CN102550404A - 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 - Google Patents
一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102550404A CN102550404A CN2011104222163A CN201110422216A CN102550404A CN 102550404 A CN102550404 A CN 102550404A CN 2011104222163 A CN2011104222163 A CN 2011104222163A CN 201110422216 A CN201110422216 A CN 201110422216A CN 102550404 A CN102550404 A CN 102550404A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- callus
- plum blossom
- sucrose
- culture
- blade
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 title claims abstract description 37
- 230000006698 induction Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 3
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 abstract description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 235000011158 Prunus mume Nutrition 0.000 description 1
- 244000018795 Prunus mume Species 0.000 description 1
- 235000015573 Prunus simonii Nutrition 0.000 description 1
- 244000140975 Prunus simonii Species 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000005078 fruit development Effects 0.000 description 1
- 230000004345 fruit ripening Effects 0.000 description 1
- 238000010413 gardening Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明提供一种梅花叶片愈伤组织诱导方法，其为以真梅系梅花品种胚培养获得的实生苗的幼嫩叶片为外植体，近轴面朝上接入愈伤组织诱导培养基，暗培养2周以上，所述的愈伤组织诱导培养基为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D 0.25～2.00mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。本发明中建立了梅花叶片愈伤组织高效诱导的培养体系，该体系的建立，能够高效的诱导愈伤组织，使叶片愈伤组织的诱导率可达90％以上，而且愈伤组织的增殖量大。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种梅花愈伤组织高效诱导的方法。
背景技术
梅花(Prunus mume Sieb.Et Zucc.)是中国的传统名花，品种繁多，种质资源丰富。它原产于我国西南地区及长江流域、珠江流域，以川、滇、藏为中心，在我国有7000年以上的应用史和3000年以上的栽培史。引种栽培过程中，培育出了众多优良的园艺新品种，极大地丰富了我国的园林景观。
梅花从受粉到果实成熟仅要两三个月左右的时间，果实发育时间短，其果实达到成熟时，胚尚未成熟。种子经过砂藏处理，在正常条件下播种萌发率也很低。胚培养技术可以挽救胚败育和发育不良，缩短休眠期，无需沙藏，极大地提高胚的萌发率及成苗率。潘晓等对‘淡丰后’杏梅品种的胚培养做了初步研究，显著提高了种子的成苗率，但观赏价值高的真梅品种在该研究中未有涉及。
愈伤组织一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律，对植物遗传育种具有特殊意义；另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物，或用于细胞培养筛选工业、农业、医药生产上有用的无性系，或用于原生质体培养中的原生质体来源等。实践证明，愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段，同时也是植物改良，种质保存和有用化合物生产的理想途径。而木本植物外植体污染率比较高，并且木本植物愈伤组织的诱导具有一定的困难。梅花组织培养研究中，通过叶片进行愈伤组织诱导少见报道，高效的愈伤组织诱导体系更是少人问津。
发明内容
本发明的目的在于提供一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法。
为实现本发明目的，本发明提供了一种梅花叶片愈伤组织诱导方法，其为以真梅系梅花品种胚培养获得的实生苗的幼嫩叶片为外植体，近轴面朝上接入愈伤组织诱导培养基，暗培养2周以上，所述的愈伤组织诱导培养基优选为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D0.25～2.00mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基，更优选为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D0.5～1.5mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基，更优选为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D1.0mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。
其中，幼嫩叶片在接种前，去掉叶柄，用刀片沿主脉划2～3刀，保证叶缘处相连目的在于使叶片产生更多的伤口，促进愈伤组织的诱导。
其中，所述幼嫩叶片优选为实生苗长至6～8片叶片时，从上往下数第3～4片叶片。
在本发明一个优选的实施方案中，胚培养包括如下步骤：
1)取开花后50～70天未成熟的梅花果实，用0.5～1.5％的高锰酸钾溶液清洗外果皮并浸泡1～2h，之后流水冲洗1～2h；
2)砸碎果实，取出种子，并用流水清洗去掉种皮；
3)将步骤2)去掉种皮的种子用70％的乙醇浸泡20～40s，1％升汞浸泡8～15min，无菌水冲洗至少3次后备用；
4)将步骤3)表面灭菌后的种子保留部分子叶，接种于MS+0.5～1.5mg/L6-BA+0.1～0.3mg/L IBA+蔗糖20～40g/L，pH＝5.8～6.0的固体实生苗诱导培养基中，暗培养1～3周后，进行光照培养，光照强度为2000～3000Lx，光照时间为14h/d。
其中，优选的梅花果实为开花后60天未成熟的果实。
其中，优选的固体实生苗诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LIBA+蔗糖20～40g/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。
本发明中建立了梅花叶片愈伤组织高效诱导的培养体系，该体系的建立，能够高效的诱导愈伤组织，使叶片愈伤组织的诱导率达90％以上。此外，本发明建立了梅花胚培养体系，实现无菌苗长期保存。用无菌实生苗的幼嫩叶片为外植体，解决了愈伤组织外植体来源的问题。
附图说明
图1所示为梅花胚培养无菌苗植株。
图2所示为梅花叶片愈伤组织诱导结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1梅花外植体的采集及消毒
春季采集真梅系梅花品种‘淡寒红’果实，清水洗净。配制1％的高锰酸钾溶液置于2L的大烧杯中，浸泡清洗外果皮1h，流水冲洗1h直至水澄清为止。用石制研钵轻砸，去掉果肉，轻砸内果皮，取完整饱满的种子，用清水浸泡去掉种皮，胚培养备用。接种时消毒，用70％酒精浸泡种子30s，1％升汞浸泡10min，无菌水冲洗3次，接种备用。
实施例2梅花种子的胚培养
将实施例1灭菌过的种子放在无菌滤纸上，吸干种子表面的水；用镊子将子叶分离，用刀片切割带胚的子叶的下半部分，去掉其中的一片子叶以及另一片子叶的1/2，然后将外植体接种于含有40ml培养基的100ml锥形瓶中，每瓶接种3个外植体，培养基配方为MS+0.5-1.5mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/L IBA(见表1)，其中添加了浓度30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂；将培养瓶置于黑暗条件下，25±3℃培养两周时间，再转入光培养，培养两周。光培养条件为光照强度2000～3000Lx，光照时间14h/d。接种一个月左右即可得到无菌苗。个激素浓度与萌发率结果见表1。
表1不同激素组合对胚培养的影响
注：小写字母表示0.05水平上差异显著；大写字母表示0.01水平上，下同。基本培养基中添加30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，PH 5.85。
实施例3愈伤组织的诱导
当实施例2中的无菌苗长至6-8片叶时，取从上往下数的第3-4片叶片，沿中脉1/3处横切2-3刀，保持叶缘连接，接种到MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+2，4-D 0～3.0mg/L，pH＝5.85(见表2)；置于温度25±3℃，暗培养条件下，培养两周时间。
表2植物激素诱导愈伤组织
从表3中可以看出，2，4-D 0.25～3.0mg/L的浓度均能诱导出愈伤组织，但当2，4-D浓度超过1.00mg/L时，愈伤组织较易发生褐化、坏死等现象，当2，4-D浓度超过2.50mg/L时，愈伤组织诱导率降低。综合考虑，2，4-D浓度为0.5～1.50mg/L时，诱导效果较好，最佳的浓度为1.0mg/L。
用上述建立的愈伤组织诱导方法试验另外的真梅系梅花品种，如‘粉瓣’、‘双碧垂枝’等，愈伤组织组织诱导率也均在85％以上。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种梅花叶片愈伤组织诱导方法，其为以真梅系梅花品种胚培养获得的实生苗的幼嫩叶片为外植体，近轴面朝上接入愈伤组织诱导培养基，暗培养2周以上，所述的愈伤组织诱导培养基为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D 0.25～2.00mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。
2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，其中幼嫩叶片在接种前，去掉叶柄，用刀片沿主脉横切2～3刀，保证叶缘处相连。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述幼嫩叶片为实生苗长至6～8片叶片时，从上往下数第3～4片叶片。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，胚培养包括如下步骤：
1)取开花后50～70天未成熟的梅花果实，用0.5～1.5％的高锰酸钾溶液清洗外果皮并浸泡1～2h，之后流水冲洗1～2h；
2)砸碎果实，取出种子，并用流水清洗去掉种皮；
3)将步骤2)去掉种皮的种子用70％的乙醇浸泡20～40s，1％升汞浸泡8～15min，无菌水冲洗至少3次后备用；
4)将步骤3)表面灭菌后的种子保留部分子叶，接种于MS+0.5～1.5mg/L6-BA+0.1～0.3mg/L IBA+蔗糖20～40g/L，pH＝5.8～6.0的固体实生苗诱导培养基中，暗培养1～3周后，进行光照培养，光照强度为2000～3000Lx，光照时间为14h/d。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的固体实生苗诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LIBA+蔗糖20～40g/L。
6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D0.5～1.5mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D1.0mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110422216 CN102550404B (zh) | 2011-12-16 | 2011-12-16 | 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110422216 CN102550404B (zh) | 2011-12-16 | 2011-12-16 | 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102550404A true CN102550404A (zh) | 2012-07-11 |
| CN102550404B CN102550404B (zh) | 2013-07-31 |
Family
ID=46398061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110422216 Expired - Fee Related CN102550404B (zh) | 2011-12-16 | 2011-12-16 | 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102550404B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106472320A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-03-08 | 广西南岜仔科技有限公司 | 一种梅花愈伤组织的诱导培养基 |
| CN106718885A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-05-31 | 广西南岜仔科技有限公司 | 一种高效快速诱导梅花愈伤组织形成的培养基 |
| CN111802247A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-10-23 | 贵州大学 | 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法 |
| CN114303947A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-12 | 浙江宜格企业管理集团有限公司 | 一种梅花愈伤组织的制备方法 |
-
2011
- 2011-12-16 CN CN 201110422216 patent/CN102550404B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 《分子植物育种》 20061231 吕英民等 梅花品种" 美人"叶片离体再生体系建立 第887-894页 1-7 第4卷, 第6期 * |
| 《北京林业大学学报》 20100228 潘晓，陈瑞丹 '淡丰后'梅胚培养影响因素的研究 第88-92页 1-7 第32卷, * |
| 吕英民等: "梅花品种" 美人"叶片离体再生体系建立", 《分子植物育种》 * |
| 潘晓，陈瑞丹: "‘淡丰后’梅胚培养影响因素的研究", 《北京林业大学学报》 * |
| 石文芳等: "4 个梅花品种的胚培养及愈伤组织诱导研究", 《中国农学通报》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106472320A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-03-08 | 广西南岜仔科技有限公司 | 一种梅花愈伤组织的诱导培养基 |
| CN106718885A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-05-31 | 广西南岜仔科技有限公司 | 一种高效快速诱导梅花愈伤组织形成的培养基 |
| CN111802247A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-10-23 | 贵州大学 | 一种山樱花的组织培养和快速繁殖方法 |
| CN114303947A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-12 | 浙江宜格企业管理集团有限公司 | 一种梅花愈伤组织的制备方法 |
| CN114303947B (zh) * | 2021-12-28 | 2023-03-03 | 浙江宜格企业管理集团有限公司 | 一种梅花愈伤组织的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102550404B (zh) | 2013-07-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101822220B (zh) | 一种春兰名品茎尖组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102613076A (zh) | 一种蝴蝶兰的无性繁殖方法 | |
| CN101347097A (zh) | 木薯体细胞胚胎发生再生植株快繁方法 | |
| CN103461118A (zh) | 一种金线莲种苗的工厂化生产方法 | |
| CN104429952A (zh) | 一种培养结球甘蓝游离小孢子高效获得再生植株的方法 | |
| CN103004604B (zh) | 一种万代兰品种的繁育方法 | |
| CN102550404B (zh) | 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 | |
| CN109258469B (zh) | 一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法 | |
| CN112715367B (zh) | 一种利用硝酸镧进行毛梾组培继代增殖的方法 | |
| CN103651141A (zh) | 亳菊工厂化试管苗快繁的方法 | |
| CN111134019B (zh) | 一种齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法 | |
| CN106106138B (zh) | 一种红掌杂交育种及快速繁殖方法 | |
| CN109526746B (zh) | 一种白鹤芋叶柄组织培养方法 | |
| CN112106663B (zh) | 一种杨梅实生无性系的建立方法 | |
| CN109601387A (zh) | 以幼孢子囊群诱导的ggb途径的华南紫萁组培繁殖方法 | |
| CN104823850A (zh) | 一种橡胶树体细胞胚胎发生和植株再生的方法 | |
| CN114424749A (zh) | 一种山麦冬离体快繁方法 | |
| CN114600772A (zh) | 一种深山含笑的组培方法和快速繁殖方法 | |
| CN108094200A (zh) | 一种热处理结合茎尖剥离获得安祖花脱毒苗的培育方法 | |
| CN110326537B (zh) | 一种香椿丛生芽诱导及增殖方法 | |
| CN107094626A (zh) | 染井吉野樱的组培快繁方法 | |
| CN114027180A (zh) | 一种文冠果多倍体的培育方法及其应用 | |
| CN104186320B (zh) | 一种长筒石蒜种子离体培养的方法 | |
| CN109526748A (zh) | 一种白鹤芋花序组织培养方法 | |
| CN109258475A (zh) | 一种木槿繁殖培育的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130731 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |