CN110411951B - 一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法 - Google Patents

一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：1)在ITO电极表面上沉积纳米金，得到Au/ITO电极；2)在步骤1)得到电极的两个不同区域分别修饰CdS和SnNb2O6，得到含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极；3)在步骤2)制得的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰戊二醛，在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTn I抗体，得到同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器。本发明制备的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器，具有操作简单、结果准确等优点。

Description

一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制 备方法
技术领域
本发明涉及光电化学分析技术领域，具体涉及一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法。
背景技术
光电化学分析是在电化学基础上发展起来的分析方法，其将光化学分析与电化学分析结合，由于其操作简单、背景信号低、易于微型化、灵敏度高等优点，光电化学分析被广泛的应用于蛋白质分析、细胞分析、核酸分析以及药物分析。
心血管疾病以其发病率高、死亡率高等特点引起了人们的广泛关注，如何快速、准确地检测心血管疾病是非常重要的。近年来，包括心肌肌钙蛋白T、肌红蛋白(Myo)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)在内的许多心肌标志物被报道用于心血管疾病的诊断。然而，大多数方法都是对心肌标志物进行单一检测，与单目标心肌标志物检测相比，多目标心肌标志物检测分析具有缩短检测时间、降低分析成本、提高分析效率等优点。目前已有报道基于两种不同酶标记信号探针在两个检测溶液中产生不同的光电信号构建了一种光电化学传感平台实现同时检测两种心肌标志物，不过这种方法需要使用两种不同的酶以及含特定酶的检测底液，极大地限制了其广泛应用。因此，如何制备一种能够灵敏、快速、准确、有效的同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器非常重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)在ITO电极表面上沉积纳米金，得到Au/ITO电极；
2)在步骤1)得到的Au/ITO电极的两个不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极；
3)在步骤2)制得的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰戊二醛，然后在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体，然后加入牛血清白蛋白，得到同时检测Myo和cTnI双心肌标志物的光电化学生物传感器。
所述CdS纳米材料为CdS纳米线，所述SnNb2O6纳米材料为SnNb2O6纳米片。
所述步骤2)中，在Au/ITO电极的不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料由包括以下步骤的方法制得：将CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料分别溶于壳聚糖溶液中，分别取CdS和壳聚糖混合溶液以及SnNb2O6和壳聚糖混合溶液滴加在Au/ITO电极表面的不同区域，55～65℃下烘干即可，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极。
所述步骤1)中，采用循环伏安法在ITO电极表面上沉积纳米金。
所述步骤3)中，Myo抗体的浓度为45～55μg/mL，cTnI抗体的浓度为45～55μg/mL。
所述壳聚糖溶液的浓度为0.08～0.11mg/mL。
所述步骤3)中，在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体后，在3℃～5℃下孵育11～13小时。
所述步骤3)中，Myo抗体的浓度为50μg/mL，cTnI抗体的浓度为50μg/mL。
所述步骤3)中，在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体，然后加入牛血清白蛋白，在35～39℃下孵育0.8～1.2小时。
所述步骤2)中，所述CdS和壳聚糖混合溶液中，CdS的浓度为0.5～1.5mg/mL，SnNb2O6和壳聚糖混合溶液中，SnNb2O6的浓度为0.5～1.5mg/mL。
本发明用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法的有益效果在于：
本发明制备的光电化学免疫传感器，通过不同心肌标志物的抗原和抗体的特异性结合，在电极的不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料，制得临界电压不同的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域，并且在修饰电极的CdS/Au/ITO区域上修饰Myo抗体，在修饰电极的SnNb2O6/Au/ITO区域上修饰cTnI抗体，使得修饰电极能够分别特异性地捕获Myo和cTnI两种心肌标志物，在不同纳米材料制得的电极的临界电压下，该纳米材料的光电流信号为零，在检测两种心肌标志物时，通过改变传感器的偏置电压为CdS/Au/ITO的临界电压或者SnNb2O6/Au/ITO的临界电压，光电流不会相互影响，且随着心肌标志物浓度越大，空间位阻越大，光电流信号越低，并且光电流强度与心肌标志物浓度的对数之间呈现良好的线性关系，因此，本发明的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法制备的光电化学传感器可用于同时检测双心肌标志物。与其他检测方法相对比，该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性好、结果准确等优点。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1为不同沉积电压下，Au纳米粒子在ITO(氧化铟锡)电极上的SEM(扫描电子显微镜)图，插图为CV(电流-电压曲线)图；
图2为CdS/Au/ITO电极和SnNb2O6/Au/ITO电极在不同的偏置电压下的光电流响应图；
图3为在本发明的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备过程中的光电化学表征图；
图4为本发明的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的工作曲线图；
图5为本发明的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的工作特异性图。
具体实施方式
本发明的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
1)在ITO电极表面上沉积纳米金，得到Au/ITO电极；
为了得到导电性能较好的Au/ITO电极，在沉积电压从0.7V-1.2V下，在干净的ITO电极表面上通过循环伏安法沉积金纳米粒子，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，得到Au/ITO电极，结果如图1所示，图1A-图1F分别为沉积电压在0.7V、0.8V、0.9V、1.0V、1.1V以及1.2V下，电沉积纳米金的SEM图，插图为CV(电流-电压曲线)图，其中，循环伏安法的参数设置为：起始电位为-0.2V，扫描速率为0.1V/S，图1中的SEM图表明沉积电压对生成AuNPs(金纳米粒子)的影响，在0.9V时，ITO表面生成的AuNPs最多，图1中的CV(电流-电压曲线)图表明沉积电压在0.9V时，峰值电流最大，结果表明：沉积电压为0.9V时，得到Au/ITO电极导电性能较好。
2)在步骤1)得到的Au/ITO电极的两个不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极；
3)在步骤2)制得的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰戊二醛，然后在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体，得到同时检测Myo和cTnI双心肌标志物的光电化学生物传感器。
所述CdS纳米材料为CdS纳米线，所述SnNb2O6纳米材料为SnNb2O6纳米片，所述步骤2)中，在Au/ITO电极的不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料由包括以下步骤的方法制得：将CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料分别溶于壳聚糖溶液中，分别取CdS和壳聚糖混合溶液以及SnNb2O6和壳聚糖混合溶液滴加在Au/ITO电极表面的不同区域，55～65℃下烘干即可，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极。所述壳聚糖溶液的浓度为0.08～0.11mg/mL。
所述步骤1)中，采用循环伏安法在ITO电极表面上沉积纳米金。
所述步骤3)中，Myo抗体的浓度为45～55μg/mL，cTnI抗体的浓度为45～55μg/mL；在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体后，在3℃～5℃下孵育11～13小时。
所述步骤3)中，Myo抗体的浓度为50μg/mL，cTnI抗体的浓度为50μg/mL。
所述步骤3)中，在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体，然后加入牛血清白蛋白，在35～39℃下孵育0.8～1.2小时。
所述步骤2)中，所述CdS和壳聚糖混合溶液中，CdS的浓度为0.5～1.5mg/mL，SnNb2O6和壳聚糖混合溶液中，SnNb2O6的浓度为0.5～1.5mg/mL。
实施例1
本实施例的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
1)沉积电压为0.9V，在干净的ITO电极表面上沉积金纳米粒子，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，得到Au/ITO电极。
2)将1.0mg的CdS纳米线溶于1.0mL的0.1mg/mL的壳聚糖溶液中，CdS的浓度为1.0mg/mL，将1.0mg的SnNb2O6纳米片溶于1.0mL的0.1mg/mL的壳聚糖溶液中，SnNb2O6的浓度为1.0mg/mL，分别取20微升的CdS和壳聚糖的混合溶液以及20微升的SnNb2O6和壳聚糖的混合溶液滴加在步骤1)得到的Au/ITO电极的两个不同区域内，60℃下烘干，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极。
3)在步骤2)中得到的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰20微升、5％质量分数的戊二醛，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，在室温下放置1小时，随后，在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体，Myo抗体的浓度为50μg/mL，cTnI抗体的浓度为50μg/mL，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，在4℃下孵育12小时；然后加入牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性吸附位点，在37℃下孵育1小时，得到同时检测Myo和cTnI双心肌标志物的光电化学生物传感器。
实施例2
本实施例的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
1)沉积电压为0.9V，在干净的ITO电极表面上沉积金纳米粒子，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，得到Au/ITO电极。
2)将0.5mg的CdS纳米线溶于1.0mL的0.11mg/mL的壳聚糖溶液中，CdS的浓度为0.5mg/mL，将0.5mg的SnNb2O6纳米片溶于1.0mL的0.11mg/mL的壳聚糖溶液中，SnNb2O6的浓度为0.5mg/mL，分别取20微升的CdS和壳聚糖的混合溶液以及20微升的SnNb2O6和壳聚糖的混合溶液滴加在步骤1)得到的Au/ITO电极的两个不同区域内，65℃下烘干，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极。
3)在步骤2)得到的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰20微升、5％质量分数的戊二醛，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，在室温下放置0.8小时，随后，分别在CdS/Au/ITO区域上滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上滴加cTnI抗体，Myo抗体的浓度为45μg/mL，cTnI抗体的浓度为45μg/mL，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，在3℃下孵育13小时；然后加入牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性吸附位点，在35℃下孵育1.2小时，得到同时检测Myo和cTnI双心肌标志物的光电化学生物传感器。
实施例3
本实施例的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
1)沉积电压为0.9V，在干净的ITO电极表面上沉积金纳米粒子，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，得到Au/ITO电极。
2)将1.5mg的CdS纳米线溶于1.0mL的0.08mg/mL的壳聚糖溶液中，CdS的浓度为1.5mg/mL，将1.5mg的SnNb2O6纳米片溶于1.0mL的0.08mg/mL的壳聚糖溶液中，SnNb2O6的浓度为1.5mg/mL，分别取20微升的CdS和壳聚糖的混合溶液以及20微升的SnNb2O6和壳聚糖的混合溶液滴加在步骤1)得到的Au/ITO电极的两个不同区域内，55℃下烘干，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极。
3)在步骤2)得到的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰20微升、5％质量分数的戊二醛，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，在室温下放置1.2小时，随后，分别在CdS/Au/ITO区域滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域滴加cTnI抗体，Myo抗体的浓度为55μg/mL，cTnI抗体的浓度为55μg/mL，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，在5℃下孵育11小时；然后加入牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性吸附位点，在39℃下孵育0.8小时，即得到同时检测Myo和cTnI双心肌标志物的光电化学生物传感器。
实验例
1、CdS/Au/ITO的临界电压筛选和SnNb2O6/Au/ITO的临界电压筛选
由于在光照射下，两种纳米材料CdS和SnNb2O6制得的电极均会产生光电流信号，但是在某种纳米材料制得的电极的临界电压下，该对应纳米材料制得的电极的光电流信号为零，在传感器的使用过程中，选取其中一种纳米材料制得的电极的临界电压作为偏置电压，会获得另一种纳米材料制得电极的光电流信号，且两种信号相互不干扰，即当传感器的偏置电压选取SnNb2O6/Au/ITO的临界电压时，光电流信号来源于CdS/Au/ITO，可灵敏检测CdS/Au/ITO上捕获的Myo抗原的浓度，反之，当偏置电压选取CdS/Au/ITO的临界电压时，光电流信号来源于SnNb2O6/Au/ITO，可灵敏检测SnNb2O6/Au/ITO上捕获的cTnI抗原的浓度。为了获得CdS/Au/ITO的临界电压和SnNb2O6/Au/ITO的临界电压，进行了以下实验，具体包括以下步骤：
(1)CdS/Au/ITO的临界电压筛选：在沉积电压为0.9V下，在干净的ITO电极表面上沉积金纳米粒子，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，得到Au/ITO电极；将1.0mg的CdS纳米线溶于1.0mL的0.1mg/mL的壳聚糖溶液中，取20微升的CdS和壳聚糖的混合溶液滴加在Au/ITO电极上，60℃下烘干，得到CdS/Au/ITO电极，将其作为工作电极，以铂丝作为辅助电极，以饱和银-氯化银电极作为参比电极，信号检测使用氙灯作为光源，电化学工作站作为检测装置；测试CdS/Au/ITO电极在0V、-0.07V、-0.08V、-0.09V、-0.1V偏置电压下的光电流响应，测试结果如图2A所示，测试结果显示偏置电压为-0.08V时，光电流响应值为零，即CdS/Au/ITO电极的临界电压为-0.08V。
