CN111909176A - 一种从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8‑丙基类似物的方法。该方法包括将他克莫司分离废液回收，他克莫司纯化废液中的组分主要为他克莫司、子囊霉素、他克莫司8丙基类似物，通过浓缩挂柱富集废液中的有效成分，银离子硅胶分离将他克莫司组分和子囊霉素、他克莫司8丙基类似物混合组分分离，再由反相填料将子囊霉素、他克莫司8丙基类似物混合组分进行精细纯化，得到高纯度的子囊霉素、他克莫司8‑丙基类似物的单体。本发明具有能够将他克莫司废液中的组分进行充分的回收利用，并且操作程序简单，方法稳定，重现性好的效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学制药技术领域，特别涉及一种从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法。
背景技术
他克莫司又名FK506，是从链霉菌属中分离出的发酵产物，其化学结构属23元大环内酯类抗生素。为一种强力的新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2(L-2)的释放，全面抑制T淋巴细胞的作用，较环孢素(CsA)强100倍。近年来、作为肝、肾移植的一线用药，已在美国、日本等多个国家上市。临床试验表明，其在心、肺、肠、骨髓等移植中有很好的疗效。
他克莫司是一种新型强效的大环内酯类免疫抑制剂，1991日本开发的普乐可复他克莫司胶囊剂和注射剂正式上市，用于原发性肝移植和肾移植的排斥反应治疗，后又被批准用于骨髓乙酯。目前他克莫司制剂已在中国、日本、美国等多个国家上市，广泛应用于干燥、胰脏、肾脏、心脏、和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。
他克莫司通常从发酵液中分离提取得到。为了保证用药安全，在仿制药的研制和生产中，应当对药物杂质进行检测研究，从而提高药品质量，减少药物的不良反应。由于他克莫司的生产主要是通过发酵，会存在很多杂质，子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物就是其中最主要存在的杂质。
目前，对采用发酵法制备他克莫司所制得的发酵液进行分离纯化，以及伴生杂质子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物的分离，是一个热门课题。在进行他克莫司的分离的时候，往往需要对色谱峰进行阶段性切割收集，切割之后的废液其中子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物的含量随之上升，废液也就再无他用，浪费了其中还存在的他克莫司有效组分，以及子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物。
有鉴于此，有必要对现有技术中的废液进行处理回收，同时将子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物分离出来，以提高产品利用度和用药安全性。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供了一种从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，步骤如下：
S1，取他克莫司分离废液，浓缩后过大孔树脂富集，用醇或酮类溶剂解析，解析液浓缩后用酯类溶剂萃取；
S2，萃取后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为醇类和酯类的混合溶液，收集子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物分离段，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分回收液；
S3，子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分回收液过反相C18填料进行制备纯化，流动相为乙腈水溶液，收集子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物各自的主峰段；
S4，主峰段纯化液浓缩结晶，过滤，真空干燥，得到最终的杂质单体。
在一些实施方式中，其步骤S1中，将含他克莫司的废液浓缩液，过HP20、SP207或D1300等大孔树脂，然后用溶剂将组分解析下来，将所得解析液真空浓缩，用酯类萃取浓缩液，将回收液处理成酯溶液。
在一些实施方式中，其步骤S2中，酯相萃取液过银离子键合硅胶，流动相为甲醇或乙醇和乙酸乙酯的混合液，比例为甲醇/乙醇：乙酸乙酯＝40:60～60:40，收集子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物的混合段。
在一些实施方式中，步骤S3中，所述流动相比例为40～70％的乙腈水溶液。
在一些实施方式中，其步骤S4中，所述浓缩温度为30～60℃，结晶温度为0～5℃，干燥温度为30～50℃。
在一些实施方式中，S1中溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
在一些实施方式中，其步骤S2中，流动相流速为0.5～1.5BV/h。
在一些实施方式中，步骤S3中，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流速为100～300ml/min。
本发明的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其有益效果是，该方法能够将他克莫司废液中的组分进行充分的回收利用，并且操作程序简单，方法稳定，重现性好。
附图说明
图1他克莫司杂质分布分析图；
图2他克莫司杂质银离子硅胶分离制备图；
图3他克莫司杂质C18分离制备图；
图4他克莫司杂质子囊霉素产品分析图；
图5他克莫司杂质他克莫司8-丙基类似物产品分析图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
取他克莫司分离后废液，浓缩后过HP20树脂富集，用乙醇解析，解析液浓缩后用乙酸乙酯萃取脱水。可见，附图1为他克莫司杂质分布分析图。
脱水后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为甲醇：乙酸乙酯＝60:40，流速为0.5BV/h，收集杂质峰，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分。可见，附图2为他克莫司杂质银离子硅胶分离制备图。
将混合组分通过C18制备纯化，可见，附图3为他克莫司杂质C18分离制备图，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流动相为40％乙腈，流速为250ml/min，分别收集子囊霉素主峰和他克莫司8-丙基类似物主峰。
将子囊霉素纯化液和他克莫司8-丙基类似物纯化液，各自在30℃浓缩，5℃冷却结晶，在30℃干燥，最终得子囊霉素1.2g，他克莫司8-丙基类似物2.1g。附图4,5分别为他克莫司杂质子囊霉素产品分析图和他克莫司杂质他克莫司8-丙基类似物产品分析图。
实施例2
取他克莫司分离后废液，浓缩后过sp207树脂富集，用甲醇解析，解析液浓缩后用乙酸丁酯萃取脱水。
脱水后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为甲醇：乙酸乙酯＝50:50，流速为1BV/h，收集杂质峰，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分。
将混合组分通过C18制备纯化，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流动相为45％乙腈，流速为150ml/min，分别收集子囊霉素主峰和他克莫司8-丙基类似物主峰。
将子囊霉素纯化液和他克莫司8-丙基类似物纯化液，各自在40℃浓缩，4℃冷却结晶，在40℃干燥，最终得子囊霉素1.3g，他克莫司8-丙基类似物2.3g。
实施例3
取他克莫司分离后废液，浓缩后过HP20树脂富集，用丙酮解析，解析液浓缩后用乙酸乙酯萃取脱水。
脱水后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为甲醇：乙酸乙酯＝45:55，流速为1BV/h，收集杂质峰，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分。
将混合组分通过C18制备纯化，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流动相为60％乙腈，流速为100ml/min，分别收集子囊霉素主峰和他克莫司8-丙基类似物主峰。
将子囊霉素纯化液和他克莫司8-丙基类似物纯化液，各自在40℃浓缩，5℃冷却结晶，在35℃干燥，最终得子囊霉素1.1g，他克莫司8-丙基类似物2.4g。
实施例4
取他克莫司分离后废液，浓缩后过D1300树脂富集，用乙醇解析，解析液浓缩后用乙酸丁酯萃取脱水。
脱水后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为甲醇：乙酸乙酯＝55:45，流速为0.5BV/h，收集杂质峰，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分。
将混合组分通过C18制备纯化，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流动相为55％乙腈，流速为200ml/min，分别收集子囊霉素主峰和他克莫司8-丙基类似物主峰。
将子囊霉素纯化液和他克莫司8-丙基类似物纯化液，各自在30℃浓缩，5℃冷却结晶，在30℃干燥，最终得子囊霉素1.2g，他克莫司8-丙基类似物2.1g。
实施例5
取他克莫司分离后废液，浓缩后过SP207树脂富集，用丙酮解析，解析液浓缩后用乙酸乙酯萃取脱水。
脱水后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为甲醇：乙酸乙酯＝40:60，流速为1.5BV/h，收集杂质峰，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分。
将混合组分通过C18制备纯化，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流动相为40％乙腈，流速为300ml/min，分别收集子囊霉素主峰和他克莫司8-丙基类似物主峰。
将子囊霉素纯化液和他克莫司8-丙基类似物纯化液，各自在50℃浓缩，0℃冷却结晶，在50℃干燥，最终得子囊霉素1.1g，他克莫司8-丙基类似物1.9g。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，步骤如下：
S1，取他克莫司分离废液，浓缩后过大孔树脂富集，用醇或酮类溶剂解析，解析液浓缩后用酯类溶剂萃取；
S2，萃取后酯溶液样品过银离子键合硅胶，流动相为醇类和酯类的混合溶液，收集子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物分离段，得到子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分回收液；
S3，子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物混合组分回收液过反相C18填料进行制备纯化，流动相为乙腈水溶液，收集子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物各自的主峰段；
S4，主峰段纯化液浓缩结晶，过滤，真空干燥，得到最终的杂质单体。
2.根据权利要求1所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，其步骤S1中，将含他克莫司的废液浓缩液，过HP20、SP207或D1300等大孔树脂，然后用溶剂将组分解析下来，将所得解析液真空浓缩，用酯类萃取浓缩液，将回收液处理成酯溶液。
3.根据权利要求2所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，其步骤S2中，酯相萃取液过银离子键合硅胶，流动相为甲醇或乙醇和乙酸乙酯的混合液，比例为甲醇/乙醇：乙酸乙酯＝40:60～60:40，收集子囊霉素和他克莫司8-丙基类似物的混合段。
4.根据权利要求1所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，步骤S3中，所述流动相比例为40～70％的乙腈水溶液。
5.根据权利要求1所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，其步骤S4中，所述浓缩温度为30～60℃，结晶温度为0～5℃，干燥温度为30～50℃。
6.根据权利要求2所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，S1中溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
7.根据权利要求2所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，其步骤S2中，流动相流速为0.5～1.5BV/h。
8.根据权利要求4所述的从他克莫司分离废液中回收子囊霉素、他克莫司8-丙基类似物的方法，其特征在于，步骤S3中，制备柱为100mm*250mm高压制备柱，流速为100～300ml/min。
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