CN111630173A - 新型人工核酸分子 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含5′非翻译区(UTR)元件和3′UTR元件的新组合的人工核酸分子。本发明的核酸分子优选地以提高可操作地连接至所述UTR元件的编码区的表达效率为特征。人工核酸可用于治疗或预防各种疾病。本发明还提供了包含所述人工核酸分子的(药物)组合物、疫苗和试剂盒。此外，提供了制备根据本发明的人工核酸分子的体外方法。

Description

新型人工核酸分子

迄今为止，裸DNA、病毒或细菌DNA载体形式的治疗性核酸已被用于多种目的。基因疗法试图通过将一种或多于一种治疗性核酸转移到患者细胞中(基因添加疗法)或通过纠正缺陷基因(基因替代疗法)，例如通过基因编辑，来治疗疾病。这种转移技术有望为常规疗法无法治愈或仅能暂时治愈的疾病提供持久疗法，甚至为以前被归类为无法治愈的疾病提供治疗。目前可用的基因治疗策略通常基于在体内将基因递送至有丝分裂后靶细胞或组织，或离体将基因递送至自体细胞，然后过继转移回患者体内(Kumar等人Mol TherMethods Clin Dev.2016；3：16034)。一段时间以来，临床基因治疗的特点是取得了令人鼓舞的结果，但也遇到了一些挫折。就确定的组成和制备可再现性而言，基因递送的优选方法涉及在合适的载体例如合成颗粒中提供裸DNA，例如使用脂质或聚合物。但是，这些方法尚未在体内实现有效吸收和持续的基因表达。因此，已经证明具有一定临床益处的基因替代疗法试验依赖于病毒载体进行基因递送。在各种基于病毒的载体系统中，腺相关病毒(AAV)DNA载体最常用于体内基因递送。能够整合到靶细胞基因组中的逆转录病毒载体(γ-逆转录病毒或慢病毒衍生的载体)的使用在一定程度上受到安全和道德问题的阻碍。有关逆转录病毒基因疗法的担忧是基于在载体制备过程中可能产生具有复制能力的逆转录病毒、基因组中的内源性逆转录病毒的载体移动、导致癌症的插入诱变、种系改变和来自基因治疗患者的新病毒的传播。尽管基于AAV的载体通常不会整合到患者的基因组中，从而避免了许多潜在的风险，但偶尔观察到的位点特异性整合事件、已治疗患者的载体脱落以及针对病毒结构蛋白的免疫应答所引起的潜在副作用令人担忧。

免疫疗法是治疗性核酸的第二重要应用领域。特别地，已经评估了用于癌症免疫治疗的编码肿瘤抗原的DNA疫苗。原则上，利用患者自身的适应性免疫力对抗癌细胞似乎很有吸引力。基于非病毒DNA载体的基于DNA的疫苗通常可以轻松工程化并快速大量生产。这些DNA载体是稳定的并且可以容易地储存和运输。与活的减毒细菌或病毒活疫苗不同，不存在致病性感染或诱导抗病毒免疫应答的风险。裸露的DNA在体内不易在细胞之间扩散。APC不能轻易吸收表达的抗原并激活符合要求的免疫应答(Yang等人Hum VaccinImmunother.2014年11月；10(11)：3153-3164)。另一方面，转染细胞的有限摄取和随之而来的有限的抗原转录是基于非病毒DNA的疫苗的主要缺点。实际上，用编码肿瘤抗原的DNA进行的抗肿瘤疫苗接种在免疫防护实验中取得了一些成功，并且已经设计、制造了多种类型的抗癌疫苗，并进行了临床前测试。但是，在临床试验中，诱导可测量的免疫应答和延长患者总体生存期的有效性一直不佳。

通过电穿孔或病毒介导递送的施用方式可以解决该问题，但会带来新的问题。就电穿孔而言，临床认可的设备的可用性和患者的依从性限制了其在临床中的使用。在病毒介导的递送情况下，问题主要与向患者施用活病毒以及患者体内存在抗病毒中和抗体相关的潜在危险有关(Lollini等人Vaccines.2015年6月；3(2)：467-489)。

自从最初开发以来，基于核酸的疫苗和基因治疗技术已经有了长足的发展。不幸的是，当应用于人类对象时，由于基因或抗原表达不足，不充分的摄取和转录只能获得有限的临床成功。对于治疗性DNA的实际使用而言，治疗性蛋白的递送不足(在基因治疗的情况下)或免疫原性不足(在免疫治疗的情况下)仍然是最大的挑战。Li和Petrovsky ExpertRev Vaccines.2016；15(3)：313-329。尽管基于RNA的治疗方法克服了治疗性DNA的许多缺点，但是对于目前观察到的可用治疗性RNA的表达效率，仍有改进的空间。因此，迫切需要帮助增强治疗性核酸效力的有效策略。本发明的一个目的是满足上述需求。

尽管在下面详细描述了本发明，应理解的是，本发明不限于本文所述的特定方法、方案和试剂，因为它们可以变化。还应理解的是，本文使用的术语不意图限制本发明的范围，本发明的范围仅受所附权利要求的限制。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

在下文中，将描述本发明的要素。这些要素与特定实施方案一起列出，但应该理解的是，它们可以以任何方式和任何数量组合以创建额外的实施方案。不同描述的实施例和优选实施方案不应被解释为将本发明限制为仅明确描述的实施方案。该描述应被理解为支持并涵盖将明确描述的实施方案与任何数量的所公开和/或优选要素相结合的实施方案。此外，除非上下文另外指出，否则应认为本申请的描述中公开了本申请中所有所描述要素的任何排列和组合。

在整个说明书和随后的权利要求中，除非上下文另有要求，否则术语“包括”以及变体如“含有”和“包含”将被理解为暗示包括所陈述的成员、整数或步骤，但不排除任何其他未陈述的成员、整数或步骤。术语“由...组成”是术语“包含”的特定实施方案，其中排除了任何其他未陈述的成员、整数或步骤。在本发明的上下文中，术语“包含”涵盖术语“由...组成”。因此，术语“包含”涵盖“包含”以及“由...组成”，例如，“包含”X的组合物可以仅由X组成、或者可以包含其他内容，例如X+Y。

除非在本文中另外指出或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中不使用数量词(特别是在权利要求的上下文中)应解释为涵盖单数和复数。本文中对数值范围的引用仅旨在用作单独提到落入该范围内的每个单独值的简写方法。除非本文另有说明，否则将每个单独的值并入本说明书中，如同其在本文中单独引用一样。说明书中的任何语言都不应解释为表示对于本发明的实践必不可少的任何未要求保护的要素。

词语“基本上”不排除“完全”，例如，“基本上没有”Y的组合物可以完全没有Y。必要时，可以从本发明的定义中省略词语“基本上”。

相对于数值x的术语“约”是指x±1％、x±2％、x±3％、x±4％、x±5％、x±6％、x±7％、x±8％、x±9％或x±10％。

在本发明中，如果没有另外指出，则替代方案和实施方案的不同特征可以彼此组合。

为了清楚和可读起见，提供以下定义。可以在本发明的每个实施方案读到针对这些定义提及的任何技术特征。在这些实施方案的上下文中可以具体地提供附加的定义和解释。

定义

人工核酸分子：人工核酸分子通常可以理解为核酸分子，例如天然不存在的DNA或RNA。换句话说，人工核酸分子可以理解为非天然核酸分子。此类核酸分子由于其单独的序列(其不是天然存在的)和/或由于不是天然存在的其他修饰例如核苷酸的结构修饰而可能是非天然的。人工核酸分子可以是DNA分子、RNA分子或包含DNA和RNA部分的杂合分子。通常，可以通过基因工程方法设计和/或产生人工核酸分子以对应于所需的人工核苷酸序列(异源序列)。在这种情况下，人工序列通常是可能天然不存在的序列，即，其与野生型序列相差至少一个核苷酸。术语“野生型”可以理解为天然存在的序列。此外，术语“人工核酸分子”不限于表示“一个单一分子”，而是通常被理解为包括相同分子的整体。因此，它可以涉及包含在试样中的多个相同分子。

DNA：DNA是脱氧核糖核酸的常用缩写。它是核酸分子，即由核苷酸组成的聚合物。这些核苷酸通常是脱氧腺苷单磷酸、脱氧胸苷单磷酸、脱氧鸟苷单磷酸和脱氧胞苷单磷酸单体，它们本身由糖部分(脱氧核糖)、碱基部分和磷酸部分组成，并通过特征性的骨架结构聚合。通常，骨架结构由第一核苷酸的糖部分即脱氧核糖和第二相邻单体的磷酸部分之间的磷酸二酯键形成。单体的特定顺序，即与糖/磷酸骨架相连的碱基的顺序，被称为DNA序列。DNA可以是单链或双链的。在双链形式中，第一链的核苷酸通常与第二链的核苷酸杂交，例如通过A/T碱基配对和G/C碱基配对杂交。

异源序列：如果两个序列不是来自同一基因，则通常被认为是“异源”的。即，尽管异源序列可以来源于相同生物，但是它们天然地(自然地)不存在于同一核酸分子中，例如同一mRNA中。

克隆位点：克隆位点通常被理解为核酸分子的区段，其适合于插入核酸序列，例如，包含开放阅读框的核酸序列。插入可以通过本领域技术人员已知的任何分子生物学方法进行，例如通过酶切与连接。克隆位点通常包含一个或多于一个限制性内切酶识别位点(酶切位点)。这些一个或多于一个酶切位点可以被在这些位点切割DNA的限制性内切酶识别。包含多于一个酶切位点的克隆位点也可以称为多克隆位点(MCS)或多位点接头。

核酸分子：核酸分子是包含核酸组分，优选由核酸组分组成的分子。术语核酸分子优选是指DNA分子或RNA分子。优选其与术语“多核苷酸”同义使用。优选地，核酸分子是包含核苷酸单体或由核苷酸单体组成的聚合物，所述核苷酸单体通过糖/磷酸骨架的磷酸二酯键彼此共价连接。术语“核酸分子”还涵盖经修饰的核酸分子，例如碱基修饰、糖修饰或骨架修饰等的DNA或RNA分子。

开放阅读框：在本发明的上下文中，开放阅读框(ORF)通常可以是几个核苷酸三联体的序列，其可以翻译成肽或蛋白质。开放阅读框优选在其5′端包含起始密码子，即三个通常编码氨基酸甲硫氨酸的顺序核苷酸的组合(ATG)，和长度通常为3个核苷酸的倍数的后续区域。ORF优选由终止密码子(例如，TAA、TAG、TGA)终止。通常，这是开放阅读框的唯一终止密码子。因此，在本发明的上下文中，开放阅读框优选是核苷酸序列，其由可以被三除的多个核苷酸组成，其以起始密码子(例如ATG)开始并且优选以终止密码子(例如，TAA、TAG、TGA)终止。开放阅读框可以是分离的，或者可以掺入更长的核酸序列中，例如掺入载体或mRNA中。开放阅读框也可以称为“(蛋白质)编码序列”，或优选地，称为“编码序列”。

肽：肽或多肽通常是通过肽键连接的氨基酸单体的聚合物。它通常包含少于50个单体单元。然而，术语“肽”并不否认具有超过50个单体单元的分子。长肽也称为多肽，通常具有50个至600个单体单元。

蛋白质 蛋白质通常包含一个或多于一个肽或多肽。蛋白质通常折叠成3维形式，这可能是蛋白质发挥其生物学功能所必需的。

限制性位点：限制性位点也称为限制性酶识别位点，是被限制酶识别的核苷酸序列。限制性位点通常是短的核苷酸序列，优选回文核苷酸序列，例如包含4个至8个核苷酸的序列。限制性位点优选被限制酶特异性识别。限制酶通常在限制性位点切割包含该位点的核苷酸序列。在双链核苷酸序列，例如双链DNA序列中，限制酶通常切割核苷酸序列的两条链。

RNA、mRNA：RNA是核糖核酸的常用缩写。它是核酸分子，即由核苷酸组成的聚合物。这些核苷酸通常是腺苷单磷酸单体、尿苷单磷酸单体、鸟苷单磷酸单体和胞苷单磷酸酯单体，它们沿着所谓的骨架相互连接。骨架是由第一单体的糖部分即核糖和第二相邻单体的磷酸部分之间的磷酸二酯键形成的。单体的特定顺序称为RNA序列。通常，RNA可以通过DNA序列例如在细胞内部的转录而获得。在真核细胞中，转录通常在细胞核或线粒体内进行。在体内，DNA的转录通常产生所谓的成熟前RNA，其必须被加工成所谓的信使RNA，通常缩写为mRNA。例如真核生物中的成熟前RNA的加工包括各种不同的转录后修饰，例如剪接、5′-加帽、多聚腺苷酸化、从核或线粒体输出等。这些过程的总和也称为RNA成熟。成熟的信使RNA通常提供可被翻译成特定肽或蛋白质的氨基酸序列的核苷酸序列。通常，成熟的mRNA包含5′帽、5′-UTR、开放阅读框、3′-UTR和多聚腺苷酸序列。除了信使RNA，还存在几种非编码类型的RNA，它们可能参与转录和/或翻译的调控。

