CN111214524A - 人参发酵物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及人参发酵物的用途，具体地，涉及人参发酵物在制备用于预防或治疗抗生素相关性腹泻及其引起的免疫功能失调及炎症的药物中的用途。本发明通过动物实验发现所述人参发酵物可使抗生素引起的相关性腹泻得以恢复，证实了所述人参发酵物在治疗抗生素相关性腹泻及其引起的免疫功能失调中的显著效果，因此，所述人参发酵物可以作为用于治疗抗生素相关性腹泻及其引起的免疫功能失调的潜力药物。

Description

人参发酵物的用途
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及人参发酵物在制备用于预防或治疗抗生素相关性腹泻及其引起的免疫功能失调及炎症的药物中的用途。
背景技术
1.抗生素的过度使用容易引起抗生素相关性腹泻(AAD)及免疫功能失调等众多不良反应。
自1928年青霉素的问世，抗生素一直被广泛使用，但抗生素滥用所带来的问题也逐渐显露出来，对人类健康产生一定危害(鲍连生,张振,张多.重症细菌性肺炎患儿继发抗生素相关性腹泻临床分析[J].临床儿科杂志,2014(06):562-563.)。已有文献报道，40％的成人和70％的儿童每年至少使用一次抗生素，然而其中十分之一的人在使用后会发生不同程度的副作用(郑丽娜.婴幼儿抗生素相关性腹泻的危险因素分析及其护理[J].中国微生态学杂志,2015(12):1439-1442.)。
抗生素相关性腹泻(antibiotic-associated diarrhea，AAD)属于药物相关性腹泻的一种，指伴随着抗生素的使用而发生的、无法用其他原因解释的腹泻。据临床报道，AAD的发病率为5％—39％，由于大量广谱抗生素的滥用(王小卉,杨毅,曹凌峰,等.益生菌预防婴幼儿抗生素相关性腹泻及对肠道菌群的影响[J].中国儿童保健杂志,2006(01):21-23.)，AAD的发生率呈逐渐增高趋势。
抗生素滥用容易引起肠道菌群多样性的减少，延缓有益菌群如双歧杆菌或乳酸杆菌的定植，诱导耐抗生素机会菌株的定植，导致以下改变(Selvaraj V.Pathogenesis ofantibiotic-associated diarrhea(AAD)---a systematic review[J].2012.)：(1)肠道菌群失衡紊乱，肠屏障保护性菌群被消灭，条件致病菌数量异常增多，肠道黏膜屏障损伤，消化系统受到影响，从而导致AAD发生。尤其是两岁以下儿童及70岁以上老人，肠道菌群系统容易受到破坏，是AAD高发人群(李自华,程国平,汪在华,等.细菌性重症肺炎患儿抗生素相关性腹泻发病率及高危因素分析[J].临床儿科杂志,2015(08):698-701.)。(2)宿主肠黏膜免疫应答模式发生变化，从而导致易感性增高。肠腔内微生物相关分子模式(MAMPs)发生改变，这种变化被宿主肠上皮细胞(IEC)表面的模式识别受体(PRRs)所感知，这种IEC与肠道优势菌之间的相互作用关系发生变化，导致肠壁杯状细胞分泌的细胞间紧密连接蛋白量降低，增加了肠壁通透性，从而发生细菌移位和肠源性感染。(3)干扰糖和胆汁酸代谢。肠道生理性细菌减少，使多糖向短链脂肪酸(SCFA)的转化减少，由于未经发酵的多糖难以吸收，滞留于肠道而引起渗透性腹泻。使用抗菌药物后，有去羟基作用的细菌数量减少，特别是当7α-去羟基功能的细菌数量减少时，鹅脱氧胆酸浓度增加，刺激大肠的分泌，继发分泌性腹泻(张春东,戴冬秋,赵哲明.益生菌预防成人抗生素相关性腹泻的荟萃分析[J].世界华人消化杂志,2012(21):2006-2011.)。
正常情况下，肠道菌群与机体保持着和谐、稳定的平衡状态。肠道固有菌群的持续刺激被认为是免疫的成熟所必需的。当肠道正常菌群的种类、数量和比例发生异常变化，偏离正常的平衡状态，转变为病理性组合状态，即为菌群失调(陈修益.微生态制剂预防小儿抗生素相关性腹泻的疗效观察[J].实用药物与临床,2012(12):848-849.)。菌群失调的发生多于长期大量使用广谱抗生素后，大多数敏感细菌与正常菌群被抑制或杀灭(吴迪,沈可欣.危重患者与抗生素相关性腹泻[J].中华医院感染学杂志,2007(05):587-588.)，同时耐药菌以及一些外来致病菌获得生存优势而大量繁殖，进而引起腹泻等多种疾病的发生。Andrey Morgun的研究发现，经过抗生素处理后的大鼠，小肠上皮细胞的线粒体活性降低，从而导致小肠上皮细胞的死亡，其毒性作用是由耐药菌中的毒力因子所介导的(Shulzhenko N,Morgun A,Hsiao W,et al.Crosstalk between B lymphocytes,microbiota and the intestinal epithelium governs immunity versus metabolismin the gut.[J].Nature Medicine,2011,17(12):1585-1593.)。
很多研究结果表明，肠道菌群的变化与炎症性肠病紧密相关(车媛,李秋荣.抗生素相关性腹泻与肠道真菌菌群多样性关系[J].肠外与肠内营养,2016(03):165-169.)。肠道菌群在炎症性肠病中具有重要的影响作用，是其产生的起始动力和持续因素(吕苏,张源波,周荣斌.抗生素相关性腹泻治疗及预防[J].临床急诊杂志,2013(05):240-242.)。肠道菌群失衡主要表现为肠道菌群数量、种类、定位、比例及生物学特性上的改变，肠道免疫系统不能耐受这些产生改变的肠道菌群；而且，肠道菌群紊乱导致肠道有害菌生长过度，对肠黏膜屏障造成损伤，肠毒素的分泌使得肠上皮通透性升高，肠腔内有害菌及其产物进入肠黏膜固有层，引发肠道黏膜免疫能力失调，从而引发炎症性肠病(梁春杰,杨雪英,黄大鸣,等.抗生素相关性腹泻临床研究[J].中华医院感染学杂志,2004(11):83-85.)。郭彩霞分析了反复使用抗生素与免疫功能低下的关系，发现抗生素的反复使用容易导致免疫功能低下，从而引发耐药性支原体肺炎(Wu H J,Ivanov I I,Darce J,et al.Gut-ResidingSegmented Filamentous Bacteria Drive Autoimmune Arthritis via T Helper17Cells[J].Immunity,2010,32(6):815-827.)。
2.益生菌可缓解抗生素引起的相关腹泻，且能提高免疫功能。
益生菌是指在人体摄入一定数量的后，对人体的健康有益的有活力的微生物。益生菌可以预防消化道炎症疾病发生，调节肠道中的菌群结构，降低血清中的胆固醇，抗幽门螺杆菌的感染，刺激免疫系统以提高机体自身的抵抗力等(范薇薇,夏国莲.双歧杆菌四联活菌片对ICU抗生素相关性腹泻患者细胞免疫功能的影响及疗效观察[J].中国微生态学杂志,2014,26(1):66-68.)。
益生菌可缓解抗生素引起的相关腹泻，闫翔等发现双歧杆菌制剂可预防和减少老年人AAD的发生，减轻腹泻症状(闫翔,李钰,刘芳,等.微生态制剂预防老年抗生素相关性腹泻的临床研究[J].中国微生态学杂志,2013,25(8):936-938.)。楼晓霞观察了益生菌制剂对老年重症肺部感染中抗生素相关性腹泻的临床疗效，发现益生菌的应用可纠正肠道菌群失调，能有效保持肠道菌群稳态，可用于预防和治疗抗生素相关性腹泻(楼晓霞,沈丽丽,胡洁云,等.益生菌制剂在老年重症肺部感染中对抗生素相关性腹泻的临床疗效[J].中国生化药物杂志,2017,37(2):276-278.)。Beausoleil等，发现服用微生态制剂后AAD发生率仅有15.9％，显著高于对照组(35.6％)(Beausoleil M,Fortier N,et al.Effect of afermented milk combining Lactobacillus acidophilus Cl1285 and Lactobacilluscasei in the prevention of antibiotic-associated diarrhea:a randomized,double-blind,placebo-controlled trial[J].Canadian Journal ofGastroenterology,2016,21(11):732-736.)。多项Meta分析报道显示，接受抗生素治疗期间使用益生菌可降低AAD相对风险。且目前尚无患者发生菌血症、真菌血症或其他严重不良反应的报道(范薇薇,夏国莲.双歧杆菌四联活菌片对ICU抗生素相关性腹泻患者细胞免疫功能的影响及疗效观察[J].中国微生态学杂志,2014,26(1):66-68.)。
益生菌可缓解抗生素引起的免疫功能失调，提高患者的免疫功能。林群探究了双歧杆菌四联活菌片对肝硬化腹泻患者肠道中分泌型免疫球蛋白a(sIgA)和细胞免疫功能的影响，观察发现双歧杆菌四联活菌片能提高肠道sIgA水平且能纠正外周血T淋巴细胞亚群的紊乱，从而增强肠道局部黏膜防御力和机体细胞免疫功能(林群,庞高平,丁秋龙.双歧杆菌四联活菌片对肝硬化腹泻患者肠道sIgA水平和细胞免疫功能的影响及疗效观察[J].中国微生态学杂志,2014,26(5):552-554.)。范薇薇探讨了双歧杆菌四联活菌片对ICU中AAD患者细胞免疫功能的影响，发现在治疗10天后，观察组患者CD4+及CD4+/CD8+比值均较前明显提高，观察组患者的临床总有效率明显高于对照组，且无明显药物不良反应(范薇薇,夏国莲.双歧杆菌四联活菌片对ICU抗生素相关性腹泻患者细胞免疫功能的影响及疗效观察[J].中国微生态学杂志,2014,26(1):66-68.)。朱建央利用匹多莫德联合酪酸梭酸活菌散治疗儿童抗生素相关性腹泻能够有效的改善儿童的肠道菌群和免疫功能，两组患儿免疫球蛋白IgA、IgM及T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+数值均较治疗前升高(朱建央,阎云芸.匹多莫德联合酪酸梭菌活菌散治疗儿童抗生素相关性腹泻的临床疗效及对免疫功能与肠道菌群的影响[J].中国微生态学杂志,2016,28(4):436-439.)。
3.人参具有广泛的药理学功能，能调节免疫系统失调等多种疾病。
人参来源于五加科植物人参的根茎，人参在中药中被认为是百草之王，其含有许多生物活性成分，拥有广泛的药理学效应和独特的作用机制，可以用来减少抑郁、疲劳、糖尿病引起的免疫系统失调。有数据表明人参皂苷Rg1能促进老年鼠的淋巴细胞的分化及IL-2的产生。进一步的研究发现，人参皂苷Rg1可以升高老年鼠淋巴细胞cAMP及cGMP的水平(杨慧萍,永雪薇.人参中有效成分人参皂苷及其药理活性研究概述[J].世界最新医学信息文摘,2016(52):68-69.)。Liou等探究了人参提取物对小鼠免疫球蛋白的产生和细胞因子的表达，发现腹腔注射人参提取物后，小鼠免疫球蛋白水平明显上升；且经脂多糖刺激后的脾细胞，IgM/IgG和IgA的分泌与人参提取物呈现出剂量依赖关系(Liou C J,Huang W C,Tseng J.Short-Term Oral Administration of Ginseng Extract Induces Type-1Cytokine Production[J].Immunopharmacol Immunotoxicol,2006,28(2):227-240.)。Lim对人参多糖的免疫调节进行了探究，人参多糖可以显著增加腹膜巨噬细胞溶酶体的活性和吞噬指数。此外，经过人参多糖处理过的巨噬细胞对B16黑色素瘤细胞具有明显的抑制作用，TNF-α、IL-1β的水平和活性氧/氮的水平均增加(Kim M S,Lim H J,Yang H J,etal.Ginseng for managing menopause symptoms:a systematic review of randomizedclinical trials[J].Journal of Ginseng Research,2013,37(1):30-36.)。Chen W发现人参皂苷Rb1和稀有皂苷CK可抑制IL-1b成熟和下游炎症因子IL-6分泌(Chen W,SandasiM,Vermaak I,et al.The Application of Vibrational Spectroscopy Techniques inthe Qualitative Assessment of Material Traded as Ginseng[J].Molecules,2016,21(4):472-478.)。人参皂苷Rb1可以通过抗炎作用预防和治疗各种炎症性疾病，在LPS刺激的噬菌体和神经胶质细胞中，人参皂苷Rb1可以抑制促炎细胞因子如TNF-α，IL-1b和IL-6以及荧光酶如iNOS和COX-2的产生，这些分子的表达主要受NF-κB信号传导途径的调节，人参皂苷Rb1对结肠炎，酒精性肝炎，IR损伤和记忆受损的动物模型有一定的修复功能(楼晓霞,沈丽丽,胡洁云,等.益生菌制剂在老年重症肺部感染中对抗生素相关性腹泻的临床疗效[J].中国生化药物杂志,2017,37(2):276-278.)。
4.益生菌发酵人参的开发尚属于起步阶段，研究其药理功能有重要的意义。
对人参的药物代谢显示，人参皂苷经过肠道微生物的转化后，皂苷的吸收率会增加，从而发挥更好的药效。Wei-Wei Dong等将人参皂苷添加至小鼠的模拟肠道系统中发现，经过肠道菌群的发酵后原人参三醇型人参皂苷转化成了更易吸收的原人参二醇型皂苷(人参皂苷CK、人参皂苷Rh1)(Liang W W,Wang D C,Cheng H,et al.Chemical Constituentsfrom Endophytic Fungus Chaetomium sp.RSQMK-9Isolated from Panax ginseng[J].Natural Product Research&Development,2014,46(4):42-55.)。Trinh等将双歧杆菌与人参连用，发现双歧杆菌可以提高人参的血脂和降血糖作用(Bae E A,Trinh H T,Yoon HK,et al.Compound K,a Metabolite of Ginsenoside Rb1,Inhibits Passive CutaneousAnaphylaxis Reaction in Mice[J].Journal of Ginseng Research,2009,33(2):93-98.)。Adriana Cimo等将人参添加到益生菌酸奶中发现共同发酵可以提高益生菌的活性，在添加了人参后，鼠李糖乳杆菌GR-1的活力增加，表明人参与鼠李糖乳酸菌GR-1之间存在合生元关系(Hekmat S,Cimo A,Soltani M,et al.Microbial Properties of ProbioticFermented Milk Supplemented with Ginseng Extracts[J].Food&Nutrition Sciences,2013,4(4):392-397.)。口服酵母菌发酵后的人参，受试者血液中的皂苷含量相比于未发酵的增加了1.55倍左右，表明经过发酵后人参皂苷的药代动力学参数不同于非发酵人参，稀有皂苷IH-901的产生与酵母菌的发酵有关(Jang S H,Park J,Kim S H,et al.Oraladministration of red ginseng powder fermented with probiotic alleviates theseverity of dextran-sulfate sodium-induced colitis in a mouse model[J].Chinese Journal of Natural Medicines,2017,15(3):192-201.)。Kim等比较了红曲发酵红参与非发酵红参的效果进行了比较，发现发酵红参能显著降低卵巢周围脂肪垫和腹部脂肪垫的脂肪细胞直径以及腹部脂肪厚度，表明红曲药理活性通过红曲发酵而得到增强，并且发酵红参可以成为减轻肥胖介导的代谢紊乱的营养源(Chang M K,Yi S J,Cho I J,et al.Red-Koji Fermented Red Ginseng Ameliorates High Fat Diet-InducedMetabolic Disorders in Mice[J].Nutrients,2013,5(11):4316-4332.)。
关于人参的药理作用已经有较多的研究开展，但关于益生菌发酵人参药理作用的探究尚属于起步阶段，针对益生菌发酵人参对肠道菌群影响的研究较少，现有技术中也没有针对发酵人参对于AAD影响的研究。
发明内容
鉴于以上，本申请的技术目的是，以益生菌发酵人参为研究对象，探究其对于抗生素引起的肠道系统紊乱的调节作用。
一方面，本发明提供人参发酵物在制备用于治疗或预防抗生素相关性腹泻及由其引起的肠道菌群失调、免疫功能失调及炎症的药物中的用途。
在具体实施方式中，所述人参发酵物可以通过包括以下步骤的方法制备得到：
(1)将人参粉末加水制备人参匀浆，灭菌，得到人参灭菌液；
(2)所述人参灭菌液冷却后接种发酵乳杆菌种子液，进行发酵，得到人参发酵物。
在具体实施方式中，优选地，在步骤(1)中，人参匀浆中的人参含量为5～12wt％。
在具体实施方式中，优选地，在步骤(2)中，所述人参灭菌液冷却后接种发酵乳杆菌种子液，在24～36℃的发酵温度下进行摇床发酵，摇床转速为100～300rmp，发酵时间为20～50h，得到人参发酵物。
在具体实施方式中，优选地，在步骤(2)中，所述发酵乳杆菌为Lactobacillusfermentium(中国工业微生物菌种保藏管理中心提供，保藏编号为：CICC 21800)；所述发酵乳杆菌种子液为采用MRS液体培养基制备的发酵乳杆菌种子液；所述发酵乳杆菌种子液的活菌数为106～108CFU·mL-1；发酵乳杆菌种子液的接种量为人参灭菌液总重量的2～6wt％。
另一方面，本发明还提供一种用于治疗或预防抗生素相关性腹泻及由其引起的肠道菌群失调、免疫功能失调及炎症的药物组合物，其包含上文所述的人参发酵物。
有益效果
在本发明中，发明人将人参发酵物灌胃抗生素引起腹泻的大鼠，意外发现其可使抗生素引起的相关性腹泻症状得以恢复，主要表现在粪便含水量上升，体重增长加快，结肠组织的炎症情况缓解，从而证实了所述人参发酵物在治疗抗生素相关性腹泻及其引起的免疫功能失调中的显著效果，因此，本申请中的人参发酵物可以作为用于治疗抗生素相关性腹泻及其引起的免疫功能失调的潜力药物。
附图说明
图1显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对于粪便含水率的影响。
图2显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对于动物体重的影响。
图3显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物相对于正常组、模型组和自由恢复组的结肠HE染色照片(图3a：正常组，图3b：模型组，图3c：自由恢复组，图3d：发酵人参组)。
图4显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对于脾、胸腺器官指数的影响。
图5显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对于肝、肾器官指数的影响。
图6显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对肠道总菌含量的影响。
图7显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对于肠道菌群结构的影响。
图8显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对肠组织中核因子κB的影响。
图9显示在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中，本申请中的人参发酵物对肠组织中Toll样受体4的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
以下制备实施例与实验例采用的实验试剂、仪器如下：
人参为5年生干人参；发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC 21800。
MRS液体培养基购自青岛海博生物科技有限公司。
发酵乳杆菌种子液为采用MRS液体培养基制备的发酵乳杆菌种子液。
高压蒸汽法灭菌设备为立式压力蒸汽灭菌器BXM-30R，购自上海博讯实业有限公司。
制备实施例：
(1)将人参粉碎过药典筛四号筛，得到人参粉末；将人参粉末与去离子水混悬后制备为人参匀浆，用高压蒸汽法进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间为20min，得到人参灭菌液；其中，人参匀浆中人参添加量为8wt％。
(2)上述人参灭菌液冷却后接种发酵乳杆菌种子液，发酵乳杆菌种子液的活菌数为5×107CFU·mL-1，发酵乳杆菌种子液的接种量为人参灭菌液的重量的3wt％，在28℃下进行摇床发酵，摇床转速为160rmp，发酵时间为36h，得到人参发酵物。冷藏保存用于后续的实验研究。
实验例：
建立动物模型以及动物分组：
实验选择SD大鼠24只，随机分为4组，每组6个重复，其中包括正常组、模型组、自由恢复组、发酵人参组。正常组灌胃生理盐水；模型组灌胃抗生素5天，导致其出现腹泻症状，后处死；自由恢复组灌胃抗生素5天，导致其出现腹泻症状，后灌胃生理盐水5天，后处死；发酵人参组灌胃抗生素5天，导致其出现腹泻症状，后灌胃发酵人参5天，后处死。其中抗生素的给药量：盐酸克林霉素1.5g/kg,头孢氨苄1.5g/kg，以及链霉素0.75g/kg，给药方式：前述三种抗生素混合后使用；发酵人参的给药量为0.5g/kg/d。通过灌胃抗生素，大鼠均出现腹泻的症状。
实验例1：人参发酵物在抗生素相关性腹泻大鼠动物模型中对于粪便含水率及动物体重的影响。
造模完成后，每天测定大鼠的体重以及粪便含水量，结果显示，通过灌胃发酵人参，相比于自由恢复组，发酵人参组的大鼠粪便含水量显著下降(P＞0.05)(图1)，体重增长加快(图2)。以上数据采用SAS 9.2软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析及q检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
实验例2：病理分析
大鼠处死后取结肠进行HE染色、取肝、脾、肾、胸腺称重，测定器官指数(器官指数＝(器官质量÷体重)×100％)，结果分别示于图3、图4和图5中。
从图3-5中可以看出，通过灌胃抗生素，大鼠结肠出现炎症症状。相比于自由恢复组，发酵人参组大鼠结肠炎症情况下降(P＞0.05)(图3)，各器官指数均呈一定的恢复(图4、图5)。这些结果表明本申请的人参发酵物可以缓解抗生素相关性腹泻引起的结肠组织的炎症。
实验例3：肠道菌群分析
分别称取0.20g粪便样品至2mL灭菌EP管中，参照
Figure BDA0002416698630000091
Stool MiniKit的说明书步骤进行细菌DNA提取。为提高革兰氏阳性细菌的提取率，在水浴步骤将温度提高至95℃，同时在最后一步加入DNA洗脱液后，将室温孵育的时间由1min延长至3min。DNA浓度和纯度用核酸蛋白检测仪(
Figure BDA0002416698630000092
–1000)进行检测，最后将所有DNA置于–20℃冰箱保存。
细菌的实时荧光定量PCR检测
使用QuantStudio6 Flex荧光定量PCR仪分析大鼠粪便中的5种菌群及总菌含量，引物见下表1。对所有引物的特异性及熔解温度(Tm值)进行检测。PCR反应体系包括1μL样品DNA、1μL上游引物、1μL下游引物、12.5μL SYBR Premix Ex TaqTM II和9.5μLddH2O，并设置阴性对照。PCR反应程序：95℃预变性5min；95℃变性15s，55～95℃退火30s，72℃延伸30s，40个循环；所有PCR循环结束后72℃延伸5min。最后在上述PCR反应体系和程序条件下，用确定的Tm值建立标准曲线，并对样品进行实时荧光定量检测。每个样品做3个重复。根据对应的Ct值及标准曲线计算胃肠道样品细菌DNA的拷贝数。菌群丰度以每克内容物中细菌DNA拷贝数的对数值表示。
表1
菌株 片段大小 引物序列
总菌(正向引物) 466 TCCTACGGGAGGCAGCAGT
总菌(反向引物) 466 GGACTACCAGGGTATCTATCCTGTT
大肠杆菌(正向引物) 340 GTTAATACCTTTGCTCATTGA
大肠杆菌(反向引物) 340 ACCAGGGTATCTAATCCTGTT
双歧杆菌(正向引物) 550 CTCCTGGAAACGGGTGG
双歧杆菌(反向引物) 550 GGTGTTCTTCCCGATATCTACA
乳酸菌(正向引物) 341 AGCAGTAGGGAATCTTCCA
乳酸菌(反向引物) 341 CACCGCTACACATGGAG
拟杆菌(正向引物) 140 GGTGTCGGCTTAAGTGCCAT
拟杆菌(反向引物) 140 CGGACGTAAGGGCCGTGC
粪肠球菌(正向引物) 144 CCCTTATTGTTAGTTGCCATCATT
粪肠球菌(反向引物) 144 ACTCGTTGTACTTCCCATTGT
通过灌胃抗生素，大鼠粪便中肠道总菌含量下降，菌群结构发生变化。与自由恢复组相比，经过灌胃发酵人参，大鼠粪便中总菌含量上升(图6)，菌群结构有向正常组恢复的趋势(图7)。
实验例4：免疫功能分析
采用ELISA法测定肠组织中核因子κB及Toll样受体4的含量，结果分别示于图8和图9中。
从图8和9中可以看出，造模完成后Toll样受体4及核因子κB的表达均呈一定程度的上升。与自由恢复组相比，发酵人参组大鼠的肠组织中Toll样受体4及核因子κB均呈显著性下降。这些结果表明，本申请的人参发酵物可以抑制抗生素相关性腹泻引起的免疫功能失调。
序列表
<110> 北京中医药大学
<120> 人参发酵物的用途
<130> DI19-2312-XC03
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 总菌（正向引物）
<400> 1
tcctacggga ggcagcagt 19
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 总菌（反向引物）
<400> 2
ggactaccag ggtatctatc ctgtt 25
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 大肠杆菌（正向引物）
<400> 3
gttaatacct ttgctcattg a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 大肠杆菌（反向引物）
<400> 4
accagggtat ctaatcctgt t 21
<210> 5
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 双歧杆菌（正向引物）
<400> 5
ctcctggaaa cgggtgg 17
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 双歧杆菌（反向引物）
<400> 6
ggtgttcttc ccgatatcta ca 22
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 乳酸菌（正向引物）
<400> 7
agcagtaggg aatcttcca 19
<210> 8
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 乳酸菌（反向引物）
<400> 8
caccgctaca catggag 17
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 拟杆菌（正向引物）
<400> 9
ggtgtcggct taagtgccat 20
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 拟杆菌（反向引物）
<400> 10
cggacgtaag ggccgtgc 18
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 粪肠球菌（正向引物）
<400> 11
cccttattgt tagttgccat catt 24
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 粪肠球菌（反向引物）
<400> 12
actcgttgta cttcccattg t 21

Claims (3)

1.人参发酵物在制备用于治疗或预防抗生素相关性腹泻及由其引起的肠道菌群失调、免疫功能失调及炎症的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述人参发酵物通过包括以下步骤的方法制备得到：
(1)将人参粉末加水制备人参匀浆，灭菌，得到人参灭菌液；
(2)所述人参灭菌液接种发酵乳杆菌种子液，进行发酵，得到人参发酵物。
3.一种药物组合物，其用于治疗或预防抗生素相关性腹泻及由其引起的肠道菌群失调、免疫功能失调及炎症，所述药物组合物至少包含如权利要求2中所述的方法制备的人参发酵物。
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