CN111802247A

CN111802247A - 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法

Info

Publication number: CN111802247A
Application number: CN202010712527.2A
Authority: CN
Inventors: 欧静; 徐晨捷
Original assignee: Guizhou University
Current assignee: Guizhou University
Priority date: 2020-07-22
Filing date: 2020-07-22
Publication date: 2020-10-23
Anticipated expiration: 2040-07-22
Also published as: CN111802247B

Abstract

本发明公开了一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，该方法包括步骤为：山樱花种胚外植体的获得、山樱花种胚外植体的诱导培养、山樱花丛生芽的增殖培养、山樱花的生根培养、山樱花组培苗的炼苗和移栽，其中诱导培养时按本发明的方法处理外植体，诱导培养（MS+6‑BA1.0‑2.0mg/L+NAA或IBA0.1‑0.2mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L）、增殖培养（MS+6‑BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L）、生根培养（1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L）中使用本发明配制的培养基，短期内即可获得大量生长活力强，生根容易，健壮抗逆的幼苗，且长势整齐一致，质量高，栽培管理较容易。利用本发明获得的组培苗，对湿热环境适应能力强，其茎干挺立，生产周期缩短50‑60d，产量增加30%‑50%。

Description

一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法

技术领域

本发明属于山樱花的组织培养技术领域，涉及一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法。

背景技术

樱花，一般用于泛指的是用于观赏的樱属植物品种或蔷薇科李亚科樱属植物的花朵统称。樱花一直以来的传统的繁殖方法主要是扦插、嫁接，但这些繁殖方法一方面需要大量的母株，另方面还需花费大量人力、物力、财力、时间等，且繁殖系数低，成苗慢。山樱花主要的繁殖方法是播种，但由于种子具有坚硬的外种皮，播种不易发芽，山樱花扦插、嫁接都难以成活。随着樱花在城市和乡镇园林绿化建设中的广泛应用，加之近几年“赏樱热”的升温，市场对樱属植物种苗的需求逐渐增加。因此，传统的繁殖方法已远远不能满足生产上的需要。

随着现代生物技术的发展，人们利用植物细胞的全能性，在人工控制的环境中，可以利用植物的茎尖、茎段、叶片等外植体诱导成小植株，这就是植物组织培养技术。植物组织苗具有根系发达，生长健壮，抗性增强，管理粗放，降低生产成本等特点。组织培养技术不仅具有繁殖系数大、成苗周期短的优点，而且能够保持亲本优良遗传性状的稳定性，为樱花快速繁殖和工业化生产提供了一条有效的途径。

近年来樱花的组培快繁技术日益受到人们的关注，并开展了广泛的研究，

目前，每当春天樱花盛开之季，各地樱花公园的游人如织，形成了独特的“赏樱游”并催生了“樱花经济”，可见樱花在国内园林绿化中的地位十分重要，因此生产上迫切需要探讨出一种外植体萌芽率高、增殖系数大、生根率好的樱花快速繁殖技术，推动我国樱花产业化发展。

山樱花常规播种出苗率极低，且生长速度较慢。加上再生能力差，扦插、嫁接难以成活。而利用植物的离体器官、组织、细胞和原生质体等在人工控制的条件下进行组织培养，在短时间内即可得到大量苗木。

文献“山樱花组培快繁技术研究（李晓玲，卢绪志，边震等。林业科技，2014，39(5)）”中关于山樱花的组织培养研究选择的外植体是带芽茎段，但山樱花树形高大，以茎段为外植体时采集材料困难，并且随着时间的推移，茎段木质化后，污染率高，褐化率高，导致诱导率降低。而选择种胚为外植体，采集种子简单，前期处理方便，污染率低，诱导率高，并且可以直接得到丛生芽。文献“山樱花高海拔居群生态学特征及组织培养（李蒙。南京林业大学，2013）”采用已有的以种子为外植体的实验中，存在诱导率低，污染率高，增殖率低的问题。

中国专利申请（申请号为2018108515447）提供了一种山樱花组培快繁方法，该方法以带休眠腋芽的嫩枝条为外植体材料，发现冬芽全部污染；该方法以茎段为外植体，在灭菌前需要进行刷洗、流水冲洗处理，容易造成资源浪费。该方法在增殖培养中，以组培苗的新萌发侧芽多次继代，但多次继代会导致苗木品质退化，抗性降低，病虫害严重等。中国专利申请（申请号为2018103214513）提供了一种福建山樱花的不定芽再生方法，该方法仅以子叶为外植体进行了不定芽诱导，诱导率低（约70%），诱导周期长（30-40d），育苗效率不高。并且未进行增殖，实际应用潜力不强。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，以解决山樱花繁殖速度慢，生产成本高的问题，达到缩短生产周期，降低成本的目的。

本发明采取的技术方案为：一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，该方法包括以下步骤：

（1）山樱花种胚外植体的获得：采集山樱花当年结实的果实，在水中搓洗掉果肉，晾干后破壳，经消毒、无菌水冲洗后，去除子叶，留种胚待用；

（2）山樱花种胚外植体的诱导培养：将处理后的种胚接种在诱导培养基中培养，最快3d，即有萌发，3周后普遍萌发，形成小芽，诱导培养基成分为：MS+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA或IBA0.1-0.2mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L，pH5.6-5.8；

（3）山樱花丛生芽的增殖培养：将由种胚形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，最快10d即有侧芽萌发，3-4周后形成丛生芽，增殖培养基成分为：MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L，pH5.6-5.8；

（4）山樱花的生根培养：将丛生芽生发出的单芽切割移栽在生根培养基中进行培养，生根培养基成分为：1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L，pH5.6-5.8；

（5）山樱花组培苗的炼苗和移栽：常温下炼苗3-5d后，移栽入基质中培养4-5周，即获得樱花的快速繁殖苗。

步骤（1）中山樱花种胚外植体的获得的具体方法为：春末结实期选择生长健壮、无病害和虫害的植株，采集成熟，完整无虫蛀的果实，带回室内，用水搓洗，去除果肉后置于阴凉通风处晾干，晾干后破除种壳，再在超净工作台上用75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗两次后用2%的次氯酸钠浸泡5min，无菌水涮洗5次以上，处理后在无菌水中浸泡过夜。

步骤（2）中诱导培养基、步骤（3）中增殖培养基、步骤（4）中生根培养基配制好后均用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。

步骤（2）、步骤（3）、步骤（4）的培养条件均为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx，培养温度24-26℃。

步骤（5）中山樱花组培苗的炼苗和移栽的具体方法为：将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3-5d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙混合而成的基质中培养4-5周，即获得樱花的快速繁殖苗。

步骤（5）中基质采用无菌泥炭、无菌蛭石和无菌河沙混合而成，无菌泥炭、无菌蛭石和无菌河沙混合的体积比2：1：1。

本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明的效果如下：

（1）现行方法以茎段为外植体时，灭菌前需要进行刷洗及流水冲洗等处理，费时费力，还造成水资源的浪费，且污染率无法控制在较低水平，与茎段外植体相比，种胚外植体处理过程简单，省略了如刷洗，流水冲洗等步骤，节省了部分人力，物力并且污染率极低；

（2）现有技术多选择以茎段作为外植体，但山樱花树形高大，采集材料困难；以种胚为外植体，采集方便，种子保存得当可实现周年生产；种子采回后洗净晾干备用，避免了多次采枝造成的人力物力损耗，；

（3）通过消毒和无菌水冲洗的灭菌处理，可将污染率控制在1%以下，从而提升诱导率，且以种胚为外植体，原材料来源广，避免了多次继代带来的苗木生长力下降的影响；

（4）相比茎段外植体，以种胚为外植体配合对应的诱导培养基以及适宜的pH，诱导率高，成苗周期短，并且可以直接得到丛生芽，极大提高育苗效率；

（5）以诱导出的小芽为材料，进行以芽繁芽，配合对应的增殖培养基，繁殖系数高，增殖所需时间短；

（6）将丛生芽生发出的单芽生根，配合对应的生根培养基，生根快，长势好，成活率高。对实现樱花的规范化种植，为樱花的现代化生产得到高产量、优品质的山樱花苗木起到关键性的作用，具有较好的市场应用前景。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明进行进一步介绍。

实施例1：一种山樱花组织培养和快速繁殖方法的步骤为：

（1）山樱花种胚外植体的获得：

采集山樱花当年结实的果实，春末结实期选择生长健壮、无病害和虫害的植株，采集成熟，完整无虫蛀的果实，带回室内，用水搓洗，去除果肉后置于阴凉通风处晾干。晾干后破除种壳，再在超净工作台上用75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗两次后用2%的次氯酸钠浸泡5min，无菌水涮洗5次以上，处理后在无菌水中浸泡过夜。次日将消毒好的材料放入无菌的培养皿内，用滤纸吸干多余的水分，用手术刀将种子切开，去除子叶，留种胚待用；

（2）山樱花种胚外植体的诱导培养：

在接种前，先将种胚的前端切除，再将处理后的种胚接种在诱导培养基中培养，诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、IBA0.1mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快3d即有萌发，3周后普遍萌发，形成小芽，萌芽率为86.02%。

（3）山樱花丛生芽的增殖培养：

将由种胚形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、IBA0.05mg、NAA0.05mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选pH5.6）。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快10d即有侧芽萌发，3-4周后形成丛生芽，增殖系数为5.67。

（4）山樱花的生根培养：

将丛生芽切割的单芽在生根培养基培养一周，长出良好的根系所述生根培养基成分为：1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，即在1000ml1/2MS培养基加入IBA0.8mg、NAA0.1mg、AC0.5g、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃，生根率为96.77%。

（5）山樱花组培苗的炼苗和移栽：

将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3-5d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙混合而成的基质中（无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙体积比为2：1：1），基质先用水浸透，然后用塑料薄膜覆盖保湿，一周后打开薄膜，每天用喷雾器喷雾3-5次保证基质潮湿和较高空气湿度。培养4-5周有新根生出即移栽成活，移栽成活率为77．42%。

实施例2：一种山樱花组织培养和快速繁殖方法的步骤为：

（1）山樱花种胚外植体的获得：

（2）山樱花种胚外植体的诱导培养：

在接种前，先将种胚的前端切除，再将处理后的种胚接种在诱导培养基中培养，诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、NAA0.1mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快3d即有萌发，3周后普遍萌发，形成小芽，萌芽率为60.21%。

（3）山樱花丛生芽的增殖培养：

将由种胚形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、IBA0.05mg、NAA0.05mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选pH5.6）。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快10d即有侧芽萌发，3-4周后形成丛生芽，增殖系数为5.21。

（4）山樱花的生根培养：

将丛生芽切割的单芽在生根培养基培养一周，长出良好的根系所述生根培养基成分为：1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，即在1000ml1/2MS培养基加入IBA0.5mg、NAA0.1mg、AC0.5g、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃，生根率为82.41%。

（5）山樱花组培苗的炼苗和移栽：

将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3-5d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙混合而成的基质中（无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙体积比为2：1：1），基质先用水浸透，然后用塑料薄膜覆盖保湿，一周后打开薄膜，每天用喷雾器喷雾3-5次保证基质潮湿和较高空气湿度。培养4-5周有新根生出即移栽成活，移栽成活率为74.85%。

实施例3：一种山樱花组织培养和快速繁殖方法的步骤为：

（1）山樱花种胚外植体的获得：

（2）山樱花种胚外植体的诱导培养：

在接种前，先将种胚的前端切除，再将处理后的种胚接种在诱导培养基中培养，诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、IBA0.1mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快3d即有萌发，3周后普遍萌发，形成小芽，萌芽率为87.10%。

（3）山樱花丛生芽的增殖培养：

将由种胚形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、IBA0.05mg、NAA0.05mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选pH5.6）。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快10d即有侧芽萌发，3-4周后形成丛生芽，增殖系数为5.49。

（4）山樱花的生根培养：

将丛生芽切割的单芽在生根培养基培养一周，长出良好的根系所述生根培养基成分为：1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，即在1000ml1/2MS培养基加入IBA0.8mg、NAA0.1mg、AC0.5g、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃，生根率为87.78%。

（5）山樱花组培苗的炼苗和移栽：

将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3-5d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙混合而成的基质中（无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙体积比为2：1：1），基质先用水浸透，然后用塑料薄膜覆盖保湿，一周后打开薄膜，每天用喷雾器喷雾3-5次保证基质潮湿和较高空气湿度。培养4-5周有新根生出即移栽成活，移栽成活率为83.64%。

实施例4：一种山樱花组织培养和快速繁殖方法的步骤为：

（1）山樱花种胚外植体的获得：

（2）山樱花种胚外植体的诱导培养：

在接种前，先将种胚的前端切除，再将处理后的种胚接种在诱导培养基中培养，诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、NAA0.1mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快3d即有萌发，3周后普遍萌发，形成小芽，萌芽率为99.25%。

（3）山樱花丛生芽的增殖培养：

将由种胚形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，即在1000mlMS培养基加入6-BA2.0mg、IBA0.05mg、NAA0.05mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选pH5.6）。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃。最快10d即有侧芽萌发，3-4周后形成丛生芽，增殖系数为5.12。

（4）山樱花的生根培养：

将丛生芽切割的单芽在生根培养基培养一周，长出良好的根系所述生根培养基成分为：1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，即在1000ml1/2MS培养基加入IBA0.8mg、NAA0.1mg、AC0.5g、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH5.6-5.8（优选5.6）。培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。培养条件为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx（优选1600lx），培养温度24-26℃，生根率为92.46%。

（5）山樱花组培苗的炼苗和移栽：

将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3-5d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙混合而成的基质中（无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙体积比为2：1：1），基质先用水浸透，然后用塑料薄膜覆盖保湿，一周后打开薄膜，每天用喷雾器喷雾3-5次保证基质潮湿和较高空气湿度。培养4-5周有新根生出即移栽成活，移栽成活率为80.58%。

对照试验：采用文献“山樱花高海拔居群生态学特征及组织培养（李蒙.南京:南京林业大学，2013）”中的方法进行试验，在实验结果中可以看到如下区别：

（1）以种子纵切作为外植体接种于培养基中，最高时仅有70%的诱导率，并且平均污染率达到了12.50%。而按本发明的方法，萌发率最高可达99.25%，污染率不足1%；

（2）在增殖阶段，对照实验中最高仅取得了2.85的平均增殖率，而本发明中增殖率最高可以达到5.67，育苗效率将提升一倍。

（3）在生根阶段，对照实验中最高取得了93.40%的生根率，而本发明中将生根提高至96.77%。

通过山樱花的组织培养和快速繁殖获得的组培苗，对湿热环境适应能力强，其茎干挺立。跟国内外同类产品相比，本发明针对生产实际，选择种胚为外植体，污染率低，增殖系数高，生产周期短，在原材料充足的情况下可以实现周年生产，避免了传统的以茎段为外植体受到季节限制的情况。利用山樱花的组织培养苗为栽培材料，与传统的樱花生产中采用扦插等无性繁殖方法相比，具有较强抗病性、生长势旺、整齐一致等优点，有利于大规模种植获得健壮樱花幼苗。因此，在大规模樱花的生产中，该方法及由该方法获得的山樱花组培苗提高了山樱花生产的科技含量，具有较强的竞争力，对实现山樱花的规范化种植，为山樱花的现代化生产得到高产量、优品质的山樱花产品起到关键性的作用，具有较好的市场应用前景。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims

1.一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

（2）山樱花种胚外植体的诱导培养：将处理后的种胚接种在诱导培养基中培养，最快3d即有萌发，3周后普遍萌发，形成小芽，诱导培养基成分为：MS+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA或IBA0.1-0.2mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L，pH5.6-5.8；

2.根据权利要求1所述的一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中山樱花种胚外植体的获得的具体方法为：春末结实期选择生长健壮、无病害和虫害的植株，采集成熟，完整无虫蛀的果实，带回室内，用水搓洗，去除果肉后置于阴凉通风处晾干，晾干后破除种壳，再在超净工作台上用75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗两次后用2%的次氯酸钠浸泡5min，无菌水涮洗5次以上，处理后在无菌水中浸泡过夜。

3.根据权利要求1所述的一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：步骤（2）中诱导培养基、步骤（3）中增殖培养基、步骤（4）中生根培养基配制好后均用高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。

4.根据权利要求1所述的一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：步骤（2）、步骤（3）、步骤（4）的培养条件均为：日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1600-2200lx，培养温度24-26℃。

5.根据权利要求1所述的一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：步骤（5）中山樱花组培苗的炼苗和移栽的具体方法为：将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3-5d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由无菌泥炭、无菌蛭石、无菌河沙混合而成的基质中培养4-5周，即获得樱花的快速繁殖苗。

6.根据权利要求1或5所述的一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：步骤（5）中基质采用无菌泥炭、无菌蛭石和无菌河沙混合而成，无菌泥炭、无菌蛭石和无菌河沙混合的体积比2：1：1。