核酸分子的序列：通常将核酸分子的序列理解为特定和单独的顺序，即其核苷酸的连续排列。通常将蛋白质或肽的序列理解为顺序，即其氨基酸的连续排列。

序列同一性：如果两个或多于两个序列具有相同的核苷酸或氨基酸长度和顺序，则它们是同一的。同一性百分比通常描述两个序列相同的程度，即，它通常描述在序列位置上与参考序列的相同核苷酸相对应的核苷酸的百分比。为了确定同一性程度(同一性％)，通常将要比较的序列视为具有相同的长度，即，要比较的序列中最长序列的长度。这意味着由8个核苷酸组成的第一序列与由10个核苷酸组成的包含第一序列的第二序列80％相同。换句话说，在本发明的上下文中，序列同一性优选地涉及在两个或多于两个具有相同长度的序列中具有相同位置的序列的核苷酸或氨基酸的百分比。具体地，可以通过将序列对齐以达到最佳比较目的(例如，可以在任一序列中引入空位以与另一序列进行最佳对齐)并比较对应位置的氨基酸或核苷酸，来确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的“同一性％”。空位通常被视为不相同的位置，而不管其在对齐中的实际位置如何。“最佳对齐”通常是产生最高同一性百分比的两个序列的对齐。同一性百分比由所比较的序列中相同核苷酸的数目确定(即，同一性％＝相同位置的数目/位置的总数×100)。可以使用本领域技术人员已知的数学算法来确定两个序列之间的同一性百分比。

稳定化的核酸分子：稳定的核酸分子是被修饰，使得其比未修饰的核酸分子对分解或降解，例如通过环境因素或酶消化，例如通过外切核酸酶或内切核酸酶降解更稳定的核酸分子，优选DNA分子或RNA分子。优选地，在本发明的上下文中，稳定化的核酸分子在细胞如原核或真核细胞，优选哺乳动物细胞如人细胞中是稳定的。稳定作用还可以例如在缓冲溶液等的细胞外部实现，例如在包含稳定的核酸分子的药物组合物的制造过程中实现。

转染：术语“转染”是指将核酸分子，例如DNA或RNA(例如mRNA)分子引入细胞，优选引入真核细胞中。在本发明的上下文中，术语“转染”涵盖技术人员已知的用于将核酸分子引入细胞优选引入真核细胞例如哺乳动物细胞中的任何方法。这样的方法包括例如电穿孔、脂质转染例如基于阳离子脂质和/或脂质体的脂质转染、磷酸钙沉淀、基于纳米颗粒的转染、基于病毒的转染、或基于阳离子聚合物例如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺的转染等。优选地，引入是非病毒性引入。

载体：术语“载体”是指核酸分子，优选人工核酸分子。在本发明的上下文中，载体适合于掺入或容纳期望的核酸序列，例如包含开放阅读框的核酸序列。这样的载体可以是储存载体、表达载体、克隆载体、转移载体等。储存载体是能够方便地储存核酸分子例如mRNA分子的载体。因此，载体可以包含例如对应于所需mRNA序列或其一部分的序列，例如对应于mRNA的编码序列和3′-UTR的序列。表达载体可用于产生表达产物，例如RNA如mRNA或肽、多肽或蛋白质。例如，表达载体可以包含转录载体的序列片段所需的序列，例如启动子序列，例如RNA聚合酶启动子序列。克隆载体通常是包含克隆位点的载体，其可用于将核酸序列纳入到载体中。克隆载体可以是例如质粒载体或噬菌体载体。转移载体可以是适于将核酸分子转移到细胞或生物体中的载体，例如病毒载体。在本发明的上下文中，载体可以是例如RNA载体或DNA载体。优选地，载体是DNA分子。优选地，在本申请意义上，载体包含克隆位点、选择标记例如抗生素抗性因子、和适合于载体复制的序列例如复制起点。

载剂：载剂通常理解为适合于储存、运输和/或施用化合物例如药物活性化合物的材料。例如，它可以是生理上可接受的液体，其适合于储存、运输和/或施用药物活性化合物。

在自然界中，基因表达的精确控制对于快速适应环境刺激至关重要，所述环境刺激会改变细胞的生理状态，例如细胞应激或感染。基因表达程序经过不断的调控，并受到顺式和反式的多层调控元件的严格调控。为了进行这样的精确控制，细胞机器发展出在从转录到翻译的多个阶段微调基因表达的调节机制。这些调节机制包括染色体DNA的结构和化学修饰、转录调控、信使RNA(mRNA)的转录后控制、不同的翻译效率和蛋白质更新。这些机制共同决定了基因的时空控制。信使RNA由蛋白质编码区、5′和3′非翻译区(UTR)组成。3′UTR的序列和大小可变，它跨越终止密码子和多聚腺苷酸尾。重要的是，3′UTR序列具有决定mRNA更新、稳定性和定位的多个调控基序，因此可控制转录后基因调控的许多方面(Schwerk和Savan.J Immunol.2015年10月1日；195(7)：2963-2971)。在基因治疗和免疫治疗应用中，转基因表达的严格调节对于治疗安全性和有效性至关重要。转基因需要在合适的位置以最佳阈值表达。然而，控制转基因表达水平以在治疗功效和非特异性毒性之间取得平衡的能力仍然是当前基因疗法和免疫疗法应用的主要挑战。本发明人出人意料地发现5′和3′非翻译区(UTR)的某些组合协同作用从而协同地增强可操作连接的核酸序列的表达。具有本发明的UTR组合的人工核酸分子有利地使得能够实现为基因治疗或免疫治疗目的而递送的大量(多)肽或蛋白质的快速和瞬时表达。此外，本文公开的基于核酸的新型治疗剂优选提供优于当前可用治疗选择的其他优点，包括降低的插入诱变的风险以及非病毒递送和摄取的更大功效。因此，本文提供的人工核酸对于体内的各种治疗应用特别有用，包括例如基因治疗、癌症免疫治疗或针对感染因子的疫苗接种。

因此，在第一方面，本发明因此涉及一种人工核酸分子，其包含衍生自选自HSD17B4、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B和UBQLN2的基因的5′UTR的至少一个5′非翻译区(5′UTR)元件；衍生自选自PSMB3、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1和RPS9的基因的3′UTR的至少一个3′非翻译区(3′UTR)元件；和任选地，可操作地连接至所述3′UTR和所述5′UTR的至少一个编码区。