(2)SnNb2O6/Au/ITO的临界电压筛选：在沉积电压为0.9V下，在干净的ITO电极表面上沉积金纳米粒子，用PH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，得到Au/ITO电极；将1.0mg的SnNb2O6纳米片溶于1.0mL的0.1mg/mL的壳聚糖溶液中，取20微升的SnNb2O6和壳聚糖的混合溶液滴加在Au/ITO电极上，60℃下烘干，得到SnNb2O6/Au/ITO电极，将其作为工作电极，以铂丝作为辅助电极，以饱和银-氯化银电极作为参比电极，信号检测使用氙灯作为光源，电化学工作站作为检测装置；测试SnNb2O6/Au/ITO在-0.05V、0V、0.1V、0.15V、0.2V偏置电压下的光电流响应，测试结果如图2B所示，结果显示偏置电压为0.1V时，光电流响应值为零，即SnNb2O6/Au/ITO电极的临界电压为0.1V。
2、心肌标志物的浓度与光电化学生物传感器的光电流信号强度之间的线性曲线方程的确定
在制备实施例一的光电化学生物传感器的过程中，测试光电化学生物传感器在构建过程中不同阶段的光电性能，测试表征结果如图3所示，其中，图3A为偏置电压为0.1V(即SnNb2O6/Au/ITO的临界电压)时光电化学生物传感器的光电流响应，图3A中：曲线a为ITO的光电流检测图，曲线b为CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图，曲线c为anti-Myo/CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图，曲线d为BSA/anti-Myo/CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图，曲线e为Myo/BSA/anti-Myo/CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图；图3B图为偏置电压为-0.08V(即CdS/Au/ITO的临界电压)时光电化学生物传感器的光电流响应，图3B中：曲线a为ITO的光电流检测图，曲线b为CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图，曲线c为anti-cTnI/CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图，曲线d为BSA/anti-cTnI/CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图，曲线e为cTnI/BSA/anti-cTnI/CdS/SnNb2O6/Au/ITO的光电流检测图。图3A和图3B表明实施例一的光电化学生物传感器在构建过程中光电性能良好，最终制得的光电化学生物传感器能够投入使用。其中，光电流的检测是在包含三电极体系的电化学工作中上进行的，该三电极体系为以制得的光电化学生物传感器作为工作电极，铂丝作为辅助电极，饱和银-氯化银电极作为参比电极，信号检测使用氙灯作为光源，电化学工作站作为检测装置。
利用实施例一制得的光电化学生物传感器检测不同浓度5×10-12ng mL-1、5×10- 11ng mL-1、5×10-10ng mL-1、5×10-9ng mL-1、5×10-8ng mL-1的Myo抗原分别对应的光电流响应，测得Myo抗原浓度的对数与光电流信号的线性关系表征结果如图4A所示；同时检测不同浓度5×10-12ng mL-1、5×10-11ng mL-1、5×10-10ng mL-1、5×10-9ng mL-1、5×10-8ng mL-1的cTnI抗原分别对应的光电流响应，测得cTnI抗原浓度的对数与光电流信号的线性关系表征结果如图4B所示。当偏置电压设置为SnNb2O6/Au/ITO的临界电压时，SnNb2O6/Au/ITO的光电流信号为零，只有CdS/Au/ITO有光电流响应，此时可以检测Myo抗原的浓度，反之，当偏置电压设置为CdS/Au/ITO的临界电压时，CdS/Au/ITO的光电流信号为零，只有SnNb2O6/Au/ITO有光电流响应，而此时可以检测cTnI抗原的浓度。通过测试一系列的cTnI抗原浓度和一系列的Myo抗原浓度，得出标志物的浓度在5.0pg mL-1～50ng mL-1范围内时，标志物的浓度与光电流信号呈现良好的线性关系，其中，Myo抗原浓度与光电流信号的线性曲线方程是I＝-0.187logCMyo–1.133，其中I为光电流信号，单位为微安，CMyo为Myo抗原的浓度值，单位为ngmL-1，检出限为2.0pg mL-1，相关系数是0.996；cTnI抗原的浓度与光电流信号线性曲线方程是I＝0.120log CcTnl+0.522，I为光电流信号，单位为微安，CcTnl为cTnI的浓度，单位为ngmL-1，检出限为2.5pg mL-1，相关系数是0.995。
3、准确度测试
以实施例一制得的光电化学生物传感器作为工作电极，以铂丝作为辅助电极，以饱和银-氯化银电极作为参比电极，信号检测是使用氙灯作为光源，电化学工作站作为检测装置，检测同时含有Myo抗原的浓度为24.5ng mL-1以及cTnI抗原的浓度为3.04ng mL-1的人血清样品。检测过程中设置传感器的偏置电压为0.1V(即SnNb2O6/Au/ITO的临界电压)时，可检测Myo抗原的浓度，此时，传感器的光电流响应值为0.284μA，根据测得的Myo抗原的浓度与光电流信号的线性曲线方程I＝-0.187logCMyo–1.133得出Myo抗原测试浓度为26.5ngmL-1，Myo抗原的测试浓度与实际浓度的相对误差8.2％，相对标准偏差8.6％；检测过程中设置传感器的偏置电压为-0.08V(即CdS/Au/ITO的临界电压)时，可检测cTnI抗原的浓度，此时，传感器的光电流响应值为-0.498μA，根据测得的cTnI抗原的浓度与光电流信号的线性曲线方程I＝0.120logCcTnl+0.522得出cTnI抗原的测试浓度为3.18ng mL-1，cTnI抗原的测试浓度与实际浓度的相对误差4.6％，相对标准偏差6.6％；结果表明本发明制备的同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器测试样品中的Myo抗原浓度和cTnI抗原浓度的相对误差较小，准确度较高。
4、特异性测试
为了评估本发明的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的特异性，我们选取人血清白蛋白(HSA)和人免疫球蛋白(IgG)作为干扰蛋白，分别测定空白溶液、HSA、IgG、Myo抗原、cTnI抗原、Myo抗原和cTnI抗原和HSA以及IgG混合溶液，测试方法为：以实施例一制得的光电化学生物传感器为工作电极，以铂丝作为辅助电极，以饱和银-氯化银电极作为参比电极，信号检测使用氙灯作为光源，电化学工作站作为检测装置，把偏置电压设置为-0.08V(即CdS/Au/ITO的临界电压)时，分别测试空白溶液、HSA、IgG、Myo抗原、Myo抗原和cTnI抗原和HSA以及IgG混合溶液的光电流响应，测试结果如图5A所示；把偏置电压设置为0.1V(即SnNb2O6/Au/ITO的临界电压)时，分别测试空白溶液、HSA、IgG、cTnI抗原、Myo抗原和cTnI抗原和HSA以及IgG混合溶液的光电流响应，测试结果如图5B所示；结果表明干扰蛋白HSA和IgG的光电流强度与空白溶液的光电流强度接近，干扰蛋白(HSA和IgG)与Myo抗原以及cTnI抗原的混合溶液的光电流强度与分别含有单一Myo抗原标志物或单一cTnI抗原标志物的光电流强度差别不大。结果表明，该光电化学生物传感器具有良好的特异性。
5、回收率测试
在已知Myo抗原浓度为24.5ng mL-1、cTnI抗原浓度为3.04ng mL-1的人血清样品中加入浓度为1.00ng mL-1的Myo抗原以及浓度为1.00ng mL-1的cTnI抗原，制得实验人血清样品，采用实施例一制得的光电化学生物传感器测试上述实验人血清样品，最终测得Myo抗原的浓度为25.4ng mL-1，相对标准偏差5.9％，回收率为90.0％；测得cTnI抗原的浓度为4.19ng mL-1，相对标准偏差5.8％，回收率为115.0％，结果表明本发明制备的光电化学生物传感器检测结果准确可靠、实用性较高。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）在ITO电极表面上沉积纳米金，得到Au/ITO电极；
2）在步骤1）得到的Au/ITO电极的两个不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极；
3）在步骤2）制得的修饰电极的CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域分别修饰戊二醛，然后在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体，得到同时检测Myo和cTnI双心肌标志物的光电化学生物传感器。
2.根据权利要求1所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述CdS纳米材料为CdS纳米线，所述SnNb2O6纳米材料为SnNb2O6纳米片。
3.根据权利要求1所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤2）中，在步骤1）得到的Au/ITO电极的两个不同区域内分别修饰CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料由包括以下步骤的方法制得：将CdS纳米材料和SnNb2O6纳米材料分别溶于壳聚糖溶液中，分别取CdS和壳聚糖混合溶液以及SnNb2O6和壳聚糖混合溶液滴加在Au/ITO电极表面的两个不同区域，55～65℃下烘干，得到同时含有CdS/Au/ITO区域和SnNb2O6/Au/ITO区域的修饰电极。
4.根据权利要求1所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤1）中，采用循环伏安法在ITO电极表面上沉积纳米金。
5.根据权利要求1所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3）中，Myo抗体的浓度为45～55µg/mL，cTnI抗体的浓度为45～55µg/mL。
6.根据权利要求3所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖溶液的浓度为0.08～0.11mg/mL。
7.根据权利要求1所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3）中，在CdS/Au/ITO区域上面滴加Myo抗体，在SnNb2O6/Au/ITO区域上面滴加cTnI抗体后，在3℃～5℃下孵育11～13小时。
8.根据权利要求1所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3）中，Myo抗体的浓度为50µg/mL，cTnI抗体的浓度为50µg/mL。
9.根据权利要求3所述的用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述CdS和壳聚糖混合溶液中，CdS的浓度为0.5～1.5mg/mL，SnNb2O6和壳聚糖混合溶液中，SnNb2O6的浓度为0.5～1.5mg/mL。
10.一种用于同时检测双心肌标志物的光电化学生物传感器，采用权利要求1-9任一项所述的的制备方法制得。
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