CN106236768B - 中国被毛孢多糖体用于抑制肥胖的用途及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是提供一种使用中国被毛孢多糖体用于抑制肥胖的用途，其中该中国被毛孢多糖体是用于减轻体重与脂肪蓄积，并因此可用于预防和治疗肥胖症。本发明另提供该中国被毛孢多糖体的制备方法。
Description
技术领域
本发明提供一种中国被毛孢多糖体的用途，特别是一种中国被毛孢多糖体用于抑制肥胖的用途。
背景技术
传统中药在亚洲国家有悠久的历史，可追溯至几千年前。通常使用的一类传统药物是由药用蕈类组成，例如牛樟芝(Antrodia cinnamomea)、巴西蘑菇(Agaricus blazeiMurrill)、灵芝(Ganoderma lucidum)、及冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)，这类药物具有包含免疫调节作用在内的广泛生物活性。药物蕈类—冬虫夏草用于促进健康与长寿已有数世纪之久，最近辨识出无性型(anamorphic)、菌丝体形式的冬虫夏草菌株，即为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)。先前研究显示冬虫夏草子实体与中国被毛孢菌丝体的萃取物在实验室的动物实验中有很多有益的功效，包括抗疲劳、抗发炎、护肾以及增强性欲的功效。
长期以来，肥胖被定义为与大多数的健康问题以及与减少寿命有关的疾病病症，越来越多临床数据显示，肥胖与慢性发炎症状密切相关，且会导致胰岛素抗性、第二型糖尿病、脂肪肝、心血管疾病、阻塞性呼吸暂停以及癌症。然而，肥胖的发生机率很高，目前已经成为威胁大众健康的主要病症之一，全球约有5亿的肥胖者及14亿的超重者。因此，预防肥胖已成为现今社会大众的一大挑战。
目前对于一些肥胖与相关代谢异常疾病，使用包含有抗生素及益菌素用于其治疗，例如：在缺乏瘦素基因的小鼠(ob/ob)或以高脂饲料喂养的小鼠给予抗生素治疗，可以改变肠道菌群、降低血液内毒素血症以及改善葡萄糖耐受性。此外，由于益菌素为不可消化，因此藉由增强在肠道中发现的特定有益的细菌的生长，该些益生菌可发酵肠道中的碳水化合物及纤维，达到减少体重及具有抗发炎的效果。益菌素不仅改变肠道菌群还能改善肠道紧密连接完整性，并降低脂多糖(lipopolysaccharides)引起的血液内毒素血症。在现今偏好精致加工的饮食习惯下，对于能帮助维持肠胃道机能健康完整的益菌素，社会大众的相关饮食常有不足。因而，对于天然安全并方便使用的益菌素的开发提供，更显其迫切需要。
然而，基于人类肥胖发生率有越来越高的趋势，以及肥胖在治疗及预防上的困难，有需要以替代方法来预防、治疗或控制此病症。新的方法可引入至饮食中，不需要在生活方式有太大的改变且不会引起毒素或对健康有不良的影响。
发明内容
有鉴于此，本发明的一目的是提供一种中国被毛孢(Hirsutella sinensis)多糖体用于制备抑制肥胖的药物的用途，其中该中国被毛孢多糖体是为中国被毛孢菌丝体的水萃取物；且其中该中国被毛孢多糖体至少包含甘露糖(mannose)、葡萄糖(glucose)及半乳糖(galactose)。
在本发明的一实施例中，其中该中国被毛孢多糖体进一步包含岩藻糖(fucose)、鼠李糖(rhamnose)、阿拉伯糖(arabinose)、葡萄糖胺(glucosamine)以及半乳糖胺(galactosamine)。
在本发明的一实施例中，其中该中国被毛孢多糖体中岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖胺、半乳糖、葡萄糖、甘露糖以及半乳糖胺的质量百分比的比例是3:3:1:4:23:12:50:0.2至4:4:2:5:24:13:51:0.6。
在本发明的一实施例中，其中该中国被毛孢多糖体的有效剂量为0.001至1,000mg/kg。
在本发明的一实施例中，其中该中国被毛孢多糖体的重量平均分子量为312kDa，以及范围是介于15,776Da至1,231,969Da之间，分子量分布指数(Mw/Mn)是7.475。
