TWI593419B - 中華被毛孢多醣體用於治療脂肪肝疾病之用途及其製備方法 - Google Patents

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Description

中華被毛孢多醣體用於治療脂肪肝疾病之用途及其製備方法
本發明提供一種中華被毛孢多醣體之用途。進一步而言，本發明係提供一種中華被毛孢多醣體用於治療脂肪肝疾病之用途。
傳統中藥在亞洲國家中有著悠久的歷史，可追溯至幾千年前。通常使用的一類傳統藥物是由藥用蕈類組成，例如牛樟芝(Antrodia cinnamomea)、巴西蘑菇(Agaricus blazei Murrill)、靈芝(Ganoderma lucidum)以及冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis)，這類藥物具有包含免疫調節作用在內的廣泛生物活性。藥用蕈類-冬蟲夏草用於促進健康與長壽已有數世紀之久，近期的研究將冬蟲夏草無性生殖菌絲(anamorphic mycelium)定義為中華被毛孢(Hirsutella sinensis)。先前研究顯示冬蟲夏草子實體與中華被毛孢菌絲體的萃取物在實驗室的動物實驗中有很多有益的效用，包括抗疲勞、護腎以及增強性慾。
脂肪肝是一種三酸甘油酯大液泡累積於肝臟所形成的狀況。這個情況大多發生在酗酒或是肥胖個體的肝臟上。脂肪肝通常與發炎 相關，稱作脂肪肝炎(steatohepatitis)。長期來說，脂肪肝疾病可能導致數種併發症，包括肝硬化、肝腫瘤以及死亡。目前脂肪肝的高普遍度使其成為大眾健康的主要威脅，其全球人口的普遍度約為10至24%。因此，在現代社會中，脂肪肝之預防及治療成為一個主要的目標。
綜觀人類脂肪肝發生率的升高及其於預防及治療上的困難，人們需要一種替代性的方法來預防、治療或是控制脂肪肝，尤其是一種新的方法可直接導入日常飲食中，而不會大幅改變生活方式且不會產生毒性或不良的影響。
有鑑於此，本發明之一目的係提供一種中華被毛孢多醣體用於製備治療或預防脂肪肝疾病之藥物的用途，其中該中華被毛孢多醣體係為中華被毛孢菌絲體的水萃取物；且其中該中華被毛孢多醣體至少包含甘露醣(mannose)、半乳醣(galactose)及葡萄醣(glucose)。
在本發明之一實施例中，其中該中華被毛孢多醣體進一步包含岩藻醣(fucose)、鼠李醣(rhamnose)、阿拉伯醣(arabinose)及葡萄醣胺(glucosamine)、及半乳醣胺(galactosamine)。
在本發明之一實施例中，該中華被毛孢多醣體中岩藻醣：鼠李醣：阿拉伯醣：葡萄醣胺：半乳醣：葡萄醣：甘露醣：半乳醣胺的比例係為3~4：3~4：1~2：4~5：23~24：12~13：50~51：0.2~0.6。
在本發明之一實施例中，其中該中華被毛孢多醣體之重量平均分子量係為312kDa，以及範圍係介於15,776Da至1,231,969Da之間，分子量分布指數(Mw/Mn)係為7.475。
本發明所提供之中華被毛孢多醣體係降低一個體的肝臟重量與肝臟液泡；同時，本發明之中華被毛孢多醣體亦可降低一個體血清中三酸甘油酯與天冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase,AST)含量。在本發明之一實施例中，該中華被毛孢多醣體之有效劑量係0.001mg/kg至1g/kg。
本發明亦提供一種前述中華被毛孢多醣體之製備方法，包含：由一中華被毛孢菌絲以水萃取，並續以一醇類沉澱，再經離心分離與濾膜過濾而得，其中，(a)將一中華被毛孢菌絲與水混合並以低轉速萃取一預定時間，取上清液並將該上清液濃縮，以獲得一中華被毛孢萃取濃縮物；(b)將該中華被毛孢萃取濃縮物加入一醇類靜置一段時間以沉澱出一中華被毛孢多醣體粗萃取物；以及(c)將該中華被毛孢多醣體粗萃取物離心後獲得一沉澱物；以切向流過濾系統(tangential flow filtration,TFF)過濾該沉澱物，以獲得一中華被毛孢多醣體。
在本發明之一實施例中，步驟(a)之該上清液係以蒸發方式濃縮且步驟(a)該中華被毛孢菌絲與水混合的比值為5.0%(w/v)；步驟(b)中該醇類係為95%酒精；該中華被毛孢萃取濃縮物之濃度比值為20.0%(w/v)；該20%(w/v)濃度比值的中華被毛孢萃取濃縮物與95%酒精混合的比例為1：5；而該一段時間係至少十六小時；步驟(c)之切向流過濾系統由0.2μm中空纖維膜過濾及10-300kDa超限濾膜(50cm2，polyethersulfone，PES)之組合進行劃分過濾。
本發明之中華被毛孢多醣體係可用於在動物體或人體中肝臟重量與肝臟液泡；亦可降低一個體血清中三酸甘油酯與天冬胺酸轉胺酶。因此，可提供作為治療或預防脂肪肝疾病之醫藥品、補充品、或飲食 品。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，以下所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
第一圖係為本發明中華被毛孢多醣體之萃取流程圖。
第二圖係為本發明使用高效陰離子交換層析與脈衝安培檢測(high-performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detection，HPAEC-PAD)分析中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)中的單醣組成。
第三圖係為本發明中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)之凝膠滲透圖譜(gel permeation chromatogram)。
第四圖係為本發明中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)的分子量取對數(Log molecular weight)對重量分部/微分分子量取對數(weight fraction/dLogMW)的曲線圖。
第五圖係為本發明中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1)的分子量取對數(Log molecular weight)對累積重量分部(cumulative weight fraction)的曲線圖。
第六圖係為中華被毛孢多醣體在脂肪肝疾病之效果。C57BL/6NCrlBltw公小鼠以標準飼料(能量來源13.5%為脂肪)或是高脂肪含量飼料(能量 來源60%為脂肪)，每天藉由胃內灌食的方式以100μL的中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1、CS-2、CS-3、以及CS-4)或蒸餾水處理，持續三個月。三個月後犧牲小鼠，取其肝臟進行(A)拍照及(B)秤重。(C)製作肝臟組織切片並以蘇木素和伊紅(hematoxylin and eosin，H&E)染色以評估其組織學特徵。(D)並測量血清三酸甘油酯(TG)及(E)天冬胺酸轉胺酶(AST)血清含量。與HFD控制組小鼠比較，CS-1、CS-2及CS-3在HFD小鼠上有對於脂肪肝有益的效果(***p<0.001；單因子變異數分析(one-way ANOVA)；ns：未有顯著差異)。另一方面，與HFD控制組小鼠比較，CS-4增進了肝臟重量與液泡量上的作用，但與CS-1至CS-3分餾液相較，此分餾物與在降低血清三酸甘油酯與AST含量上效果較小。此結果以平均值±平均值之標準差(standard error of the mean，SEM)表示。比例尺：5mm(A)；20μm(C)。
定義
本文所述之有效劑量表示能減少動物及人類體重及脂肪堆積的中華被毛孢多醣體劑量。適當的有效劑量可依所治療生物體或個體的不同而有所差異，但可使用劑量遞增(dose escalation study)的各種實驗技術決定有效劑量。
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
本發明提供一種能治療脂肪肝疾病的中華被毛孢多醣體，經由實驗顯示本發明之中華被毛孢多醣體能有效降低一個體的肝臟重量與肝 臟液泡，亦能降低血清中三酸甘油酯與天冬胺酸轉胺酶的含量。概括而言，每日給予哺乳動物或人類本發明之多醣體0.001至1,000mg/kg(體重)劑量可有效預防與治療該哺乳動物或人類的脂肪肝疾病，詳細說明如下。
首先，將中華被毛孢多醣體定性，之後經由實驗顯示該分離的中華被毛孢多醣體對於脂肪肝的效果實驗。
實施例1 本發明之中華被毛孢多醣體的製備方法
本發明之中華被毛孢多醣體係為中華被毛孢菌絲體的水萃取物能有效用於降低肝臟重量與肝臟液泡，更能降低血清中三酸甘油酯與天冬胺酸轉胺酶的含量。本發明之中華被毛孢多醣體可加入至飲食中，其可為一飲品、日常補充品或食品，不需要在生活方式有太大的改變，且不會引起毒素或對健康造成不良的影響。
1.1本發明之中華被毛孢發酵菌絲體水萃取濃縮物的製備
第一圖係顯示從中華被毛孢(冬蟲夏草無性生殖菌絲體)分離多醣體之方法。首先，由長庚生物科技股份有限公司(臺北，臺灣)取得之乾燥液態醱酵的冬蟲夏草無性生殖菌絲體(即：中華被毛孢，500g)混合10L蒸餾水形成混合液(50g/L)，其中固體與液體比值為5%(w/v)，以20公升攪拌式反應器、121℃高溫以及150RPM轉速(revolution per minute)條件下萃取30分鐘。接著，離心該萃取後混合液以去除固體物質，獲得一中華被毛孢水萃取物，並以蒸發方式濃縮該中華被毛孢醱酵菌絲體水萃取物至體積為2.5公升，並分裝至20mL暗色玻璃安瓶，接著經高溫高壓滅菌處理 20分鐘，獲得一固體與液體比值為20.0%(w/v)的一中華被毛孢萃取濃縮液，保存於4℃備用。
1.2本發明中華被毛孢多醣體粗萃取物的製備步驟
如第一圖所示，取120mL、20.0%(w/v)的中華被毛孢萃取濃縮物(代號為W1，含有總水溶性碳水化合物2.09g；詳見表一)，加入600mL(五倍中華被毛孢水萃取濃縮物體積)、95%酒精混合均勻，在4℃靜置16小時以沉澱出中華被毛孢多醣體粗萃取物，接著續以離心去除上清液，並以120mL、70%冰酒精清洗及離心沉澱中華被毛孢多醣體粗萃取物三次。接著，將三次的上清液混合為酒精沉澱上清液，體積為1,040mL(代號為CS-4，含有總水溶性碳水化合物0.83g；詳見表一)。取1,000mL蒸餾水復溶酒精沉澱中華被毛孢多醣體粗萃取物，經濃縮至體積為700mL以去除殘留酒精，接著加入蒸餾水定量此中華被毛孢多醣體粗萃取物體積至2,400mL(代號為W2，含有總水溶性粗多醣1.26g；詳見表一與表二)。
1.3本發明中華被毛孢多醣體粗萃取物的分離純化
取2,400ml中華被毛孢多醣體粗萃取物至50℃水浴槽，接著以切向流過濾系統TFF(Spectrum公司，KrosFlo型號)組合0.2μm中空纖維膜(1,500cm2，PES)進行劃分過濾並將過膜壓力(transmembrane pressure，TMP)控制在15-16psi。當回流液體積剩餘800-1000mL時補入蒸餾水600mL，繼續進行過濾。重複操作補入蒸餾水600mL三次，共計補入蒸餾水1,800mL。得到1,250mL的CS-1-1分餾液(含總水溶性粗多醣0.24g)及3,600mL過濾液。
取上述3,600mL、0.2μm中空纖維膜過濾液至50℃水浴 槽，接著以切向流過濾系統組合300kDa超限濾膜(50cm2，PES)進行劃分過濾，將過膜壓力(TMP)控制在18-20psi。當回流液體積剩餘1,000至1,200mL時補入蒸餾水600mL，繼續進行過濾。得到回流液體積為1,040mL的CS-1-2分餾液(含總水溶性粗多醣0.18g)及3,600mL過濾液。合併CS-1-1分餾液與CS-1-2分餾液得到體積為2,290mL的CS-1分餾液(總水溶性粗多醣0.42g；詳見表二)。
另取上述步驟3,600mL、300kDa超限濾膜過濾液至50℃水浴槽，接著以切向流過濾系統組合10kDa超限濾膜(50cm2，PES)進行劃分過濾，將過膜壓力(TMP)控制在18-20psi。當回流液體積剩餘1,000至1,200mL時補入蒸餾水600mL，繼續進行過濾。得到990mL的10kDa至300kDa的CS-2分餾液(總水溶性粗多醣0.64g；詳見表二)，3,600mL的10kDa過濾液，該10kDa過濾液即為小於10kDa的CS-3分餾液(總水溶性粗多醣0.16g；詳見表二)。
將劃分收集到的四個CS-1~CS-4分餾液，進行濃縮至少量體積並復溶於蒸餾水至體積120mL。將每一分餾液分裝至20mL暗色玻璃安瓶，接著經121℃滅菌20分鐘，保存於4℃備用。
1.4本發明之中華被毛孢多醣體總水溶性碳水化合物或總水溶性粗多醣含量分析
本發明使用酚-硫酸法分析20.0%(w/v)的中華被毛孢水萃取濃縮物(代號為W1，120mL)、中華被毛孢多醣體粗萃取物(代號為W2，2,400mL)、CS-1分餾液(2,290mL)、CS-2分餾液(990mL)、CS-3分餾液(3,600mL) 與CS-4分餾液(1,040mL)之總水溶性碳水化合物或總水溶性粗多醣含量。配製0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.16、0.18與0.20mg/mL之葡萄糖標準溶液。每一濃度的葡萄糖標準溶液分別取200μL至1.5mL微量離心管，再加入200μL、5%苯酚並混合均勻。接著加入1mL硫酸，混合均勻。待靜置20分鐘，以分光光度計(spectrophotometer)在波長490nm下測定其讀值，並以此讀值建立檢量線，檢量線之R2>0.99。待測樣品經適當稀釋後，取200μL至1.5mL微量離心管，再加入200μL、5%苯酚，混合均勻。接著加入1mL硫酸，混合均勻。待靜置20分鐘，以分光光度計在波長490nm下測定其讀值，將讀值帶入檢量線可以計算獲得總水溶性碳水化合物或總水溶性粗多醣的濃度。
中華被毛孢多醣體粗萃取物的總水溶性碳水化合物與總水溶性粗多醣含量分析結果如表一及表二所示，其中在表二的20%(w/v)中華被毛孢萃取濃縮液的總水溶性粗多醣含量分布分析中，中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的總水溶性粗多醣中含有0.42克截留分子量大於300kDa的本發明之中華被毛孢多醣體(CS-1)，其佔總中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的33.3%；0.64克截留分子量10kDa至300kDa的本發明之中華被毛孢多醣體(CS-2)，其佔總中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的50.8%；0.16克截留分子量小於10kDa的本發明之中華被毛孢多醣體(CS-3)，其佔總中華被毛孢多醣體粗萃取物(W2)的12.7%。
1.5本發明中華被毛孢多醣體的單醣組成分析
第二圖顯示CS-1多醣分餾物中的單醣組成，係以高效能陰離子交換色層分析儀裝配脈衝式安培檢測器(HPAEC-PAD)所量測。使用高效能陰離子交換色層分析儀裝配脈衝式安培檢測器(high performance anion exchange chromatography-pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD；Dionex ICS-5000 System)來分析中華被毛孢菌絲體分餾物中的單醣組成。岩藻醣(L-fucose)、鼠李醣(L-rhamnose)、半乳醣胺(D-galactosamine)、阿拉伯 醣(D-arabinose)、葡萄醣胺(D-glucosamine)、半乳醣(D-galactose)、葡萄醣(D-glucose)與甘露醣(D-mannose)之標準混合溶液濃度為0.1、0.5、1.0、2.0與5.0mg/L。分析條件在注射體積為25μl、分析管柱為CarboPac PA1(4×250mm)、移動相為純水(92%)與200mM氫氧化鈉水溶液(8%)經混合後組成比例為16mM氫氧化鈉水溶液、流速為1.0ml/min以及管柱烘箱溫度為30℃。注射入單醣標準品，經過三十分鐘之分析時間，可獲得單醣標準品在0.1、0.5、1.0、2.0與5.0mg/L的峰形積分面積，以此積分面積建立各別單醣之檢量線，檢量線之R2>0.99。
取1.0mL中華被毛孢CS-1分餾液(總水溶性粗多醣3mg)加入1.79mL蒸餾水以及1.33mL三氟醋酸(trifluoroacetic acid)，在112℃下加熱12小時進行酸水解。接著將此混合物濃縮並反覆復溶於蒸餾水以除酸，最後復溶於蒸餾水至1mg/mL。此水解產物經稀釋4倍(0.25mg/mL)後取25μL，利用高效能陰離子交換色層分析儀搭配脈衝式安培檢測器與分析管柱分析，移動相為純水(92%)與200mM氫氧化鈉水溶液(8%)經混合後組成比例為16mM氫氧化鈉水溶液、流速為1.0ml/min、管柱烘箱溫度為30℃。經過30分鐘之分析時間，將樣品分析所得峰形之滯留時間與積分面積與上述8個標準品相比對，可經由標準品檢量線計算出中華被毛孢分餾液(CS-1)的各別單醣濃度，進而獲得單醣組成的百分比。中華被毛孢分餾液(CS-1)經高效能陰離子交換色層分析儀搭配脈衝式安培檢測器分析單醣組成比例，岩藻醣佔3.2%、鼠李醣佔3.4%、阿拉伯醣佔1.7%、葡萄醣胺佔4.6%、半乳醣佔23.8%、葡萄醣佔12.5%、甘露醣佔50.4%以及半乳醣胺佔0.4%，詳如表三、表四、以及第二圖所示。
1.6本發明中華被毛孢多醣分子量分佈的分析
本發明使用分子篩滲透層析法(size-exclusion chromatography，SEC)搭配折射(refractive index，RI)、以及光散射(light scattering，LS)二合一偵測器之高效液相色谱分析儀(high performance liquid chromatography，配有Waters 2410折射率檢測器index detector，Viscotek 270雙檢測器)來分析中華被毛孢分餾液(CS-1)與分餾液(CS-2)中的多醣分子量分佈。製備濃度為1.5mg/mL的分子量標準品葡聚糖(Dextran 670；分子量為667,800Da)進行系統校正。分析條件係：注射體積100μL、分析管柱為串接2組GPC管柱TSKgel G5000PWxL(7.8×300mm)與TSKgel G6000PWxL(7.8×300mm)、移動相為純水添加0.02% NaNO3、流速為0.5ml/min、管柱分析溫度為45℃。
取CS-1及CS-2分餾液以上述條件以OmniSEC軟體(Viscotek公司，美國)進行分析，其計算方式如下表示：
Mn：數目平均分子量
Mw：重量平均分子量
Mz：較高平均分子量
Mp：最高波鋒分子量，為分子量分布最高重量分布點的分子量
Mi：單鏈分子量(molecular weight of a chain)
Ni：單鏈的數目(number of chains of that molecular weight)
利用光散射GPC/SEC系統進行CS-1多醣體分餾液(總水溶 性粗多醣4.0mg/ml)的分子量分析：取得折射率(refractive index，RI)以及光散射(light scattering，LS)數據(第三圖)。多醣體分子量分布以Viscotek OmniSEC軟體計算(第四圖)，亦決定累積重量分部(cumulative weight fraction)(第五圖)。累積重量分部顯示於第五圖。
CS-1分餾液累積重量分部值為0.95(5%)及0.05(95%)，多醣分子量分別為15,776Da及1,231,969Da。在15,776Da及1,231,969Da之間的多醣體佔有大約90%的總多醣重量，分子量分布指數(Mw/Mn)係為7.475。表五顯示CS-1與CS-2多醣分餾液之比較表。
實施例2 本發明中華被毛孢多醣體對高脂飲食誘導成肥胖小鼠(High Fat Diet-fed，HFD-fed)之治療脂肪肝疾病的效果
第六圖顯示中華被毛孢多醣體分餾物於小鼠脂肪肝之實驗效果。C57BL/6NCrlBltw公小鼠以標準飼料(能量來源13.5%為脂肪)為Chow組或是高脂肪含量飼料(能量來源60%為脂肪)為HFD組，每天藉由胃內灌 食的方式以100μL的中華被毛孢多醣體分餾液(CS-1、CS-2、CS-3、以及CS-4)或蒸餾水處理，持續三個月。三個月後犧牲小鼠，取其肝臟進行拍照及秤重，並製作肝臟組織切片並以蘇木素和伊紅(hematoxylin and eosin，H&E)染色以評估其組織學特徵。測量血清三酸甘油酯(TG)及天冬胺酸轉胺酶(AST)血清含量。與HFD控制組小鼠相較，以CS-1、CS-2及CS-3治療3個月的HFD小鼠呈現肝臟大小(第六A圖)、肝臟重量(第六B圖)、以及脂質液泡之數量與尺寸(第六C圖)皆降低，血清三酸甘油酯與血清AST含量亦降低(第六D圖及第六E圖)。
另一方面，與HFD控制組小鼠比較，CS-4分餾液增進了降低肝臟重量與液泡量上的作用，但與CS-1至CS-3分餾液相較，此分餾物在降低血清三酸甘油酯與AST含量上效果較小。
各中華被毛孢多醣體分餾液之多醣體含量分別為：0.35g/100mL(CS-1)、0.53g/100mL(CS-2)、0.13g/100mL(CS-3)、0.69g/100mL(CS-4)。故，用以處理小鼠(平均體重為30g)之各中華被毛孢多醣體的劑量係分別為0.00035g/小鼠體重(CS-1)、0.00053g/小鼠體重(CS-2)、0.00013g/小鼠體重(CS-3)、0.00069g/小鼠體重(CS-4)(小鼠之平均重量為每隻30g或0.03kg)。經由換算，可得用以處理人個體(體重為70kg)之各中華被毛孢多醣體的劑量係分別為0.82g/人個體體重(CS-1)、1.24g/人個體體重(CS-2)、0.30g/人個體體重(CS-3)、1.61g/人個體體重(CS-4)，亦即用於人體之劑量分別為：0.012g/kg(CS-1)、0.018g/kg(CS-2)、0.0043g/kg(CS-3)、0.023g/kg(CS-4)。
本發明所分離出來並純化的多醣體，在餵食HFD哺乳動物 上可降低脂肪肝疾病的症狀。因此，本發明提供一個預防與治療人類脂肪肝疾病之新穎方法。這個方法有顯著商業潛力，可以廣泛地用於設計治療此疾病的商品及治療方法。前述結果僅代表本發明的一個示例性的應用。本發明之修飾與改良將成為本發明相關領域者的努力成果。這些修飾仍然落入本發明之範圍以及本專利之專利範圍內。

Claims (6)

  1. 一種中華被毛孢(Hirsutella sinensis)多醣體用於製備治療或預防脂肪肝疾病之藥物的用途，其中該中華被毛孢多醣體係為中華被毛孢菌絲體的水萃取物；且其中該中華被毛孢多醣體至少包含甘露醣(mannose)、半乳醣(galactose)及葡萄醣(glucose)。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體進一步包含岩藻醣(fucose)、鼠李醣(rhamnose)、阿拉伯醣(arabinose)及葡萄醣胺(glucosamine)、及半乳醣胺(galactosamine)。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體中岩藻醣：鼠李醣：阿拉伯醣：葡萄醣胺：半乳醣：葡萄醣：甘露醣：半乳醣胺的比例係為3~4：3~4：1~2：4~5：23~24：12~13：50~51：0.2~0.6。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體之重量平均分子量係為312kDa，以及範圍係介於15,776Da至1,231,969Da之間，分子量分布指數(Mw/Mn)係為7.475。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體係降低一個體的肝臟重量與肝臟液泡、以及降低血清中三酸甘油酯與天冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase)含量。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該中華被毛孢多醣體之有效劑量係0.001mg/kg至1g/kg。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201422230A (zh) * 2012-03-28 2014-06-16 Tcm Biotech Internat Corp 預防及治療肝纖維化之醫藥組成物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Li SP et al,"Hypoglycemic activity of polysaccharide, with antioxidation, isolated from cultured Cordyceps mycelia", Phytomedicine, 2006, 13(6): 428-433. *

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