术语“UTR”是指位于本文所述核酸分子编码区上游(5′)和/或下游(3′)的“非翻译区”，从而通常位于所述编码区的侧翼。因此，术语“UTR”通常包括3′非翻译区(“3′-UTR”)和5′非翻译区(“5′-UTR”)。UTR通常可以包含或组成为不翻译成蛋白质的核酸序列。通常，UTR包含“调节元件”。术语“调节元件”是指具有基因调节活性的核酸序列，其能够影响可操作地(以顺式或反式)连接的可转录核酸序列的表达，特别是转录或翻译。该术语包括启动子、增强子、内部核糖体进入位点(IRES)、内含子、前导序列、转录终止信号例如多聚腺苷酸化信号和多聚尿苷酸化序列、以及其他表达控制元件。调节元件可以组成性地或以时间和/或细胞特异性的方式起作用。任选地，调节元件可通过与能够调节(诱导、增强、减少、消除或阻止)基因表达，特别是基因转录的调节蛋白相互作用(例如募集和结合)而发挥其功能。UTR优选“可操作地连接”，即以功能关系位于编码区，优选以允许它们控制(即调控或调节，优选增强)所述编码序列表达的方式位于编码区。“UTR”优选包含或组成为衍生自基因，优选本文举例说明的基因的(天然存在的，野生型)UTR的核酸序列。如本文所用，术语“UTR元件”通常是指对应于亲本基因的UTR(“亲本”UTR)的较短子序列的核酸序列。在该语境下，术语“对应于”是指UTR元件可以包含或组成为由“亲本”UTR所衍生自的基因转录的RNA序列(即等于用于确定所述“亲本”UTR的RNA序列)、或等同于所述RNA序列的相应DNA序列(包括有义链和反义链、成熟和未成熟的)、或其混合物。

当提及“衍生自”某个基因的UTR的UTR元件时，所述UTR元件可以衍生自所述基因的任何天然存在的同源物、变体或片段。即，当提及“衍生自”HSD17B4基因的UTR元件时，相应的UTR元件可以由对应于“亲本”HSD17B4基因的UTR的较短子序列的核酸序列或任何HSD17B4同源物、变体或片段(特别包括与“亲本”HSD17B4基因相比，在UTR区包括变体的HSD17B4同源物、变体或片段)组成。

在整个说明书中，在人工核酸的上下文中使用的术语“衍生自”，即对于“衍生自”(另一种)人工核酸的人工核酸，还指衍生自(另一种)人工核酸的(人工)核酸与其所衍生自的核酸具有例如至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。技术人员知道，通常针对相同类型的核酸，即针对DNA序列或针对RNA序列计算序列同一性。因此，可以理解，如果DNA“衍生自”RNA、或者RNA“衍生自”DNA，则第一步，将RNA序列转化为相应的DNA序列(特别是通过在整个序列中用胸腺嘧啶(T)替换尿嘧啶(U))，或者反过来，将DNA序列转化为相应的RNA序列(特别是通过在整个序列中用U替换T)。此后，确定DNA序列的序列同一性或RNA序列的序列同一性。优选地，“衍生自”核酸的核酸还指与其所衍生自的核酸相比被修饰，例如以进一步增加RNA稳定性和/或延长和/或增加蛋白质产量的核酸。在氨基酸序列(例如抗原性肽或蛋白质)的上下文中的术语“衍生自”是指衍生自(另一个)氨基酸序列的氨基酸序列与其所衍生自的氨基酸序列具有例如至少60％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。

在基因(或由其衍生或由所述基因包含的核酸序列，例如UTR)的上下文中的术语“同源物”是指与由共同的祖先DNA序列进化出的第二基因(或这样的核酸序列)相关的基因(或由其衍生或由所述基因包含的核酸序列)。术语“同源物”包括因物种形成事件而分离出的基因(“种间同源”)和因基因复制事件而分离出的基因(“种内同源”)。

在基因的核酸序列的上下文中，术语“变体”是指核酸序列变体，即，包含与参考(或“亲本”)核酸或基因的参考(或“亲本”)核酸序列的至少一个核酸不同的核酸序列的核酸序列或基因。因此，与变体核酸或基因各自的参考序列相比，它们可优选在其核酸序列中包含至少一个突变、置换、插入或缺失。优选地，如本文所用，术语“变体”包括天然存在的变体以及核酸序列或基因的工程变体。因此，本文所定义的“变体”可以衍生自参考核酸序列、分离自参考核酸序列、与参考核酸序列相关、基于参考核酸序列或与参考核酸序列同源。“变体”可以优选地与各自的天然存在的(野生型)核酸序列或基因或其同源物、片段或衍生物的核酸序列具有至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％、优选至少70％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、甚至更优选至少90％、最优选至少95％或甚至97％的序列同一性。

同样，在本说明书的蛋白质或肽的上下文中使用的术语“变体”将被本领域普通技术人员所认识和理解，并且例如是指以下的蛋白质或肽变体，其氨基酸序列与原始序列的区别在于一个或多于一个突变，例如一个或多于一个置换、插入和/或缺失的氨基酸。优选地，与全长天然蛋白质相比，这些片段和/或变体具有相同的生物功能或特定活性，例如其特定的抗原性。与本文定义的蛋白质或肽的“变体”的天然序列，即，未突变的生理序列相比，本文定义的蛋白质或肽的“变体”可包含保守的氨基酸置换。那些氨基酸序列以及它们的编码核苷酸序列尤其属于本文所定义的术语变体。来自同一类别的氨基酸彼此交换的置换称为保守置换。特别是，这些氨基酸是具有脂肪族侧链、带正电荷或负电荷的侧链、在侧链中具有芳香族基团的氨基酸，或其侧链可以进入氢桥，例如具有羟基功能的侧链的氨基酸。这意味着例如具有极性侧链的氨基酸被具有相同极性侧链的另一个氨基酸替换，或例如，以疏水性侧链为特征的氨基酸被具有相同疏水性侧链的另一个氨基酸替换(例如，丝氨酸(苏氨酸)被苏氨酸(丝氨酸)替换，或亮氨酸(异亮氨酸)被异亮氨酸(亮氨酸)替换)。插入和置换是可能的，特别是在那些不会改变三维结构或不影响结合区域的序列位置。可以容易地确定通过插入或缺失进行的三维结构的修饰，例如使用CD光谱(圆二色光谱)。蛋白质或肽的“变体”可在这种蛋白质或肽的至少10个、20个、30个、50个、75个或100个氨基酸的区段内具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的氨基酸同一性。优选地，蛋白质变体包含蛋白质的功能变体，这是指该变体与其所衍生自的蛋白质的作用或功能相比，发挥了相同的作用或功能或至少40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的作用或功能。

在核酸序列或基因的上下文中，术语“片段”是指全长参考(或“亲本”)核酸序列或基因的连续子序列。换句话说，“片段”通常可以是全长核酸序列或基因的较短部分。因此，片段通常由与全长核酸序列或基因内的相应片段相同的序列组成。该术语包括天然存在的片段以及工程片段。在本发明的上下文中，优选的序列片段由核酸的连续片段组成，该核酸的连续片段对应于衍生该片段的核酸或基因实体的连续片段，其占衍生该片段的全部(即全长)核酸序列或基因的至少20％、优选至少30％、更优选至少40％、更优选至少50％、甚至更优选至少60％、甚至更优选至少70％和最优选至少80％。关于这样的片段指示的序列同一性优选是指整个核酸序列或基因。优选地，“片段”可以包含与衍生它们的参考核酸序列或基因具有至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％、优选至少70％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、甚至更优选至少90％、最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

UTR元件优选是“功能性的”，即能够发挥与其衍生自的亲本UTR相同的期望生物学作用，即特别是调节、控制或调控(诱导、增强、减少、消除或预防，优选诱导或增强)可操作连接的编码序列的表达。这里使用的术语“表达”通常包括蛋白质生物合成的所有步骤，尤其是转录、mRNA加工和翻译。例如，UTR元件，特别是本文指定的组合中的3′-UTR元件和5′UTR元件，可以(通常通过所述UTR元件所包含的调节区的作用)调节包含所述UTR元件的核酸的聚腺苷酸化、翻译起始、翻译效率、定位和/或稳定性。

本发明的人工核酸分子有利地包含至少一个5′UTR元件和至少一个3′UTR元件，其分别衍生自选自本文公开的组的基因。合适的5′UTR元件优选地选自衍生自选自HSD17B4、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B和UBQLN2的基因的5′UTR的5′UTR元件，优选如本文所定义。合适的3′UTR元件优选地选自衍生自选自PSMB3、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1和RPS9的基因的3′UTR的3′UTR元件，优选如本文所定义。此外，本发明的人工核酸分子可任选地包含可操作地连接至所述3′UTR元件和所述5′UTR元件的至少一个编码区。优选地，本发明的人工核酸分子因此可以在5′→3′方向上包含如本文所定义的5′-UTR元件，其可操作地连接至编码目的(多)肽或蛋白质的编码区(cds)，以及3′UTR元件，其可操作地连接至所述编码区：

5′-UTR-cds-3′UTR。

通常，本发明的人工核酸分子的5′-UTR和/或3′-UTR元件可以是与至少一个编码序列“异源的”。本文使用的术语“异源”是指通常衍生自与参考核酸序列不同物种的核酸序列。因此，“异源序列”可以衍生自与参考序列相比具有不同起源的基因，并且其核酸序列通常可以与参考序列不同和/或可以编码不同的基因产物。

UTR

5′UTR

本文所述的人工核酸包含衍生自本文所述基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的至少一个5′-UTR元件。

术语“5′-UTR”是指核酸分子的一部分，其位于开放阅读框的5′(即“上游”)，并且不翻译成蛋白质。在本发明上下文中，5′-UTR以转录起始位点开始，并在开放阅读框的起始密码子之前的一个核苷酸终止。5′-UTR可以包含用于调节基因表达的元件，其也称为“调节元件”。这样的调节元件可以是例如核糖体结合位点。5′-UTR可以进行转录后修饰，例如添加5′-帽。因此，5’-UTR可以优选对应于位于5′-帽和起始密码子之间的核酸序列，特别是成熟的mRNA，更具体地对应于以下序列：其从位于3′至5′-帽的核苷酸，优选从位于紧邻3′至5′-帽的核苷酸延伸到位于5′至蛋白质编码序列的起始密码子的核苷酸(转录起始位点)，优选延伸到位于紧邻5′至蛋白质编码序列的起始密码子的核苷酸(转录起始位点)。位于成熟mRNA的紧邻3′至5′-帽的核苷酸通常对应于转录起始位点。5′UTR的长度通常小于500个、400个、300个、250个或小于200个核苷酸。在一些实施方案中，其长度可以为至少10个、20个、30个或40个核苷酸，优选至多100个或150个核苷酸。

优选地，至少一个5′UTR元件包含或组成为衍生自脊索动物基因，优选脊椎动物基因，更优选哺乳动物基因，最优选人基因的5′UTR的核酸序列，或衍生自脊索动物基因，优选脊椎动物基因，更优选哺乳动物基因，最优选人基因的3′UTR的变体的核酸序列。

本文指定的某些5′UTR元件可衍生自TOP基因的5′UTR或衍生自其同源物、变体或片段。“TOP基因”的典型特征是存在5′末端寡嘧啶束(TOP)，而且还在于与生长相关的翻译调节。然而，具有组织特异性翻译调节的TOP基因也是已知的。包含5′TOP的mRNA通常称为TOP mRNA。因此，提供这种信使RNA的基因被称为“TOP基因”。例如，已经在编码肽延伸因子和核糖体蛋白的基因和mRNA中发现了TOP序列。5′末端寡嘧啶束(“5′TOP”或TOP)通常是位于核酸分子5′末端区域例如某些mRNA分子的5′末端区域或某些基因的功能实体例如转录区的5′末端区域中的嘧啶核苷酸的片段。TOP基因的5′UTR对应于衍生自TOP基因的成熟mRNA的5′UTR的序列，其优选从位于3′至5′-帽的核苷酸延伸至位于5′至起始密码子的核苷酸。该TOP序列通常以通常对应于转录起始位点的胞苷开始，然后是通常约3个至30个嘧啶核苷酸的片段。嘧啶延伸，因此，5′TOP终止于TOP下游的第一个嘌呤核苷酸的5′端的一个核苷酸。

TOP基因的5′UTR通常不包含任何起始密码子，优选不包含上游AUG(uAUG)或上游开放阅读框(uORF)。其中，上游AUG和上游开放阅读框通常被理解为出现在应翻译的开放阅读框的起始密码子(AUG)的5′处的AUG和开放阅读框。TOP基因的5′UTR通常很短。TOP基因的5′UTR的长度可以在20个核苷酸至最多500个核苷酸之间变化，并且通常小于约200个核苷酸，优选小于约150个核苷酸，更优选小于约100个核苷酸。例如，TOP可以包含3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个，25个、26个、27个、28个、29个、30个或甚至多于30个核苷酸。如本文所用的，术语“TOP基序”指对应于如上定义的5′TOP的核酸序列。因此，“TOP基序”优选是长度为3个至30个核苷酸的嘧啶核苷酸的片段。优选地，TOP基序由至少3个，优选至少4个，更优选至少6个，更优选至少7个，最优选至少8个嘧啶核苷酸组成，其中嘧啶核苷酸的延伸优选在其5′端以胞嘧啶核苷酸开始。在TOP基因和TOP mRNA中，“TOP基序”优选在其5′端以转录起始位点开始，并在所述基因或mRNA中第一个嘌呤残基的5′端的一个核苷酸处终止。“TOP基序”优选位于代表5′UTR的序列的5′端、或编码5′UTR的序列的5′端。因此，优选地，如果具有3个或多于3个嘧啶核苷酸的片段位于相应序列例如人工核酸分子、人工核酸分子的5′UTR元件、或衍生自本文所述TOP基因5′UTR的核酸序列的5′端，则该片段被称为“TOP基序”。换句话说，不位于5′UTR或5′UTR元件的5′端，而是位于5′UTR或5′UTR元件内的任何地方的具有3个或多于3个嘧啶核苷酸的片段优选不被称为“TOP基序”。

在一个实施方案中，mRNA的5′端是“gggaga”。

衍生自本文示例的TOP基因的5′UTR的5′UTR元件可优选缺少如上所定义的TOP基序或5′TOP。因此，衍生自TOP基因的5′UTR的5′UTR元件的核酸序列可以在其3′端终止于位于该基因或其衍生自的mRNA的起始密码子(例如A(U/T)G)上游第1位、第2位、第3位、第4位、第5位、第6位、第7位、第8位、第9位或第10位的核苷酸。因此，5′UTR元件不包含蛋白质编码序列的任何部分。因此，优选地，人工核酸的唯一的氨基酸编码部分由编码序列提供。

下面详细描述根据本发明设想的特定的5′-UTR元件。

HSD17B4衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码17-β-羟基类固醇脱氢酶4的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件，优选地缺少5′TOP基序。

这种5′UTR元件优选包含或组成为衍生自17-β-羟基类固醇脱氢酶4(也称为过氧化物酶体多功能酶2型)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的17-β-羟基类固醇脱氢酶4(HSD17B4)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列，其中优选5′UTR元件不包含所述基因的5′TOP。所述基因可以优选编码对应于人17-β-羟基类固醇脱氢酶4的17-β-羟基类固醇脱氢酶4蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号Q9BPX1，输入版本号139)或其同源物、变体、片段或衍生物。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自HSD17B4基因，特别是衍生自所述HSD17B4基因的5′UTR的5′UTR元件，优选地，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ IDNO：1的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：1的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：2的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：2的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

ASAH1衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可包含衍生自编码酸性神经酰胺酶(ASAH1)的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选包含或组成为衍生自酸性神经酰胺酶(ASAH1)基因，优选脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的酸性神经酰胺酶(ASAH1)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因优选编码对应于人酸性神经酰胺酶的酸性神经酰胺酶蛋白(2017年6月7日的UniProt参考号Q13510，输入版本号177)或其同源物、变体、片段或衍生物。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自ASAH1基因，特别是衍生自所述ASAH1基因的5′UTR的5′UTR元件，优选地，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：3的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：3的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：4的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：4的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码线粒体ATP合酶亚基α(ATP5A1)的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件优选缺少5′TOP基序。

这种5′UTR元件优选地包含或组成为衍生自线粒体ATP合酶亚基α(ATP5A1)基因，优选地脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选地人的线粒体ATP合酶亚基α(ATP5A1)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列，其中5′UTR元件优选不包含所述基因的5′TOP。所述基因可以优选编码对应于人线粒体ATP合酶亚基α的线粒体ATP合酶亚基α蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号P25705，输入版本号208)或其同源物、变体、片段或衍生物。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自ATP5A1基因，特别是衍生自所述ATP5A1基因的5′UTR的5′UTR元件，优选地，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ IDNO：5的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：5的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：6的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：6的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

MP68衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可包含衍生自编码MP68的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选地包含或组成为衍生自6.8kDa线粒体蛋白脂质(MP68)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的6.8kDa线粒体蛋白脂质(MP68)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人6.8kDa线粒体蛋白脂质(MP68)的6.8kDa线粒体蛋白脂质(MP68)蛋白(2017年2月15日UniProt参考号P56378，输入版本号127)或其同源物、变体、片段或衍生物。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自MP68基因，特别是衍生自所述MP68基因的5′UTR的5′UTR元件，优选地，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：7的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：7的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：8的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：8的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码细胞色素c氧化酶亚基(NDUFA4)的基因或其同源物、片段或变体的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选地包含或组成为衍生自细胞色素c氧化酶亚基(NDUFA4)基因，优选脊椎动物的，更优选地哺乳动物的，最优选人的细胞色素c氧化酶亚基(NDUFA4)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人细胞色素c氧化酶亚基(NDUFA4)蛋白质的细胞色素c氧化酶亚基(NDUFA4)蛋白质(2017年8月30日的UniProt参考号O00483，输入版本号149)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自NDUFA4基因的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：9的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：9的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：10的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：10的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码一氧化氮合酶相互作用蛋白(NOSIP)的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选包含或组成为衍生自一氧化氮合酶相互作用蛋白(NOSIP)基因的5′UTR，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的硝酸氧化物合酶相互作用蛋白(NOSIP)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人一氧化氮合酶相互作用蛋白(NOSIP)的一氧化氮合酶相互作用蛋白(NOSIP)(2017年6月7日的UniProt参考号Q9Y314，输入版本号130)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自NOSIP基因的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：11的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：11的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：12的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：12的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

RPL31衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可包含衍生自编码60S核糖体蛋白L31的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件优选缺少5’TOP基序。

这种5′UTR元件优选包含或组成为衍生自60S核糖体蛋白L31(RPL31)基因的5′UTR，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的60S核糖体蛋白L31(RPL31)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列，其中5′UTR元件优选不包含所述基因的5′TOP。所述基因可优选编码对应于人60S核糖体蛋白L31(RPL31)的60S核糖体蛋白L31(RPL31)(2017年8月30日的UniProt参考号P62899，输入版本号138)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自RPL31基因的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：13的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：13的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：14的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：14的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码阳离子氨基酸转运蛋白3(溶质载体家族7成员3，SLC7A3)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选包含或组成为衍生自阳离子氨基酸转运蛋白3(SLC7A3)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的阳离子氨基酸转运蛋白3(SLC7A3)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人阳离子氨基酸转运蛋白3(SLC7A3)蛋白的阳离子氨基酸转运蛋白3(SLC7A3)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号Q8WY07，输入版本号139)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自SLC7A3基因的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：15的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：15的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：16的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：16的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

TUBB4B衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码微管蛋白β-4B链(TUBB4B)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选地包含或组成为衍生自微管蛋白β-4B链(TUBB4B)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的微管蛋白β-4B链(TUBB4B)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人微管蛋白β4B链(TUBB4B)蛋白的微管蛋白β4B链(TUBB4B)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号Q8WY07，输入版本号142)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自微管蛋白β-4B链(TUBB4B)基因的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：17的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：17的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：18的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：18的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

UBQLN2衍生的5′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码泛醌蛋白2(ubiquilin，UBQLN2)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的5′UTR元件。

这种5′UTR元件优选包含或组成为衍生自泛醌蛋白-2(UBQLN2)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的泛醌蛋白-2(UBQLN2)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的5′UTR的核酸序列。所述基因可以优选地编码对应于人泛醌蛋白2(UBQLN2)的泛醌蛋白2(UBQLN2)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号Q9UHD9，输入版本号151)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自泛醌蛋白-2(UBQLN2)基因的5′UTR元件，其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：19的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：19的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：20的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：20的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

3′UTR

本文所述的人工核酸还包含衍生自本文限定的基因或所述基因的同源物、变体或片段的3′UTR的至少一个3′UTR元件。术语“3′-UTR”是指核酸分子的一部分，其位于开放阅读框的3′(即“下游”)，并且不翻译成蛋白质。在本发明的上下文中，3′-UTR对应于位于蛋白质编码序列的终止密码子，优选紧邻蛋白质编码序列的终止密码子3′与人工核酸(RNA)分子的多聚腺苷酸序列之间的序列。

优选地，至少一个3′UTR元件包含或组成为衍生自脊索动物基因，优选脊椎动物基因，更优选鼠科动物基因，甚至更优选哺乳动物基因，最优选人基因的3′UTR的核酸序列，或衍生自脊索动物基因，优选脊椎动物基因，更优选鼠科动物基因，甚至更优选哺乳动物基因，最优选人基因的3′UTR的变体的核酸序列。

PSMB3衍生的3′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码蛋白酶体亚基β-3型(PSMB3)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的3′UTR元件。

这种3′UTR元件优选地包含或组成为衍生自蛋白酶体亚基β-3型(PSMB3)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的蛋白酶体亚基β-3型(PSMB3)基因或其同源物、变异体、片段或衍生物的3UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人蛋白酶体亚基β-3型(PSMB3)蛋白的蛋白酶体亚基β-3型(PSMB3)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号P49720，输入版本号183)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自PSMB3基因的3′UTR元件，其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：23的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：23的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：24的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：24的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

CASP1衍生的3′UTR元件

根据本发明的人工核酸可包含衍生自编码胱天蛋白酶-1(CASP1)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的3′UTR元件。

这种3′UTR元件优选包含或组成为衍生自胱天蛋白酶-1(CASP1)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的胱天蛋白酶-1(CASP1)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的核酸序列。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自CASP1基因的3′UTR元件，其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：25的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：25的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：26的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：26的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

COX6B1衍生的3′UTR元件

根据本发明的人工核酸可以包含衍生自编码细胞色素c氧化酶亚基6B1(COX6B1)蛋白的COX6B1基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的3′UTR元件。

这种3′UTR元件优选地包含或组成为衍生自细胞色素c氧化酶亚基6B1(COX6B1)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的细胞色素c氧化酶亚基6B1(COX6B1)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的核酸序列。所述基因可以优选编码对应于人细胞色素c氧化酶亚基6B1(COX6B1)蛋白的细胞色素c氧化酶亚基6B1(COX6B1)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号P14854，输入版本号166)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自COX6B1基因的3′UTR元件，其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：27的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：27的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：28的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：28的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

GNAS衍生的3′UTR元件

根据本发明的人工核酸可包含衍生自编码鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G亚基α亚型短(GNAS)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的3′UTR元件。

这种3′UTR元件优选包含或组成为衍生自鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G亚基α亚型短(GNAS)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G亚基α亚型短(GNAS)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的核酸序列。所述基因可以优选编码对应于人鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G亚基α亚型短(GNAS)蛋白的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G亚基α亚型短(GNAS)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号P63092，输入版本号153)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自GNAS基因的3′UTR元件，其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：29的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：29的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：30的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：30的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

NDUFA1衍生的3′UTR元件

根据本发明的人工核酸可包含衍生自编码NADH脱氢酶[泛醌]1α亚复合体亚基1(NDUFA1)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的3′UTR元件。

此类3′UTR元件优选地包含或组成为衍生自NADH脱氢酶[泛醌]1α亚复合体亚基1(NDUFA1)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，优选人的NADH脱氢酶[泛醌]1α亚复合体亚基1(NDUFA1)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的核酸序列。所述基因可以优选地编码对应于人NADH脱氢酶[泛醌]1α亚复合体亚基1(NDUFA1)蛋白的NADH脱氢酶[泛醌]1α亚复合体亚基1蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号O15239，输入版本号152)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自NDUFA1基因的3′UTR元件，其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：31的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：31的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：32的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：32的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

RPS9衍生的3′UTR

根据本发明的人工核酸可包含3′UTR元件，其包含或组成为衍生自编码40S核糖体蛋白S9(RPS9)蛋白的基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的核酸序列。

此类3′UTR元件优选包含或组成为衍生自40S核糖体蛋白S9(RPS9)基因，优选衍生自脊椎动物的，更优选哺乳动物的，最优选人的40S核糖体蛋白S9(RPS9)基因或其同源物、变体、片段或衍生物的3′UTR的核酸序列。所述基因可优选编码对应于人40S核糖体蛋白S9(RPS9)蛋白的40S核糖体蛋白S9(RPS9)蛋白(2017年8月30日的UniProt参考号P46781，输入版本号179)。

因此，根据本发明的人工核酸可包含衍生自RPS9基因的3′UTR元件，其中所述3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：33的DNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：33的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的DNA序列，或其中所述5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：34的RNA序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与根据SEQ ID NO：34的核酸序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的RNA序列。

UTR组合

优选地，至少一个5′UTR元件和至少一个3′UTR元件协同作用，以调节，更优选诱导或增强可操作地连接至所述UTR元件的至少一个编码序列的表达。本文设想以任何可能的组合来利用本文示例的每个5′-UTR元件和3′-UTR元件。

下表1中列出了5′-UTR元件和3′-UTR元件的优选组合。

表1：UTR组合

特别优选以下UTR组合：5′UTR：ASAH1+3′UTR：CASP1；5′UTR：ASAH1+3′UTR：COX6B1：

3′UTR：PSMB3；和5′UTR：Ubqln2+3′UTR：RPS9，优选UTR组合5′UTR：HSD17B4+3′UTR：Gnas，更优选UTR组合5′UTR：Slc7a3+3′UTR：Gnas。

