CN111084103A - 一种欧李组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种欧李组培快繁的方法，所述方法包括：欧李外植体经消毒处理之后进行接种，依次经过初代培养，继代培养和生根培养，然后进行炼苗处理，将生根苗移栽到炼苗基质中驯化，将移栽苗置于培养温度为22～28℃的环境中生长。采用本发明所述的方法，欧李的诱导培养的污染率低，同时有效防止组培苗褐化，降低了生产成本，诱导成活率高。炼苗时欧李成活率高，同时确保了欧李遗传性状的稳定，实现在短期内获得大量欧李组培苗木，对实现欧李组培产业化具有重要意义，因此具有良好的实际应用之价值。
Description
技术领域
本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种欧李组培快繁的方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
欧李(Cerasus humilis Bunge)为蔷薇科樱桃属多年生落叶矮小灌木，是我国特有的国宝级植物。核果，果实酷似樱桃，味似李子，酸甜可口，风味独特。欧李根系发达，能够耐受极端环境，保持水土，改良土壤，治理荒漠化，是调节生态环境的优良树种。由于其不可估量的营养价值，生态价值和社会价值，开发利用前景广阔。今后欧李的良种种苗会供不应求，苗木需求量会很大，这为工业化育苗提供了广阔的市场。
目前欧李主要采用播种，扦插，嫁接等方式进行繁殖，但繁殖系数低，生长周期长，同时容易受到外界环境的影响，受到根癌病等一系列病虫害威胁。近年来，已培育出一批优良欧李品种，但传统的繁殖方式已不能满足其良种推广对种苗的需要，而采用组培快繁的方法，繁殖系数高，可以在任意生长阶段进行选材扩繁，对欧李优良品种的选育和工厂化育苗提供了便利的条件。本发明以欧李的顶芽为外植体，经过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了欧李再生体系植株，建立了欧李再生体系，为今后工厂化育苗及驯化栽培奠定坚实的基础。
而组培技术经过多年研究，没有成功解决欧李组培苗的炼苗问题，即使完成芽的增殖培养和生根培养，炼苗移栽环节还会失败。欧李炼苗驯化移栽和诱导培养污染率高成为欧李组培是否成功的两个生产问题。另外，欧李的叶片再生常使种苗发生遗传变异而使母株本身的优良性状发生改变。
发明内容
针对现有技术中欧李组培诱导阶段污染率高，遗传性状不稳定，移栽成活率低的问题，本发明提供一种欧李组培快繁方法。本发明以欧李的部分器官作为外植体，经过诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽等步骤获得了欧李离体再生植株，建立了欧李再生体系，具有良好的实际应用之价值。
本发明采用如下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种欧李组培快繁方法，所述方法包括：
欧李外植体经消毒处理之后进行接种，依次经过初代培养，继代培养和生根培养，然后进行炼苗处理，将生根苗移栽到炼苗基质中驯化，将移栽苗置于培养温度为22～28℃的环境中生长。
其中，所述欧李外植体为顶芽、茎段或欧李成熟胚中的任意一个；
所述顶芽为含有一个分生组织的茎尖和几个(如1～3个)未发育的叶原基，茎段上的侧芽可以有1至多个(如2～3个)腋芽分生组织。
所述消毒处理具体为将外植体依次使用0.1～0.5％高锰酸钾、75％酒精、0.1％的升汞+0.05％～0.1％的吐温80进行处理；
所述初代培养的具体方法为：将经消毒处理的外植体接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导，每天光照12～16小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％；培养时间为20～25天；
所述诱导培养基各组分与含量分别为：MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L。
所述继代培养的具体方法为：将初代培养获得的芽丛小枝剪切成单个小枝接种于增殖培养基进行继代增殖培养，以获得更多的萌条；每天光照时间14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，培养时间为25～30天；
所述增殖培养基各组分与含量分别为：MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L。
所述生根培养的具体方法为：选取增殖苗接种至生根盒，生根盒内含有已消毒蛭石和营养液，每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为80％～95％的条件，培养室里面的二氧化碳浓度为1000～1200ppm，培养时间为25～30天。
其中，选取的增殖苗健壮且长势相对一致。
所述生根盒优选为扣合式透明塑料盒，长30厘米，宽23厘米，高11厘米。
生根盒内营养液各组分与含量分别为：1/2MS(不含有机)+NAA0.2mg/L。
所述炼苗具体方法为：将生根苗移栽至混合基质中驯化培养，炼苗前期做遮阴处理，进一步优选遮阴处理为将已经移栽生根苗的混合基质置于穴盘内培养；
其中，所述混合基质优选为草炭土:珍珠岩＝1:2(w/w)，采用上述混合基质，有利于提高幼苗的生存能力，提高其成活率。
本发明的有益技术效果：
采用本发明所述的方法，欧李的诱导培养的污染率低，同时有效防止组培苗褐化，降低了生产成本，诱导成活率高。炼苗时欧李成活率高，同时确保了欧李遗传性状的稳定，实现在短期内获得大量欧李组培苗木，对实现欧李组培产业化具有重要意义。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
如前所述，欧李炼苗驯化移栽和诱导培养污染率高成为欧李组培是否成功的两个生产问题。另外，欧李的叶片再生常使种苗发生遗传变异而使母株本身的优良性状发生改变。
有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供一种欧李组培快繁方法，所述方法包括：
欧李外植体经消毒处理之后进行接种，依次经过初代培养，继代培养和生根培养，然后进行炼苗处理，将生根苗移栽到炼苗基质中驯化，将移栽苗置于培养温度为22～28℃的环境中生长。
本发明的又一具体实施方式中，所述欧李外植体为顶芽、茎段或欧李成熟胚中的任意一个；
本发明的又一具体实施方式中，所述顶芽为含有一个分生组织的茎尖和几个(如1～3个)未发育的叶原基，茎段上的侧芽可以有1至多个(如2～3个)腋芽分生组织。
本发明的又一具体实施方式中，所述消毒处理具体为将外植体依次使用0.1～0.5％高锰酸钾、75％酒精、0.1％的升汞+0.05％～0.1％的吐温80进行处理；
本发明的又一具体实施方式中，所述消毒处理方法为：采用0.1％的高锰酸钾处理2分钟，75％的酒精处理30秒，0.1％的升汞+0.1％的吐温80处理3分钟；通过控制消毒剂使用顺序，使用浓度和消毒处理时间，可以有效提高消毒效果，降低污染率，提高欧李萌发率。
本发明的又一具体实施方式中，所述初代培养的具体方法为：将经消毒处理的外植体接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导，每天光照12～16小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％；培养时间为20～25天；
所述诱导培养基各组分与含量分别为：MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L。
本发明的又一具体实施方式中，所述继代培养的具体方法为：将初代培养获得的芽丛小枝剪切成单个小枝接种于增殖培养基进行继代增殖培养，以获得更多的萌条；每天光照时间14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，培养时间为25～30天；
所述增殖培养基各组分与含量分别为：MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L。
本发明的又一具体实施方式中，所述生根培养的具体方法为：选取增殖苗接种至有营养液和蛭石的生根盒，每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为80％～95％，二氧化碳浓度为1000～1200ppm的条件，培养时间为25～30天。
其中，选取的增殖苗健壮且长势相对一致。
营养液各组分与含量分别为：1/2MS(不含有机)+NAA0.2mg/L。
本发明的又一具体实施方式中，所述炼苗具体方法为：将生根苗移栽至混合基质中驯化培养，炼苗前期做遮阴处理，进一步优选遮阴处理为将已经移栽生根苗的混合基质置于穴盘内培养；
其中，所述混合基质优选为草炭土:珍珠岩＝1:2(w/w)，采用上述混合基质，有利于提高幼苗的生存能力，提高其成活率。
本发明的又一具体实施方式中，对于未生根苗，进行进一步处理：具体可采用生根药剂配制药液速蘸促其生根或者滤纸桥生根。生根药剂可以是吲哚丁酸、萘乙酸等植物激素，也可以是ABT系列、GGR等复合型生根剂。
需要说明的是，上述“将移栽苗置于培养温度为22～28℃的环境中生长”中，所述环境可以是利用第二代日光温室，及其内部的供温系统、供水系统所调控的环境。
还可以是塑料大棚及其内部设施所调控的环境。虽然与温室相比，大棚调控环境的能力差，但是管理方便，可配备环境调控设施。
同时，计算机控制的智能化环境也是可以的。智能化的环境下，组培苗可以达到光合自养过程的最大化。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
(1)外植体选择：于连续3天晴朗的天气上午9:30，在健壮，无病虫害的母株上采集嫩芽。
(2)消毒处理：将嫩芽置于0.1％高锰酸钾浸泡2分钟后，放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2小时，然后将冲洗过的顶芽带入超净工作台，首先用75％的酒精消毒30秒后，用无菌水漂洗2次，再用0.1％的升汞+0.1％的吐温80消毒4分钟，最后用无菌水冲洗5次；
(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的接种盘上，用解剖刀将嫩芽周围的叶片去掉，然后将去掉叶片的顶芽接入初代培养基，每瓶接一个顶芽；
(4)诱导培养：初代的光照时间为12小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％，25天以后转接，20天后，诱导成活率为95.2％，污染率为1.6％；
(5)增殖培养：将顶芽诱导得到的芽丛小枝剪切成单个小枝并接种到增殖培养基，置于光照时间12小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，30天后转接；
(6)生根培养：选取健壮、生长势相对一致的增殖苗接种至盛有事先洒上营养液的蛭石的生根盒，置于光照时间16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为80％～95％，二氧化碳浓度为1000～1200ppm的环境中进行生根培养，30天后出苗；
(7)炼苗移栽：选取经过步骤(6)以后，将生根盒搬出实验室，选择根系发达的生根苗进行移栽，移栽到事先浇透由草炭土:珍珠岩＝1:2组成的混合基质中，基质盛装在穴盘内。对未生根苗使用浓度为1.0g/LNAA的速蘸处理之后，栽到基质里。20天后移栽成活率为96.8％。
日光温室内，利用负压风机，降温水帘，智能温控水电暖气，维持环境温度为22～28℃。
实施例2
(1)外植体选择：于连续3天晴朗的天气上午9:00，在健壮，无病虫害的母株上采集枝条。
(2)消毒处理：将枝条除去叶片，剪成3～4厘米长的茎段，置于0.1％高锰酸钾浸泡2分钟后，放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2小时，然后将冲洗过的茎段带入超净工作台，首先用75％的酒精消毒30秒后，用无菌水漂洗2次，再用0.1％的升汞+0.1％的吐温80消毒4分钟，最后用无菌水冲洗5次；
(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的接种盘上，用解剖刀将茎段剪成1-2cm并带有单个腋芽的小段，然后将小段接入初代培养基，每瓶接一个小段；
(4)诱导培养：初代的光照时间为12小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％，25天后转接，20天后，诱导成活率为98.7％，污染率为3.1％；
(5)增殖培养：将茎段诱导得到的芽丛小枝剪切成单个小枝并接种到增殖培养基，置于光照时间16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，30天后转接；
(6)生根培养：选取健壮、生长势相对一致的增殖苗接种至盛有事先洒上营养液的蛭石的生根盒，置于光照时间14小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为80％～95％，二氧化碳浓度为1000～1200ppm的环境中进行生根培养，30天后出苗；
(7)炼苗移栽：选取经步骤(6)以后，将生根盒搬出实验室，选择根系发达的组培苗进行移栽，移栽到事先浇透由草炭土:珍珠岩＝1:2组成的混合基质中，基质盛装在穴盘内。对未生根苗使用浓度为1.0g/LNAA的速蘸处理之后，栽到基质里。20天后，移栽成活率为98.4％。
日光温室内，利用负压风机，降温水帘，智能温控水电暖气，维持环境温度为22～28℃。
实施例3
(1)外植体选择：将欧李种子去除残留的果肉，敲开种皮，用手掰开，选择带有胚芽的那一半带回实验室。
(2)消毒处理：将种子用0.1％的高锰酸钾消毒2分钟，带入超净工作台，用75％的酒精消毒30秒后，用无菌水漂洗2次，再用0.1％的升汞+0.1％的吐温80消毒3分钟，最后用无菌水冲洗5次；
(3)接种：将消毒好的胚放在铺有无菌滤纸的接种盘上，用解剖刀将子叶去掉，然后将去掉子叶的胚接入初代培养基，每瓶接一个胚；
(4)诱导培养：初代光照时间时间12小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％，25天后转接，20天后，诱导成活率100％，污染率为2.5％；
(5)增殖培养：将胚诱导得到的芽丛小枝剪切成单个小枝并接种到增殖培养基，置于光照时间14小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，30天后转接；
(6)生根培养：选取健壮、生长势相对一致的增殖苗接种至盛有事先洒上营养液的蛭石的生根盒，置于光照时间15小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为80％～95％，二氧化碳浓度为1000～1200ppm的环境中进行生根培养，30天后出苗；
(7)炼苗移栽：选取经步骤(6)以后，将生根盒搬出实验室，选择根系发达的组培苗进行移栽，移栽到事先浇透由草炭土:珍珠岩＝1:2组成的混合基质中，基质盛装在穴盘内。对未生根苗使用浓度为1.0g/LNAA的速蘸处理之后，栽到基质里。20天后移栽成活率为95.1％。
日光温室内，利用负压风机，降温水帘，智能温控水电暖气，维持环境温度为22～28℃。
对比例1
(1)外植体选择：于连续3天晴朗的天气上午9:30，在健壮，无病虫害的母株上采集嫩芽。
(2)消毒处理：将嫩芽置于0.1％高锰酸钾浸泡2分钟后，放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2小时，然后将冲洗过的顶芽带入超净工作台，首先用75％的酒精消毒30秒后，用无菌水漂洗2次，再用0.1％的升汞+0.1％的吐温80消毒4分钟，最后用无菌水冲洗5次；
(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的接种盘上，用解剖刀将嫩芽周围的叶片去掉，然后将去掉叶片的顶芽接入初代培养基，每瓶接一个顶芽；
(4)诱导培养：初代的光照时间为12小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％，25天后转接，诱导成活率为91.4％，污染率为0；
(5)增殖培养：将顶芽诱导得到的芽丛小枝剪切成单个小枝并接种到增殖培养基，置于光照时间12小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，25天后转接；
(6)生根培养：选取健壮、生长势相对一致的增殖苗接种至生根培养基，置于光照时间16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行生根培养，30天后出苗；
(7)炼苗移栽：选取经过步骤(6)以后，将瓶苗搬出实验室，在温室内进行7天的不开盖炼苗和3天的开盖炼苗，之后选择根系发达的生根苗进行移栽，洗去组培苗基部附着的琼脂，之后将其移栽到事先浇透由草炭土:珍珠岩＝1:2组成的混合基质中，基质盛装在穴盘内，放在以塑料膜和竹劈子搭建的小拱棚内，使用喷雾器向小苗进行喷雾，保证棚内空气相对湿度达100％，之后逐渐掀膜通风透光并注意棚内的湿度。对未生根苗使用浓度为1.0g/LNAA的速蘸处理之后，栽到基质里。20天后移栽成活率为50％。
日光温室内，利用负压风机，降温水帘，智能温控水电暖气，维持环境温度为22～28℃。
对比例2
(1)外植体选择：于连续3天晴朗的天气上午10:30，在健壮，无病虫害的母株上采集嫩芽。
(2)消毒处理：将嫩芽置于放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2小时，然后将冲洗过的顶芽带入超净工作台，首先用75％的酒精消毒30秒后，用无菌水漂洗2次，再用0.1％的升汞+0.1％的吐温80消毒4分钟，最后用无菌水冲洗5次；
(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的接种盘上，用解剖刀将嫩芽周围的叶片去掉，然后将去掉叶片的顶芽接入初代培养基，每瓶接一个顶芽；
(4)诱导培养：初代的光照时间为12小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％，25天后转接，20天后诱导成活率为89.5％，污染率为22.3％；
(5)增殖培养：将顶芽诱导得到的芽丛小枝剪切成单个小枝并接种到增殖培养基，置于光照时间12小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，30天后转接；
(6)生根培养：选取健壮、生长势相对一致的继代苗接种至生根培养基，置于光照时间16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行生根培养，30天后出苗；
(7)炼苗移栽：选取经过步骤(6)以后，将瓶苗搬出实验室，在温室内进行7天的不开盖炼苗和3天的开盖炼苗，之后选择根系发达的生根苗进行移栽，洗去组培苗基部附着的琼脂，而后将其移栽到事先浇透由草炭土:珍珠岩＝1:2组成的混合基质中，基质盛装在穴盘内。对未生根苗使用浓度为1.0g/LNAA的速蘸处理之后，栽到基质里。当小苗叶片增大，有新叶长出时，打开盒盖进行敞口驯化。20天后移栽成活率为72.5％。
日光温室内，利用负压风机，降温水帘，智能温控水电暖气，维持环境温度为22～28℃。
对比例3
(1)外植体选择：于连续3天晴朗的天气上午9:00，在健壮，无病虫害的母株上采集枝条。
(2)消毒处理：将枝条用手掐去叶片，剪成3～4厘米长的茎段，放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2小时，然后将冲洗过的茎段带入超净工作台，首先用75％的酒精消毒30秒后，用无菌水漂洗2次，再用0.1％的升汞消毒4分钟，最后用无菌水冲洗5次；
(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的接种盘上，用接种剪将茎段剪成2cm带有单个腋芽的小段，然后将小段接入初代培养基，每瓶接一个小段；
(4)诱导培养：初代的光照时间为12小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％，25天后转接，20天后诱导成活率为87.1％，污染率为56.9％；
(5)增殖培养：将茎段诱导得到的芽丛小枝剪切成单个小枝并接种到增殖培养基，置于光照时间16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，30天后转接；
(6)生根培养：选取健壮、生长势相对一致的继代苗接种至生根培养基，置于光照时间14小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行生根培养，30天后出苗；
(7)炼苗移栽：选取经过步骤(6)以后，将瓶苗搬出实验室，在温室内进行7天的不开盖炼苗和3天的开盖炼苗，之后选择根系发达的生根苗进行移栽，洗去组培苗基部附着的琼脂，而后将其移栽到事先浇透由草炭土:珍珠岩＝1:2组成的混合基质中，基质盛装在穴盘内。对未生根苗使用浓度为1.0g/LNAA的速蘸处理之后，栽到基质里。当小苗叶片增大，有新叶长出时，打开盒盖进行敞口驯化。20天后移栽成活率为46.2％。
日光温室内，利用负压风机，降温水帘，智能温控水电暖气，维持环境温度为22～28℃。
统计实施例1～3以及对比例1～3所述方法的诱导污染率，诱导成活率和移栽成活率，结果见表1。
表1欧李组培苗的成活率
| 外植体 | 诱导污染率 | 诱导成活率 | 移栽成活率 | |
| 实施例1 | 顶芽 | 1.6％ | 95.2％ | 96.8％ |
| 实施例2 | 茎段 | 2.6％ | 100％ | 98.4％ |
| 实施例3 | 成熟胚 | 3.1％ | 98.7％ | 95.1％ |
| 对比例1 | 顶芽 | 1.3％ | 91.4％ | 50％ |
| 对比例2 | 顶芽 | 22.3％ | 89.5％ | 72.5％ |
| 对比例3 | 茎段 | 56.9％ | 87.1％ | 46.2％ |
将实施例与对比例进行比较可知，本发明所述方法将污染率降至5％以内，移栽成活率达到95％以上。而将实施例1～3进行比较可以发现，实施例2效果最佳。
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种欧李组培快繁方法，其特征在于，所述方法包括：
欧李外植体经消毒处理之后进行接种，依次经过初代培养，继代培养和生根培养，然后进行炼苗处理，将生根苗移栽到炼苗基质中驯化，将移栽苗置于培养温度为22～28℃的环境中生长。
2.如权利要求1所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述欧李外植体为顶芽、茎段或欧李成熟胚中的任意一个。
3.如权利要求1所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述消毒处理具体为将外植体依次使用0.1～0.5％高锰酸钾、75％酒精、0.1％的升汞+0.05％～0.1％的吐温80进行处理；
优选的，采用0.1％的高锰酸钾处理2分钟，75％的酒精处理30秒，0.1％的升汞+0.1％的吐温80处理3分钟。
4.如权利要求1所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，初代培养的具体方法为：将经消毒处理的外植体接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导，每天光照12～16小时，光照强度为2000～4000lx，培养温度为22～28℃，空气相对湿度为75％～80％；培养时间为20～25天；
所述诱导培养基各组分与含量分别为：MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L。
5.如权利要求1所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述继代培养的具体方法为：将初代培养获得的芽丛小枝剪切成单个小枝接种于增殖培养基进行继代增殖培养，以获得更多的萌条；每天光照时间14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为23～28℃，空气相对湿度为75％～80％的环境中进行增殖培养，培养时间为25～30天；
所述增殖培养基各组分与含量分别为：MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L。
6.如权利要求1所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养的具体方法为：选取增殖苗接种至盛有事先洒上营养液的蛭石的生根盒，每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为24～28℃，空气相对湿度为80％～95％，二氧化碳浓度为1000～1200ppm的条件，培养时间为25～30天；
营养液各组分与含量分别为：1/2MS(不含有机)+NAA0.2mg/L。
7.如权利要求1所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述炼苗具体方法为：将生根苗移栽至混合基质中驯化培养，炼苗前期做遮阴处理，优选遮阴处理为将已经移栽生根苗的混合基质置于穴盘内培养。
8.如权利要求7所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述混合基质优选为草炭土:珍珠岩＝1:2。
9.如权利要求7所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，所述生根盒优选为扣合式透明塑料盒。
10.如权利要求7所述的欧李组培快繁方法，其特征在于，对于未生根苗，进行进一步处理：具体采用生根药剂配制药液速蘸促其生根或者滤纸桥生根；优选的，所述生根药剂为吲哚丁酸、萘乙酸、ABT系列或GGR复合型生根剂。
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| CN111802247A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-10-23 | 贵州大学 | 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法 |
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