CN110467685B - 一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用 - Google Patents
一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110467685B CN110467685B CN201910744803.0A CN201910744803A CN110467685B CN 110467685 B CN110467685 B CN 110467685B CN 201910744803 A CN201910744803 A CN 201910744803A CN 110467685 B CN110467685 B CN 110467685B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- sinensis seed
- cedrela sinensis
- seed
- seed polysaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000425037 Toona sinensis Species 0.000 title claims abstract description 153
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 140
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 140
- 235000011783 Cedrela sinensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 110
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 14
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 claims description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 11
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 10
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 8
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims description 7
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims description 6
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 claims description 5
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 3
- 229920006122 polyamide resin Polymers 0.000 claims description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 19
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 abstract description 11
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 abstract description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 6
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010025 steaming Methods 0.000 abstract 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 119
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 5
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 5
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 5
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 5
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 4
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 4
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 3
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 229920001499 Heparinoid Polymers 0.000 description 1
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 description 1
- 229920000869 Homopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 241000158728 Meliaceae Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000701382 Ranavirus Species 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 229920001284 acidic polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000004805 acidic polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009924 canning Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000002554 heparinoid Substances 0.000 description 1
- 229940025770 heparinoids Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000019633 pungent taste Nutrition 0.000 description 1
- 150000003214 pyranose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000009424 thromboembolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7004—Monosaccharides having only carbon, hydrogen and oxygen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用，涉及香椿子多糖提取技术领域，将香椿子烘干后粉碎，热水浸提，旋蒸浓缩，醇沉，冷冻干燥后得到粗多糖，然后经聚酰胺脱蛋白、活性炭脱色，再采用DEAE‑SepharoseCL‑6B阴离子交换柱层析，分别用0、0.1、0.2、0.5mol/L NaCl溶液阶段洗脱，流收集0.2mol/L NaCl洗脱液，真空浓缩后用蒸馏水透析，然后将其冷冻干燥冻干得到均一的香椿子多糖STSP‑3；本发明制备的香椿子多糖抗凝血活性高，制备方法简单，避免了残留的化学试剂存在的安全隐患，具有良好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及香椿子多糖提取技术领域，特别是指一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用。
背景技术
随着人们生活水平的提髙、饮食习惯的改变以及生活节奏的加快，人们对自身的健康更加的关心和重视；从天然产物中提取有效成分并加以开发利用得到了前所未有的大发展。而血栓性疾病严重影响人们的身体健康，而且近年来还有不断增加的趋势，是医学领域研究的重要课题之一，目前治疗血栓性疾病比较有效的药物是多糖类药物肝素，但是其可以导致许多不良的副作用，如导致骨质疏松、需要连续的静脉注射、导致血栓栓塞并发症、对抗凝血酶和抗凝血剂的依赖和诱发血小板减少等，而且商业肝素一般从猪和牛的肠组织中提取，且有可能被阮病毒和病毒污染。因此，从天然产物中提取类肝素物质显得尤为重要。
香椿子，又被称为椿树子，是楝科植物香椿(Toona sinensis)的果实，主要产于中国长江南北地区，具有较高的经济和药用价值。据《四川中药志》记载，其性温，味辛苦且无毒，具祛风、散寒止痛之功效，主治风寒外感、心胃气痛、风湿关节痛、疝气及冷骨风。医学研究表明，香椿子可用于治疗胃溃疡和十二指肠溃疡、慢性胃炎等。香椿子水煎剂有较强的抗血栓作用[金桂兰,陈超.香椿子水煎剂的抗血栓作用研究[J].中国药房,2011,22(15):1364-1366]香椿子水煎剂含有诸多水溶性及亲水性化学成分，如生物碱、皂苷、甾体、多糖、蛋白质、水溶性色素、植物酚类等，药效主要成分不清楚；香椿子粗多糖具有抗凝血作用[鄢文霞.香椿子多糖的抗凝血作用研究[D].三峡大学,2013]，其复合物中结合有蛋白质、色素物质，且中性多糖组份、酸性多糖组份缠绕交联，但具体是香椿子多糖中哪一种多糖产生的抗凝血作用，至今仍没有明确的研究结果。
同时申请人研究发现，现有的香椿子多糖的提取方法，制备的多是香椿子粗多糖，香椿子粗多糖是混合物，在初提的时候会产生一些杂质，如色素类、蛋白质等，在很大的程度上会对多糖的外观、纯度造成影响，且组分较为复杂，这更增加了香椿子多糖抗凝血生物性能研究的不确定性，从而限制了香椿子多糖生物活性的市场推广。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提出一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用，以提高香椿子多糖的纯化均一性，从而提高香椿子多糖生物活性研究的确定性，提高其市场价值。
基于上述目的本发明提供的一种香椿子多糖，所述香椿子多糖为均一性的多糖，且包括如下摩尔百分比成分：阿拉伯糖2～7％、鼠李糖20～30％、氨基葡萄糖1.5～5.5％、半乳糖45～60％、葡萄糖2.5～10％、木糖0.25～1％、甘露糖2.5～4％。
可选的，所述香椿子多糖包括如下摩尔百分比成分：阿拉伯糖4.36％、鼠李糖26.05％、氨基葡萄糖3.74％、半乳糖54.79％、葡萄糖6.88％、木糖0.72％、甘露糖3.45％。
一种香椿子多糖的制备、纯化方法，包括如下步骤：
水提、浓缩，将香椿子烘干后进行粉碎成香椿子粉末，将香椿子粉末加入水中，搅拌混合均匀后，在温度50～90℃下提取30～150min，离心抽滤，得香椿子提取液，将香椿子提取液真空浓缩至原体积的20～35％，得香椿子浓缩液；
醇沉，向香椿子浓缩液中加入无水乙醇，搅拌混合，将混合液醇沉18～30h后，离心过滤得沉淀物，将沉淀物经过醇洗后，将沉淀加水复溶，去除酒精后，冷冻干燥得到香椿子粗多糖；
脱蛋白，将香椿子粗多糖配成水溶液，并加入树脂，且两者的质量比为10～25:1mg/g，室温条件下振荡1.5～3h，将混合液依次经过抽滤、离心，保留上清液，进行浓缩并干燥；
脱色，将脱蛋白的香椿子粗多糖用水溶解，加入活性炭在温度50～70℃加热反应0.5～1.5h，然后调节样液pH至3.5～4.5后，进行抽滤，将滤液离心后，收集离心液进行真空浓缩并冷冻干燥；
层析，将脱蛋白、脱色后的香椿子粗多糖溶解于水中，离心处理后，将离心液进行层析，同时用0、0.1、0.2、0.5mol/L NaCl溶液进行阶段洗脱，收集0.2mol/L NaCl洗脱液，真空浓缩后用水透析60～70h，然后将其冻干，得到香椿子酸性均一多糖。
可选的，所述水提中，料液比为1:15～35；所述真空浓缩的温度为45～60℃；所述醇沉的温度为2.5～5.5℃。
可选的，所述脱蛋白方法为聚酰胺树脂法，具有多糖保留率高，成本低等优点。
可选的，所述脱色中加入活性炭的质量百分数为0.5～5％。
可选的，所述层析柱采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱；
可选的，所述香椿子均一多糖为STSP-3，其重均分子量为36080Da，此为首次分离纯化得到的香椿子多糖均一组分，此分子量的香椿子多糖具有较高的抗凝血活性。
相应的，本发明还提供了一种香椿子多糖的应用，可用于制备具有抗凝血作用的药物和功能性食品。
从上面所述可以看出，本发明提供的一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用，将香椿子烘干后粉碎，热水浸提，真空浓缩，乙醇醇沉，冷冻干燥后得到粗多糖，然后经聚酰胺脱蛋白、活性炭脱色，再采用DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析柱层析，最后获得具有抗凝血活性且均一的香椿子多糖，该多糖组分具有良好的抗凝血效果，当其浓度达到4mg/mL时，其能延长凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)；抗凝血活性高，制备方法简单，避免了残留的化学试剂存在的安全隐患，具有良好的开发应用前景。同时制备的均一的香椿子多糖能用于药品、保健营养品的原料或添加剂。
附图说明
图1为本发明实施例香椿子多糖经DEAE-Sepharose CL-6B的洗脱曲线图；
图2为本发明实施例香椿子多糖STSP-3的高效凝胶过滤色谱图示意图；
图3为本发明实施例香椿子多糖提取工艺流程图；
图4为本发明实施例单糖标样的离子色谱分析图谱；
图5为本发明实施例单糖标样氨基葡萄糖的离子色谱分析图谱；
图6为本发明实施例STSP-3的离子色谱分析图；
图7为本发明实施例香椿子多糖红外光谱图；
图8为本发明实施例香椿子多糖紫外光谱分析图。
具体实施方式
为下面通过对实施例的描述，本发明的具体实施方式如所涉及的制造工艺及操作使用方法等，作进一步详细的说明，以帮助本领域技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
实施例1
可以理解的是，现有技术中对香椿子多糖的提取中，多是获得香椿子粗多糖，由于粗多糖中含有杂质，如如色素类蛋白质等，其对多糖的色泽、纯度造成一定的影响，且导致在后续研究其生物活性时，无法确定生物活性成分，不利于香椿子多糖的应用和研究。
为了解决现有技术中的全部或者部分不足，本发明提供的一种香椿子多糖，香椿子多糖为具有均一性的单糖，且包括如下摩尔百分比成分：阿拉伯糖2～7％、鼠李糖20～30％、氨基葡萄糖1.5～5.5％、半乳糖45～60％、葡萄糖2.5～10％、木糖0.25～1％、甘露糖2.5～4％。
同时，本发明提供一种香椿子多糖的制备、纯化方法，包括如下步骤，
一种香椿子多糖的制备、纯化方法，包括如下步骤：
水提、浓缩，将香椿子烘干后进行粉碎成香椿子粉末，将香椿子粉末加入水中，搅拌混合均匀后，在温度50～90℃下提取30～150min，离心抽滤，得香椿子提取液，将香椿子提取液真空浓缩至原体积的20～35％，得香椿子浓缩液；
醇沉，向香椿子浓缩液中加入无水乙醇，搅拌混合，将混合液醇沉18～30h后，离心过滤得沉淀物，将沉淀物经过醇洗后，将沉淀加水复溶，去除酒精后，冷冻干燥得到香椿子粗多糖；
脱蛋白，将香椿子粗多糖配成水溶液，并加入树脂，且两者的质量比为10～25:1mg/g，室温条件下振荡1.5～3h，将混合液依次经过抽滤、离心，保留上清液，进行浓缩并干燥；
脱色，将脱蛋白的香椿子粗多糖用水溶解，加入活性炭在温度50～70℃加热反应0.5～1.5h，然后调节样液pH至3.5～4.5后，进行抽滤，将滤液离心后，收集离心液进行真空浓缩并冷冻干燥；
层析，将脱蛋白、脱色后的香椿子粗多糖溶解于水中，离心处理后，将离心液经DEAE-Sepharose CL-6B柱进行层析，同时用0、0.1、0.2、0.5mol/L NaCl溶液进行阶段洗脱，收集0.2mol/L NaCl洗脱液，真空浓缩后透析60～70h，然后将其冻干，得到香椿子均一多糖，即STSP-3。
本发明制备的香椿子多糖，可用于制备具有抗凝血作用的药物和功能性食品。
本发明提供的方法操作简单可行且能耗小，利用聚酰胺法可有效除去香椿子多糖中的蛋白质，并利用活性炭法对其脱色。分离纯化得到均一的香椿子多糖，可用于药品、保健营养品的原料或添加剂，如胶囊剂、片剂、口服液等。该多糖安全无毒，具有较好的开发应用前景。
进一步的，本发明实施例1提供的一种均一多糖的制备、纯化方法，包括如下步骤：
水提、浓缩，将市场上购买的香椿子经过过筛除杂后，70℃烘干后将其粉碎、过筛80目筛，得香椿子粉末，将香椿子粉末加入蒸馏水中，保持料液比1:25，搅拌混合均匀后，在温度82.5℃下提取92min，离心抽滤，得香椿子提取液，将香椿子提取液在50℃下用旋转蒸发仪进行真空浓缩至原体积的30％，得香椿子浓缩液；
醇沉，向香椿子浓缩液中加入体积是其4倍的无水乙醇并不断搅拌，然后于4℃醇沉24h，将溶液进行低速离心(4000rpm/20min)，过滤，得沉淀物，将沉淀物经过多次无水乙醇洗后，将沉淀物加水复溶，去除酒精，冷冻干燥得到香椿子粗多糖；
脱蛋白，将香椿子粗多糖配成2mg/mL的水溶液，并加入聚酰胺，且香椿子粗多糖和聚酰胺的质量比为31:2mg/g，将混合溶液在室温的条件下振荡2h，转速110r/min，待振荡结束后，将混合液进行抽滤、离心，保留上清液，然后将上清液进行浓缩并干燥得到粗多糖；
脱色，称取脱蛋白的香椿子粗多糖1g，用蒸馏水溶解，加入2％的活性炭于60℃下加热1h，调节样液pH至4，然后抽滤，取其滤液高速离心(10000r/min，10min)，去除残留的活性炭，其溶液呈现淡黄色至无色；收集脱色后的多糖溶液，进行真空浓缩并冷冻干燥；
DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析柱层析，准确称量经过脱蛋白、脱色处理后的香椿子粗多糖100mg，将其溶解于10mL蒸馏水中，离心(10000r/min处理10min)除去多糖中所含有的不溶物，并进行微滤，溶液上DEAE-Sepharose CL-6B柱(1.6cm×60cm)，用0、0.1、0.2、0.5mol/L NaCl溶液进行阶段洗脱，流速为1.0mL/min，每管收集5mL；洗脱出来的多糖用部分收集器收集，苯酚-硫酸法于波长490nm处跟踪检测多糖含量，并以试管的管号为横坐标，以490nm下测得的吸光值和氯化钠浓度为纵坐标绘制香椿子多糖的洗脱曲线；总共得到4个洗脱曲线峰，曲线峰对应的多糖分别为STSP-1、STSP-2、STSP-3和STSP-4，如图1所示。收集0.2mol/L氯化钠洗脱液，真空浓缩后用蒸馏水进行透析72h(每天换4次水)，然后将其冻干，得到均一的香椿子多糖STSP-3。
实现了对香椿子多糖的进一步分离纯化，获得了其重均分子量为36080Da的STSP-3，该多糖组分具有良好的抗凝血效果，当其浓度达到4mg/mL时，其能延长凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)。
采用ICS-5000离子色谱仪对单糖成分进行测定。色谱柱：CarboPac PA20；
流速：0.5mL/min；检测器：脉冲安培检测器。测试图谱标样如图4～6所示，STSP-3的离子色谱分析图如图6所示，STSP-3的成分如表1所示。
表1多糖STSP-3的组分
最终均一的香椿子多糖STSP-3的提取率的主要决定因素是提取温度、提取时间、料液比及提取次数。香椿子粗多糖提取率的计算如下。量取一定体积的香椿子粗多糖提取液，稀释50倍，即浓度至所绘制的标准曲线浓度范围内。量取稀释后的多糖溶液1mL，加入1.0mL 6％的苯酚以及5.0mL的浓硫酸，摇匀，静止0.5h后于490nm处测香椿子粗多糖溶液的吸光度。把所得到的数据代入标准曲线的回归方程中以计算出多糖的浓度，然后计算得到相应的多糖含量。由以下公式即得出香椿子多糖的提取率。
香椿子粗多糖提取率(％)＝100×C×N×V/W；
C-从标准曲线计算出的多糖的浓度(mg/mL)；
N-稀释倍数；
V-提取溶液的总体积(mL)；
W-香椿子干粉的质量(g)。
进一步的，通过响应面Design expert设计，得到最优的提取工艺为提取温度82.5℃、提取时间为92min，料液比为1:25，提取1次。
进一步的，本发明实施例脱蛋白还采用如下工艺：香椿子粗多糖与聚酰胺质量比为10:1mg/g，振荡1.5h。
进一步的，本发明实施例脱蛋白还采用如下工艺：香椿子粗多糖与聚酰胺质量比为25:1mg/g，振荡3h。
进一步的，本发明实施例脱色还采用如下工艺：脱色中活性炭加入量为0.5％，温度50℃，加热反应0.5h。
进一步的，本发明实施例脱色还采用如下工艺：脱色中活性炭加入量为5％，温度70℃，加热反应1.5h。
上述工艺条件的变化均是为了说明本发明在研究过程中的全面性。为确定本发明实施例中提取的香椿子均一多糖的性能，本发明实施例对香椿子均一多糖做了如下性能测试研究。
一种香椿子均一多糖体外抗凝血活性实验
一、采用本发明制备的均一的香椿子多糖STSP-3体外抗凝血活性实验。
1、样本的收集和处理
将血浆(健康志愿者处获得)和柠檬酸钠(浓度为3.8％)按体积比(9:1)混匀，离心(3600rpm，15min)收集上清液，将其置于真空采血管内，4℃保存。
2、观察指标
活化部分凝血活酶时间(APTT)，凝血酶原时间(PT)，凝血酶时间(TT)。
Minitab 15统计分析软件对结果进行数学统计分析，并与对照组进行配对t检验。
(1)均一的香椿子多糖STSP-3对APTT的影响。取50μL待测样液(STSP-3与血浆1:4体积比混匀)，37℃预热3min后加入等体积APTT试剂，保温5min后，再加入50μL 37℃预热的CaCl2溶液，生理盐水和肝素钠分别做阴性和阳性对照，同时用仪器记录凝血时间，测试结果如表2所示。实验结果表明在浓度范围内，STSP-3对APTT没有呈现一定的影响，说明STSP-3不是通过内源性途径进行抗凝血作用的。
表2均一的香椿子多糖STSP-3对APTT的影响
注：表2中数据为平均值±标准差，n＝3。其中：**表示与生理盐水相比P＜0.01；*表示与生理盐水相比0.01＜P＜0.05。
(2)均一的香椿子多糖STSP-3对凝血酶原时间(PT)的影响
取50μL待测样液(STSP-3与血浆1:4体积比混匀)，37℃预热3min后加入100μL PT试剂，生理盐水和肝素钠分别做阴性和阳性对照，同时用仪器记录凝血时间，测试结果如表3所示。实验结果表明，在浓度范围内，STSP-3对PT有一定的影响，当浓度达到4mg/mL时，其能延长PT，时间为15.5s。
表3均一的香椿子多糖STSP-3对PT的影响
注：表3中数据为平均值±标准差，n＝3。其中：**表示与生理盐水相比P＜0.01；*表示与生理盐水相比0.01＜P＜0.05。
(3)均一的香椿子多糖STSP-3对凝血酶时间(TT)的影响
取50μL待测样液(STSP-3与血浆1:4体积比混匀)，37℃预热3min后加入50μL TT试剂，生理盐水和肝素钠分别做阴性和阳性对照，同时用仪器记录凝血时间。结果如表4所示，实验结果表明在浓度范围内，STSP-3可显著延长TT时间。
表4均一的香椿子多糖STSP-3对TT的影响
注：表中数据为平均值±标准差，n＝3。其中：**表示与生理盐水相比P＜0.01；*表示与生理盐水相比0.01＜P＜0.05。
测试结果显示，均一的香椿子多糖STSP-3可以显著延长PT和TT，但对APTT没有影响。这表明其可参与外源性凝血途径并且进一步凝血酶原转变为凝血酶来发挥抗凝血效果，由此证明了其具有抗凝血活性。
二、同时对本发明实施例中的提取的4种多糖STSP-1、STSP-2、STSP-3和STSP-4进了红外光谱分析，称取香椿子多糖组分各2mg，用KBr粉末与其研磨、压片。然后在4000～400cm-1内对分别对多糖组分进行红外光谱分析，测试结果如图7所示，STSP-1、STSP-2、STSP-3和STSP-4在3400cm-1左右处都出现了一个比较宽的强吸收峰，说明是O-H的伸缩振动，在2930cm-1附近处也都出现了的一个比较弱的峰，这个为糖类特征吸收峰C-H，这2个吸收峰为多糖类物质的特征吸收峰；在1622～1640cm-1处和1385cm-1出现了较弱的吸收峰，可能有羧基和羰基的存在；在1075～1140cm-1处的峰说明有吡喃糖；在870～875cm-1处出现的峰说明多糖中存β-糖苷键。
三、在对香椿子粗多糖进行脱蛋白时，采用的是现有技术中多糖脱蛋白常用的方法，即聚酰胺法脱蛋白，发现其脱蛋白效果很好，蛋白质基本可以去除，且同时亦可以去除一部分色素。聚酰胺法脱蛋白条件温和，成本较低，易于回收，能够保留多糖的原始结构。
将未脱蛋白的香椿子粗多糖和脱蛋白的香椿子多糖分别配成0.2mg/mL的溶液，然后分别在200-400nm内用紫外可见分光光度计进行扫描，观察脱蛋白效果，测试结果如图8所示。未进行脱蛋白处理时，香椿子粗多糖在260-280nm处有一个吸收峰，说明其存在蛋白质和核酸，而经聚酰胺法处理的香椿子多糖在260-280nm处没有出现吸收峰，表明没有蛋白质和核酸的存在，说明聚酰胺法对其脱蛋白的效果达到了最佳效果。
实施例2
本发明实施例2提供一种抗凝血保健品—香椿子口服液的制备。具体包括如下步骤：
按重量份计，水与香椿子粗粉的比例为1～30:100，萃取温度为65～90℃，时间10～30min，浸提后用250目尼龙布过滤除渣，迅速冷却，放置24h澄清，0.5μm精滤后获得澄清的样液即香椿子汁。然后将0.03～0.4％STSP-3，4～6％蔗糖，0.03～0.07％抗坏血酸等辅料先用部分温水溶化、过滤。与上述香椿子汁混合，然后将其于135℃下灭菌5～10s，罐装后即可制得抗凝血保健香椿子口服液(设置每瓶口服液的体积为8～10mL)。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
本发明的实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种香椿子多糖，其特征在于，所述香椿子多糖为具有均一性的多糖，且包括如下摩尔百分比成分：阿拉伯糖2~7%、鼠李糖20~30%、氨基葡萄糖1.5~5.5%、半乳糖45~60%、葡萄糖2.5~10%、木糖0.25~1%、甘露糖2.5~4%；
所述香椿子多糖的制备、纯化方法，包括如下步骤：
水提、浓缩，将香椿子烘干后进行粉碎成香椿子粉末，将香椿子粉末加入水中，搅拌混合均匀后，在温度50~90℃下提取30~150min，离心抽滤，得香椿子提取液，将香椿子提取液真空浓缩至原体积的20~35%，得香椿子浓缩液；
醇沉，向香椿子浓缩液中加入无水乙醇，搅拌混合，将混合液醇沉18~30h后，离心过滤得沉淀物，将沉淀物经过醇洗后，将沉淀加水复溶，去除酒精后，冷冻干燥得到香椿子粗多糖；
脱蛋白，将香椿子粗多糖配成水溶液，并加入树脂，且两者的质量比为10~25:1 mg/g，室温条件下振荡1.5~3h，将混合液依次经过抽滤、离心，保留上清液，进行浓缩并干燥；
脱色，将脱蛋白的香椿子粗多糖用水溶解，加入活性炭在温度50~70℃加热反应0.5~1.5h，然后调节样液pH至3.5~4.5后，进行抽滤，将滤液离心后，收集离心液进行真空浓缩并冷冻干燥；
层析，将脱蛋白、脱色后的香椿子粗多糖溶解于水中，离心处理后，将离心液上DEAE-Sepharose CL-6B柱，用0、0.1、0.2、0.5mol/L NaCl溶液进行阶段洗脱，收集0.2 mol/LNaCl洗脱液，真空浓缩后用水透析60~70h，然后将其冻干，得到香椿子均一多糖。
2.根据权利要求1所述的香椿子多糖，其特征在于，所述香椿子多糖包括如下摩尔百分比成分：阿拉伯糖4.36%、鼠李糖26.05%、氨基葡萄糖3.74%、半乳糖54.79%、葡萄糖6.88%、木糖0.72%、甘露糖3.45%。
3.根据权利要求1所述的香椿子多糖，其特征在于，所述水提中，料液比为1:15~35；所述水提、浓缩中的真空浓缩的温度为45~60℃；所述醇沉的温度为2.5~5.5℃。
4.根据权利要求1所述的香椿子多糖，其特征在于，所述脱蛋白采用聚酰胺树脂法。
5.根据权利要求1所述的香椿子多糖，其特征在于，所述脱色中加入活性炭的质量百分数为0.5~5%。
6.根据权利要求1所述的香椿子多糖，其特征在于，所述香椿子多糖的重均分子量为36080Da。
7.一种权利要求1-6任一项所述的香椿子多糖的应用，其特征在于，用于制备具有抗凝血作用的药物或功能性食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910744803.0A CN110467685B (zh) | 2019-08-13 | 2019-08-13 | 一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910744803.0A CN110467685B (zh) | 2019-08-13 | 2019-08-13 | 一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110467685A CN110467685A (zh) | 2019-11-19 |
| CN110467685B true CN110467685B (zh) | 2021-05-04 |
Family
ID=68510693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910744803.0A Active CN110467685B (zh) | 2019-08-13 | 2019-08-13 | 一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110467685B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100998651A (zh) * | 2007-01-06 | 2007-07-18 | 三峡大学 | 治疗血栓栓塞性疾病的药物及其制备方法 |
| CN104861084A (zh) * | 2015-06-15 | 2015-08-26 | 潍坊医学院 | 香椿子多糖提取方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050175716A1 (en) * | 2004-02-09 | 2005-08-11 | Lee Yuan Y. | Method and herbal composition for treatment of diabetes |
-
2019
- 2019-08-13 CN CN201910744803.0A patent/CN110467685B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100998651A (zh) * | 2007-01-06 | 2007-07-18 | 三峡大学 | 治疗血栓栓塞性疾病的药物及其制备方法 |
| CN104861084A (zh) * | 2015-06-15 | 2015-08-26 | 潍坊医学院 | 香椿子多糖提取方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| "香椿子多糖的抗凝血作用研究";鄢文霞;《中国学位论文全文数据库》;20140703;第4-28页 * |
| "香椿子抗凝血作用的实验研究";饶娅琦等;《四川中医》;20081115;第26卷(第11期);第58-61页 * |
| "香椿子水煎剂的抗血栓作用研究";金桂兰等;《中国药房》;20110420;第22卷(第15期);第1364-1366页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110467685A (zh) | 2019-11-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104945531B (zh) | 一种龙胆酸性均一多糖及其提纯方法和应用 | |
| CN109329500A (zh) | 一种茯砖茶多酚和多糖的复合速溶茶及其制备方法和应用 | |
| US10835552B2 (en) | Method for preparing linseed polysaccharide having antiviral activity and immunological activity, and use of the linseed polysaccharide | |
| CN110551230B (zh) | 一种黄芪多糖的制备方法 | |
| CN112961260A (zh) | 一种具有显著抗炎活性龙须菜多糖及其制备方法与应用 | |
| CN114703241B (zh) | 一种酒制多花黄精多糖的制备方法及其用途 | |
| CN113024685A (zh) | 一种低分子量竹荪菌托多糖及其制备方法与应用 | |
| CN111732673A (zh) | 一种沙棘多糖、制备方法及其在沙棘干膏中的用途 | |
| CN112694541B (zh) | 一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法 | |
| CN111248440B (zh) | 一种功能性茉莉花低聚糖口服液及其应用 | |
| CN102887962A (zh) | 一种分离纯化制备绿茶多糖的方法及其应用 | |
| CN110467685B (zh) | 一种香椿子多糖的制备、纯化方法及其应用 | |
| CN109232756B (zh) | 一种碱蓬多糖提取物及其制备方法和应用 | |
| CN103342755A (zh) | 枸杞多糖均一级份ⅳ及其制备方法和应用 | |
| CN107540756B (zh) | 一种促凝血女贞花多糖及其提取分离方法和应用 | |
| CN110760013A (zh) | 一种澳洲坚果叶片提取物的制备方法及其应用 | |
| CN110483657B (zh) | 一种半边莲均一多糖及其制备方法和应用 | |
| CN113754789A (zh) | 一种改善茶多酚茶多糖溶解性的方法及所制备复合物与应用 | |
| KR102290859B1 (ko) | 사포닌과 고순도의 산성다당체를 함유하는 홍삼 추출물, 그 제조방법 및 이를 포함하는 건강기능성 식품 | |
| CN104292351A (zh) | 一种茶藨子木层孔菌多糖及其制备方法和应用 | |
| CN116655820B (zh) | 一种藤茶酸性多糖AGP-3a及其提取分离方法和在制备抗炎化妆品中的用途 | |
| JP7479538B1 (ja) | 降圧効果のあるイナゴマメ多糖類及びその製造方法並び使用 | |
| CN116731217B (zh) | 一种藤茶酸性多糖AGP-2a及其制备方法和在制备抗炎化妆品中的用途 | |
| CN111116770B (zh) | 一种鹅不食草多糖及其制备方法和应用 | |
| CN109021133B (zh) | 一种超声-双氧水结合大孔树脂的青钱柳多糖的脱色方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |