CN106538392A - 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法 - Google Patents

一种白樱花组织培养与快速繁殖方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106538392A
CN106538392A CN201611119739.XA CN201611119739A CN106538392A CN 106538392 A CN106538392 A CN 106538392A CN 201611119739 A CN201611119739 A CN 201611119739A CN 106538392 A CN106538392 A CN 106538392A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
white
seedling
oriental cherry
root
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611119739.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN106538392B (zh
Inventor
张玉杰
景龄
冒文娟
李文剑
林大为
张承妹
苏涌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jingyi Biotechnology Co ltd
Original Assignee
SHANGHAI SHANYI PLANT TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI SHANYI PLANT TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical SHANGHAI SHANYI PLANT TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201611119739.XA priority Critical patent/CN106538392B/zh
Publication of CN106538392A publication Critical patent/CN106538392A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106538392B publication Critical patent/CN106538392B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，进行工厂化生产以满足市场需求。它包括以下步骤：樱花无菌苗获得、无菌苗继代培养、生根培养、组培苗的炼苗和移栽；采用本发明所提供的白樱花组培方法，无菌外植体获得和无菌苗诱导培养使用同一种培养基，简化了操作流程，降低了生产成本；这种方法可以在4‑5个月时间内建立一套完整的白樱花组培生产流程，从而进行工厂化生产，大大缩短了组织培养的繁殖周期，且生根率高，可以达到98％以上，为市场上快速提供大量樱花种苗提供可能。

Description

一种白樱花组织培养与快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种组织培养的方法，具体涉及一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，属于组织培养育苗技术领域。
背景技术
樱花隶属于蔷薇科李亚科樱属，是著名的木本观赏花卉。起源于中国，是我国资源物种丰富，分布广泛的优良树种，约有45个品种在除东北、西北地区以外各地种植，在世界各地也均有生长，为日本国花。樱花大部分为落叶乔木,高5-25米,树冠广展,树皮呈灰褐色，花单生、散形或少花(通常在8朵以下)组成伞房总状花序。樱花既适用于庭院绿化美化，又可充当行道树使用，在山林中成片种植观赏效果更佳。并有很强的适应性和较强的抗污染能力。樱花因花色艳丽、气味幽香，是人们喜爱的园林观赏树种，每年樱花开放时都会吸引大量游客，带动了周边旅游业的发展，提高了人们的精神文化生活。
樱属植物种子自然状态下不易萌发，传统的扦插、嫁接方法繁殖系数低，成苗慢。随着樱花在园林绿化建设中的广泛应用，市场上对樱花苗木的需求量增加。因此，传统的繁殖方法已远远不能满足生产上的需要。组织培养技术，选用优良单株作为外植体，保证了遗传性状的稳定，缩短其良种推广的周期,提升种苗质量,为市场上快速大量提供樱花优良苗木提供可能。
朱育端在“东京樱花组培快繁技术研究”中，研究了植物激素、GA3对东京樱花组织培养的影响，诱导培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，芽的诱导率为95.83％；增殖培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+GA3 0.5mg/L；生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA0.5mg/L，生根率为95％以上。
王光萍等在“福建山樱花的组组织培养及植株再生”的研究中，以一年生嫩枝作为外植体，诱导培养基为1/4MS+BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L，芽的诱导率为87.5％；增殖培养基为MS+BA/KT1.0mg/L+IBA0.1mg/L+GA3 0.3mg/L，增值系数4以上；生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+BA0.75mg/L，生根率为90％以上。
黄宇翔等在“福建山樱花组培快繁研究”中，诱导培养基为1/4MS+BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L，芽的诱导率为68.57％；增殖培养基为MS+BA1.0mg/L+GA3 0.3mg/L，增值系数为6；生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA0.2mg/L，生根率为92.1％。
李勇等在“福建山樱花组培快繁技术”中，诱导培养基为MS+BA0.4mg/L+NAA0.3mg/L，芽的诱导率为84％；增殖培养基为MS+BA0.4mg/L+GA3 0.2mg/L，增值系数为4.14；生根培养基为1/2改良MS+IBA0.2mg/L+NAA0.2mg/L，生根率为91.6％。
吕月良等在“福建山樱花不定芽诱导和植株再生规模化繁殖试验”中，诱导培养基为1/4MS+BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L，芽的诱导率为68.57％；增殖培养基为MS+BA1.0mg/L+GA3 0.3mg/L，增值系数为6；生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA0.2mg/L，生根率为92.1％以上。
王红梅等，在“垂枝樱花外植体灭菌及不定芽的诱导研究”中，对外植体选择、灭菌方法和程序、不定芽的诱导等环节进行了初步研究，诱导培养基为1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，分化率为68.3％。
王玉珍等在“草樱花组培快繁技术的研究”中研究了激素配比、蔗糖、培养条件等组培苗工厂化生产关键技术，移栽成活率90％以上，理论上建立了草樱花工厂化生产工艺及试管苗培养标准。
综上所述，可见近年来对樱花的组织培养和快繁技术的研究很多，多数都在樱花启动、增殖、生根和移栽方面做了较全面的试验，但是针对工厂化生产的试验还很少，且多数停留在理论层面上，实际投入生产的很少。本研究结合生产实际对白樱花茎段进行启动培养，采用GA3提高了植株诱导率；生根切割采用特定切割手法，使生根率达到98％以上，并且投入实际生产中，使试验数据更具真实性、准确性；生产中用白砂糖代替蔗糖，增加单瓶接种数量，降低了生产成本，更有利于实际生产。使组培技术理论用于实践，有利于推广樱花工厂化生产，推动我国樱花产业化发展。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。本发明的目的是提供一种白樱花组织培养方法，解决组培苗生产周期长，生产成本高等问题。
本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：
一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：包括白樱花无菌苗获得、无菌苗继代培养、生根培养和组培苗炼苗及移栽，具体操作步骤如下：
(1)无菌苗的获得：剪取白樱花一年生健康幼嫩枝条，距叶柄基部2-3mm处将叶柄、叶片剪掉，将枝条修剪成3-5cm长枝段，用2％洗衣粉浸泡3-5min，用流水冲洗30-60min，然后在超净工作台上用75％酒精消毒20-30s，无菌水冲洗1-2次，再用0.05％升汞消毒8-16min，无菌水冲洗6-8次，滤纸吸干水分后，切成带一个或二个腋芽的茎尖或茎段接种到培养基中，先暗培养5-7d后转到正常光照下培养，10-12d后腋芽开始萌动，形成小芽；所述诱导培养基成分为：改良MS+6-BA0.1-0.3mg/L+NAA或IBA0.01-0.03mg/L+GA30.5-1mg/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0；
(2)无菌苗继代培养：将由腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，26-30d后形成丛生芽，利用顶芽、茎段及基部芽团进行继代增殖；
所述增殖培养基成分为：改良MS+6-BA0.4-0.8mg/L+2-ip0.01-0.05mg/L+NAA或IBA0.01-0.1mg/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0。
(3)生根培养：选取权利要求(2)继代培养中高度大于1.8cm的白樱花组培苗，保留3-4片展开叶，距离叶柄3-5mm处切割，基部叶片、叶柄及腋芽切除干净，接种到生根培养基中，10-12d开始形成新根，20d左右生根率达到98％以上；所述生根培养基成分为：1/2MS+NAA或IBA0.8-2.0mg/L+白砂糖20g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0。
(4)白樱花组培苗的炼苗和移栽：常温炼苗4-7d后，移栽入基质中培养3-4周，棚内湿度控制在80-90％，温度控制在22-30℃，待新根及新叶发出后逐渐揭膜通风，获得白樱花大棚生根苗。
其中，所述步骤(1)中无菌苗的获得、步骤(2)中继代培养，其特征在于：所述改良MS培养基含有成分为：
CaCl2·2H2O 441mg/L；MgSO4·7H2O 370mg/L；KNO3 2022mg/L；NH4NO3 1600mg/L；NaH2PO4312mg/L；Na2·EDTA 37.25mg/L；FeSO4·7H2O 27.8mg/L；KI 0.83mg/L；H3BO36.2mg/L；MnSO4·4H2O 16.9mg/L；ZnSO4·7H2O 11.5mg/L；Na 2MoO4·2H2O 0.25mg/L；CuSO4·5H2O0.03mg/L；CoCl2·6H2O 0.03mg/L；肌醇100mg/L；烟酸0.5mg/L；盐酸吡哆酸0.5mg/L；盐酸硫胺素0.1mg/L；甘氨酸2mg/L。
其中，所述步骤(1)中无菌苗的获得，首先放在暗培养5-7d后，再放到正常光照下培养。
其中，所述步骤(1)无菌苗的获得培养基、步骤(2)无菌苗继代培养培养基、步骤(3)生根培养基所需的碳源均由白砂糖替换了蔗糖。
其中，所述步骤(1)中、以改良MS为基本培养基，含有下列浓度的物质：0.1-0.3mg/L 6-BA、0.01-0.03mg/LNAA或IBA、0.5-1mg/L GA3。
优选的，所述步骤(2)中，以改良MS为基本培养基，含有下列浓度的物质：0.4-0.8mg/L 6-BA、0.01-0.05mg/L 2-ip、0.01-0.1mg/LNAA或IBA
其中，所述步骤(1)无菌苗的获得培养基、步骤(2)无菌苗继代培养培养基、步骤(3)生根培养基配制好后均用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌15min。
其中，所述培养均在植物组培室采用日光灯照射进行光照培养，光照时间12-14h/d、光照强度2000-3000lx，温度26±2℃。
其中，所述步骤(4)组培苗的炼苗和移栽：
白樱花组培苗的炼苗和移栽：将生根的试管苗移至常温环境中，在常温下炼苗4-7d后，用清水洗净试管苗的根部培养基，用1‰多菌灵浸泡2min，在缓慢流水下冲洗干净，用1‰高锰酸钾浸泡2-3min，移栽入分层基质中，营养杯下层2/3为体积比园土：珍珠岩：蛭石：草炭＝2:2:2:1的混合基质，上层1/3为体积比珍珠岩：蛭石：草炭＝1:1:1的混合基质。控制棚内湿度80-90％，温度22-30℃，培养3-4周，待新根及新叶发出后逐渐揭膜通风，获得白樱花的大棚生根苗。
本发明的有益效果：
1.本发明的白樱花组织培养方法，外植体启动、诱导阶段，先进行暗培养处理，后放到正常光照下培养，接种到含有低浓度的NAA、IBA和GA3培养基中，缩短了芽的萌发时间，增加了芽萌发数量。10-12d后腋芽开始萌动，萌动率85％；18-20d后转接到继代培养基中，缩短了组培周期。
2.继代种苗接种到生根培养基中，将高度大于1.8cm的种苗距离叶柄下3-5mm处切割，贴茎秆将叶柄和腋芽切除干净，20d后，生根率可以达到98％以上。
3.增加单瓶接种数量，采用白砂糖替代蔗糖。降低了单株生产成本，有利于樱花组培工厂化生产推广。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1
白樱花组织培养和快速繁殖方法，它按照以下步骤顺序进行：
(1)白樱花无菌苗的获得：
剪取白樱花一年生健康幼嫩枝条，距叶柄基部2-3mm处将叶柄、叶片剪掉，将枝条修剪成3-5cm长枝段，用2％洗衣粉浸泡3-5min，用流水冲洗30-60min，然后在超净工作台上用75％酒精消毒20-30s，无菌水冲洗1-2次，再用0.05％升汞消毒8-16min，无菌水冲洗6-8次，滤纸吸干水分后，切成带一个或二个腋芽的茎尖或茎段接种到培养基中，先暗培养5-7d后转到正常光照下培养，10-12d后腋芽开始萌动，形成小芽；所述诱导培养基成分为：MS+6-BA0.1-0.3mg/L+NAA或IBA0.01-0.03mg/L+GA30.5-1mg/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0。启动培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌15min。培养光照时间12-14h/d、光照强度2000-3000lx，温度26±2℃。启动培养20d，启动率71.7％。
(2)无菌苗继代培养：
将启动培养20d后形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，26-30d后形成丛生芽，利用顶芽、茎段及基部芽团进行继代增殖；所述增殖培养基成分为：MS+6-BA0.4-0.8mg/L+2-ip0.01-0.05mg/L+NAA或IBA0.01-0.1mg/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0。继代培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌15min。培养光照时间12～14h/d、光照强度2000-3000lx，温度26±2℃。增殖培养周期28±2天，增殖系数3.6。
(3)生根培养：
选取继代种苗高度大于1.8cm的白樱花组培苗，保留3-4片展开叶，距离叶柄3-5mm处切割，基部叶片、叶柄及腋芽切除干净，接种到生根培养基中，10-12d开始形成新根，20d左右生根率达到98％以上；所述生根培养基成分为：1/2MS+NAA或IBA0.8-2.0mg/L+白砂糖20g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0；生根培养基配制好后用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌15min。培养光照时间12-14h/d、光照强度2000-3000lx，温度26±2℃。生根培养周期28±2天，生根率98％以上。
(4)白樱花组培苗的炼苗和移栽：
常温炼苗4-7d，前3-5d封盖放到光照、湿度适宜的棚内炼苗，后1-2d将盖子旋开搭在瓶子上炼苗。用清水洗净试管苗的根部培养基，用1‰多菌灵浸泡2min，在缓慢流水下冲洗干净，用1‰高锰酸钾浸泡2-3min，移栽入分层基质中，营养杯下层2/3为体积比园土：珍珠岩：蛭石：草炭＝2:2:2:1的混合基质，上层1/3为体积比珍珠岩：蛭石：草炭＝1:1:1的混合基质。控制棚内湿度80-90％，温度22-30℃，培养3-4周，待新根及新叶发出后逐渐揭膜通风，获得白樱花的大棚生根苗，大棚移栽成活率达到85％以上。
实施例2
诱导、继代培养基本培养基的优化。为了提高白樱花的诱导率和增殖系数，对诱导培养和继代培养的基本培养基进行改良优化，改良MS母液的具体成分如下：
CaCl2·2H2O 441mg/L；MgSO4·7H2O 370mg/L；KNO3 2022mg/L；NH4NO3 1600mg/L；NaH2PO4312mg/L；Na2·EDTA 37.25mg/L；FeSO4·7H2O 27.8mg/L；KI 0.83mg/L；H3BO36.2mg/L；MnSO4·4H2O 16.9mg/L；ZnSO4·7H2O 11.5mg/L；Na2 MoO4·2H2O 0.25mg/L；CuSO4·5H2O0.03mg/L；CoCl2·6H2O 0.03mg/L；肌醇100mg/L；烟酸0.5mg/L；盐酸吡哆酸0.5mg/L；盐酸硫胺素0.1mg/L；甘氨酸2mg/L。
除了诱导和继代基本培养基替换成改良MS母液外，其他步骤方法同实施例1，使用改良MS为基本培养基，诱导率可以达到85％，增殖系数达到5.85，都有明显提高。
实施例3
启动培养基的筛选，以改良MS为基本培养基，采用L8(27)正交设计(如表1)，筛选不同种类、浓度激素对白樱花诱导率的影响，每个处理接种20瓶，每瓶接种3株，重复3次。其余方法步骤均与实施例1相同。
表1不同种类、浓度激素对白樱花诱导率的影响
试验结果如表2：
表2不同种类、浓度激素对白樱花诱导率的影响
由上表可知，使用不同种类和浓度的激素对白樱花进行诱导培养，诱导率不同。其中GA3对白樱花芽的诱导效果最显著，其次是6-BA，生长素NAA和IBA效果不明显。赤霉素和细胞分裂素具有打破植物休眠的作用，加快了白樱花腋芽的萌发。当GA3、6-BA、IBA浓度分别为1.0mg/L、0.3mg/L和0.03mg/L时，白樱花的外植体诱导率可以达到85％。
实施例4
白樱花生根培养基配方的优化，用继代培养所得的组培苗进行生根培养，将1.8cm以上的健壮苗切割下来，分成单株接种在生根培养基中，进行生根培养。以1/2MS为基本培养基，采用L9(34)正交设计，添加不同质量浓度的IAA、IBA和NAA诱导根的生成，研究不同植物生长调节剂浓度对白樱花瓶内生根的影响，以不添加任何激素的1/2MS培养基作对照。每个处理接种15瓶，每瓶接种6株，重复3次。除生根培养基配方与实施例1不同外，其余方法步骤均与实施例1相同。
表3白樱花瓶内生根的因素水平表
表4不同植物生长调节剂组合对试管苗生根的影响
由表4可知，在白樱花生根培养基中添加生长素有利于根的生成，且不同浓度的IAA、IBA和NAA对白樱花根的形成的诱导效果不同。在白樱花生根培养基中添加NAA和IBA，生根率高于添加IAA的培养基，未添加任何生长素的1/2MS培养基不利于樱花生根。当培养基中IBA和NAA的浓度≥1.5mg/L时，白樱花的生根率可以达到100％，但是为了节约成本，进行工厂化生成，可以将IBA和NAA的浓度控制在1.0-1.5之间，生根率可以达到98％以上。
实施例5
重复实施例1操作过程，将培养基中的蔗糖用白砂糖替代；将增殖培养时的单瓶接种数量由原来的5株变为单瓶接种8株；将生根培养时的单瓶接种数量由原来的6株变为10株；继代和生根周期变为26±2d。增殖系数变为5.5；生根率变为95.5％。与实施例1中周期28±2d时增殖系数为5.85，生根率为98％相差不多，但是单瓶接种数量，降低了生产成本，更适合工厂化生成。
利用樱花的组织培养和快速繁殖获得的组培苗，与传统的樱花扦插、嫁接繁殖方法相比具有抗病性强、生长整齐一致等优点。跟国内外同类生产方法相比，我们更针对生产实际，充分考虑了组培生产周期长和生产成本高的问题。通过改进组培方法和生产流程，降低了组培生产成本，为短时间内提供市场大量健康、优质的樱花苗木提供可能。
以上对本发明的具体实施方式进行了说明，但本发明并不以此为限，只要不脱离本发明的宗旨，本发明还可以有各种变化。

Claims (9)

1.一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：包括白樱花无菌苗获得、无菌苗继代培养、生根培养和组培苗炼苗及移栽，具体操作步骤如下：
(1)无菌苗的获得：剪取白樱花一年生健康幼嫩枝条，距叶柄基部2-3mm处将叶柄、叶片剪掉，将枝条修剪成3-5cm长枝段，用2％洗衣粉浸泡3-5min，用流水冲洗30-60min，然后在超净工作台上用75％酒精消毒20-30s，无菌水冲洗1-2次，再用0.05％升汞消毒8-16min，无菌水冲洗6-8次，滤纸吸干水分后，切成带一个或二个腋芽的茎尖或茎段接种到培养基中，先暗培养5-7d后转到正常光照下培养，10-12d后腋芽开始萌动，形成小芽；所述诱导培养基成分为：改良MS+6-BA0.1-0.3mg/L+NAA或IBA0.01-0.03mg/L+GA30.5-1mg/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0；
(2)无菌苗继代培养：将由腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，26-30d后形成丛生芽，利用顶芽、茎段及基部芽团进行继代增殖；所述增殖培养基成分为：改良MS+6-BA0.4-0.8mg/L+2-ip0.01-0.05mg/L+NAA或IBA0.01-0.1mg/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0；
(3)生根培养：选取权利要求(2)继代培养中高度大于1.8cm的白樱花组培苗，保留3-4片展开叶，距离叶柄3-5mm处切割，基部叶片、叶柄及腋芽切除干净，接种到生根培养基中，10-12d开始形成新根，20d左右生根率达到98％以上；所述生根培养基成分为：1/2MS+NAA或IBA0.8-2.0mg/L+白砂糖20g/L+琼脂5.8-6.0g/L，pH5.6-6.0；
(4)白樱花组培苗的炼苗和移栽：常温炼苗4-7d后，移栽入基质中培养3-4周，棚内湿度控制在80-90％，温度控制在22-30℃，待新根及新叶发出后逐渐揭膜通风，获得白樱花大棚生根苗。
2.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中无菌苗的获得、步骤(2)中继代培养，其特征在于：所述改良MS培养基含有成分为：
CaCl2·2H2O 441mg/L；MgSO4·7H2O 370mg/L；KNO3 2022mg/L；NH4NO3 1600mg/L；NaH2PO4312mg/L；Na2·EDTA 37.25mg/L；FeSO4·7H2O 27.8mg/L；KI 0.83mg/L；H3BO36.2mg/L；MnSO4·4H2O 16.9mg/L；ZnSO4·7H2O 11.5mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L；CuSO4·5H2O0.03mg/L；CoCl2·6H2O 0.03mg/L；肌醇100mg/L；烟酸0.5mg/L；盐酸吡哆酸0.5mg/L；盐酸硫胺素0.1mg/L；甘氨酸2mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中无菌苗的获得，首先放在暗培养5-7d后，再放到正常光照下培养。
4.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)无菌苗的获得培养基、步骤(2)无菌苗继代培养培养基、步骤(3)生根培养基所需的碳源均由白砂糖替换了蔗糖。
5.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中、以改良MS为基本培养基，含有下列浓度的物质：0.1-0.3mg/L 6-BA、0.01-0.03mg/LNAA或IBA、0.5-1mg/LGA3。
6.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(2)中，以改良MS为基本培养基，含有下列浓度的物质：0.4-0.8mg/L 6-BA、0.01-0.05mg/L2-ip、0.01-0.1mg/LNAA或IBA。
7.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)无菌苗的获得培养基、步骤(2)无菌苗继代培养培养基、步骤(3)生根培养基配制好后均用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121℃灭菌15min。
8.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述培养均在植物组培室采用日光灯照射进行光照培养，光照时间12-14h/d、光照强度2000-3000lx，温度26±2℃。
9.根据权利要求1所述的一种白樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(4)组培苗的炼苗和移栽：
白樱花组培苗的炼苗和移栽：将生根的试管苗移至常温环境中，在常温下炼苗4-7d后，用清水洗净试管苗的根部培养基，用1‰多菌灵浸泡2min，在缓慢流水下冲洗干净，用1‰高锰酸钾浸泡2-3min，移栽入分层基质中，营养杯下层2/3为体积比园土：珍珠岩：蛭石：草炭＝2:2:2:1的混合基质，上层1/3为体积比珍珠岩：蛭石：草炭＝1:1:1的混合基质，控制棚内湿度80-90％，温度22-30℃，培养3-4周，待新根及新叶发出后逐渐揭膜通风，获得白樱花的大棚生根苗。
CN201611119739.XA 2016-12-08 2016-12-08 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法 Active CN106538392B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611119739.XA CN106538392B (zh) 2016-12-08 2016-12-08 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611119739.XA CN106538392B (zh) 2016-12-08 2016-12-08 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106538392A true CN106538392A (zh) 2017-03-29
CN106538392B CN106538392B (zh) 2019-04-19

Family

ID=58396659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611119739.XA Active CN106538392B (zh) 2016-12-08 2016-12-08 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106538392B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107006367A (zh) * 2017-04-20 2017-08-04 华南农业大学 一种‘阳光’樱组培快繁方法
CN107135943A (zh) * 2017-04-20 2017-09-08 广州旺地园林工程有限公司 一种冬樱离体快繁方法
CN111084109A (zh) * 2020-02-18 2020-05-01 美尚生态景观股份有限公司 一种麦李组培苗瓶内生根的方法
CN111802247A (zh) * 2020-07-22 2020-10-23 贵州大学 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法
CN114403003A (zh) * 2022-01-12 2022-04-29 中国科学院合肥物质科学研究院 一种绿樱花植株离体再生的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06181655A (ja) * 1992-10-30 1994-07-05 Kankyo Riyokuka Shigen Kaihatsu Center:Kk ヒマラヤザクラの増殖法
JPH0866134A (ja) * 1993-09-30 1996-03-12 Mayekawa Mfg Co Ltd サクラの多芽体による増殖方法
CN101584299A (zh) * 2009-04-15 2009-11-25 河南省农业科学院 一种红叶樱花组培快繁培养基及组培快繁方法
CN105325291A (zh) * 2015-09-25 2016-02-17 江苏农林职业技术学院 垂枝樱花的组织培养方法
CN105494100A (zh) * 2015-12-30 2016-04-20 江汉大学 樱花组织培养和快速繁殖方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06181655A (ja) * 1992-10-30 1994-07-05 Kankyo Riyokuka Shigen Kaihatsu Center:Kk ヒマラヤザクラの増殖法
JPH0866134A (ja) * 1993-09-30 1996-03-12 Mayekawa Mfg Co Ltd サクラの多芽体による増殖方法
CN101584299A (zh) * 2009-04-15 2009-11-25 河南省农业科学院 一种红叶樱花组培快繁培养基及组培快繁方法
CN105325291A (zh) * 2015-09-25 2016-02-17 江苏农林职业技术学院 垂枝樱花的组织培养方法
CN105494100A (zh) * 2015-12-30 2016-04-20 江汉大学 樱花组织培养和快速繁殖方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
B. BHAGWAT ET AL.: "In vitro shoot regeneration from leaves of sweet cherry (Prunus avium) ‘Lapins’ and ‘Sweetheart’", 《PLANT CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE》 *
J. ĎURKOVIČ: "Rapid micropropagation of mature wild cherry", 《BIOLOGIA PLANTARUM》 *
吕月良等: "福建山樱花不定芽诱导和植株再生规模化繁殖试验", 《南京林业大学学报（自然科学版）》 *
李艳敏等: "赤霉素对樱花组培苗壮苗及生根的影响", 《园艺学报》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107006367A (zh) * 2017-04-20 2017-08-04 华南农业大学 一种‘阳光’樱组培快繁方法
CN107135943A (zh) * 2017-04-20 2017-09-08 广州旺地园林工程有限公司 一种冬樱离体快繁方法
CN107006367B (zh) * 2017-04-20 2019-12-13 华南农业大学 一种‘阳光’樱组培快繁方法
CN111084109A (zh) * 2020-02-18 2020-05-01 美尚生态景观股份有限公司 一种麦李组培苗瓶内生根的方法
CN111084109B (zh) * 2020-02-18 2022-04-01 美尚生态景观股份有限公司 一种麦李组培苗瓶内生根的方法
CN111802247A (zh) * 2020-07-22 2020-10-23 贵州大学 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法
CN111802247B (zh) * 2020-07-22 2022-11-29 贵州大学 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法
CN114403003A (zh) * 2022-01-12 2022-04-29 中国科学院合肥物质科学研究院 一种绿樱花植株离体再生的方法
CN114403003B (zh) * 2022-01-12 2022-11-04 中国科学院合肥物质科学研究院 一种绿樱花植株离体再生的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106538392B (zh) 2019-04-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101647393B (zh) 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法
CN106538392B (zh) 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法
CN106417015B (zh) 一种怀集报春苣苔组织培养和快速繁殖方法
CN105454047B (zh) 一种大花序桉的组培快繁方法
CN104285813B (zh) 一种金花茶组培繁殖方法
CN106258971B (zh) 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法
CN106613961B (zh) 一种楸树微繁殖的培育方法
CN101983556A (zh) 杉木体细胞胚胎发生及植株再生方法
CN104012417B (zh) 小木漆高效快速扩繁方法
CN103988777B (zh) 一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法
CN105494100A (zh) 樱花组织培养和快速繁殖方法
CN107683770B (zh) 一种矾根‘抹茶’种苗的培育方法
CN102577956A (zh) 一种黑松体细胞胚胎发生和植株再生方法
CN106922534A (zh) 一种组织培养快速繁育杉木的方法
CN102090337A (zh) 一种鹿角杜鹃的快繁方法
CN103609455B (zh) 基于微扦插的非洲堇组织培养健壮苗优化生产方法
CN102210267B (zh) 玫瑰再生为完整植株的方法
CN108575747A (zh) 一种福建山樱花的不定芽再生方法
Nak-Udom et al. Micropropagation from cultured nodal explants of rose (Rosa hybrida L. cv.‘Perfume Delight’)
CN107197746A (zh) 一种杉木野外优异资源的繁育方法
CN100577796C (zh) 一种福建柏体细胞胚胎发生和植株再生技术
CN110150147A (zh) 一种大叶杨组培快繁方法
CN103477988A (zh) 轮叶蒲桃离体培养和快速繁殖的方法
CN101946704A (zh) 以未成熟种子为外植体的月季再生植株的方法
CN108552055B (zh) 一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230307

Address after: 200333 Room 2403, No. 44, Lane 1817, Zhenbei Road, Putuo District, Shanghai

Patentee after: Shanghai Jingyi Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 201801 room 2002, building 2, No. 2762, Bao'an Road, Jiading District, Shanghai

Patentee before: SHANGHAI SHANYI PLANT TECHNOLOGY Co.,Ltd.