本发明的另一目的是提供一种所述中国被毛孢多糖体的制备方法，包含：是由中国被毛孢菌丝体以水萃取，并续以醇类沉淀，再经离心分离与滤膜过滤而得，其中(a)将中国被毛孢菌丝体与水混合并以低转速萃取一预定时间，取上清液并将该上清液浓缩，以获得中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物；(b)将该中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物加入醇类静置一段时间以沉淀出中国被毛孢多糖体粗萃取物；以及(c)将该中国被毛孢多糖体粗萃取物离心后获得沉淀物；以切向流过滤系统(TFF)过滤该沉淀物，以获得中国被毛孢多糖体。
在本发明的一实施例中，其中该步骤(a)进一步包含将该上清液进行高温萃取处理步骤，该高温萃取处理步骤是于高温搅拌式反应器萃取一预定时间；且该上清液是以蒸发方式浓缩。
在本发明的一实施例中，其中步骤(a)该中国被毛孢菌丝体与水混合的比值为5％(w/v)。
在本发明的一实施例中，其中步骤(b)该醇类是95％酒精，该中国被毛孢水萃取浓缩物的浓度比值为20％(w/v)，且该20％(w/v)浓度比值的中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物与95％酒精混合的体积比例为1:5；以及该一段时间是至少十六小时。
在本发明的一实施例中，其中步骤(c)切向流过滤系统由0.2μm中空纤维膜过滤及300kDa超限滤膜(50cm2)TFF的组合进行划分过滤。
给予一个体本发明的中国被毛孢多糖体可减少体重、附睪脂肪及皮下脂肪的蓄积；亦能达到预防、治疗肥胖及抑制脂肪堆积的功效。因此，本发明的中国被毛孢多糖体为一种预防、治疗肥胖的新策略。
以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，以下所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
附图说明
图1是本发明的中国被毛孢(Hirsutella sinensis)多糖体的萃取流程图。
图2是本发明利用高效能阴离子交换色层分析仪装配脉冲式安培检测器(highperformance anion exchange chromatography-pulsed amperometric detection，HPAEC-PAD)分析中国被毛孢多糖体分馏液(CS-1)中的单糖组成。移动相为16mM NaOH，流速为1毫升/分钟。
| 滞留时间(分钟) | 单糖 |
| 4.642 | 岩藻糖(Fuc) |
| 7.623 | 鼠李糖(Rha) |
| 8.558 | 半乳糖胺(GalN) |
| 8.921 | 阿拉伯糖(Ara) |
| 9.911 | 葡萄糖胺(GlcN) |
| 11.374 | 半乳糖(Gal) |
| 12.089 | 葡萄糖(Glc) |
| 12.848 | 甘露糖(Man) |
图3是本发明的中国被毛孢多糖体分馏液(CS-1)的凝胶渗透图谱(gelpermeation chromatogram)。
图4是本发明的中国被毛孢多糖体分馏液(CS-1)的分子量取对数(Log molecularweight)对重量分布/微分分子量取对数(weight fraction/dLogMW)的曲线图。
图5是本发明的中国被毛孢多糖体分馏液(CS-1)的分子量取对数(Log molecularweight)对累积重量分布(cumulative weight fraction)的曲线图。
图6A至D是为本发明的中国被毛孢多糖体对高脂饮食诱导成肥胖小鼠(high-fatdiet，HFD)在减轻体重及减少脂肪堆积的数据图；C57BL/6公小鼠(每组10只)以普通饮食(chow；13.5％的能量来自脂肪)或是高脂饮食(HFD；60％的能量来自脂肪)，并且搭配0.001至1,000mg/kg的多糖分馏液(8％的CS-1、CS-2、CS-3或CS-4)或二次蒸馏水，以灌胃的方式给予三个月；A为体重、B为体重增加、C为皮下脂肪组织(subcutaneous adipose tissue，SAT)及D为脂肪垫(fat pad)。此结果以平均值±平均值脂标准偏差(standard error ofthe mean，SEM)表示，在数值统计分析应用上使用单因子变异数分析(one-way ANOVA)(**P<0.01,***P<0.001)。
具体实施方式
定义
本文所述的有效剂量表示能减少动物及人类体重及脂肪堆积的中国被毛孢多糖体剂量，适当的有效剂量可依治疗生物体或个体的不同而有不同，但可以包含剂量递增的研究方式的各种实验技术决定有效剂量。
如于本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。
