CN111948269B - 牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用。所述制备方法包括：在电极表面依次修饰rGO‑Au复合纳米粒子、戊二醛、模板分子，获得模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白；以及，以吡咯为功能单体，采用循环伏安法在所述模板分子修饰的电极表面电聚合形成聚吡咯分子印迹膜，之后去除模板分子从而制得牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。本发明制备的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器检测MAA的方法较现有的ELISA方法更加快速、简便、灵敏，并且本发明在奶牛乳腺炎尤其是亚临床乳腺炎的检测和预防方面具有重要意义，实用性强。

Description

牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用
技术领域
本发明属于分子印迹电化学检测技术领域，具体涉及一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用。
背景技术
牛乳腺炎(Bovine mastitis)是一种影响奶牛健康的主要疾病，乳腺炎导致牛奶产量减少、治疗开支负担加重。亚临床乳腺炎(SM)是一种缺乏全身或局部炎症迹象的疾病，亚临床乳腺炎通常通过诸如加利福尼亚乳腺炎测试(CMT)、通过对SCC的实验室分析或乳汁病原微生物检测法来诊断。急性期反应期蛋白(Acute phase protein,APP)是在压力、外伤、感染或炎症等刺激激发动物机体产生早期蛋白，血清淀粉样蛋白A(SAA)、触珠蛋白(HP)、C反应蛋白(CRP)、铜蓝蛋白等是常见的APP，人类医学中，APP在炎症性疾病的诊断和预后中已被使用了很长一段时间，它们的测定已成为兽医学中的重要诊断工具，部分APP已经成功应用到商业检测。
在奶牛中，最主要的APP是SAA和Hp,血清淀粉样蛋白A是一种具有多种蛋白质种类的APP，主要在肝脏遭受急性刺激是产生的反应，它的主要同种型SAA1，SAA2和SAA3，SAA1和SAA2主要在肝脏中产生，而SAA3在肝外部位产生，且主要在牛奶中发现，被称为乳腺相关淀粉样蛋白A(M-SAA3)。血清淀粉样蛋白A(SAA)和M-SAA3一起被称为牛奶淀粉样蛋白A(MAA)，可使用市售ELISA在牛奶样品中进行测量，目前研究发现，在奶牛发生隐性乳腺炎期间，奶牛乳中MAA含量显著升高，已经提出牛奶中这种蛋白质的水平作为奶牛乳腺炎感染的敏感指标。
目前检测MAA浓度的方法据报道只有ELISA试剂盒法，ELISA检测准确度高，但是费用昂贵、检测时间长以及容易产生非特异性结果等都是ELISA法检测现有的缺点。电化学传感器是一种基于待测物的电化学性质并将其与待测物之间相互作用的化学能转变成可记录的电信号，从而实现对被测物分析检测的器件。作为天然分子识别元件的替代方法，分子印迹聚合物(MIP)受到国内外越来越多科研人员的青睐。基于MIP的电化学传感器具有MIP和电化学传感器的优点，包括仪器简单，价格低廉，信号定量容易，快速等优点，已广泛应用于各种物质的检测，例如金属离子，小分子和蛋白质。采用分子印迹电化学传感器法检测MAA并应用于实际牛奶检测国内外未见报道。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用，以克服现有技术的不足。
为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：
本发明实施例提供了一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备方法，其包括：
提供电极；
在电极表面依次修饰rGO-Au复合纳米粒子、戊二醛(GA)、模板分子，获得模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白(MAA)；
以及，以吡咯为功能单体，采用循环伏安法在所述模板分子修饰的电极表面电聚合形成聚吡咯分子印迹膜，之后去除模板分子从而制得牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。
本发明实施例还提供了由前述方法制备的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。
本发明实施例还提供了前述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器于检测牛奶淀粉样蛋白中的应用。
本发明实施例还提供了一种检测牛奶淀粉样蛋白的方法，其包括：
提供前述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器；
将所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器置于待测液体样品中并于室温下孵育15～20min，之后以所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器为工作电极，与铂丝电极、饱和甘汞电极组成三电极体系，并置于铁氰化钾探针溶液中进行差分脉冲测试，实现对待测液体样品中牛奶淀粉样蛋白的检测。
石墨烯是修饰电极的理想材料，它具有很高的比表面积、优良的化学活性和超强的导电能力，在电化学领域有很好的应用前景。但石墨烯具有很多官能团可能会参与到实验中影响测试结果，本发明采用的是经还原后的还原石墨烯rGO，去掉官能团后石墨烯成为更理想的分子印迹电极修饰材料。
金纳米粒子具有良好的生物相容性和稳定的化学性质，并且具有较大的比表面积的导电性。本发明采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备金纳米粒子并且通过优化二者比例获得形貌均一、粒径较小的金纳米粒子。以此作为改性电极的材料能够很大程度上提高导电性的导电性和生物吸附能力。
壳聚糖(CS)是一种线性多糖，可以使得石墨烯和金纳米粒子呈线性分布。壳聚糖成膜性强、渗透力高、附着力强且无毒无害，本发明以壳聚糖作为分散剂和成膜剂，以此分散石墨烯材料和金纳米粒子制备复合材料，修饰电极之后搭配同样具有成膜能力的戊二醛(GA)能够很好的将纳米材料固定在电极上，最后利用壳聚糖上富含的氨基和戊二醛的醛基固定模板蛋白。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1)本发明建立的检测MAA的方法较现有的ELISA法更加灵敏、快速、简便以及经济，相比于传统的传感器，本发明提出的传感器具有更高的灵敏度，检测限达5pg/mL；
2)本发明成功制备石墨烯纳米金复合材料，该材料结合石墨烯和金纳米粒子双重提高电极导电性和生物相容性，引入的壳聚糖不仅能够提高材料的分散性，其优越的成膜性能能结合戊二醛更好的固定材料，丰富的氨基更是为蛋白修饰提供有力位点；
3)本发明可作为一种新兴检测奶牛乳腺炎的技术，可达到有效诊断和预防奶牛乳腺炎的目的，该方法操作简单，识别性能好，价格低廉且样品无需前处理，具有实用性且易于推广。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1a-1b是本发明实施例1中分子印迹电极制备过程中的循环伏安响应图和差分脉冲伏安响应图；
图2a-2d是本发明实施例1中牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器制备过程的扫描电镜表征图；
图3a-3d是本发明实施例2中牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器对不同MAA浓度的差分脉冲响应曲线和线性校准曲线；
图4是本发明一实施方案中牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备及检测示意图。
具体实施方式
鉴于现有技术的缺陷，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案，其主要提供一种能够灵敏、快速便捷、安全廉价的用于牛奶淀粉样蛋白A检测的方法以达到对奶牛隐性乳腺炎的早期检测和诊断，解决ELISA法昂贵、耗时长等缺点，同时达到弥补传统乳腺炎检测方周期长、费用高、不稳定等缺点的目的，将负载金纳米粒子的还原氧化石墨烯(rGO-Au)作为MIP传感器的电极修饰复合材料，两者产生协同作用能够有效提高生物分子固定效率、提高传感器灵敏度和降低背景电流等。
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例的一个方面提供了一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备方法，其包括：
提供电极；
在电极表面依次修饰rGO-Au复合纳米粒子、戊二醛、模板分子，获得模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白；
以及，以吡咯为功能单体，采用循环伏安法在所述模板分子修饰的电极表面电聚合形成聚吡咯分子印迹膜，之后去除模板分子从而制得牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。
在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：
将rGO-Au复合纳米粒子的壳聚糖溶液涂覆于所述电极表面，经干燥处理制得rGO-Au复合纳米粒子修饰的电极；
将戊二醛水溶液涂覆于所述rGO-Au复合纳米粒子修饰的电极表面并于25-30℃活化处理1-2h，制得戊二醛修饰的电极，其中，所述戊二醛水溶液的浓度为2.0-3.0wt％；
以及，将模板分子溶液覆于所述戊二醛修饰的电极表面并于25-30℃反应1-2h，之后于4-8℃继续反应8-12h，制得所述模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白，所述模板分子溶液的浓度为50-200μg/mL。
在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：
采用柠檬酸钠还原法制备Au纳米粒子分散液；
将壳聚糖溶于乙酸溶液形成壳聚糖溶液，之后与rGO的分散液超声混合形成rGO的壳聚糖溶液，其中所述乙酸溶液的浓度为0.15-0.25mol/L，壳聚糖溶液中壳聚糖的浓度为0.2-0.3mg/mL，rGO的分散液中rGO的浓度为0.5-1.5mg/mL；
以及，将所述Au纳米粒子分散液与rGO的壳聚糖溶液超声混合处理，获得所述rGO-Au复合纳米粒子的壳聚糖溶液。
进一步的，所述壳聚糖溶液与rGO的分散液的体积比为1:2-1:3。
进一步的，所述Au纳米粒子分散液与rGO的壳聚糖溶液的体积比为1:1-1:2。
在一些较为具体的实施方案中，所述rGO-Au复合纳米粒子的壳聚糖溶液、戊二醛水溶液与模板分子溶液的体积比为5～20:5:5。
进一步的，所述制备方法还包括：使用pH为7.4的磷酸缓冲盐溶液冲洗所述模板分子修饰的电极。
在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：
将含有吡咯的pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶液进行除氧处理，之后将所述模板分子修饰的电极浸入所获混合液，并采用循环伏安法电聚合形成所述聚吡咯分子印迹膜，其中，所述循环伏安法电聚合的反应条件包括：混合液中吡咯浓度为80～100mmol/L，扫描电位为-0.3V～0.8V，聚合圈数为10～14圈，聚合速率为50～75mV/s；
以及，将所获电极浸入洗脱液进行洗脱处理20～25min，之后使用pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶液进行清洗处理，获得所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器，其中，所述洗脱液包括乙酸、水和十二烷基硫酸钠(SDS)；优选的，所述乙酸与水的体积比为1:8-1:10；优选的，所述洗脱液中十二烷基硫酸钠的浓度为5-20wt％。
在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法还包括：在电极表面修饰rGO-Au复合纳米粒子前先对电极进行预处理。
进一步的，所述预处理包括：将电极进行抛光、循环伏安扫描活化、超声清洗处理，之后于探针溶液中进行CV扫描，直到得到对称可逆的氧化还原峰为止。
进一步的，所述电极为玻碳电极，且不限于此。
进一步的，所述探针溶液为[Fe(SCN)6]3-、[Fe(SCN)6]4-和KCl的PBS溶液。
进一步的，所述探针溶液中[Fe(SCN)6]3-与[Fe(SCN)6]4-的摩尔比为1:1。
进一步的，所述[Fe(SCN)6]3-/4-为[Fe(SCN)6]3-与[Fe(SCN)6]4-的摩尔比为1:1。
在一些更为具体的实施方案中，所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备方法(如图4所示)包括：首先制备rGO-Au复合纳米粒子，采用循环伏安法对玻碳电极预处理，预处理后的玻碳电极依次修饰rGO-Au复合纳米粒子、戊二醛、MAA，循环伏安法电聚合形成聚吡咯印迹膜，最后洗脱模板分子MAA得到分子印迹电化学传感器。
进一步的，所述石墨烯金纳米粒子复合材料(rGO-Au复合纳米粒子)的制备方法为：首先以柠檬酸三钠(1％)还原氯金酸(0.01％)制得Au纳米粒子(AuNPs)分散液，将壳聚糖(CS)用的乙酸(0.02mol/L)制备成0.25mg/mL的CS溶液，将购得的还原氧化石墨烯(rGO)用超纯水制备成1mg/mL的分散液，按照体积比1:2取CS溶液和rGO溶液，超声混合10min。再按照体积比1:1取Au纳米粒子分散液与该混合液超声混合，得到rGO-Au复合纳米粒子分散液。
进一步的，所述氯金酸的用量范围为0.5mL～1.0mL，柠檬酸三钠用量为450～950μL。
进一步的，所述玻碳电极的预处理过程为：玻碳电极用不同粒径的Al2O3在麂皮上打磨抛光处理以除去表面颗粒，接着在0.5mol/L～1mol/L H2SO4循环伏安扫描活化50圈以上，扫描电位-1.0V～1.0V，扫速50mV/s，分别用超纯水、乙醇、超纯水超声洗涤。将三电极体系置于探针溶液(10mmol/L[Fe(SCN)6]3-/4-和0.1mol/L KCl的PBS溶液)中CV扫描，直到出现对称可逆的氧化还原峰，氮气吹干待用。
进一步的，依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm粒径的Al2O3打磨玻碳电极100圈以上，活化后的电极依次用超纯水、乙醇、超纯水洗涤3min。
进一步的，所述纳米材料的固定过程为：将rGO-Au复合纳米粒子分散液均匀滴涂在玻碳电极表面，室温晾干，在上述修饰电极表面滴加2.5wt％的戊二醛(GA)水溶液，室温活化2h，用超纯水轻轻冲洗电极洗去除未结合的GA，室温晾干。
进一步的，所述rGO-Au复合纳米粒子分散液的用量为5～20μL，GA用量为5μL。
进一步的，模板蛋白的修饰过程为：吸取MAA溶液滴加到电极表面，室温结合1h后置于4℃冰箱中反应12h，最后用PBS除去未结合的MAA蛋白。
进一步的，所用PBS溶液的pH＝7.4，所述MAA溶液为5μL，浓度为100μg/mL。
进一步的，电聚合过程为：将含有吡咯的pH＝7.4的PBS溶液先通氮气除氧气15min，将修饰好的电极浸入到该溶液中，采用循环伏安法进行电聚合获得嵌有MAA的吡咯膜。
进一步的，所述吡咯浓度为80mmol/L～100m mol/L，扫描电位为-0.3V～0.8V，聚合圈数为10～14圈，聚合速率为50～75mV/s。
进一步的，配置洗脱液并洗脱模板蛋白，按体积比1：9配置乙酸水溶液，以此为溶剂配置质量分数为10％的SDS溶液。将分子印迹电化学传感器浸入该洗脱液孵育以出去模板分子，最后用PBS(pH＝7.4)清洗电极，所述洗脱时间确定为20～25min。
本发明实施例的另一个方面还提供前述方法制备的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。
本发明实施例的另一个方面还提供了前述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器于检测牛奶淀粉样蛋白中的应用。
本发明实施例的另一个方面还提供了一种检测牛奶淀粉样蛋白的方法，其包括：
提供前述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器；
将所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器置于待测液体样品中并于室温下孵育15～20min，之后以所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器为工作电极，与铂丝电极、饱和甘汞电极组成三电极体系，并置于铁氰化钾探针溶液中进行差分脉冲测试，实现对待测液体样品中牛奶淀粉样蛋白的检测。
在一些较为具体的实施方案中，所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器对牛奶淀粉样蛋白的检测线性范围为0.01-200ng/mL。
进一步的，所述奶淀粉样蛋白的检测线性范围为0.01-1ng/mL时，线性回归方程为：ΔΙp(μΑ)＝10.14+22.93CMAA(ng/mL)，相关系数R2为0.991。
进一步的，所述奶淀粉样蛋白的检测线性范围为1-200ng/mL时，线性回归方程为：ΔΙp(μΑ)＝10.14+22.93CMAA(ng/mL)，相关系数R2为0.994。
进一步的，所述待测液体样品的体积为0.5mL-1mL。
进一步的，所述差分脉冲测试的条件包括：扫描电位为-0.1-0.6V，扫描速率为50mV/s。
进一步的，所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器对牛奶淀粉样蛋白的检出限为5pg/mL，S/N＝3。
在一些更为具体的实施方案中，利用该传感器对检测牛奶淀粉样蛋白的方法包括：将制备好的牛奶淀粉样蛋白分子印迹传感器浸入添加不同浓度的MAA的鲜牛奶中孵育15～20min。将分子印迹电化学传感器作为工作电极、铂丝电极和饱和甘汞电极组成的三电极体系浸入铁氰化钾探针溶液中进行差分脉冲测试，根据峰电流随浓度的变化建立线性关系。
进一步的，标准曲线建立的过程如下：将工作电极浸入0.01-200ng/mL MAA溶液中孵育15～20min，然后用洗脱液洗脱20～25min，对洗脱前后的电极进行差分脉冲扫描，以洗脱前后的峰电流差ΔΙp和MAA的浓度作线性拟合。
进一步的，所述分子印迹电化学传感器对MAA检测的线性范围为0.01-200ng/mL，在0.01-1ng/mL浓度范围内，线性回归方程为：ΔΙp(μΑ)＝10.14+22.93CMAA(ng/mL)(R2＝0.991),在1-200ng/mL浓度范围内，线性回归方程为：ΔΙp(μΑ)＝31.42+0.119CMAA(ng/mL)(R2＝9.994)。
进一步的，所述分子印迹电化学传感器对牛奶淀粉样蛋白检出限LOD为5pg/mL(S/N＝3)。
本发明中，rGO具有较大的比表面积和较好的导电性和生物相容性，还原后的rGO化学性质较为稳定，本发明制备的电化学传感器，对物质要求较高，选用化学性质更稳定的rGO。
下面结合若干优选实施例及附图对本发明的技术方案做进一步详细说明，本实施例在以发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
下面所用的实施例中所采用的实验材料，如无特殊说明，均可由常规的生化试剂公司购买得到。本发明所有的CV测试条件为扫描电位-0.1V-0.6V，扫描速率50mV/s。所有的DPV测试条件为扫描电位-0.1V-0.6V，扫描速率50mV/s，间隔时间2s。探针溶液均为含10mmol/L K3[Fe(SCN)6]和K4[Fe(SCN)6]的PBS溶液。
实施例1：牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备
(1)rGO-Au复合纳米粒子的制备：Au纳米粒子的制备采用柠檬酸钠还原法，将50mL二次水在锥形瓶中加热搅拌至微沸，取0.85mL的质量分数0.01％的氯金酸溶液加入煮沸，之后快速把0.75mL的质量分数为1％的柠檬酸三钠溶液加入，煮沸15-20min左右，关闭加热电源，继续搅拌冷却至室温，完成后获得Au纳米粒子分散液，4℃保存待用。将壳聚糖(CS)用的乙酸(0.02mol/L)制备成0.25mg/mL的CS溶液，将购得的还原氧化石墨烯(rGO)用超纯水制备成1mg/mL的rGO分散液，按照体积比1:2取CS溶液和rGO分散液，超声混合10min，形成混合液。再按照体积比1:1取Au纳米粒子分散液与该混合液超声混合30min，得到rGO-Au复合纳米粒子的分散液；
(2)玻碳电极的预处理：玻碳电极用不同粒径(1.0、0.3、0.05μm)的Al2O3在麂皮上打磨抛光处理以除去表面颗粒，接着在0.5mol/L H2SO4循环伏安扫描活化，扫描电位-1.0V-1.0V，扫描速率50mV/s，扫描60圈。分别用超纯水、乙醇、超纯水超声洗涤3min。将玻碳电极为工作电极、三电极体系置于探针溶液(10mmol/L[Fe(SCN)6]3-/4-和0.1mol/L KCl的PBS溶液)中CV扫描，直到出现对称可逆的氧化还原峰，氮气吹干待用；
(2)MAA分子印迹电化学传感器：将12μL rGO-Au复合纳米粒子的分散液均匀滴涂在GCE表面，25℃晾干，在上述修饰电极表面滴加5μL 2.5wt％的戊二醛(GA)水溶液，活化2h，超纯水洗去除未结合的GA，室温晾干，然后取5μL 100μg/mL的MAA滴加到电极表面，利用戊二醛的醛基和蛋白质的氨基共价结合原理，室温结合1h后转移至4℃冰箱中反应12h，最后用pH＝7.4的PBS溶液洗涤以除去未结合的MAA蛋白。将修饰好的玻碳电极置于事先已经通氮气15min且含80mM吡咯的pH＝7.4的PBS溶液中利用循环伏安法电聚合。扫描电位-0.3V～0.8V，扫描速率75mV/s，扫描圈数10圈。将聚合后的玻碳电极浸入含10wt％的SDS的10％(V/V)乙酸溶液中孵育以除去MAA，再用pH＝7.4的PBS清洗电极得到分子印迹电化学传感器，洗脱时间为25min。
采用[Fe(CN)6]3-/4-(1:1)为探针，根据其氧化还原电流大小表征电极的不同成分，不同成分修饰的电极在探针溶液中扫描的循环伏安图和差分脉冲伏安图差异显著。如图1a-1b所示，裸电极显示了一对明显的氧化还原峰(曲线a)；当裸电极修饰上rGO-Au复合纳米粒子后，[Fe(CN)6]3-/4-(1:1)氧化还原峰电流明显增大，这是由于复合材料优越的导电能力(曲线b)；当非电活性戊二醛通过自身醛基与壳聚糖氨基形成亚胺键交联到电极上后，氧化还原峰电流减小(曲线c)；当模板分子MAA蛋白质利用GA交联作用修饰到电极之后，氧化还原峰电流明显下降(曲线d)，蛋白质是生物大分子，具有绝缘性，MAA与GA形成阻碍电子传输层，从而使峰电流较曲线c明显下降。
性能表征：通过扫描电极对不同修饰阶段的电极进行表征，结果如图2所示。图2a表明裸的玻碳电极(GCE)表面光滑无颗粒感，表明电极已打磨完全。图2b为修饰了rGO-Au复合纳米粒子后的电极，与图2a明显不同，可以看出rGO-Au复合纳米粒子均匀的生长在玻碳电极表面。图2c为洗脱前的MIP/rGO-Au/GCE，此时电极表面高度交联形成一层致密的聚吡咯(ppy)膜，表明印迹聚合物以成功制备。图2d显示通过洗脱剂移除模板蛋白后形成的MIP/rGO-Au/GCE电极，由于移除模板蛋白后会形成印迹腔，所以此时的电极表面较图2c显得粗糙且疏松。
实施例2：用于MAA检测的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的线性方程和检测限
在优化条件下，将实施例1制备的分子印迹电化学传感器分别浸入已知浓度的MAA溶液中0.5mL孵育20min，随后将电极于含10mmol/L[Fe(CN)6]3-/4-([Fe(SCN)6]3-与[Fe(SCN)6]4-的摩尔比为1:1)的PBS溶液中以差分脉冲伏安扫描，考查洗脱后和重吸附后的峰电流差ΔΙp和MAA浓度的线性关系以及传感器的检测限。如图3a所示，在不同浓度的MAA溶液中孵育之后电极呈现出显著不同的差分脉冲伏安电流响应，DPV电流信号随MAA升高而降低，将ΔΙp值与MAA浓度进行关联并对其进行线性曲线校准，结果如图3b，在0.01ng/mL-200ng/mL浓度范围内，ΔΙp和MAA浓度有两段较好的线性关系，在0.01-1ng/mL浓度范围内，线性回归方程为(如图3c)：ΔΙp(μΑ)＝10.14+22.93CMAA(ng/mL)(R2＝0.991),在1-200ng/mL浓度范围内，线性回归方程(如图3d)为：ΔΙp(μΑ)＝31.42+0.119CMAA(ng/mL)(R2＝9.994),检出限LOD为5pg/mL(S/N＝3)。
实施例3
牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器对含MAA牛奶样品的检测
按照实施例1的方法制备分子印迹电化学传感器，然后将电极放入0.5mL的鲜牛奶中，鲜牛奶中MAA浓度分别为0.01-100ng/mL(样品1-6，如表1所示)，记录其DPV响应，计算出检测出的MAA浓度，同时我们将结果和所购买的MAA检测ELISA试剂盒的检测结果进行比对。传感器对样品的回收率在96.1％-105％之间。
表1：牛奶中MAA样品检测加结果
Figure BDA0002658270210000091
实施例4：牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备
(1)rGO-Au复合纳米粒子的制备：Au纳米粒子的制备采用柠檬酸钠还原法，将50mL二次水在锥形瓶中加热搅拌至微沸，取0.85mL的质量分数0.01％的氯金酸溶液加入煮沸，之后快速把0.75mL的质量分数为1％的柠檬酸三钠溶液加入，煮沸15-20min左右，关闭加热电源，继续搅拌冷却至室温，完成后获得Au纳米粒子分散液，4℃保存待用。将壳聚糖(CS)用乙酸(0.15mol/L)制备成0.2mg/mL的CS溶液，将购得的还原氧化石墨烯(rGO)用超纯水制备成0.5mg/mL的rGO分散液，按照体积比1:2取CS溶液和rGO分散液，超声混合10min，形成混合液，再按照体积比1:1取Au纳米粒子分散液与该混合液超声混合30min，得到rGO-Au复合纳米粒子的分散液；
(2)玻碳电极的预处理：玻碳电极用不同粒径(1.0、0.3、0.05μm)的Al2O3在麂皮上打磨抛光处理以除去表面颗粒，接着在0.5mol/L H2SO4循环伏安扫描活化，扫描电位-1.0V-1.0V，扫描速率50mV/s，扫描60圈。分别用超纯水、乙醇、超纯水超声洗涤3min。将玻碳电极为工作电极、三电极体系置于探针溶液(10mmol/L[Fe(SCN)6]3-/4-和0.1mol/L KCl的PBS溶液)中CV扫描，直到出现对称可逆的氧化还原峰，氮气吹干待用；
(2)MAA分子印迹电化学传感器：将12μL rGO-Au复合纳米粒子的分散液均匀滴涂在GCE表面，25℃晾干，在上述修饰电极表面滴加5μL 2.0wt％的戊二醛(GA)水溶液，25℃活化2h，超纯水洗去除未结合的GA，室温晾干，然后取5μL 50μg/mL的MAA滴加到电极表面，利用戊二醛的醛基和蛋白质的氨基共价结合原理，25℃结合2h后转移至4℃冰箱中反应12h，最后用pH＝7.4的PBS溶液洗涤以除去未结合的MAA蛋白。将修饰好的玻碳电极置于事先已经通氮气15min且含80mM吡咯的pH＝7.4的PBS溶液中利用循环伏安法电聚合。扫描电位-0.3V～0.8V，扫描速率75mV/s，扫描圈数10圈。将聚合后的玻碳电极浸入含5wt％的SDS的8％(V/V)乙酸溶液中孵育以除去MAA，再用pH＝7.4的PBS清洗电极得到分子印迹电化学传感器，洗脱时间为25min。
实施例5：牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备
(1)rGO-Au复合纳米粒子的制备：Au纳米粒子的制备采用柠檬酸钠还原法，将50mL二次水在锥形瓶中加热搅拌至微沸，取0.85mL的质量分数0.01％的氯金酸溶液加入煮沸，之后快速把0.75mL的质量分数为1％的柠檬酸三钠溶液加入，煮沸15-20min左右，关闭加热电源，继续搅拌冷却至室温，完成后获得Au纳米粒子分散液，4℃保存待用。将壳聚糖(CS)用乙酸(0.25mol/L)制备成0.3mg/mL的CS溶液，将购得的还原氧化石墨烯(rGO)用超纯水制备成1.5mg/mL的rGO分散液，按照体积比1:3取CS溶液和rGO分散液，超声混合10min，形成混合液。再按照体积比1:2取Au纳米粒子分散液与该混合液超声混合30min，得到rGO-Au复合纳米粒子的分散液；
(2)玻碳电极的预处理：玻碳电极用不同粒径(1.0、0.3、0.05μm)的Al2O3在麂皮上打磨抛光处理以除去表面颗粒，接着在0.5mol/L H2SO4循环伏安扫描活化，扫描电位-1.0V-1.0V，扫描速率50mV/s，扫描60圈。分别用超纯水、乙醇、超纯水超声洗涤3min。将玻碳电极为工作电极、三电极体系置于探针溶液(10mmol/L[Fe(SCN)6]3-/4-和0.1mol/L KCl的PBS溶液)中CV扫描，直到出现对称可逆的氧化还原峰，氮气吹干待用；
(2)MAA分子印迹电化学传感器：将12μL rGO-Au复合纳米粒子的分散液均匀滴涂在GCE表面，30℃晾干，在上述修饰电极表面滴加5μL 3.0wt％的戊二醛(GA)水溶液，30℃活化1h，超纯水洗去除未结合的GA，室温晾干，然后取5μL 200μg/mL的MAA滴加到电极表面，利用戊二醛的醛基和蛋白质的氨基共价结合原理，30℃结合1h后转移至8℃冰箱中反应8h，最后用pH＝7.4的PBS溶液洗涤以除去未结合的MAA蛋白。将修饰好的玻碳电极置于事先已经通氮气15min且含100mM吡咯的pH＝7.4的PBS溶液中利用循环伏安法电聚合。扫描电位-0.3V～0.8V，扫描速率75mV/s，扫描圈数10圈。将聚合后的玻碳电极浸入含20wt％的SDS的10％(V/V)乙酸溶液中孵育以除去MAA，再用pH＝7.4的PBS清洗电极得到分子印迹电化学传感器，洗脱时间为25min。
实施例6：牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备
(1)rGO-Au复合纳米粒子的制备：Au纳米粒子的制备采用柠檬酸钠还原法，将50mL二次水在锥形瓶中加热搅拌至微沸，取0.85mL的质量分数0.01％的氯金酸溶液加入煮沸，之后快速把0.75mL的质量分数为1％的柠檬酸三钠溶液加入，煮沸15-20min左右，关闭加热电源，继续搅拌冷却至室温，完成后获得Au纳米粒子分散液，4℃保存待用。将壳聚糖(CS)用乙酸(0.2mol/L)制备成0.25mg/mL的CS溶液，将购得的还原氧化石墨烯(rGO)用超纯水制备成1.0mg/mL的rGO分散液，按照体积比1:2.5取CS溶液和rGO分散液，超声混合10min，形成混合液，再按照体积比1:1.5取Au纳米粒子分散液与该混合液超声混合30min，得到rGO-Au复合纳米粒子的分散液；
(2)玻碳电极的预处理：玻碳电极用不同粒径(1.0、0.3、0.05μm)的Al2O3在麂皮上打磨抛光处理以除去表面颗粒，接着在0.5mol/L H2SO4循环伏安扫描活化，扫描电位-1.0V-1.0V，扫描速率50mV/s，扫描60圈。分别用超纯水、乙醇、超纯水超声洗涤3min。将玻碳电极为工作电极、三电极体系置于探针溶液(10mmol/L[Fe(SCN)6]3-/4-和0.1mol/L KCl的PBS溶液)中CV扫描，直到出现对称可逆的氧化还原峰，氮气吹干待用；
(2)MAA分子印迹电化学传感器：将12μL rGO-Au复合纳米粒子的分散液均匀滴涂在GCE表面，28℃晾干，在上述修饰电极表面滴加5μL 2.5wt％的戊二醛(GA)水溶液，27℃活化1.5h，超纯水洗去除未结合的GA，室温晾干，然后取5μL 100μg/mL的MAA滴加到电极表面，利用戊二醛的醛基和蛋白质的氨基共价结合原理，27℃结合1.5h后转移至6℃冰箱中反应10h，最后用pH＝7.4的PBS溶液洗涤以除去未结合的MAA蛋白。将修饰好的玻碳电极置于事先已经通氮气15min且含90mM吡咯的pH＝7.4的PBS溶液中利用循环伏安法电聚合。扫描电位-0.3V～0.8V，扫描速率75mV/s，扫描圈数10圈。将聚合后的玻碳电极浸入含10wt％的SDS的9％(V/V)乙酸溶液中孵育以除去MAA，再用pH＝7.4的PBS清洗电极得到分子印迹电化学传感器，洗脱时间为25min。
此外，本案发明人还参照前述实施例，以本说明书述及的其它原料、工艺操作、工艺条件进行了试验，并均获得了较为理想的结果。
本发明的各方面、实施例、特征及实例应视为在所有方面为说明性的且不打算限制本发明，本发明的范围仅由权利要求书界定。在不背离所主张的本发明的精神及范围的情况下，所属领域的技术人员将明了其它实施例、修改及使用。
在本发明案中标题及章节的使用不意味着限制本发明；每一章节可应用于本发明的任何方面、实施例或特征。
在本发明案通篇中，在将组合物描述为具有、包含或包括特定组份之处或者在将过程描述为具有、包含或包括特定过程步骤之处，预期本发明教示的组合物也基本上由所叙述组份组成或由所叙述组份组成，且本发明教示的过程也基本上由所叙述过程步骤组成或由所叙述过程步骤组组成。
应理解，各步骤的次序或执行特定动作的次序并非十分重要，只要本发明教示保持可操作即可。此外，可同时进行两个或两个以上步骤或动作。
尽管已参考说明性实施例描述了本发明，但所属领域的技术人员将理解，在不背离本发明的精神及范围的情况下可做出各种其它改变、省略及/或添加且可用实质等效物替代所述实施例的元件。另外，可在不背离本发明的范围的情况下做出许多修改以使特定情形或材料适应本发明的教示。因此，本文并不打算将本发明限制于用于执行本发明的所揭示特定实施例，而是打算使本发明将包含归属于所附权利要求书的范围内的所有实施例。此外，除非具体陈述，否则术语第一、第二等的任何使用不表示任何次序或重要性，而是使用术语第一、第二等来区分一个元素与另一元素。

Claims (13)

1.一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备方法，其特征在于包括：
提供电极；
将rGO-Au复合纳米粒子的壳聚糖溶液涂覆于所述电极表面，经干燥处理制得rGO-Au复合纳米粒子修饰的电极；将戊二醛水溶液涂覆于所述rGO-Au复合纳米粒子修饰的电极表面并于25-30℃活化处理1-2h，制得戊二醛修饰的电极，将模板分子溶液覆于所述戊二醛修饰的电极表面并于25-30℃下反应1-2h，之后于4-8℃继续反应8-12h，制得模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子溶液的浓度为50-200μg/mL，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白；所述戊二醛水溶液的浓度为2.0-3.0wt%；
将含有吡咯的pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶液进行除氧处理，之后将所述模板分子修饰的电极浸入所获混合液，并采用循环伏安法电聚合形成聚吡咯分子印迹膜，其中，所述循环伏安法电聚合的反应条件包括：混合液中吡咯浓度为80~100mmol/L，扫描电位为-0.3V~0.8V，聚合圈数为10～14圈，聚合速率为50～75mV/s；
以及，将所获电极浸入洗脱液进行洗脱处理20~25min，之后使用pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶液进行清洗处理，获得牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器，其中，所述洗脱液包括乙酸、水和十二烷基硫酸钠。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
采用柠檬酸钠还原法制备Au纳米粒子分散液；
将壳聚糖溶于乙酸溶液形成壳聚糖溶液，之后与rGO的分散液超声混合形成rGO的壳聚糖溶液，其中所述乙酸溶液的浓度为0.15-0.25mol/L，壳聚糖溶液中壳聚糖的浓度为0.2-0.3mg/mL，rGO的分散液中rGO的浓度为0.5-1.5mg/mL；
以及，将所述Au纳米粒子分散液与rGO的壳聚糖溶液超声混合处理，获得所述rGO-Au复合纳米粒子的壳聚糖溶液。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述壳聚糖溶液与rGO的分散液的体积比为1:2-1:3；所述Au纳米粒子分散液与rGO的壳聚糖溶液的体积比为1:1-1:2。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述rGO-Au复合纳米粒子的壳聚糖溶液、戊二醛水溶液与模板分子溶液的体积比为5~20:5:5。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于还包括：使用pH为7.4的磷酸缓冲盐溶液冲洗所述模板分子修饰的电极。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述洗脱液中乙酸与水的体积比为1:8-1:10；所述洗脱液中十二烷基硫酸钠的浓度为5-20wt%。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于还包括：在电极表面修饰rGO-Au复合纳米粒子前先对电极进行预处理；所述预处理包括：将电极进行抛光、循环伏安扫描活化、超声清洗处理，之后于探针溶液中进行CV扫描，直到得到对称可逆的氧化还原峰为止；所述电极为玻碳电极；所述探针溶液为[Fe(SCN)6]3-、[Fe(SCN)6]4-和KCl的PBS溶液；所述探针溶液中[Fe(SCN)6]3-与[Fe(SCN)6]4-的摩尔比为1:1。
8.由权利要求1-7中任一项所述方法制备的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。
9.权利要求8所述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器于检测牛奶淀粉样蛋白中的应用。
10.一种检测牛奶淀粉样蛋白的方法，其特征在于包括：
提供权利要求8所述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器；
将所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器置于待测液体样品中并于室温下孵育15~20min，之后以所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器为工作电极，与铂丝电极、饱和甘汞电极组成三电极体系，并置于铁氰化钾探针溶液中进行差分脉冲测试，实现对待测液体样品中牛奶淀粉样蛋白的检测；其中，所述奶淀粉样蛋白的检测线性范围为0.01-1ng/mL时，线性回归方程为：∆Ip=10.14+22.93CMAA，相关系数R2为0.991；所述奶淀粉样蛋白的检测线性范围为1-200ng/mL时，线性回归方程为：∆Ip=10.14+22.93CMAA，相关系数R2为0.994；所述∆Ip的单位为μA，所述CMAA的单位为ng/mL。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述待测液体样品的体积为0.5mL-1mL。
12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述差分脉冲测试的条件包括：扫描电位为-0.1-0.6V，扫描速率为50mV/s。
13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器对牛奶淀粉样蛋白的检出限为5pg/mL，S/N=3。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112903781B (zh) * 2021-01-11 2022-07-08 北京理工大学 一种电铜基MOFs敏感膜修饰电极的分子印迹电化学传感器及其制备方法和检测方法
CN112858435A (zh) * 2021-01-12 2021-05-28 齐鲁工业大学 一种长期抗污染的基于人血清白蛋白分子印迹聚合凝胶的电化学生物传感器的制备方法
CN115201302B (zh) * 2022-07-04 2024-02-02 青岛科技大学 一种电化学传感器及其制备方法与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108802122A (zh) * 2018-06-14 2018-11-13 江苏大学 一种壳聚糖-石墨烯/金纳米粒子@碳纳米管离子印迹传感器的制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102645479A (zh) * 2012-04-19 2012-08-22 湖南大学 一种铅离子的特异性检测传感器及其制备和使用方法
CN103454426B (zh) * 2013-09-10 2015-07-01 山东理工大学 纳米金/壳聚糖-石墨烯-亚甲蓝修饰的免疫传感器的制备方法
CN103926294B (zh) * 2014-04-24 2015-06-03 青岛大学 Cs/il-gr修饰的牛血清白蛋白分子印迹电极的制备及其应用
CN104155447B (zh) * 2014-07-21 2015-05-06 济南大学 一种夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备和应用
CN106018530A (zh) * 2016-03-31 2016-10-12 广东工业大学 一种双酚a分子印迹电化学传感器及其制备方法和应用
CN106226370B (zh) * 2016-08-08 2018-04-27 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种草甘膦分子印迹电化学传感器的制备方法
CN110411951B (zh) * 2019-08-13 2021-11-30 信阳师范学院 一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108802122A (zh) * 2018-06-14 2018-11-13 江苏大学 一种壳聚糖-石墨烯/金纳米粒子@碳纳米管离子印迹传感器的制备方法

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