程度，并以μm为单位表示，其中该影像是选自各组中10-15 个切片中二个随机的区域，结果如图8B所示。实验结果的数据以中位数±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；***表示p值<0.001；****表示p值<0.0001； NS则表示无显著差异。

由图8A及8B可以看出，相较于暴露于室内空气中的控制组小鼠，经香烟烟雾诱导为慢性阻塞性肺病的比较组小鼠的肺泡壁破坏严重且肺泡的气隙扩大，显示比较组小鼠具有肺气肿等肺组织病理学异常的现象；然而，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，则皆能够显著地降低此种肺组织病理学异常的现象而较接近于控制组小鼠，其中施用包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的灵芝多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地改善慢性阻塞性肺病的肺组织病理学异常的现象，且在本发明的细菌组成物中灵芝多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

3-3灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的肺功能异常

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的灵芝多醣、及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物是否能够改善慢性阻塞性肺病个体的肺功能，在前述各组小鼠分组操作12周后，将所有小鼠进行麻醉以执行气管造口，并将该些小鼠置于强制肺动作系统(BuxcoResearch Systems，美国，以下简称Buxco系统)中，以进行肺功能的评估。首先，经麻醉的小鼠被诱导为100次呼吸/分钟的平均呼吸频率，使用Buxco系统进行三次半自动机动，其中包含波以耳定律测定功能性肺余容积(Functional residual capacity,FRC)、准静态P-V(Quasistatic P-V)、及快速流量驱动(Fast flow volume maneuver)；其中，该功能性肺余容积系由波以耳定律所决定；进行准静态P-V的操作系为测量肺部顺应性(Chordcompliance,Cchord)，而进行快速流量驱动操作系为记录用力呼气容积(Forcedexpiratory volume,FEV)，包含用力肺活量(Forced vital capacity,FVC)、及第100毫秒的用力呼气量(FEV100)。

本发明的灵芝多醣及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物改善慢性阻塞性肺病小鼠的功能性肺余容积异常现象的测试结果如图9A所示，功能性肺余容积以mL为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的用力肺活量异常现象的测试结果如图9B所示，用力肺活量以mL为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的肺部顺应性异常现象的测试结果如图9C所示，肺部顺应性以mL/cm H₂O为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例的异常现象的实验结果如图9D所示。以上的所有操作及驱动皆持续执行至完成三次正确的测量为止，并将从各组中每只小鼠所测得的以上各种参数的三次平均值，作为该组小鼠该种参数的结果数值，且该些结果数值皆是以中位数±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01；***则表示p值 <0.001；****表示p值<0.0001；NS则表示无显著差异。

由图9A至图9D可以看出，相较于暴露于室内空气中的控制组小鼠，经香烟烟雾诱导为慢性阻塞性肺病的比较组小鼠具有显著增加的功能性肺余容积及肺部顺应性，显示以香烟烟雾诱导产生肺气肿的小鼠的肺部出现过度充气 (hyperinflation)的现象；再者，由于比较组小鼠的最大充气时的肺部容积较大，因此在强制呼气的操作下亦具有显著增加的用力肺活量；而呼气期间气流阻塞的指标，即肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例，则在比较组小鼠显著地下降；这些结果显示，以香烟烟雾诱导小鼠产生慢性阻塞性肺病确实会造成其肺功能降低。

然而，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，其功能性肺余容积、用力肺活量、及肺部顺应性皆会显著地降低，且其肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例则会显著地上升，其中施用包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的灵芝多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆可以有效地改善慢性阻塞性肺病的肺气肿病理现象，而可以有效改善患有慢性阻塞性肺病个体的肺功能，且在本发明的细菌组成物中灵芝多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

实施例4霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物改善慢性肺阻塞疾病

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的霍山石斛多醣、及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物于改善一个体的慢性肺阻塞疾病的症状的功效，同样使用经香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的小鼠模型进行测试。

在本发明实施例中，同样使用8至10周龄的C57BL/6小鼠作为实验动物，并以实施例3所述的方法饲养。

在本发明实施例中，用于动物实验的霍山石斛多醣是于100μL的5mg/mL 本发明的霍山石斛多醣中，加入100μL的PBS溶液所配制而成。

在本发明实施例中，用于动物实验的细菌组是以实施例3所述的方法所配制而成，且用于动物实验的包含霍山石斛多醣的细菌组成物则是于实施例3 所述6×10⁸CFU/100μL的细菌(其中各菌株分别为1×10⁸CFU)中，加入100 μL的5mg/mL本发明的霍山石斛多醣所配制而成。

此外，在本发明实施例中，用于动物实验的霍山石斛多醣、细菌组、及包含霍山石斛多醣的细菌组成物，皆先于37℃的厌氧环境下培养6小时后，再喂食给实验动物。

待实验小鼠的饲养适应期结束后，将8至10周龄的C57BL/6小鼠分为以下五组进行试验(各组n＝5)：(1)控制组(CTL)：仅使小鼠暴露于室内空气中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共12周；(2)比较组(CS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共12周；(3)实验组(CS+DHPS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的霍山石斛多醣(25mg/kg，每只小鼠约为0.5mg)，如此持续共12周；(4)实验组(CS +Bacteroidetes bacteria)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用 200μL上述的本发明的细菌组(3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共12周；以及(5)实验组(CS+Bacteroidetes bacteria+DHPS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物(霍山石斛多醣25mg/kg，每只小鼠0.5mg；细菌组3×10¹⁰ CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共12周。

4-1霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的体重下降

在前述各组小鼠分组操作的12周中，每周监测各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图10A所示；再者，在各组小鼠分组操作的第12周，测量各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图10B所示。以上实验结果的数据皆以平均值±标准差显示，并以 Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示 p值<0.05；**表示p值<0.01；***表示p值<0.001；****表示p值<0.0001； NS则表示无显著差异。

由图10A及图10B可以看出，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的体重增加百分比则会显著地提高，其中施用包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的霍山石斛多醣多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地改善慢性阻塞性肺病导致的个体体重下降的问题，且在本发明的细菌组成物中霍山石斛多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

4-2霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的肺组织病理学异常

在本发明实施例中，为更直接地观察本发明的霍山石斛多醣、及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物是否能够改善慢性阻塞性肺病个体的组织病理学异常的现象，在前述各组小鼠分组操作12周后牺牲并取出肺脏组织，以实施例3所述的方法进行组织切片的制作与染色，并以光学显微镜(Olympus，日本)观察与记录各组小鼠肺脏组织染色切片，结果如图11A所示，接着同样使用Image J软体(National Institutes of Health，美国)分析各组组织学影像，以判别线性截距(图11B中以Lm表示)量化肺组织病理学异常的严重程度，并以μm为单位表示，结果如图11B所示。实验结果的数据以中位数±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；***表示p值<0.001；****表示p值<0.0001；NS 则表示无显著差异。

由图11A及图11B可以看出，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠(CS)，则皆能够显著地降低肺组织病理学异常的现象而较接近于控制组小鼠，其中施用包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的霍山石斛多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地改善慢性阻塞性肺病的肺组织病理学异常的现象，且在本发明的细菌组成物中霍山石斛多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

4-3霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的肺功能异常

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的霍山石斛多醣、及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物是否能够改善慢性阻塞性肺病个体的肺功能，在前述各组小鼠分组操作12周后，以实施例3所述的方法，进行肺功能的评估。

本发明的霍山石斛多醣及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物改善慢性阻塞性肺病小鼠的功能性肺余容积异常现象的测试结果如图12A所示，功能性肺余容积以mL为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的用力肺活量异常现象的测试结果如图12B所示，用力肺活量以mL为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的肺部顺应性异常现象的测试结果如图12C所示，肺部顺应性以 mL/cm H₂O为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例的异常现象的实验结果如图12D所示。以上的所有操作及驱动皆持续执行至完成三次正确的测量为止，并将从各组中每只小鼠所测得的以上各种参数的三次平均值，作为该组小鼠该种参数的结果数值，且该些结果数值皆是以中位数±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01； ***则表示p值<0.001；****表示p值<0.0001；NS则表示无显著差异。

由图12A至图12D可以看出，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠(CS)，其功能性肺余容积、用力肺活量、及肺部顺应性皆会显著地降低，且其肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例则会显著地上升，其中施用包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的霍山石斛多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，皆可以有效地改善慢性阻塞性肺病的肺气肿病理现象，而可以有效改善患有慢性阻塞性肺病个体的肺功能，且在本发明的细菌组成物中霍山石斛多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

实施例5中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物改善慢性肺阻塞疾病

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的中华被毛孢多醣、及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物于改善一个体的慢性肺阻塞疾病的症状的功效，同样使用经香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的小鼠模型进行测试。

在本发明实施例中，用于动物实验的中华被毛孢多醣是于100μL的5 mg/mL本发明的中华被毛孢多醣中，加入100μL的PBS溶液所配制而成。

在本发明实施例中，用于动物实验的细菌组是以实施例3所述的方法所配制而成，且用于动物实验的包含中华被毛孢多醣的细菌组成物则是于实施例3 所述6×10⁸CFU/100μL的细菌(其中各菌株分别为1×10⁸CFU)中，加入100 μL的5mg/mL本发明的中华被毛孢多醣所配制而成。

此外，在本发明实施例中，用于动物实验的中华被毛孢多醣、细菌组、及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物，皆先于37℃的厌氧环境下培养6小时后，再喂食给实验动物。

待实验小鼠的饲养适应期结束后，将8至10周龄的C57BL/6小鼠分为以下五组进行试验(各组n＝5)：(1)控制组(CTL)：仅使小鼠暴露于室内空气中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共12周；(2)比较组(CS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共12周；(3)实验组(CS+HSMPS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的中华被毛孢多醣(25mg/kg，每只小鼠约为0.5mg)，如此持续共12周；(4)实验组(CS +Bacteroidetes bacteria)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支 3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用 200μL上述的本发明的细菌组(3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共12周；以及(5)实验组(CS+Bacteroidetes bacteria+HSMPS)：以每周五次的频率，使小鼠每天两次暴露于12支3R4F卷烟的烟雾中，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物(中华被毛孢多醣25mg/kg，每只小鼠0.5mg；细菌组3 ×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共12周。

5-1中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的体重下降

在前述各组小鼠分组操作的12周中，每周监测各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图13A所示；再者，在各组小鼠分组操作的第12周，测量各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图13B所示。以上实验结果的数据皆以平均值±标准差显示，并以 Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中**** 表示p值<0.0001；NS则表示无显著差异。

由图13A及图13B可以看出，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的体重增加百分比则会显著地提高，其中施用包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的中华被毛孢多醣多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地改善慢性阻塞性肺病导致的个体体重下降的问题，且在本发明的细菌组成物中的中华被毛孢多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

5-2中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的肺组织病理学异常

在本发明实施例中，为更直接地观察本发明的中华被毛孢多醣、及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物是否能够改善慢性阻塞性肺病个体的组织病理学异常的现象，在前述各组小鼠分组操作12周后牺牲并取出肺脏组织，以实施例3所述的方法进行组织切片的制作与染色，并以光学显微镜 (Olympus，日本)观察与记录各组小鼠肺脏组织染色切片，结果如图14A所示，接着同样使用Image J软体(National Institutes ofHealth，美国)分析各组组织学影像，以判别线性截距(图14B中以Lm表示)量化肺组织病理学异常的严重程度，并以μm为单位表示，结果如图14B所示。实验结果的数据以中位数 ±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；****表示p值<0.0001；NS则表示无显著差异。

由图14A及图14B可以看出，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，则皆能够显著地降低肺组织病理学异常的现象而较接近于控制组小鼠，其中施用包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的中华被毛孢多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地改善慢性阻塞性肺病的肺组织病理学异常的现象，且在本发明的细菌组成物中的中华被毛孢多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

5-3中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物改善慢性阻塞性肺病的肺功能异常

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的中华被毛孢多醣、及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物是否能够改善慢性阻塞性肺病个体的肺功能，在前述各组小鼠分组操作12周后，以实施例3所述的方法，进行肺功能的评估。

本发明的中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物改善慢性阻塞性肺病小鼠的功能性肺余容积异常现象的测试结果如图15A所示，功能性肺余容积以mL为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的用力肺活量异常现象的测试结果如图15B所示，用力肺活量以mL为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的肺部顺应性异常现象的测试结果如图15C所示，肺部顺应性以mL/cm H₂O为单位表示；改善慢性阻塞性肺病小鼠的肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例的异常现象的实验结果如图15D所示。以上的所有操作及驱动皆持续执行至完成三次正确的测量为止，并将从各组中每只小鼠所测得的以上各种参数的三次平均值，作为该组小鼠该种参数的结果数值，且该些结果数值皆以中位数±四分位距显示，并以Newman-Keuls多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01； ***则表示p值<0.001；****表示p值<0.0001；NS则表示无显著差异。

由图15A至图15D可以看出，若在以香烟烟雾诱导小鼠为慢性阻塞性肺病后，施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，其功能性肺余容积、用力肺活量、及肺部顺应性皆会显著地降低，且其肺脏第100毫秒的用力呼气量/用力肺活量比例则会显著地上升，其中施用包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于单独施用本发明的中华被毛孢多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，皆可以有效地改善慢性阻塞性肺病的肺气肿病理现象，而可以有效改善患有慢性阻塞性肺病个体的肺功能，且在本发明的细菌组成物中的中华被毛孢多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

实施例6灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物改善肥胖

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的灵芝多醣、及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物于改善一个体的肥胖症状的功效，使用经高脂饮食诱导的肥胖的小鼠作为动物模型进行测试。

在本发明实施例中，动物实验是经长庚大学的实验动物照护及使用准则所批准，并根据其指引所进行。此处所使用的动物实验是6周龄的C57BL/6J雄性小鼠，该小鼠是购自中国台湾省实验研究院(NARLabs，中国台湾)。该些小鼠时饲养在温控室(21±2℃)中，并遵循12小时的光/暗循环，且小鼠可以自由获取食物及无菌饮用水，以此条件为期一周的饲养适应期。

在本发明实施例中，以实施例3所述方法配置用于动物实验的灵芝多醣、细菌组、及包含灵芝多醣的细菌组成物，且此三者都先于37℃的厌氧环境下培养6小时后，再喂食给实验动物。

待实验小鼠的饲养适应期结束后，将6周龄的C57BL/6J雄性小鼠分为以下五组进行试验(各组n＝8)：(1)控制组(Chow)：喂食小鼠标准食物饲料 (Standard chow diet，其中含有13.5％来自脂肪的能量来源，购买自LabDiet，美国，编号为LabDiet 5001)，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共8周；(2)比较组(HFD)：喂食小鼠高脂肪食物饲料(High-fat diet,HFD，其中含有60％来自脂肪的能量来源，购买自LabDiet，美国，编号为TestDiet 58Y1)，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共8周；(3)实验组(HFD+ GLPS)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的灵芝多醣(25mg/kg，每只小鼠约为0.5mg)，如此持续共8周；(4)实验组(HFD+Bacteroidetes bacteria)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的细菌组(3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共8周；以及(5)实验组(HFD+Bacteroidetes bacteria+GLPS)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL 的包含灵芝多醣的本发明细菌组成物(灵芝多醣25mg/kg，每只小鼠0.5mg；细菌组3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共8周。

6-1灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物减缓肥胖个体的体重上升

在前述各组小鼠分组操作的8周中，每周监测各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图16A所示；再者，在各组小鼠分组操作的第8周，测量各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图16B所示。该些实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey 多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中**表示p值<0.01； ****则表示p值<0.0001。

由图16A及图16B可以看出，相较于喂食标准食物饲料的控制组小鼠，喂食高脂饮食诱导为肥胖症的比较组小鼠的体重增加百分比会显著地增加；然而，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的体重增加百分比则会显著地降低，其中施用包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的灵芝多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地减缓肥胖个体的体重上升，且在本发明的细菌组成物中灵芝多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

6-2灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物降低肥胖个体的脂肪组织重量

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的灵芝多醣、及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物是否能够降低肥胖个体的脂肪组织重量，以有效减缓肥胖症状，在前述各组小鼠分组操作8周后牺牲，并将各组小鼠的内脏脂肪组织取出进行秤重，结果如图17所示，实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以 Turkey多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中**表示p值 <0.01；****则表示p值<0.0001。

由图17可以看出，相较于喂食标准食物饲料的控制组小鼠，喂食高脂饮食诱导为肥胖症的比较组小鼠的内脏脂肪组织的重量会显著地上升；然而，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的内脏脂肪组织的重量则会显著地下降，其中施用包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的灵芝多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地降低肥胖个体的脂肪组织重量而得以有效减缓肥胖症状，且在本发明的细菌组成物中灵芝多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

6-3灵芝多醣及包含灵芝多醣的细菌组成物降低肥胖个体的相关指标

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的灵芝多醣、及包含灵芝多醣的本发明细菌组成物是否能够降低肥胖个体的三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平，以有效减缓肥胖症状，在前述各组小鼠分组操作8周后，使各组小鼠在指定时间内禁食并麻醉，以透过心脏穿刺的方式采集各组小鼠的全血，再以富士全自动干式生化分析仪(FUJIFILMDRI-CHEM NX-500)分别检测各组小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平，结果分别如图18A、图18B、及图18C所示，实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey 多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；** 表示p值<0.01；****则表示p值<0.0001。

由图18A至图18C可以看出，相较于喂食标准食物饲料的控制组小鼠，喂食高脂饮食诱导为肥胖症的比较组小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平皆会显著地上升；然而，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平则都会显著地下降，其中施用包含灵芝多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的灵芝多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的灵芝多醣、本发明的细菌组、或包含灵芝多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地降低肥胖个体的三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖，而得以有效减缓肥胖症状，且在本发明的细菌组成物中灵芝多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

实施例7霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物改善肥胖

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的霍山石斛多醣、及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物于改善一个体的肥胖症状的功效，同样使用经高脂饮食诱导的肥胖的小鼠作为动物模型进行测试。

在本发明实施例中，同样使用6周龄的C57BL/6J雄性小鼠作为实验动物，并以实施例6所述的方法饲养。

在本发明实施例中，以实施例4所述方法配置用于动物实验的霍山石斛多醣、细菌组、及包含霍山石斛多醣的细菌组成物，且此三者都先于37℃的厌氧环境下培养6小时后，再喂食给实验动物。

待实验小鼠的饲养适应期结束后，将6周龄的C57BL/6J雄性小鼠分为以下五组进行试验(各组n＝8)：(1)控制组(Chow)：喂食小鼠标准食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共8周；(2)比较组(HFD)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共8周； (3)实验组(HFD+DHPS)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的霍山石斛多醣(25mg/kg，每只小鼠约为0.5mg)，如此持续共8周；(4)实验组(HFD+Bacteroidetes bacteria)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的细菌组(3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6 ×10⁸CFU)，如此持续共8周；以及(5)实验组(HFD+Bacteroidetes bacteria+ DHPS)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物(霍山石斛多醣25 mg/kg，每只小鼠0.5mg；细菌组3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共8周。

7-1霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物减缓肥胖个体的体重上升

在前述各组小鼠分组操作的8周中，每周监测各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图19A所示；再者，在各组小鼠分组操作的第8周，测量各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图19B所示。该些实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey 多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；** 表示p值<0.01；****则表示p值<0.0001。

由图19A及图19B可以看出，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的体重增加百分比皆会显著地降低，其中施用包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的霍山石斛多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地减缓肥胖个体的体重上升，且在本发明的细菌组成物中霍山石斛多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

7-2霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物降低肥胖个体的脂肪组织重量

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的霍山石斛多醣、及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物是否能够降低肥胖个体的脂肪组织重量，以有效减缓肥胖症状，在前述各组小鼠分组操作8周后牺牲，并将各组小鼠的内脏脂肪组织取出进行秤重，结果如图20所示，实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01；***表示p值<0.001；****则表示p值<0.0001。

由图20可以看出，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的内脏脂肪组织的重量则会显著地下降，其中施用包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的霍山石斛多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地降低肥胖个体的脂肪组织重量而得以有效减缓肥胖症状，且在本发明的细菌组成物中霍山石斛多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

7-3霍山石斛多醣及包含霍山石斛的细菌组成物降低肥胖个体的相关指标

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的霍山石斛多醣、及包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物是否能够降低肥胖个体的三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平，以有效减缓肥胖症状，在前述各组小鼠分组操作8周后，以实施例6所述的方式采集各组小鼠的全血，再以富士全自动干式生化分析仪 (FUJIFILM DRI-CHEM NX-500)分别检测各组小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平，结果分别如图21A、图21B、及图21C所示，实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01；***表示p值 <0.001；****则表示p值<0.0001。

由图21A至图21C可以看出，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平都会显著地下降，其中施用包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的霍山石斛多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的霍山石斛多醣、本发明的细菌组、或包含霍山石斛多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地降低肥胖个体的三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖，而得以有效减缓肥胖症状，且在本发明的细菌组成物中霍山石斛多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

实施例8中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物改善肥胖

在本发明的一实施例中，为了测试本发明的中华被毛孢多醣、及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物于改善一个体的肥胖症状的功效，同样使用经高脂饮食诱导的肥胖的小鼠作为动物模型进行测试。

在本发明实施例中，以实施例5所述方法配置用于动物实验的中华被毛孢多醣、细菌组、及包含中华被毛孢多醣的细菌组成物，且此三者都先于37℃ 的厌氧环境下培养6小时后，再喂食给实验动物。

待实验小鼠的饲养适应期结束后，将6周龄的C57BL/6J雄性小鼠分为以下五组进行试验(各组n＝8)：(1)控制组(Chow)：喂食小鼠标准食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共8周；(2)比较组(HFD)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的PBS溶液，如此持续共8周； (3)实验组(HFD+HSMPS)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的中华被毛孢多醣(25 mg/kg，每只小鼠约为0.5mg)，如此持续共8周；(4)实验组(HFD+ Bacteroidetes bacteria)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL上述的本发明的细菌组(3×10¹⁰CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共8周；以及(5)实验组(HFD+ Bacteroidetes bacteria+HSMPS)：喂食小鼠高脂肪食物饲料，并以每周五次的频率，每日一次以口服喂食方式施用200μL的包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物(中华被毛孢多醣25mg/kg，每只小鼠0.5mg；细菌组(3×10¹⁰ CFU/kg，每只小鼠约为6×10⁸CFU)，如此持续共8周。

8-1中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物减缓肥胖个体的体重上升

在前述各组小鼠分组操作的8周中，每周监测各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图22A所示；再者，在各组小鼠分组操作的第8周，测量各组小鼠相对于第0周的起始体重的体重增加百分比，其结果如图22B所示。该些实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey 多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**** 则表示p值<0.0001。

由图22A及图22B可以看出，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的体重增加百分比皆会显著地降低，其中施用包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的中华被毛孢多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地减缓肥胖个体的体重上升，且在本发明的细菌组成物中的中华被毛孢多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

8-2中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物降低肥胖个体的脂肪组织重量

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的中华被毛孢多醣、及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物是否能够降低肥胖个体的脂肪组织重量，以有效减缓肥胖症状，在前述各组小鼠分组操作8周后牺牲，并将各组小鼠的内脏脂肪组织取出进行秤重，结果如图23所示，实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01；***表示p值<0.001；****则表示p值 <0.0001。

由图23可以看出，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠的内脏脂肪组织的重量则会显著地下降，其中施用包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的中华被毛孢多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地降低肥胖个体的脂肪组织重量而得以有效减缓肥胖症状，且在本发明的细菌组成物中的中华被毛孢多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

8-3中华被毛孢多醣及包含中华被毛孢的细菌组成物降低肥胖个体的相关指标

在本发明实施例中，为进一步观察本发明的中华被毛孢多醣、及包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物是否能够降低肥胖个体的三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平，以有效减缓肥胖症状，在前述各组小鼠分组操作8 周后，以实施例6所述的方式采集各组小鼠的全血，再以富士全自动干式生化分析仪(FUJIFILM DRI-CHEM NX-500)分别检测各组小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平，结果分别如图24A、图24B、及图24C所示，实验结果的数据以中位数±标准差显示，并以Turkey多重比较事后比对单变量变异数分析进行统计分析，其中*表示p值<0.05；**表示p值<0.01；***表示p值<0.001；****则表示p值<0.0001。

由图24A至图24C可以看出，以高脂饮食诱导小鼠为肥胖症时，施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，相较于比较组小鼠，小鼠血液中三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖的水平都会显著地下降，其中施用包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物的功效又皆显著地优于施用本发明的中华被毛孢多醣或本发明的细菌组的组别；此结果显示，不论施用本发明的中华被毛孢多醣、本发明的细菌组、或包含中华被毛孢多醣的本发明细菌组成物，皆能够有效地降低肥胖个体的三酸甘油脂、总胆固醇、及空腹血糖，而得以有效减缓肥胖症状，且在本发明的细菌组成物中的中华被毛孢多醣经细菌组利用与消化后，所产生的活性物质使其具有显著提升的功效。

综上所述，本发明证实拟杆菌门的细菌组能够有效利用与消化本发明的中草药多醣，并证实本发明的中草药多醣、以及包含该中草药多醣的本发明细菌组成物能够有效抗发炎、改善个体的慢性阻塞性肺病，以及有效预防及/或治疗饮食引起的肥胖与代谢症候群。此外，由于先前研究显示将多醣与细菌混合以形成共生元，并无法维持多醣或细菌本身的功效，然而本发明结果显示将本发明的中草药多醣与细菌组混合所形成的本发明细菌组成物却具有显著较佳的功效。

Claims

1.一种中草药多醣用于制备改善慢性肺阻塞疾病(Chronic obstructive pulmonarydisease,COPD)的医药组成物的用途，其特征在于，其中所述中草药多醣是選自由以下組成的群組：灵芝(Ganoderma lucidum,GL)多醣、霍山石斛(Dendrobium huoshanense,DH)多醣、中华被毛孢(Hirsutella sinensis,HSM)多醣、及其任意组合。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，其中所述灵芝多醣取自灵芝的水萃取物，所述霍山石斛多醣取自霍山石斛的水萃取物，且所述中华被毛孢多醣取自中华被毛孢的水萃取物。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，其中所述中草药多醣的有效量是一个体每周至少给予二次，且每次至少25mg/kg。

4.一种细菌组成物用于制备改善慢性肺阻塞疾病的医药组成物的用途，其特征在于，其中所述细菌组成物是由一细菌组及如权利要求1所述的中草药多醣所组成。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组是由一拟杆菌门(Bacteroidetes)细菌所组成。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组是选自由以下组成的群组：戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii,P.goldsteinii)、狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis,P.distasonis)、木茴香拟杆菌(Bacteroidesxylanisolvens,B.xylanisolvens)、单形拟杆菌(Bacteroides uniformis,B.uniformis)、松脆拟杆菌(Bacteroides fragilis,B.fragilis)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus,B.ovatus)及其组合。

7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组成物的有效量是一个体每周至少给予二次，且每次包含至少3×10¹⁰CFU/kg的所述细菌组、及至少25mg/kg的所述中草药多醣。

8.根据权利要求1或4所述的用途，其特征在于，其中改善慢性阻塞性肺病是指改善慢性阻塞性肺病导致的一个体的体重下降、肺组织病理学异常、及/或肺功能异常。

9.一种细菌组成物用于制备预防及/或治疗肥胖的医药组成物的用途，其中所述细菌组成物是由一细菌组及如权利要求1所述的中草药多醣所组成。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组是由一拟杆菌门细菌所组成。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组是选自由以下组成的群组：戈氏副拟杆菌、狄氏副拟杆菌、木茴香拟杆菌、单形拟杆菌、松脆拟杆菌、卵形拟杆菌及其组合。

12.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组成物是减缓一个体的体重上升。

13.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组成物是降低一个体的脂肪组织重量、三酸甘油脂、总胆固醇、及/或空腹血糖。

14.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，其中所述细菌组成物的有效量是一个体每周至少给予二次，且每次包含至少3×10¹⁰CFU/kg的所述细菌组、及至少25mg/kg的所述中草药多醣。

15.根据权利要求1、4或9中任一项所述的用途，其特征在于，其中所述医药组成物进一步包括一医药学上可接受的赋形剂、载剂、辅剂及/或食品添加剂。

16.根据权利要求1、4或9中任一项所述的用途，其特征在于，其中所述医药组成物的剂型是一喷雾气体、一溶液、一半固态、一固态、一明胶胶囊、一软胶囊、一锭剂、一口含片、及/或一冷冻干燥粉末制剂。