CN111175507B - 一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒 - Google Patents

一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN111175507B
CN111175507B CN202010175316.XA CN202010175316A CN111175507B CN 111175507 B CN111175507 B CN 111175507B CN 202010175316 A CN202010175316 A CN 202010175316A CN 111175507 B CN111175507 B CN 111175507B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
concentration
lung cancer
cyfra21
edc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010175316.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN111175507A (zh
Inventor
郭晓玉
刘艳菊
郝露露
郭壮壮
宋安琪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Original Assignee
Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM filed Critical Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority to CN202010175316.XA priority Critical patent/CN111175507B/zh
Publication of CN111175507A publication Critical patent/CN111175507A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111175507B publication Critical patent/CN111175507B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明公开了一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，包括：金电极、MPA溶液、cAb溶液、dAb溶液、PBS缓冲液、BSA溶液、LiClO4溶液、GO‑PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液A和EDC/NHS混合溶液B。本发明利用功能化GO具有多引发位点的特性将其应用于ROP反应中，作为引发剂以提高单体聚合能力，大量二茂铁单体通过ROP反应连接聚合，最后，通过电化学工作站测定的氧化电流强度与CYFRA 21‑1浓度呈正相关，成功构建了基于功能化GO引发开环聚合反应信号放大的标志物CYFRA 21‑1的检测试剂盒。本试剂盒对肺癌生物标志物CYFRA 21‑1的检测具有灵敏度高，稳定性高，抗干扰性强等特点，为肺癌的临床检测开辟了新的途径。

Description

一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒
技术领域
本发明涉及一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，属于生物分析技术领域。
背景技术
由于早期诊断和预后不良，肺癌是威胁人类生命的最常见恶性肿瘤。肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)两种主要亚型，其中NSCLC约占80％。肿瘤标志物提供了一种有效的方法用于癌症的筛查、诊断、预后。细胞角蛋白片段抗原21-1(CYFRA 21-1)被认为是诊断NSCLC最重要的生物标志物。在过去的几十年中，已报道了多种用于肿瘤标志物测定的技术，例如免疫放射测定(IRMA)、表面等离子体共振(SPR)、酶联法免疫吸附测定(ELISA)、电化学免疫测定等。在这些策略中，电化学免疫传感器由于其易小型化、仪器简单和信号量化等特点受到了广泛的关注。常规的电化学免疫传感方法只能结合或封闭一个二茂铁标签或Tyr残基，因而灵敏度较低。
为了提高检测灵敏度，已经提出了一些技术，例如金属纳米颗粒，天然酶或聚合物链。但是酶的高成本和纳米材料的操作复杂限制了它们的应用范围。基于聚合的扩增策略由于低成本、高效、简单，被认为是一种有效的信号放大方法。其中以阳离子引发为基础的开环聚合(ROP)，聚合物分子中的C-C键和C-O键能够自由旋转使得聚合物具有良好的柔性、低的溶解温度和高的降解温度，这使聚合物常被用在药物控制释放领域以及生物降解领域。此外，氧化石墨烯(GO)由于具有多官能团和高表面积，使其适合构建固定各种分子。通过乙醇胺(ETA)制备羟基官能化的GO，可为ROP提供丰富的引发位点，有效提高聚合效率。目前，还没有基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒的相关报道。
发明内容
针对目前存在非小细胞肺癌高灵敏检测的问题，本发明的目的是提供一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，包括：金电极、MPA溶液、cAb溶液、dAb溶液、PBS缓冲液、BSA溶液、LiClO4溶液、GO-PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液A和EDC/NHS混合溶液B。
MPA溶液浓度为20mM，cAb溶液浓度为1μg/mL，dAb溶液浓度为1μg/mL，BSA溶液质量浓度为1％，PBS缓冲液浓度为0.1mM，pH为7.4，LiClO4溶液浓度为1M，GO-PolyFc溶液浓度为9.5mg/mL，EDC/NHS混合溶液A中EDC浓度为0.2M，NHS浓度为0.05M，EDC/NHS混合溶液B中EDC浓度为8mM，NHS浓度为2mM。
肺癌早期诊断试剂盒，还包括水虎鱼酸和0.5M稀盐酸，水虎鱼酸的制备方法为：98％H2SO4和H2O2以体积比3:1的比例混合。
肺癌早期诊断试剂盒，还包括0.3μm和0.05μm抛光粉。
肺癌早期诊断试剂盒，还包括系列浓度的CYFRA 21-1溶液，浓度分别为1ng/mL、100pg/mL、10pg/mL、1pg/mL、100fg/mL、10fg/mL、1fg/mL。
一种利用肺癌早期诊断试剂盒诊断肺癌的方法，包括以下步骤：
(1)电极修饰
①将金电极表面依次用0.3μm和0.05μm的抛光粉打磨至镜面，清洗电极表面；
②在水虎鱼酸中常温浸泡处理10min，清洗电极表面；
③在0.5M的稀硫酸中用循环伏安法对电极表面进行电化学处理，直到得到重合的曲线，清洗电极表面，得到洁净的金电极；
④将洁净的金电极在MPA溶液中37℃浸泡2h，然后浸泡在EDC/NHS混合溶液A中，在37℃下反应30min进行活化，清洗电极表面；
(2)cAb的固定
①将cAb溶液滴加到步骤(1)所得电极表面，在37℃下反应2h，清洗电极表面；
②将BSA溶液滴加到电极表面，在37℃下反应30min，清洗电极表面；
(3)肺癌标志物的识别
将系列浓度CYFRA 21-1溶液分别滴加到步骤(2)所得电极表面，在37℃下反应1h，清洗电极表面；
(4)GO-PolyFc-dAb的修饰
将GO-PolyFc溶液与EDC/NHS混合溶液B混合，恒温摇床37℃条件下避光反应1h；然后加入dAb溶液，恒温摇床37℃条件下避光反应2h；将所得反应液分别滴在步骤(3)所得电极表面，在37℃下孵育1h，清洗电极表面；
(5)电化学测定
将步骤(4)所得电极分别浸泡在1M LiClO4溶液中用差示脉冲伏安法进行电化学检测，构建CYFRA 21-1浓度和电流强度之间的线性关系；
(6)待测样品检测
根据线性关系，计算待检测样品溶液中CYFRA 21-1浓度。
循环伏安法的扫描范围：-0.3～1.5V，扫描速率：0.2V/s。
差示脉冲伏安法的扫描范围：0V～0.5V，扫描速率：0.1V/s。
GO-PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液B和dAb溶液的体积比为1:1:1。
本发明诊断试剂盒的检测原理示意图见图1。
本发明的有益效果：
1、与传统的接枝聚合物方法相比，本发明通过将聚合物GO-PolyFc直接引入传感体系，具有节省时间、操作简单、灵敏度高等特点。
2、氧化石墨烯表面的环氧基团通过乙醇胺功能化可引入大量羟基基团，为ROP反应提供多引发位点，大大提高了聚合效率，有效进行反应信号的放大，提高灵敏度。
3、利用功能化GO具有多引发位点的特性将其应用于ROP反应中，作为引发剂以提高单体聚合能力，大量二茂铁单体通过ROP反应连接聚合，最后，通过电化学工作站测定的氧化电流强度与CYFRA 21-1浓度呈正相关，成功构建了基于功能化GO引发开环聚合反应信号放大的标志物CYFRA 21-1的检测试剂盒。结果表明，最优条件下，在1fg/mL～1ng/mL范围内的CYFRA21-1浓度与电流强度呈良好线性关系，线性方程为I(μA)＝20.061+4.8178log[CCYFRA 21-1(pg/mL)](R2＝0.999)，检出限低至72.58ag/mL。同时该试剂盒在实际样品人血清中测定CYFRA 21-1也表现出较高的抗干扰性(96％)。综上所述，本试剂盒对肺癌生物标志物CYFRA 21-1的检测具有灵敏度高，稳定性高，抗干扰性强等特点，为肺癌的临床检测开辟了新的途径。
附图说明
图1为试剂盒检测原理的示意图。
图2为不同修饰电极的电流强度(a、b、c、d、e、f分别代表MPA空白、cAb空白、CYFRA21-1空白、dAb空白、GO-PolyFc空白、MPA/cAb/CYFRA 21-1/GO-PolyFc-dAb)。
图3为电流信号强度与GO-PolyFc浓度的关系。
图4为电流信号强度与GO-PolyFc-dAb孵育时间的关系。
图5为电流信号强度与MPA浓度的关系。
图6为不同CYFRA 21-1浓度对电流强度的影响。图中CYFRA 21-1的浓度从上到下依次为1ng/mL、100pg/mL、10pg/mL、1pg/mL、100fg/mL、10fg/mL、1fg/mL。
图7为电流强度与CYFRA 21-1浓度C的关系。
图8为试剂盒的选择性实验结果。
图9为电流强度与0.1mM PBS和10％NHS的关系。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1：肺癌早期诊断试剂盒的构建
该试剂盒包括：金电极、3-巯基丙酸(MPA)溶液、cAb(CYFRA21-1单抗，包被，购自北京科跃中楷生物技术有限公司，货号CY11N005)溶液、dAb(CYFRA 21-1单抗，标记用，购自北京科跃中楷生物技术有限公司，货号CY11N007)溶液、PBS缓冲液、牛血清白蛋白(BSA)溶液、LiClO4溶液、GO-PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液A和EDC/NHS混合溶液B。其中，
MPA溶液浓度为20mM，cAb溶液浓度为1μg/mL，dAb溶液浓度为1μg/mL，BSA溶液质量浓度为1％，PBS缓冲液浓度为0.1mM，pH为7.4，LiClO4溶液浓度为1M，GO-PolyFc溶液浓度为9.5mg/mL，EDC/NHS混合溶液A中EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)浓度为0.2M，NHS(N-羟基丁二酰亚胺)浓度为0.05M，EDC/NHS混合溶液B中EDC浓度为8mM，NHS浓度为2mM。
PBS缓冲液的制备方法为：称取5.8g Na2HPO4 .12H2O、0.592g NaH2PO4 .2H2O、2.34gNaCl和200μL超纯水混合，即得；其浓度为0.1mM，pH为7.4。
GO-PolyFc的制备参考Reza Teimuri-Mofrad,Hassan Abbasi,RahaHadi.Graphene oxide-grafted ferrocene moiety via ring opening polymerization(ROP)as a supercapacitor electrode material[J].Polymer.2019,3861(19):30114-30117。
该试剂盒还包括水虎鱼酸、0.5M稀盐酸和无水乙醇，水虎鱼酸的制备方法为：质量分数98％H2SO4和H2O2以体积比3:1的比例混合。
该试剂盒还包括0.3μm和0.05μm抛光粉。
该试剂盒还包括系列浓度的CYFRA 21-1溶液，浓度分别为1ng/mL、100pg/mL、10pg/mL、1pg/mL、100fg/mL、10fg/mL、1fg/mL。
实施例2：试剂盒的检测方法
该检测方法，包括以下步骤：
(1)电极修饰
①将金电极表面依次用0.3μm和0.05μm的抛光粉打磨至镜面，依次用无水乙醇和超纯水超声清洗干净；
②在水虎鱼酸中常温浸泡处理10min，依次用无水乙醇和超纯水超声清洗干净；
③在0.5M的稀硫酸中用循环伏安法(扫描范围：-0.3～1.5V，扫描速率：0.2V/s)对电极表面进行电化学处理，直到得到重合的曲线，以除去吸附在电极表面的化学杂质，依次用无水乙醇和超纯水超声清洗干净后，得到洁净的金电极；
④将洁净的金电极在MPA溶液中37℃浸泡2h，MPA通过金-硫键固定在金电极表面，MPA端羧基通过金电极浸泡在EDC/NHS混合溶液A中37℃下反应30min进行活化，用超纯水清洗干净；
(2)cAb的固定
①将10μL cAb溶液滴加到步骤(1)所得电极表面，在37℃下反应2h，用PBS缓冲液清洗电极表面；
②将10μL BSA溶液滴加到电极表面，在37℃下反应30min，封闭未结合的残余位点，用PBS缓冲液清洗电极表面；
(3)肺癌标志物的识别
将10μL系列浓度CYFRA 21-1溶液(1ng/mL、100pg/mL、10pg/mL、1pg/mL、100fg/mL、10fg/mL、1fg/mL)分别滴加到步骤(2)所得电极表面，在37℃下反应1h，用PBS缓冲液清洗电极表面；
(4)GO-PolyFc-dAb的修饰
将100μL GO-PolyFc溶液与100μL EDC/NHS混合溶液B混合，恒温摇床37℃条件下避光反应1h；然后加入100μL dAb溶液，恒温摇床37℃条件下避光反应2h(得到GO-PolyFc-dAb)；将10μL所得反应液分别滴在步骤(3)所得电极表面，在37℃下孵育1h，用PBS缓冲液清洗电极表面；
(5)电化学测定
将步骤(4)所得电极分别浸泡在1M LiClO4溶液中用差示脉冲伏安法进行电化学检测(扫描范围：0V～0.5V，扫描速率：0.1V/s)，构建CYFRA 21-1浓度和电流强度之间的线性关系；
(6)结果计算
按照上述步骤检测待检测样品溶液的电流强度，根据线性关系，计算待检测样品溶液中CYFRA 21-1浓度。
实施例3：可行性验证
首先对不同修饰状态的电极表面进行电化学检测。参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，分别检测不同修饰状态电极的氧化电流，即未加入MPA、cAb、CYFRA 21-1、dAb、GO-PolyFc修饰电极，以及MPA/cAb/CYFRA 21-1/GO-PolyFc-dAb修饰电极(如图2所示)。结果显示，未加入MPA、cAb、CYFRA 21-1、dAb、GO-PolyFc修饰电极未观察到明显的氧化电流，MPA/cAb/CYFRA 21-1/GO-PolyFc-dAb修饰电极，产生了极大的氧化峰电流信号，这表明实验具有较高的灵敏度。通过对比实验，充分证明了通过羟基功能化氧化石墨烯GO-ETA和ROP双信号扩增对CYFRA 21-1生物传感的可行性。
实施例4：检测条件优化
(1)GO-PolyFc浓度的优化
参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，通过检测不同GO-PolyFc浓度的电流强度(其它条件不变)，反应出了GO-PolyFc浓度与电流强度的关系。结果如图3所示，电流强度随着GO-PolyFc浓度的增大逐渐增强并在9.5mg/mL达到了稳定。因此，GO-PolyFc溶液的最佳浓度为9.5mg/mL。
(2)GO-PolyFc-dAb孵育时间的优化
GO-PolyFc-dAb在电极表面的孵育时间可影响检测性能。当孵育时间不充分时，电流强度达不到理想值。参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，分别测定GO-PolyFc-dAb的孵育时间为30min、40min、50min、60min、70min、80min时的修饰电极电流强度(其它条件不变)，结果如图4所示，当孵育时间为60min时修饰电极电流强度达到最大，因此选择GO-PolyFc-dAb的孵育时间为60min，并用于以后的实验中。
(3)MPA浓度的优化
MPA的浓度不仅对固定cAb的量有影响，且影响测性能。参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，分别测定MPA的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM时的修饰电极电流强度(其它条件不变)，结果如图5所示，当加入MPA浓度为20mM时修饰电极的电流强度达到最大，此后继续增大MPA的浓度，电流强度并未明显增大，因此选择MPA溶液浓度为20mM应用于以下实验中。
综上所述，最佳检测条件为：GO-PolyFc溶液浓度为9.5mg/mL，GO-PolyFc-dAb孵育时间为60min，MPA溶液浓度为20mM。
实施例5：对CYFRA 21-1的检测性能分析
参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，将10μL不同浓度的CYFRA 21-1(1ng/mL、100pg/mL、10pg/mL、1pg/mL、100fg/mL、10fg/mL、1fg/mL)修饰于电极表面(其它条件不变)，用差示脉冲伏安法进行电化学检测。如图6、7所示，修饰电极的电流强度随着CYFRA 21-1浓度的增加而增强，这是因为CYFRA 21-1浓度越大，导致结合GO-PolyFc-dAb的数量就越多，从而引入的二茂铁信号单元越多，产生较强的氧化电流。电流强度与CYFRA 21-1浓度的对数值在1fg/mL～1ng/mL范围呈现良好的线性关系，线性方程为I(μA)＝20.061+4.8178log[CCYFRA 21-1(pg/mL)](R2＝0.999)，检测限为72.58ag/mL，结果表明该检测方法具有较高的检测灵敏度，性能优异。
实施例6：选择性实验
参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，研究不同干扰物存在下对试剂盒检测性能的影响。在相同条件下，分别以BSA(牛血清白蛋白)、CEA(癌胚抗原)、MAGE(黑色素瘤抗原)替代CYFRA 21-1，对比空白(未加入)、BSA(牛血清白蛋白)、CEA(癌胚抗原)、MAGE(黑色素瘤抗原)与CYFRA 21-1的电流强度。如图8所示，不同干扰物(BSA、CEA、MAGE)所对应的电流强度分别为CYFRA 21-1的10.8％，19.8％、14.84％，干扰物产生的电流强度相对于CYFRA 21-1较小，这是由于抗原抗体的特异性识别，证明本发明方法具有较高的选择性。
实施例7：干扰性实验
参照实施例2步骤(1)-(5)的检测方法，分别测定CYFRA 21-1加入10％(v/v)的正常人血清和0.1mM PBS缓冲液(pH 7.4)中的样品溶液的电流强度，如图9所示，当两者中CYFRA 21-1的浓度分别为1fg/mL、1pg/mL、1ng/mL时，所测得10％的正常人血清的修饰电极的电流强度分别为PBS缓冲液(pH 7.4)的96％、97％、98％。结果表明本发明在方法实际血清样品中具有较强的抗干扰能力，可用于实际样品的检测。

Claims (4)

1.一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，包括：金电极、MPA溶液、cAb溶液、dAb溶液、PBS缓冲液、BSA溶液、LiClO4溶液、GO-PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液A和EDC/NHS混合溶液B；
MPA溶液浓度为20 mM，cAb溶液浓度为1 μg/mL，dAb溶液浓度为1 μg/mL，BSA溶液质量浓度为1%，PBS缓冲液浓度为0.1 mM，pH为7.4，LiClO4溶液浓度为1 M，GO-PolyFc溶液浓度为9.5 mg/mL，EDC/NHS混合溶液A中EDC浓度为0.2 M，NHS浓度为0.05 M，EDC/NHS混合溶液B中EDC浓度为8 mM，NHS浓度为2 mM。
2.根据权利要求1所述的肺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，还包括水虎鱼酸和0.5 M稀盐酸，水虎鱼酸的制备方法为：98% H2SO4和H2O2以体积比3:1的比例混合。
3.根据权利要求1所述的肺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，还包括0.3 μm和0.05 μm抛光粉。
4.根据权利要求1所述的肺癌早期诊断试剂盒，其特征在于，还包括系列浓度的CYFRA21-1溶液，浓度分别为1 ng/mL、100 pg/mL、10 pg/mL、1 pg/mL、100 fg/mL、10 fg/mL、1fg/mL。
CN202010175316.XA 2020-03-13 2020-03-13 一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒 Active CN111175507B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010175316.XA CN111175507B (zh) 2020-03-13 2020-03-13 一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010175316.XA CN111175507B (zh) 2020-03-13 2020-03-13 一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111175507A CN111175507A (zh) 2020-05-19
CN111175507B true CN111175507B (zh) 2023-04-25

Family

ID=70653410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010175316.XA Active CN111175507B (zh) 2020-03-13 2020-03-13 一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111175507B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114460159B (zh) * 2022-02-17 2023-11-03 河南中医药大学 基于photo-ATRP信号放大策略的ALP活性检测试剂盒及其使用方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104949971A (zh) * 2015-06-19 2015-09-30 广州华弘生物科技有限公司 肝癌早期诊断试剂盒及其应用

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102175729B (zh) * 2011-01-13 2013-10-09 青岛科技大学 功能化石墨烯与纳米粒子层层组装制备光致电化学传感器
CN102411019B (zh) * 2011-08-08 2014-02-19 北京大学 一种基于石墨烯电极的分子器件用于检测有机生物小分子的方法
CN102426868B (zh) * 2011-09-05 2013-11-06 湖南大学 水溶性石墨烯-贵金属纳米复合物及其制备方法和应用
CN102504533B (zh) * 2011-10-19 2013-10-16 北京化工大学 生物分子功能化石墨烯/金纳米粒子复合薄膜及制备方法
CN102818893B (zh) * 2012-08-28 2013-10-09 济南大学 金钯核壳材料构建肺癌肿瘤标志物免疫传感器制备及应用
CN106610395A (zh) * 2015-10-26 2017-05-03 青岛大学 一种利用自组装石墨烯高灵敏检测蛋白质分子的方法
WO2018093943A1 (en) * 2016-11-16 2018-05-24 The Regents Of The University Of California Identification and optimization of carbon radicals on hydrated graphene oxide for ubiquitous antibacterial coatings
US20200033332A1 (en) * 2016-12-13 2020-01-30 Eccrine Systems, Inc. Thiolated aromatic blocking structures for eab biosensors
CN208860790U (zh) * 2018-08-28 2019-05-14 长沙理工大学 一种基于谷胱甘肽复合膜栅极金电极的l-胱氨酸传感器
CN110208348B (zh) * 2019-07-02 2022-04-22 河南中医药大学 一种以Nafion为引发剂通过电化学介导的原子转移自由基聚合反应的肺癌检测盒
CN110257519B (zh) * 2019-07-29 2022-07-08 河南中医药大学 一种基于Nafion引发原子转移自由基聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104949971A (zh) * 2015-06-19 2015-09-30 广州华弘生物科技有限公司 肝癌早期诊断试剂盒及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111175507A (zh) 2020-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
D'Orazio Biosensors in clinical chemistry—2011 update
JP6796231B2 (ja) Ｔｉ３Ｃ２二次元金属炭化物触媒に基づくルミノールの電気化学発光プローブを用いたバイオセンサー及びその製造方法
Gogola et al. Label-free aptasensor for p24-HIV protein detection based on graphene quantum dots as an electrochemical signal amplifier
CN110208348B (zh) 一种以Nafion为引发剂通过电化学介导的原子转移自由基聚合反应的肺癌检测盒
CA2870176A1 (en) An electrode and use thereof
Ni et al. Physical absorption vs covalent binding of graphene oxide on glassy carbon electrode towards a robust aptasensor for ratiometric electrochemical detection of vascular endothelial growth factor (VEGF) in serum
CN108469524A (zh) 一种检测ca125的光电化学免疫传感器及其制备方法和应用
CN110133252A (zh) 用于检测癌胚抗原的试剂盒和检测方法及其应用
KR20130081206A (ko) 표식화 프로브-수용성 담체 복합체
Trindade et al. A label-free and reagentless immunoelectrode for antibodies against hepatitis B core antigen (anti-HBc) detection
CN111175507B (zh) 一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒
Zhou et al. An amperometric immunosensor based on an electrochemically pretreated carbon–paraffin electrode for complement III (C3) assay
CN114813872A (zh) 一种基于H-rGO-Mn3O4纳米酶的电化学/比色双模式检测GP73的方法
CN112763563B (zh) 一种基于复合材料改性laps芯片检测1,5-脱水葡萄糖醇的方法
Sun et al. Design and development of biosensors for progesterone detection
Chen et al. Electrochemical Immunoassay of Human Chorionic Gonadotrophin Based on Its Immobilization in Gold Nanoparticles‐Chitosan Membrane
US20230152310A1 (en) Single-chain polymer-based target receptors for use in electrochemical detection of target analytes
CN105866211A (zh) 一种氨苄西林分子印迹传感器的制备方法及应用
Tang et al. Multiplexed electrochemical immunoassay for two immunoglobulin proteins based on Cd and Cu nanocrystals
CN106124579B (zh) 一种电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法
Avelino et al. Nanoimmunosensor for the electrochemical detection of oncostatin M receptor and monoclonal autoantibodies in systemic sclerosis
CN114778839A (zh) 基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒及检测方法
CN112904004B (zh) 同时检测psa和sar的生物传感器及制备方法和应用
CN110398585B (zh) 一种测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器及其制备方法与应用
CN111766288A (zh) 一种基于富氧空位NiCo2O4电致化学发光传感器的制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant