CN106258971B - 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法 - Google Patents

一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106258971B
CN106258971B CN201610669453.2A CN201610669453A CN106258971B CN 106258971 B CN106258971 B CN 106258971B CN 201610669453 A CN201610669453 A CN 201610669453A CN 106258971 B CN106258971 B CN 106258971B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bud
culture
explant
illumination
paulownia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610669453.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106258971A (zh
Inventor
郑兴华
郑正练
刘海龙
覃子海
陈博雯
丁慧
肖少华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi Fu Tong Forestry Science And Technology Co Ltd
Original Assignee
Guangxi Fu Tong Forestry Science And Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi Fu Tong Forestry Science And Technology Co Ltd filed Critical Guangxi Fu Tong Forestry Science And Technology Co Ltd
Priority to CN201610669453.2A priority Critical patent/CN106258971B/zh
Publication of CN106258971A publication Critical patent/CN106258971A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106258971B publication Critical patent/CN106258971B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采用以芽繁芽的方式，经消毒获得无菌芽后，优化调整培养基的成分及比例，筛选得到初始芽诱导、继代增殖、生根培养等组培繁育阶段的培养基配方，再辅以适宜的温度和光照，建立泡桐优良单株的组培快繁体系。本方法以泡桐优良单株带有腋芽的茎段为外植体，在最大程度上保存了单株的优良特性；在采集外植体前喷施消毒液，有效降低外植体消毒的污染率，污染率最低为2.3%；继代增殖培养基增殖效果显著，增殖系数达13.2～15.8；生根培养周期短，生根培养6～8天开始萌发出根系，生根率达到98.5～100%，继续培养至15天后统计，生根率均可达到100%，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。

Description

一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法
技术领域
本发明属于植物无性快繁技术领域，涉及一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法。
背景技术
泡桐（拉丁文名：Paulownia.），别名：白花泡桐、大果泡桐，空桐木等，属落叶乔木，生长快，抗性强，应范围广，材质优良，木材纹理通直，花纹美观，色泽悦目，材质轻软，密度低，尺寸稳定，不翘不裂，具有制作胶合板、拼板、集成材的优良材质特性；泡桐材保温隔热绝缘性能优良，共振性能好，辐射阻尼高，内摩擦小，是优良的弦乐器用材；泡桐材的木纤维高，是刨花板、纤维板、造纸等的优良原料用材，产品供不应求，市场前景广阔，是我国中东部地区的重要速生造林树种。我国泡桐种质资源丰富，经科研人员多年选育研究，已经获得很多优良品种。
目前，泡桐的培育基本处于野生或半野生状态，而常规的扦插繁殖，难生根；埋根繁殖萌发率低，且根段采集不易；嫁接繁殖在后期的亲和性方面留下隐患，同时影响无性系测定以及在造林生产中优良性状不能得以充分表达。因此选择泡桐优良无性系作为繁殖材料，采用组培繁殖方法有利于建立泡桐的高效繁殖体系，为泡桐优质种苗专业化和规模化生产奠定了良好的物质基础和技术基础。
发明内容
本发明采用以芽繁芽的方式，提供了一种生长效果好、扩繁快，并能最大程度保存单株的优良特性的泡桐优良单株的无性组培快繁方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用消毒液对待采集的枝条进行喷雾消毒，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过10～15d增殖培养，形成丛芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将长≥5cm的单芽的上部剪下后插入生根培养基中诱导生根；主要操作步骤如下：
（1）外植体选择：采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用消毒液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0 cm、带有腋芽的茎段作为外植体；
（2）外植体处理：用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10 min后，用体积浓度为75%酒精对洗净的外植体浸泡消毒30～60s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1%氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，余下部分外植体，备用；
（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）处理后的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养条件为：温度25±2℃～28±2℃，光照500～1000 lx，光照8～12h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长；
（4）增殖培养：将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照1000～2000 lx，光照10～12h/d；经10～15d培养后行成丛芽；
（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的芽高为1.8～2.2cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照2000～5000lx，光照12～16h/d；培养10～15天后形成壮芽；
（6）生根培养：将步骤（5）得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照1500～3000 lx，光照12～16h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。
以上步骤（1）所述的消毒液为体积浓度2～5%的苯扎氯铵溶液。
以上所述的初始芽诱导培养基的配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6-BA 1.0～2.0mg/L+NAA 0.1～0.5 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。
以上所述的增殖培养基配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6-BA 6.0～8.0mg/L+NAA 0.5～1.5 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。
以上所述的壮芽培养基配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6-BA 2.0～5.0 mg/L+NAA 1.0～2.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。
以上所述的生根培养基配方为：1/5～3/5改良WPM培养基+ABT 1#1.0～3.5 mg/L+NAA 0.5～2.0mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L。
以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550 mg/L，CaCl2·2H2O192 mg/L，MgSO4·7H20 370 mg/L，KH2PO4 170 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4·H2O 22.4 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25 mg/L，Na2·EDTA 37.3 mg/L，FeSO4·7H2O 27.8 mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。
相比于现有技术，本发明具有的优点及有益效果如下：
1、现有的泡桐组培技术大多采用种子、叶柄或叶片做为外植体，然而，种子与母本之间自然存在的性状分化，叶柄或叶片在诱导脱分化、再分化的过程中潜在的变异概率，对优良单株的性状保存极为不利，本发明采用以芽繁芽的方式，以泡桐优良单株带有腋芽的茎段为外植体，在最大程度上保存了单株的优良特性，并可稳定遗传。
2、本发明在外植体采集之前先用消毒液对枝条进行表面消毒，有效降低外植体消毒的污染率，污染率最低为2.3%。
3、本发明采用的增殖培养基增殖效果显著，在10～15天的培养周期内，可由单芽萌发至丛芽，增殖系数达13.2～15.8，并且在生根取芽时剩余的单芽下半部和丛芽基部均可继续进入增殖培养，使得材料能够多次继代，实现大量增殖，规模化生产壮芽，实现泡桐优良单株的扩繁。
4、本发明采用的壮芽培养基可有效促进丛芽伸长，在在10～15天的培养周期内，单芽可伸长5～8cm，满足生根条件。
5、本发明生根培养周期短，生根培养6～8天开始萌发出根系，生根率达到98.5～100 %，继续培养至15天后统计，生根率均可达到100 %。
6、本发明对WPM基本培养基进行了改良，同时重点调整了与泡桐出芽壮芽相关的微量元素和有机成分，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使泡桐芽诱导的发生、增殖和壮芽，效果显著。
7、本发明操作过程简便，培养周期短，继代芽产量大,并且质量优，增殖系数高，达到组培苗产业化技术要求，并在最大程度上保存了单株的优良特性，极大的推动了泡桐优良种苗繁育的规模化发展，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用体积浓度2%的苯扎氯铵溶液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0 cm、带有腋芽的茎段作为外植体。
用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10 min后，用体积浓度为75%酒精对洗净的外植体浸泡消毒30s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1%氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，将余下部分的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养基的配方为：3/5改良WPM培养基+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。初始芽诱导培养条件为：温度25±2℃，光照500～1000 lx，光照8h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长。
将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基配方为：3/5改良WPM培养基+6-BA 6.0mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。增殖培养条件为：温度28±2℃，光照1000～1500 lx，光照12h/d；经10～15d培养后行成丛芽。
将得到的芽高为1.8～2.0cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养基配方为：3/5改良WPM培养基+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。壮芽培养条件为：温度28±2℃，光照2000～2500 lx，光照16h/d；培养10～15天后形成壮芽。
将得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养基配方为：1/5改良WPM培养基+ABT 1#1.0 mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L。生根培养条件为：温度28±2℃，光照1500～2000 lx，光照16h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550 mg/L，CaCl2·2H2O192 mg/L，MgSO4·7H20 370 mg/L，KH2PO4 170 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4·H2O 22.4 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25 mg/L，Na2·EDTA 37.3 mg/L，FeSO4·7H2O 27.8 mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。
生根培养6天开始萌发出根系，生根率达到99.3%，继续培养至15天后统计，生根率100 %。
实施例2：
一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用体积浓度3%的苯扎氯铵溶液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0 cm、带有腋芽的茎段作为外植体。
用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10 min后，用体积浓度为75%酒精对洗净的外植体浸泡消毒40s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1%氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，将余下部分的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养基的配方为：4/5改良WPM培养基+6-BA1.5mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。初始芽诱导培养条件为：温度26±2℃，光照500～1000 lx，光照8h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长。
将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基配方为：3/5改良WPM培养基+6-BA 6.0mg/L+NAA 1.0 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。增殖培养条件为：温度28±2℃，光照1500～2000 lx，光照10h/d；经10～15d培养后行成丛芽。
将得到的芽高为1.8～2.0cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养基配方为：3/5改良WPM培养基+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。壮芽培养条件为：温度28±2℃，光照3000 lx，光照16h/d；培养10～15天后形成壮芽。
将得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养基配方为：2/5改良WPM培养基+ABT 1#1.5 mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L。生根培养条件为：温度28±2℃，光照1500～2000 lx，光照16h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550 mg/L，CaCl2·2H2O192 mg/L，MgSO4·7H20 370 mg/L，KH2PO4 170 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4·H2O 22.4 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25 mg/L，Na2·EDTA 37.3 mg/L，FeSO4·7H2O 27.8 mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。
生根培养6天开始萌发出根系，生根率达到99.2%，继续培养至15天后统计，生根率100 %。
实施例3：
一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用体积浓度3%的苯扎氯铵溶液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0 cm、带有腋芽的茎段作为外植体。
用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10 min后，用体积浓度为75%酒精对洗净的外植体浸泡消毒40s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1%氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，将余下部分的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养基的配方为：4/5改良WPM培养基+6-BA1.5mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。初始芽诱导培养条件为：温度27±2℃，光照500～1000 lx，光照10h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长。
将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基配方为：4/5改良WPM培养基+6-BA 6.0mg/L+NAA 1.0 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。增殖培养条件为：温度29±2℃，光照1500～2000 lx，光照10h/d；经10～15d培养后行成丛芽。
将得到的芽高为1.8～2.0cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养基配方为：4/5改良WPM培养基+6-BA 4.0 mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。壮芽培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照2000～5000 lx，光照12～16h/d；培养10～15天后形成壮芽。
将得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养基配方为：2/5改良WPM培养基+ABT 1#2.0mg/L+NAA 1.5mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L。生根培养条件为：温度29±2℃，光照2000～2500 lx，光照14h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550 mg/L，CaCl2·2H2O192 mg/L，MgSO4·7H20 370 mg/L，KH2PO4 170 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4·H2O 22.4 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25 mg/L，Na2·EDTA 37.3 mg/L，FeSO4·7H2O 27.8 mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。
生根培养6天开始萌发出根系，生根率达到99.5%，继续培养至15天后统计，生根率100 %。
实施例4：
一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用体积浓度4%的苯扎氯铵溶液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0 cm、带有腋芽的茎段作为外植体。
用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10 min后，用体积浓度为75%酒精对洗净的外植体浸泡消毒50s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1%氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，将余下部分的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养基的配方为：5/5改良WPM培养基+6-BA2.0mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。初始芽诱导培养条件为：温度27±2℃，光照500～1000 lx，光照12h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长。
将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基配方为：4/5改良WPM培养基+6-BA 7.0mg/L+NAA1.0 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。增殖培养条件为：温度29±2℃，光照1000～2000 lx，光照10～12h/d；经10～15d培养后行成丛芽。
将得到的芽高为2.0～2.2cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养基配方为：5/5改良WPM培养基+6-BA 5.0 mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。壮芽培养条件为：温度29±2℃，光照4000～4500 lx，光照12h/d；培养10～15天后形成壮芽。
将得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养基配方为：3/5改良WPM培养基+ABT 1#2.5 mg/L+NAA1.5mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L。生根培养条件为：温度29±2℃，光照2500～3000 lx，光照12h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550 mg/L，CaCl2·2H2O192 mg/L，MgSO4·7H20 370 mg/L，KH2PO4 170 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4·H2O 22.4 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25 mg/L，Na2·EDTA 37.3 mg/L，FeSO4·7H2O 27.8 mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。
生根培养6天开始萌发出根系，生根率达到99.2%，继续培养至15天后统计，生根率100 %。
实施例5：
一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用体积浓度5%的苯扎氯铵溶液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0 cm、带有腋芽的茎段作为外植体。
用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10 min后，用体积浓度为75%酒精对洗净的外植体浸泡消毒60s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1%氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，将余下部分的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养基的配方为：5/5改良WPM培养基+6-BA2.0mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。初始芽诱导培养条件为：温度28±2℃，光照500～1000 lx，光照12h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长。
将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基配方为：5/5改良WPM培养基+6-BA 8.0mg/L+NAA 1.5 mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。增殖培养条件为：温度30±2℃，光照1500～2000 lx，光照10h/d；经10～15d培养后行成丛芽。
将得到的芽高为2.0～2.2cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养基配方为：5/5改良WPM培养基+6-BA 5.0 mg/L+NAA 2.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L。壮芽培养条件为：温度30±2℃，光照4500～5000 lx，光照12h/d；培养10～15天后形成壮芽。
将得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养基配方为：3/5改良WPM培养基+ABT 1#3.5 mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L。生根培养条件为：温度30±2℃，光照2500～3000 lx，光照12h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550 mg/L，CaCl2·2H2O192 mg/L，MgSO4·7H20 370 mg/L，KH2PO4 170 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180 mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4·H2O 22.4 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25 mg/L，Na2·EDTA 37.3 mg/L，FeSO4·7H2O 27.8 mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。
生根培养6天开始萌发出根系，生根率达到99.3%，继续培养至15天后统计，生根率100 %。

Claims (1)

1.一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用消毒液对待采集的枝条进行喷雾消毒，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过10～15d增殖培养，形成丛芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将长≥5cm的单芽的上部剪下后插入生根培养基中诱导生根；主要操作步骤如下：
(1)外植体选择：采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用消毒液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0cm、带有腋芽的茎段作为外植体；
(2)外植体处理：用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10min后，用体积浓度为75％酒精对洗净的外植体浸泡消毒30～60s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1％氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，余下部分外植体，备用；
(3)初始芽诱导培养：将步骤(2)处理后的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养条件为：温度25±2℃～28±2℃，光照500～1000lx，光照8～12h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长；
(4)增殖培养：将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照1000～2000lx，光照10～12h/d；经10～15d培养后行成丛芽；
(5)壮芽培养：将步骤(4)得到的芽高为1.8～2.2cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照2000～5000lx，光照12～16h/d；培养10～15天后形成壮芽；
(6)生根培养：将步骤(5)得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照1500～3000lx，光照12～16h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至步骤(4)的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤(5)，循环往复，获得大量壮芽；
所述的初始芽诱导培养基的配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6-BA 1.0～2.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L；
所述的增殖培养基配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6-BA 6.0～8.0mg/L+NAA 0.5～1.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L；
所述的壮芽培养基配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6-BA 2.0～5.0mg/L+NAA 1.0～2.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L；
所述的生根培养基配方为：1/5～3/5改良WPM培养基+ABT 1#1.0～3.5mg/L+NAA 0.5～2.0mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L；
步骤(1)所述的消毒液为体积浓度2～5％的苯扎氯铵溶液；
所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550mg/L，CaCl2·2H2O 192mg/L，MgSO4·7H20 370mg/L，KH2PO4 170mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·H2O 22.4mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25mg/L，Na2·EDTA 37.3mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫胺素2.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L。
CN201610669453.2A 2016-08-16 2016-08-16 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法 Active CN106258971B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610669453.2A CN106258971B (zh) 2016-08-16 2016-08-16 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610669453.2A CN106258971B (zh) 2016-08-16 2016-08-16 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106258971A CN106258971A (zh) 2017-01-04
CN106258971B true CN106258971B (zh) 2018-07-06

Family

ID=57671168

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610669453.2A Active CN106258971B (zh) 2016-08-16 2016-08-16 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106258971B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106942063B (zh) * 2017-05-03 2019-01-18 广西绿树农林科技有限公司 一种结合瓶外生根技术的泡桐组培快繁方法
CN107006376A (zh) * 2017-06-20 2017-08-04 广西大学 一种泡桐植物组织培养方法
CN111034613A (zh) * 2019-11-20 2020-04-21 国家林业和草原局泡桐研究开发中心 一种楸叶泡桐优树的组培快繁方法
CN111374056B (zh) * 2020-04-17 2021-05-18 山东省林业科学研究院 一种培养粗壮四倍体泡桐苗的增殖培养基配方及应用
CN112690211A (zh) * 2021-01-04 2021-04-23 海南品优种苗科技有限公司 一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法
CN113349055A (zh) * 2021-07-07 2021-09-07 广东粤恬生物科技有限公司 一种泡桐的组织培养方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104026008A (zh) * 2014-05-19 2014-09-10 西南林业大学 一种抑制漆树外植体污染和褐变的方法
CN105104210A (zh) * 2015-09-30 2015-12-02 江苏农林职业技术学院 一种规模化高效快速繁殖泡桐试管苗的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104026008A (zh) * 2014-05-19 2014-09-10 西南林业大学 一种抑制漆树外植体污染和褐变的方法
CN105104210A (zh) * 2015-09-30 2015-12-02 江苏农林职业技术学院 一种规模化高效快速繁殖泡桐试管苗的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
白花泡桐优树组织培养幼化技术研究;李芳东等;《中南林业科技大学学报》;20101231;第30卷(第8期);第22页摘要，第23页第1.2节实验方法，第24页第2.2节，第2.3节及表3 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106258971A (zh) 2017-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106258971B (zh) 一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法
CN101647393B (zh) 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法
CN103609224B (zh) 一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法
CN102422810A (zh) 一种茶树无性系离体再生培养的方法
CN102217548A (zh) 龙脑樟树工厂化育苗方法
KR101137819B1 (ko) 백합나무의 배발생조직 증식방법
CN108575747A (zh) 一种福建山樱花的不定芽再生方法
CN106538392A (zh) 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法
CN106069772A (zh) 一种建兰组培快速繁殖方法
CN105613288A (zh) 一种金边黄杨快繁体系的构建方法
CN103109728B (zh) 一种长白松试管内快速育苗方法
Yasodha et al. Improved micropropagation methods for teak
CN107711515A (zh) 一种木槿组培再生的方法
Robert et al. Successive grafting confers juvenility traits to adult Spanish red cedar (Cedrela odorata Linnaeus): a tool for the rescue of selected materials
CN101341853A (zh) 一种北京杨组织培养方法
CN102550404A (zh) 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法
CN101904302A (zh) 一种药用植物北五味子体细胞胚发生和植株再生方法
CN107568069A (zh) 一种光皮桦组培苗高效增殖方法
CN108739398A (zh) 一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法
CN104488709A (zh) 一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法
CN104488710B (zh) 一种牛角瓜组织培养的方法
CN102657089A (zh) 一种榉树无菌播种方法
CN106857265A (zh) 一种白牛筋木的组培增殖方法
CN105766643A (zh) 在8-9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的方法
CN108271693A (zh) 一种寄树兰再生体系快速建立及保存方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant