CN102199502B - 一种显著增加白藜芦醇含量的干红葡萄酒的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种显著增加白藜芦醇含量的干红葡萄酒的制备方法，以干红葡萄酒为原料，先通过生物反应器1，再通过生物反应器2，得到高白藜芦醇含量的干红葡萄酒，获得了具有明显改进的保健特征的白藜芦醇含量的干红葡萄酒，在抗氧化、抗心脑血管疾病、抗黄斑变性以及提高免疫力方面，具有积极的作用。

Description

一种显著增加白藜芦醇含量的干红葡萄酒的制备方法

技术领域

本发明涉及一种显著增加白藜芦醇含量的干红葡萄酒的制备方法，属于葡萄酒领域。

背景技术

葡萄原产西亚，据说是汉朝张骞出使西域时由中亚经丝绸之路带入中国，历史已有两千年之久。葡萄是世界最大的水果作物之一，现代研究发现，葡萄中含有乙醇、多种其他醇类、糖、其他碳水化合物、多酚、醛类、酮类和色素构成的化学调和物， 6种维生素、15-20种矿物质、22种以上的有机酸，以及其他尚未鉴定出的成分。很多文献报道，葡萄酒的医疗保健功效大都与葡萄中的生物活性物质的药理活性有关。

葡萄酒作为优质健康酒精饮料，在世界上享有声誉。现代生物医学研究，已经越来越关注于葡萄酒的保健养生价值，尤其是对葡萄酒中含有的生物活性物质的研究，已经取得了丰富的研究成果。

葡萄酒的健康价值

葡萄酒健康价值在于其主要成分是醇类和多酚抗氧化剂。醇类负责减少凝块的形成（通过增大纤维蛋白溶解，减少纤维蛋白原并减少血小板聚集）、提高有益胆固醇（高密度脂蛋白HDL）水平并降低有害胆固醇（低密度脂蛋白LDL）水平，这些都有助于减少血管疾病。抗氧化剂使得葡萄酒具备了卓越的保健功效。

葡萄酒抗氧化

仅存在于葡萄酒的抗氧化剂（多酚）的功效比标准的基准抗氧化剂维生素C和维生素E强5倍，在几杯过后即达到100%抗氧化活性的平台期。这些抗氧化剂降低胰岛素抵抗，因此有助于显著减少糖尿病，阻断细胞核中DNA的损伤，减低罹患癌症的风险，并且提高有丝分裂原激活蛋白（MAP）激酶的活性以有助于降低高达80%的痴呆症。

自由基是导致身体造成生物损伤的有毒代谢废物。来自葡萄酒的抗氧化剂，中和了这些自由基的影响，由此保护身体免疫退化和衰老，即提供细胞保护作用，或防止细胞死亡。

葡萄酒抗黄斑变性

黄斑变性导致65岁以上全部人口中的30%失明。这种疾病一旦形成无法治疗，但是可以预防，而唯一已知有助于预防此疾病的方式，是适量饮用葡萄酒，这使得黄斑变性的发生率降低至多34%。

葡萄酒抗心血管疾病

每天适量饮用葡萄酒的最大健康益处来自于减少高达50%的血管疾病。这不仅包括冠心病，还涉及脑（中风）、大动脉（动脉瘤）、静脉（深静脉血管症（DVT））和肾脏（50%的肾衰竭是由血管疾病引起）在内的整个血管系统。血管疾病是目前最大的致死原因，约占所有死亡人数的一半。最新医学研究显示，血管疾病是类似于类风湿性关节炎的慢性炎性疾病，其涉及被称作内皮的血管壁内衬。因此，目前研究的新重点强调对内皮的抗炎作用，从而预防动脉粥样硬化斑块以及随后导致血管堵塞并使由该血管供血的组织死亡的凝块。葡萄酒中的抗氧化剂显著减少了这种炎症和凝块，由此减少了高达50%的血管疾病。这是有关葡萄酒抗氧化剂的益处和作用的令人激动的全新领域，其不仅涉及补充抗氧化剂的机理，而且还涉及葡萄酒多酚的新的其他生物机理。

有害胆固醇（LDL）通常被氧化，随后被加入血管壁，从而形成最终膨大而后破裂的动脉粥样硬化斑块。所述破裂通过凝块封闭，而这是导致血管堵塞的最后事件。内皮炎症理论解释了某些人可带有与瘢痕组织充分结合一起而在数十年的时间内没有发生破裂的稳定大斑块，而另一些人则具有在早年间便破裂的小但是却不稳定或者发炎的斑块的原因。

存在于葡萄酒中的抗氧化剂阻止了LDL的氧化，使其无法加入血管壁中，减少了有害胆固醇，提高了有益胆固醇（有助于重新吸收斑块），减少了内皮的炎症，并且发挥了抗凝血的作用。

葡萄酒中白藜芦醇的药理作用：

葡萄酒含有自然界最有效的抗氧化剂，即白藜芦醇（反式-3，5，4′—三羟基芪）、栎精和表儿茶素。其中研究的重点为白藜芦醇生物活性物质。

1940年， 首次从毛叶黎芦根部得到了白黎芦醇.1960年Nonomura等提出白黎芦醇是某些草药治疗炎症、脂类代谢和心脏疾病的有效成分。1977年在葡萄中发现白黎芦醇作为植物抗毒素存在.1989年WHO进行的一项流行病学的调查结果显示“French  Paradox”(法国悖论)，即：高脂肪膳食与冠状动脉硬化的低发病率呈明显一致性。经过进一步研究，人们发现通过饮用葡萄酒摄取Res是法国人心血管疾病发病率低的重要原因之一:红葡萄酒因带皮发酵，果皮与果汁接触时间长，使果皮中相当数量的Res能够进人葡萄酒中，从而具有抗脂质过氧化作用，已知脂质过氧化作用在动脉粥样硬化等心血管疾病的发生中起着重要的作用。1992年在商业葡萄酒中首次发现了白黎芦醇，同年学术界对葡萄酒富含白黎芦醇进一步进行了确认。近些年来，国外很多学者对白黎芦醇的生物学功能进行了深层次的研究，这些研究包括脂类代谢、花生四烯酸代谢等阁，证实其具有许多重要的生理活性。

白藜芦醇（Resveratrol）简称Res，化学名为芪三酚（3，4′，5—trihydrolystilbene），存在于许多植物中，是植物受到真菌感染或紫外线照射后产生的一种植物抗毒素，属于次生代谢产物，不但能够杀灭感染植物的真菌，而且对于动物、人体都具有广泛的生理活性，在虎杖、买麻藤、落花生、芦笋、朝鲜槐、欧洲云杉等中相继发现，实现了化学全合成。

白藜芦醇有顺式和反式两种异构体，反式异构体的生理活性强于顺式异构体，在紫外线照射下反式白藜芦醇能转化为顺式异构体。反式白藜芦醇为白色，浅黄色晶体，熔点253～255℃，分子式C14H12O3，分子量228.2。顺式，反式白藜芦醇均可与葡萄糖结合，形成顺式或反式白藜芦苷，它们与白藜芦醇一样具有生理活性。顺式，反式白藜芦醇结构式如下：

反式- 白藜芦醇                             顺式- 白藜芦醇 

白藜芦醇可诱导SOD产生的作用，具有抗菌、抗脂质过氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝集、血管松弛、降血脂和抗诱变、抗肿瘤活性。     白藜芦醇有很强的抗体内脂质过氧化作用。白藜芦醇能抑制脂质过氧化物在小鼠肝中沉积，能降低小鼠血清中天冬氨酸和丙氨酸转氨酶的水平，还能抑制小鼠肝微粒中由ADP和HADPH引起的脂质过氧化，白藜芦醇能抑制铜介导的低密度脂蛋白（LDL）的氧化，还能通过螯合作用和消除自由基来保护LDL的过氧化。白藜芦醇若结合维生素C和E，则可使细胞的抗氧化能力更强大。

用红葡萄酒给小鼠进行灌胃，小鼠心脏中白藜芦醇的含量很高，且和心肝肾有较强的亲和力，白藜芦醇具有抑制环氧酶和氢过氧化酶的作用，诱导人前骨髓白细胞分化作用，抑制鼠乳腺损伤组织恶性增生和抑制致肿瘤作用，表现出较强的抗癌作用。

白藜芦醇能抑制去甲状肾上腺素（NA）对小鼠动脉内皮引起的收缩作用，在适当的浓度下 ，能松弛肾上腺素引起的血管收缩。

对高脂模型小鼠，白藜芦醇抑制肝中甘油三脂和胆固醇的沉积，能降低血清中甘油三脂和LDL胆固醇水平及动脉粥样硬化指数，能降低血小板凝集。

白藜芦醇的制备方法

白藜芦醇的制备并不是很困难的事情。如前文所述，白藜芦醇可以从虎杖、葡萄籽、买麻藤、落花生、芦笋、朝鲜槐、欧洲云杉中提取，也可以化学全合成。

国内外许多学者和生产商都采用化学方法制取。一般来说，化学合成方法成本较低，但出于食品安全性考虑，越来越多的学者主张从天然植物中提取。

在陈述本申请的发明点之前，发明人对葡萄酒中白藜芦醇含量的调控做如下综述：

葡萄酒中的白藜芦醇受葡萄品种、葡萄生长环境、酿酒工艺以及葡萄被微生物感染程度等因素的影响。

人们在对多种植物不同部位中白藜芦醇的含量分析后发现，葡萄皮中白藜芦醇的含量最高。

由于白黎芦醇的合成需要独特的酶，而这种酶在葡萄果粒中的分存布并不一致，R.Pezet于1996年研究测定，在葡萄果实中白黎芦醇主要分布在果皮中，其次为种子。

　   葡萄酒中白藜芦醇含量

　　葡萄酒中的白黎芦醇主要来源于葡萄果实，通过酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵后，果皮和种子中的白藜芦醇进入葡萄酒中。

　　比较不同品种的葡萄酒，就白藜芦醇的绝对量而言，黑彼诺＞梅鹿特＞赤霞珠，同时也能看出，黑彼诺中糖苷化白黎芦醇与游离态白黎芦醇之比最小。葡萄果实中白黎芦醇的含量与葡萄品种对采收时的极端恶劣条件的敏感性呈正相关。黑彼诺果皮较薄，对真菌病害敏感，因而诱导了白黎芦醇的合成。

　　虽然白黎芦醇在葡萄酒中的含量根据葡萄酒的酒种、葡萄品种、产地的不同，而存在着很大的差异，但就其总量而言，红葡萄酒＞白葡萄酒＞加强葡萄酒。

地区间的差异

　　不同地区的葡萄酒中，游离态白黎芦醇的含量差异很大，地中海地区(意大利、西班牙、葡萄牙)和新大陆(加州和南美)的葡萄酒中含量较低，而法国布根地和波尔多葡萄酒中的含量则较高。

在中国，根据不同的葡萄品种、产地、葡萄酒种类及酿酒工艺，葡萄酒中白藜芦醇的含量各不相同。

根据葡萄酒中白藜芦醇含量的调控方法，已经有人发明了提高白藜芦醇含有量的葡萄酒的制备方法，可以归纳为：

1.  优选高白藜芦醇含量的葡萄为原料

如天津科技大学提交的CN200610129321.7，该发明通过选取特定产区的富含白藜芦醇的葡萄品种和紫外辐射诱导白藜芦醇的合成,采用特定的工艺尽可能地溶出葡萄皮中的白藜芦醇,并且最大程度地防止白藜芦醇的氧化，酒质细腻醇和,香气优雅高贵,呈清亮的宝石红色。

CN200610129321.7的优点是：和普通的葡萄酒酿造工艺没有冲突，不需特定的设备，工艺参数调整相当方便，社会效益巨大。 

CN200610129321.7的缺点是：高白藜芦醇的葡萄品种是紫外辐射诱导的，因此，在理论上而言，其培养成本高，高白藜芦醇的性状不容易遗传继承，一旦高白藜芦醇的性状消失之后，企业将不能持续生产高白藜芦醇的葡萄酒。

2.  往葡萄酒中加入白藜芦醇

如澳大利亚的菲利普·安东尼·诺里提交的CN200880122683.0，其方法包括：向桶装葡萄酒的一部分中添加得自于葡萄的白藜芦醇，形成白藜芦醇浓缩物，和向桶装葡萄酒中添加所述白藜芦醇浓缩物，产生白藜芦醇增加的葡萄酒。

有趣的是，CN200880122683.0的说明书记载：用于本发明的白藜芦醇的优选来源是由中国长沙康隆生物制品有限公司（Organic Herbal Inc）制造的。

CN200880122683.0 的优点是：生产成本低。

CN200880122683.0  的缺点是：类似的方法早就被公开，CN200880122683.0  授权前景有待观察。

山东省葡萄科研所的王德福，在CN 03112486.0的说明书中公开了高含量白藜芦醇酒生产工艺（2005-10-26授权）：

具体实施方式：一吨高含量白藜芦醇酒类生产实例：

     按每升葡萄酒白藜芦醇含量增加10mg计算，需准备白藜芦醇10克，葡萄酒1000kg，取葡萄酒适量，低温蒸馏得70％v/v以上葡萄酒精液50mL，将10g白藜芦醇加入上述葡萄酒精液中，待充分溶解后，加入1000mL葡萄酒中，充分均匀后，然后将此酒加入一吨葡萄酒中，搅拌混合均匀，制得高含量白藜芦醇葡萄酒。

CN200610129321.7，CN200880122683.0 和CN 03112486.0都想避免采用附加的技术设备，充分利用原有生产设备和仪器，以降低生产成本，但是，对于单宁含量较高的葡萄酒，这样的方法不但不能提高白藜芦醇的含量，反而会导致单宁含量进一步升高，甚至出现浑浊，口感变得更苦。

喝红葡萄酒的时候，苦涩的东西就是单宁。单宁也叫鞣酸，对口腔粘膜有收敛作用，这种物质是抗氧化剂，对于葡萄酒延长保藏期限发挥重要作用。在化学结构上，主要源于葡萄皮和葡萄籽的单宁为缩合单宁。在保留葡萄皮的红葡萄酒发酵过程中，酒液还会从橡木中汲取一定的单宁物质，从橡木桶汲取的单宁为“水解单宁”。

单宁的主要作用有：使酒体结构稳定、坚实丰满；有效地聚合稳定色素物质，为葡萄酒赋予完美和富有活力的颜色；和酒液中的其它物质发生反应，生成新的物质，增加葡萄酒的复杂性。单宁不足的葡萄酒则会发育不良，通常表现为质地轻薄、柔弱无力、素然无味。

鞣酸单宁会分解为白藜芦醇一类的小分子物质，从而起到抗氧化的作用，防止葡萄酒过酸，但是，过分从外界添加白藜芦醇，将抑制鞣酸单宁的分解，虽然能有利于葡萄酒的保藏，但是，会导致鞣酸单宁的含量维持在高水平，使得葡萄酒变得苦涩不堪。

因此，本申请的发明点不在于优选高白藜芦醇含量的葡萄为原料，也不在于往葡萄酒中加入白藜芦醇，而是在于：结合葡萄中白藜芦醇的生物合成、分布，结合葡萄酒的发酵原理，提供一套简便易行的方法，从而制备得到高白藜芦醇含量的葡萄酒。

发明内容

    本发明以干红葡萄酒为原料，先通过生物反应器1，再通过生物反应器2，得到高白藜芦醇含量的干红葡萄酒。

生物反应器1的组成是：

生物反应器1载体：纤维，

生物反应器1纤维，优选：竹炭纤维、甲壳素纤维、壳聚糖纤维。

生物反应器1载体上吸附了：酿酒酵母，

生物反应器1的外部材料：玻璃、不锈钢、高分子材料，

生物反应器1的外形：柱状、球状，

生物反应器1的底部：滤膜，防止酵母流出。

生物反应器2的组成是：

生物反应器2载体：纤维，

生物反应器2纤维，优选：竹炭纤维、甲壳素纤维、壳聚糖纤维。

生物反应器2固定化材料上吸附了：固定化葡萄糖苷酶, 诱导子，

生物反应器2诱导子是：灭菌的酵母孢子水提取物、灭菌的灵芝孢子水提取物、或、灭菌的黑曲霉孢子水提取物。

生物反应器2的外部材料：玻璃、不锈钢、高分子材料，

生物反应器2的外形：柱状、球状，

生物反应器2的底部：滤膜，防止固定化酶流出。

竹炭纤维、甲壳素纤维、壳聚糖纤维，都是天然高分子纤维，不含有木质素，不会引起鞣酸单宁含量的增加，这些纤维不是化学合成纤维，不会导致化学合成物质的残留。

为了便于葡萄酒通过，可以使用蠕动泵、加压泵。

本发明高白藜芦醇含量的葡萄酒有很多优点，例如：

增强葡萄酒在人体内的抗氧化能力，形成更好的效果

本发明的干红葡萄酒对人体无附作用，与一种或多种本领域所熟知的可食用、药用的载体和/或赋形剂混合。 

 本发明的干红葡萄酒，在治疗、预防或者改善 骨质疏松 症尤其是绝经后 的 骨质疏松症、女性更年期综合症或绝经综合症、绝经后皮肤感觉异常、月经不调尤其是月经前期综合症、老年痴呆症、阿尔兹海默病、衰老、 雷纳德综合症、伯格氏病，能缓解压力和抑郁。 

本发明的干红葡萄酒，在治疗、预防或者改善肿瘤或癌症 ，尤其是乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、淋巴癌、大肠癌、前列腺癌等癌症方面。 

本发明的干红葡萄酒，在治疗、预防或者改善心脑血管系统疾病方面， 尤其是对高血脂、动脉硬化、高血压、脑血栓、脑梗塞、 冠心病 、心肌缺血以及心血管系统的慢性退化性疾病方面。 

 本发明的干红葡萄酒，对于皮肤衰老、色斑、雀斑、女性绝经后皮肤感觉异常等有很好的预防、改善或治疗效果。 

 本发明的干红葡萄酒，在男性前列腺增生症、痤疮或青春痘、脱发，尤其 是男性斑秃、遗传性脱发、风湿病尤其是类风湿性关节炎等方面，有很好的预防、改善或治疗效果。 

本发明的干红葡萄酒，在胆结石，肾结石，溃疡，肝炎等消化疾病上，有很好的预防、改善或治疗效果， 能帮助消化。

具体实施方式

具体实施例1：生物反应器1的制备方法

(1)载体预处理

将纤维放入不锈钢柱状容器中，用自来水冲洗，洗净灰尘，用蒸馏水浸泡和冲洗，转入烘箱，120摄氏度干热灭菌，去除水份，抽真空，然后用甲醛气体进行灭菌过夜。载体与柱体比(w／v)为l／3．

纤维是：丝纤维，竹炭纤维、甲壳素纤维、或壳聚糖纤维

(2)吸附酵母

吸附前抽真空，去除余留的甲醛气体。然后真空吸入1×1 0⁷个细胞／mL酵母悬液，再经特殊处理，使载体充分吸附酵母1小时．吸附完毕，放出剩余的酵母液，计数，并算出吸附率。

生物反应器1的底部：滤膜，防止酵母流出。

(3)固定化酵母的增殖

固定在载体上的酵母细胞密度较低，发酵能力较弱，必经过活化增殖，代谢活力才能提高。用蠕动泵以200 mL／min的流量将麦芽汁输入发酵罐，液面超过载体1 cm为止。每隔5 h通入无菌空气5 min，增殖温度维持12℃～15℃ ，待麦芽汁糖度降至4 Bx，增殖结束，放出增殖液。

具体实施例2：生物反应器1降低单宁含量

经增殖后，生物反应器1内酵母密度大，代谢旺盛。在储液罐中注入干红葡萄酒5 L，启动蠕动泵，以100mL／mim的流量，泵入生物反应器1，葡萄酒注满发酵罐后，继续以100mL／mim流量进行回流。发酵温度保持15℃，每2小时取样测单宁，24 h后结束。

具体实施例3：生物反应器2的制备方法

(4)载体预处理

将纤维，用自来水冲洗，洗净灰尘，用蒸馏水浸泡和冲洗，粉碎, 转入烘箱，120摄氏度干热灭菌，去除水份，抽真空，然后用甲醛气体进行灭菌过夜。

纤维是：竹炭纤维、甲壳素纤维、或壳聚糖纤维

(5)  海藻酸钙胶珠包埋葡萄糖苷酶和诱导子：

配置200ml，60g·L-1的CaCl2溶液两瓶；

400ml，40g·L-1的海藻酸钠溶液一瓶；

121℃下灭菌25min，冷却至室温，待用。

将海藻酸钠溶液平分为两份，分别与β- D- 葡萄糖苷酶( 2.4 U/mg)和诱导子混合均匀，制得海藻酸钠-葡萄糖苷酶混合液，海藻酸钠-诱导子混合液；

诱导子是：灭菌的酵母孢子水提取物、灭菌的灵芝孢子水提取物、或、灭菌的黑曲霉孢子水提取物。    

海藻酸钠-葡萄糖苷酶混合液中，葡萄糖苷酶的浓度是：0.02mg/L

海藻酸钠-诱导子混合液中，诱导子的浓度是: 0.2mg / L

两种混合液通过蠕动泵以8ml·min-1的速率滴入60g·L-1的CaCl2溶液中，CaCl2溶液通过磁力搅拌器以150～200转/分不断搅拌，固化20分钟后，制得直径为4～6mm的包埋葡萄糖苷酶的固定化胶珠。 

(5)海藻酸钙胶珠与载体混合

将载体、固定化胶珠放置入无菌烧瓶中，放到摇床上，震荡摇匀，放入不锈钢柱状容器中，载体与柱体比(w／v)为l／3，抽真空，然后用甲醛气体进行灭菌过夜。

生物反应器1的底部：滤膜，防止固定化酶流出。

具体实施例4：生物反应器2提高白藜芦醇含量

在储液罐中注入生物反应器1处理过的干红葡萄酒5 L，启动蠕动泵，以100mL／mim的流量，泵入生物反应器2，葡萄酒注满发酵罐后，继续以100mL／mim流量进行回流。发酵温度保持15℃，每2小时取样测白藜芦醇，24 h后结束。

具体实施例5：生物反应器1，2中的白藜芦醇含量测定

结束，按照如下方法测定生物反应器1，2中的白藜芦醇含量

仪器

PC- 2000 型高效液相色谱仪、分析之星色谱工作站、Model525 紫外/可见可变波长检测器（美国LabAlliance公司）；超纯水仪（Millipore 公司）；离心浓缩仪（Thermo 公司）；FT- 120 葡萄酒分析仪（北京福斯福有限公司）。

分析方法

样品处理

葡萄酒样品离心浓缩除去乙醇, 加入6 mL去离子水, 用7mL 乙酸乙酯萃取酶解液, 萃取4 次, 收集萃取液离心浓缩除去乙酸乙酯,用250 μL 甲醇/水( 6:4; v/v) 溶解残留物, 待用。

标准品配制

精确称取一定量的反式白藜芦醇标样, 甲醇溶解配成100 μg/mL 的标准液。- 4 ℃避光保存。顺式白藜芦醇用配好的反式白藜芦醇在紫外光下( 254 nm,990 μW/cm2) 辐照20 min 制得。

色谱条件: 色谱柱:KromasilC18 ( 5 μm, 250×4.6mm)；流动相: A 液为7.5 %乙腈和0.1 %的三乙胺水溶液,B液为100 %乙腈, 梯度洗脱, 20 min 内由100 %A 液变为100 %B 液。流速: 0.8 mL/min；波长: 306 nm；进样量:20 μL。

流入到生物反应器1干红葡萄酒中的白藜芦醇含量：1.7-2.5mg/ L，优选是2mg/ L

生物反应器1流出的干红葡萄酒中的白藜芦醇含量：10.5-35.6mg/ L，优选是30mg/ L

生物反应器2流出的干红葡萄酒中的白藜芦醇含量：100.5-290.6mg/ L，优选是270mg/ L

因此，生物反应器1，2显著提高了干红葡萄酒中的白藜芦醇含量。

具体实施例5：生物反应器2流出的干红葡萄酒的口感

生物反应器2流出的干红葡萄酒的口感，没有明显的苦味、酸味，放置之后没有出现浑浊。

具体实施例6：

本发明的生物反应器2流出的干红葡萄酒，对四氯化碳致大鼠肝纤维化的影响 

1.      试验方法 

选择雄性健康大鼠40只，体重150-180g，将大鼠均随机分正常组、模型组、对照组,生物反应器2流出的干红葡萄酒(白藜芦醇含量100mg/ L)组，除正常对照组外，其余各组大鼠首次于背部皮下注射四氯化碳15ml/kg，以后每周2次背部皮下注射40％四氯化碳橄榄油2ml/kg，共4周。在试验期间除正常组外，第1~2 周各组均给予20％猪油加0.5％胆固醇的玉米粉饲料，第4周饲以普通饲料。各给药组在造模开始时即同时灌胃给予相应剂量的药液, 干红葡萄酒(给药体积0.5ml/100g)，给药时间共6周。乙醚麻醉下剖腹，取一部分 肝组织制成肝匀浆，用于检测羟脯氨酸(Hyp)含量。

 2.试验结果 

试验结果表明，造模6周后，与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织中Hyp显著升高，有显著性差异。

各给药组Hyp的升高程度均小于模型组。

生物反应器2流出的干红葡萄酒升高程度最小，能保肝降酶。这表明生物反应器2流出的干红葡萄酒.对四氯化碳致大鼠肝纤维化损伤有一定的保护作用。

具体实施例7:

本发明的生物反应器2流出的干红葡萄酒，对化疗后免疫力增强的影响 

将健康昆明种小鼠腹腔连续注射环磷酰胺80mg/kg/日，连续三日，待外周血中白细胞降至800/mm³后，建立小鼠化疗后白细胞下降模型，开始服用本发明的生物反应器2流出的干红葡萄酒, 黄芪颗粒。各组药物连续使用30天，每天灌胃1次，每组小鼠20只。 

试验分组： 

1模型对照组：动物模型造模成功后，正常生理盐水灌胃； 

2黄芪颗粒组：2mg/kg体重灌胃 

4生物反应器2流出的干红葡萄酒(白藜芦醇含量100mg/ L)组, (给药体积0.5ml/100g)体重灌胃。 

组别	白细胞数目
		组1	805±101.3/mm3
组2	2530±170.1/mm3
		组3	3456±162.1/mm3

生物反应器2流出的干红葡萄酒(白藜芦醇含量100mg/ L)组，能显著提升化疗后的白细胞含量，增强免疫力。

具体实施例8:

优选白藜芦醇含量100mg/ L的干红葡萄酒中，按照早中晚，每次50ml的量服用，观察到如下结果

Claims (1)

1.一种增加白藜芦醇含量的干红葡萄酒的制备方法，其特征在于：

   以干红葡萄酒为原料，先通过生物反应器1，再通过生物反应器2，得到高白藜芦醇含量的葡萄酒，

生物反应器1的组成是：

生物反应器1载体：纤维，所述的纤维为丝纤维、竹炭纤维、甲壳素纤维或壳聚糖纤维；

生物反应器1载体上吸附了：酿酒酵母，

生物反应器1的底部：设置滤膜；

生物反应器2的组成是：

生物反应器2载体：纤维，所述的纤维为竹炭纤维、甲壳素纤维或壳聚糖纤维，

生物反应器2固定化材料上吸附了：固定化葡萄糖苷酶和诱导子，

生物反应器2诱导子是：灭菌的酵母孢子水提取物、灭菌的灵芝孢子水提取物或灭菌的黑曲霉孢子水提取物，

生物反应器2的底部：设置滤膜。