本发明提供一种有效减少动物及人类体重及脂肪堆积的中国被毛孢多糖体，经由实验显示本发明的中国被毛孢多糖体能有效减少小鼠体重及脂肪堆积。一般而言，每日给予哺乳动物或人类本发明的多糖体0.001至1,000mg/kg剂量可有效减少体重及脂肪堆积，详细说明如下。
实施例1本发明的中国被毛孢多糖体的制备方法
本发明的中国被毛孢多糖体为中国被毛孢菌丝体的水萃取物能有效用于预防、治疗肥胖、减少脂肪蓄积以及体重管理。本发明的中国被毛孢多糖体可引入至饮食中，其可为饮品、日常补充品或食物，不需要在生活方式有太大的改变，且不会引起毒素或对健康有不良的影响。
1.1本发明的中国被毛孢发酵菌丝体水萃取浓缩物的制备
如图1所示，首先，由长庚生物科技股份有限公司(台北，台湾)取得的干燥液态发酵的中国被毛孢菌丝体(500g)混合10L蒸馏水形成混合液(50g/L)，其中固体与液体比值为5％(w/v)，以20公升搅拌式反应器、121℃高温以及150RPM转速(revolution per minute)条件下萃取三十分钟。接着，离心该萃取后混合液以去除固体物质以获得中国被毛孢发酵菌丝体水萃取物，并以蒸发方式浓缩该中国被毛孢发酵菌丝体水萃取物至2.5公升，并分装至20mL暗色玻璃安瓶，接着经高压高温灭菌处理二十分钟，以获得一固体与液体比值为20％(w/v)的中国被毛孢发酵菌丝体水萃取浓缩物，保存于4℃备用。
1.2本发明的中国被毛孢多糖体粗萃取物的制备
如图1所示，取120mL、20％(w/v)的中国被毛孢发酵菌丝体水萃取浓缩物(代号为W1，含有总水溶性碳水化合物2.09g；详见表一)，加入600mL(五倍中国被毛孢发酵菌丝体水萃取浓缩物体积)、95％酒精混合均匀，在4℃静置十六小时以沉淀出中国被毛孢多糖体粗萃取物，接着续以离心去除上清液，并以120mL、70％冰酒精清洗及离心沉淀中国被毛孢多糖体粗萃取物三次，将三次的上清液混合为酒精沉淀上清液，体积为1,040mL(代号为CS-4，含有总水溶性碳水化合物0.83g；详见表一)。取1,000mL蒸馏水复溶酒精沉淀中国被毛孢多糖体粗萃取物，再经浓缩至700mL以去除残留酒精，接着加入蒸馏水定量此中国被毛孢多糖体粗萃取物至2,400mL(代号为W2，含有总水溶性粗多糖1.26g；详见表一与表二)。
1.3本发明的中国被毛孢多糖体粗萃取物的分离纯化
取2,400mL中国被毛孢多糖体粗萃取物至50℃水浴槽，接者以切向流超限过滤系统TFF(Spectrum公司，KrosFlo型号)组合0.2μm中空纤维膜(1,500cm2，polyethersulfone，PES)并将过膜压力(transmembrane pressure，TMP)控制在15至16psi进行划分过滤。当回流液体积剩余800至1000mL时补入蒸馏水600mL，继续操作过滤。重复操作补入蒸馏水600mL三次，共计补入蒸馏水1,800mL。得到1,250mL的CS-1-1分馏液(总水溶性粗多糖0.24g)及3,600mL过滤液。
取前步骤3,600mL、0.2μm中空纤维膜过滤液至50℃水浴槽，接者以切向流过滤系统组合300kDa超限滤膜(50cm2、PES)进行划分过滤，将过膜压力(TMP)控制在18至20psi。当回流液体积剩余1,000至1,200mL时补入蒸馏水600mL，继续操作过滤。得到1,040mL的CS-1-2分馏液(总水溶性粗多糖0.18g)以及3,600mL过滤液。合并CS-1-1分馏液与CS-1-2分馏液得到2,290mL的CS-1分馏液(代号为CS-1，总水溶性粗多糖0.42g；详见表二)。
另取前步骤3,600mL过滤液至50℃水浴槽，接着以切向流过滤系统组合10kDa超限滤膜(50cm2、PES)进行划分过滤，将过膜压力(TMP)控制在18至20psi。当回流液体积剩余1,000至1,200mL时补入蒸馏水600mL，继续操作过滤。得到990mL的10kDa至300kDa的CS-2分馏液(总水溶性粗多糖0.64g；详见表二)，3,600mL的10kDa过滤液，该10kDa过滤液即为小于10kDa的CS-3分馏液(总水溶性粗多糖0.16g；详见表二)。
将划分收集到的四个CS-1至CS-4分馏液，进行浓缩至少量体积并复溶蒸馏水至体积120mL。每一分馏液分装于20ml暗色玻璃安瓶，接着经高压高温中灭菌斧灭菌二十分钟，保存于4℃备用。
1.4本发明的中国被毛孢多糖体的总水溶性碳水化合物或总水溶性粗多糖含量分析
本发明利用酚-硫酸法分析20％(w/v)的中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物(代号为W1,120mL)、中国被毛孢多糖体粗萃取物(代号为W2,2,400mL)、CS-1分馏液(2,290mL)、CS-2分馏液(990mL)、CS-3分馏液(3,600mL)及CS-4分馏液(1,040mL)的总水溶性碳水化合物或总水溶性粗多糖含量。配制0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.16、0.18与0.20mg/mL的葡萄糖标准溶液。每一浓度的葡萄糖标准溶液分别取200μL至1.5mL微量离心管，再加入200μL 5％苯酚并均匀混合。接着加入1mL硫酸并均匀混合。待静置二十分钟，以分光亮度计(spectrophotometer)在波长490nm下测定其读值，并以此读值建立检量线，检量线的R2>0.99。待测样品经适当稀释后，取200μL至1.5mL微量离心管，再加入200μL 5％苯酚均匀混合均匀。接着加入1mL硫酸均匀混合。待静置二十分钟，以分光亮度计在波长490nm下测定其读值，将读值带入检量线可以计算获得总水溶性碳水化合物或总水溶性粗多糖的浓度。
中国被毛孢多糖体粗萃取物的总水溶性碳水化合物与总水溶性粗多糖含量分析结果如表一及表二所示，其中在表二的20％(w/v)中国被毛孢菌丝体萃取浓缩液的总水溶性粗多糖含量分布分析中，中国被毛孢多糖体粗萃取物(W2)的总水溶性粗多糖中含有0.42克截留分子量大于300kDa的本发明的中国被毛孢多糖体(CS-1)，其占总中国被毛孢多糖体粗萃取物(W2)的33.3％；0.64克截留分子量10kDa至300kDa的本发明的中国被毛孢多糖体(CS-2)，其占总中国被毛孢多糖体粗萃取物(W2)的50.8％；0.16克截留分子量小于10kDa的本发明的中国被毛孢多糖体(CS-3)，其占总中国被毛孢多糖体粗萃取物(W2)的12.7％。
表一、中国被毛孢多糖体粗萃取物的总水溶性碳水化合物与总水溶性粗多糖含量分析
表二 20％(w/v)中国被毛孢菌丝体萃取浓缩液的总水溶性粗多糖含量分布分析
1.5本发明的中国被毛孢多糖体的单糖组成分析
本发明使用高效能阴离子交换色层分析仪装配脉冲式安培检测器(HPAEC-PAD；厂牌：Thermo Scientific；型号：Dionex ICS-5000System)分析各中国被毛孢菌丝体分馏物中的单糖组成。岩藻糖(L-fucose)、鼠李糖(L-rhamnose)、半乳糖胺(D-galactosamine)、阿拉伯糖(D-arabinose)、葡萄糖胺(D-glucosamine)、半乳糖(D-galactose)、葡萄糖(D-glucose)与甘露糖(D-mannose)的标准混合溶液浓度为0.1、0.5、1、2与5mg/L。分析条件在注射体积为25μL、分析管柱为CarboPac PA1(4×250mm)、移动相为纯水(92％)与200mM氢氧化钠水溶液(8％)经混合后组成比例为16mM氢氧化钠水溶液、流速为1mL/min以及管柱烘箱温度为30℃。注射入单糖标准品，经过三十分钟的分析时间，可获得单糖标准品在0.1、0.5、1、2与5mg/L的峰形积分面积，以此积分面积建立各别单糖的检量线，检量线的R2>0.99。
取1mL的分馏液(CS-1)(总水溶性粗多糖3mg)加入1.79mL蒸馏水以及1.33mL三氟醋酸(trifluoroacetic acid)，在112℃下加热十二小时进行酸水解。接着将此混合物浓缩并反复复溶蒸馏水以除酸，最后复溶蒸馏水至1mg/mL。此水解产物经稀释4倍(0.25mg/mL)后取25μL，利用高效能阴离子交换色层分析仪搭配脉冲式安培检测器与分析管柱分析，移动相为纯水(92％)与200mM氢氧化钠水溶液(8％)经混合后组成比例为16mM氢氧化钠水溶液、流速为1mL/min以及管柱烘箱温度为30℃。经过三十分钟的分析时间，将样品分析所得峰形的滞留时间与积分面积与8个标准品相比对，可经由标准品检量线计算出分馏液(CS-1)的各别单糖浓度，进而获得单糖组成的百分比。分馏液(CS-1)经高效能阴离子交换色层分析仪搭配脉冲式安培检测器分析单糖组成比例，岩藻糖占3.2％、鼠李糖占3.4％、阿拉伯糖占1.7％、葡萄糖胺占4.6％、半乳糖占23.8％、葡萄糖占12.5％、甘露糖占50.4％以及半乳糖胺占0.4％(详见第二图、表三与表四)。
表三、高效能阴离子交换色层分析仪-脉冲式安培检测器分析300kDa分馏液(CS-1)的单糖组成比例
表四、300kDa分馏液(CS-1)的单糖组成摩尔比率(molar ratio)分析
1.6本发明的中国被毛孢多糖体的分子量分布的分析
本发明使用分子筛渗透层析法(size-exclusion chromatography,SEC)搭配折射(refractive index,RI)以及光散射(light scattering,LS)二合一侦测器的高效液相色谱分析仪(high performance liquid chromatography，配有Waters 2410折射率检测器index detector，Viscotek 270双检测器)分析中国被毛孢多糖体CS-1与CS-2分馏液中的多糖分子量分布。制备浓度1.5mg/mL的分子量标准品葡聚糖(Dextran 670)进行系统校正。分析条件为注射体积100μL、分析管柱为串接2组GPC管柱TSKgel G5000PW×L(7.8×300mm)与TSKgel G6000PW×L(7.8×300mm)、移动相为纯水添加0.02％NaNO3、流速为0.5mL/min以及管柱分析温度为45℃。
取CS-1及CS-2分馏液以上述条件以OmniSEC软件(Viscotek公司，美国)进行分析，其计算方式如下表示：
Mn：数目平均分子量
Mw：重量平均分子量
Mz:较高平均分子量
Mp：最高波锋分子量，其为分子量分布最高重量分布点的分子量
Mi：单链分子量(molecular weight of a chain)
Ni：单链的数目(number of chains of that molecular weight)
利用折射/光散射GPC/SEC系统进行CS-1分馏液(总水溶性粗多糖4.0mg/ml)的分子量分析：取得折射率(refractive index，RI)以及光散射(light scattering，LS)数据(图3)。多糖分子量分布以OmniSEC软件(Viscotek公司，美国)进行分析(图4)，同时获得累积重量分布(cumulative weight fraction)(图5)。
CS-1分馏液累积重量分布值为0.95(5％)及0.05(95％)，多糖分子量分别为15,776Da及1,231,969Da。在15,776Da及1,231,969Da的间的多糖占有大约90％的总多糖重量。表五显示CS-1与CS-2多糖分馏液的比较表。
表五、CS-1与CS-2多糖分馏液的比较表
实施例2本发明的中国被毛孢多糖体对高脂饮食诱导成肥胖小鼠(High-FatDiet，HFD)在减轻体重及减少脂肪堆积的功效
本发明以标准饲料饲养(来自脂肪能量13.5％)的C57BL/6NCrlBltw作为对照组(Chow)，以及高脂饮食诱导(来自脂肪能量60％)成肥胖小鼠作为实验组(HFD)，每个实验组再分为每日灌胃给予0.001至1,000mg/kg的本发明的中国被毛孢多糖体CS-1分馏液、CS-2分馏液、CS-3分馏液、CS-4馏液或二次蒸馏水的小组并持续三个月(每小组n＝10)，分别为HFD+8％CS-1、HFD+8％CS-2、HFD+8％CS-3、HFD+8％CS-4、HFD、Chow+8％CS-1、Chow+8％CS-2、Chow+8％CS-3、Chow+8％CS-4及Chow小组。
如图6A至D显示中国被毛孢多糖体对高脂饮食诱导成肥胖小鼠(HFD)在减轻体重及减少脂肪堆积的功效。在体重方面如图6A所示，除HFD+8％CS-4外，相较于HFD组，HFD+8％CS-1、HFD+8％CS-2及HFD+8％CS-3组体重皆较轻，显示出本发明不同分子量的中国被毛孢多糖体皆具有减轻体重的效果。在减少体重增加方面如图6B所示，相较于HFD组，HFD+8％CS-1、HFD+8％CS-2、HFD+8％CS-3及HFD+8％CS-4组减少体重增加效果皆佳，显示出不同分子量的中国被毛孢多糖体皆具有减少体重增加的效果。在皮下脂肪组织(subcutaneousadipose tiusse，SAT)方面如图6C所示，相较于HFD组，HFD+8％CS-1、HFD+8％CS-2、HFD+8％CS-3及HFD+8％CS-4组减少皮下脂肪组织效果皆佳，显示出不同分子量的中国被毛孢多糖体皆具有减少皮下脂肪组织的效果。在脂肪垫(fat pad)方面如图6D所示，相较于HFD组，HFD+8％CS-1、HFD+8％CS-2、HFD+8％CS-3及HFD+8％CS-4组减少脂肪垫效果皆佳，显示出不同分子量的中国被毛孢多糖体皆具有减少脂肪垫的效果。因此，本发明的中国被毛孢多糖体具有良好的减轻体重、减少体重增加以及减少脂肪堆积的效果。
本发明估计中国被毛孢多糖体使用三个月后产生对人类有利影响的每日口服剂量：每只小鼠给予100μL本发明的中国被毛孢多糖体，各中国被毛孢多糖体分馏液的多糖体含量分别为0.35g/100mL(CS-1)、0.53g/100mL(CS-2)、0.13g/100mL(CS-3)、0.69g/100mL(CS-4)。因此，把100μL本发明分馏液给予小鼠(体重为30g)的各中国被毛孢多糖体的剂量，分别为0.00035g/小鼠体重(CS-1)、0.00053g/小鼠体重(CS-2)、0.00013g/小鼠体重(CS-3)、0.00069g/小鼠体重(CS-4)。经由换算，可得用以处理人类个体(体重为70kg)的各中国被毛孢多糖体分馏物的剂量分别为0.82g/人个体体重(CS-1)、1.24g/人个体体重(CS-2)、0.30g/人个体体重(CS-3)、1.61g/人个体体重(CS-4)，亦即用于人体的剂量分别为：0.012g/kg(CS-1)、0.018g/kg(CS-2)、0.0043g/kg(CS-3)、0.023g/kg(CS-4)。
本发明提供一种中国被毛孢多糖体用于抑制肥胖的用途及其制备方法，经由本发明的特殊制备方法所萃取的中国被毛孢多糖体能有效降低哺乳动物体重及脂肪堆积。因此，本发明对于体重管理及减少体脂肪堆积提供一种新策略，该策略可有效应用于商业上体重控制及管理需求的目标族群，达到增进人类健康福祉的目的。
Claims (6)
1.一种中国被毛孢多糖体用于制备抑制肥胖的药物的用途，其中该中国被毛孢多糖体为中国被毛孢菌丝体的水萃取物；且其中该中国被毛孢多糖体包含甘露糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖胺以及半乳糖胺；所述中国被毛孢多糖体的重量平均分子量为312kDa，以及范围是介于15,776Da至1,231,969Da之间，分子量分布指数(Mw/Mn)是7.475；
所述中国被毛孢多糖体中岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖胺、半乳糖、葡萄糖、甘露糖以及半乳糖胺的质量百分比的比例是3～4:3～4:1～2:4～5:23～24:12～13:50～51:0.2～0.6；
所述的中国被毛孢多糖体的制备方法，包含：是由中国被毛孢菌丝体以水萃取，并续以95％酒精沉淀，再经离心分离与滤膜过滤而得，具体为：
(a)将中国被毛孢菌丝体与水按照质量体积比为5％(w/v)混合并以121℃低转速萃取三十分钟，取上清液并将该上清液浓缩，获得中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物；
(b)将该中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物加入95％酒精静置一段时间以沉淀出中国被毛孢多糖体粗萃取物；所述中国被毛孢水萃取浓缩物的固体与液体的质量体积为20％(w/v)；所述固体与液体的质量体积比为20％(w/v)的中国被毛孢菌丝体水萃取浓缩物与95％酒精混合的体积比为1:5；以及
(c)将该中国被毛孢多糖体粗萃取物离心后获得沉淀物；以切向流过滤系统过滤该沉淀物，获得中国被毛孢多糖体；切向流过滤系统由0.2μm中空纤维膜过滤及300kDa超限滤膜TFF的组合进行划分过滤。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述中国被毛孢多糖体的有效剂量为0.001至1,000mg/kg。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤(a)进一步包含将所述上清液进行高温萃取处理步骤。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述高温萃取处理步骤是于高温搅拌式反应器萃取一预定时间。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤(a)中，所述上清液是以蒸发方式浓缩。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤(b)中，所述一段时间是至少十六小时。
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