表1中通过参考特定SEQ ID NO所限定的每个UTR元件可以包括由所述特定SEQ IDNO限定的核酸序列的变体或片段，其与参考其特定SEQ ID NO所限定的相应核酸序列具有至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性。如在此指出的，表1中通过参考其特定SEQ ID NO所确定的每个序列也可以由其相应的DNA序列限定。可以如下面所述修饰(任选地彼此独立地)表1中通过参考其特定SEQ ID NO所确定的每个序列。

优选的根据本发明的人工核酸可以包含：

a-1.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-2.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-3.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-4.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-5.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-1.至少一个衍生自UBQLN2基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-2.至少一个衍生自ASAH1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-3.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-4.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一种衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-5.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-1.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-2.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-3.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-4.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-5.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、其同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-1.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-2.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-3.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-4.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-5.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-1.至少一个衍生自TUBB4B基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-2.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-3.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-4.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-5.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-6.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-1.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-2.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-3.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-4.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-5.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-1.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-2.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-3.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-4.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-5.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-1.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-2.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-3.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-4.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-5.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

i-1.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

i-2.至少一个衍生自Ndufa4.1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

特别优选的人工核酸可以包含根据a-1、a-2、a-3、a-4或a-5，优选根据a-1的UTR组合。

出人意料地发现，本文公开的5′和3′非翻译区(UTR)的某些组合协同作用，以协同地增强可操作地连接的核酸序列的表达。UTR组合的协同作用测试是本领域技术人员的常规操作，例如可以在mRNA转染后通过荧光素酶表达进行协同作用测试，以证明存在协同作用，即不只是累加作用。

在肝脏中的表达

设想本文公开的任何UTR组合，以调节，优选诱导，更优选增强可操作地连接的编码序列(cds)的表达。不希望受特定理论的束缚，当与特定编码序列结合使用和/或与特定靶细胞或组织结合使用时，本文公开的一些UTR组合可能是特别有用的。

在一些实施方案中，根据本发明的人工核酸分子可以包含如上限定的根据a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；c-1(NDUFA4/RPS9)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；e-3(MP68/RPS9)；e-4(NOSIP/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；e-5(ATP5A1/RPS9)；d-4(HSD17B4/NUDFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；b-1(UBQLN2/RPS9)；b-2(ASAH1/RPS9)；b-4(HSD17B4/CASP1)；e-6(ATP5A1/COX6B1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；g-5(RPL31/CASP1)；h-1(RPL31/COX6B1)；和/或c-5(ATP5A1/PSMB3)的UTR元件。这样的人工核酸分子对于在肝脏中表达编码的目的(多)肽或蛋白质可能是特别有用的。因此，特别设想了这种人工核酸分子用于全身施用，特别是静脉内、腹膜内、肌内或气管内施用或注射，且任选地与本文的肝靶向元件(如下所述)组合。此外，不希望暗示任何特定限制，上述UTR组合对于人工核酸可能特别有用，所述人工核酸在其至少一个编码区中编码本文公开的治疗性(多)肽或蛋白质、抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质，例如可用于治疗选自以下疾病的蛋白质：遗传性疾病、过敏症、自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤、癌症和肿瘤相关疾病、炎性疾病、血液和造血器官疾病、内分泌疾病、营养和代谢疾病、神经系统疾病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、皮肤和皮下组织疾病、肌肉骨骼系统和结缔组织疾病以及泌尿生殖系统疾病(条件是这些疾病独立地是遗传性或获得性的)，及其组合。

在真皮、表皮和皮下的表达

在一些实施方案中，根据本发明的人工核酸分子可以包含如上限定的根据a-1(HSD17B4/PSMB3)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；a-5(MP68/PSMB3)；d-1(RPL31/PSMB3)；a-2(NDUFA4/PSMB3)；h-1(RPL31/COX6B1)；b-1(UBQLN2/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；c-5(ATP5A1/PSMB3)；b-5(NOSIP/COX6B1)；d-4(HSD17B4/NDUFA1)；i-1(SLC7A3/RPS9)；f-3(HSD17B4/COX6B1)；b-4(HSD17B4/CASP1)；g-5(RPL31/CASP1)；c-2(NOSIP/NDUFA1)；e-4(NOSIP/RPS9)；c-4(NDUFA4/NDUFA1)；和/或d-5(SLC7A3/NDUFA1)的UTR元件。这样的人工核酸分子对于在皮肤中表达编码的目的(多)肽或蛋白质可能是特别有用的。因此，本文特别设想了这种人工核酸分子用于皮内施用，特别是局部、透皮、皮内注射、皮下或表皮施用或注射。此外，不希望暗示任何特定限制，上述UTR组合对于人工核酸可能特别有用，所述人工核酸在其至少一个编码区中编码本文公开的治疗性(多)肽或蛋白质、抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质，例如可用于治疗选自以下疾病的蛋白质：遗传性疾病、过敏症、自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤、癌症和肿瘤相关疾病、炎性疾病、血液和造血器官疾病、内分泌疾病、营养和代谢疾病、神经系统疾病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、皮肤和皮下组织疾病、肌肉骨骼系统和结缔组织疾病以及泌尿生殖系统疾病(条件是这些疾病独立地是遗传性或获得性的)，及其组合。

在肌肉中的表达

在一些实施方案中，根据本发明的人工核酸分子可以包含如上限定的根据a-4(NOSIP/PSMB3)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；d-3(SLC7A3/GNAS)；a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；d-5(SLC7A3/NDUFA1)；i-1(SLC7A3/RPS9)；d-1(RPL31/PSMB3)；d-4(HSD17B4/NDUFA1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；f-3(HSD17B4/COX6B1)；f-4(HSD17B4/GNAS)；h-5(SLC7A3/COX6B1)；g-4(NOSIP/CASP1)；c-3(NDUFA4/COX6B1)；b-1(UBQLN2/RPS9)；c-5(ATP5A1/PSMB3)；h-4(SLC7A3/CASP1)；h-2(RPL31/GNAS)；e-1(TUBB4B/RPS9)；f-2(ATP5A1/NDUFA1)；c-2(NOSIP/NDUFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；和/或e-4(NOSIP/RPS9)的UTR元件。这样的人工核酸分子对于在骨骼肌、平滑肌或心肌中表达编码的目的(多肽)肽或蛋白质是特别有用的。因此，本文特别设想了这种人工核酸分子用于肌内施用，更优选肌内注射或心内注射。此外，不希望暗示任何特定限制，上述UTR组合对于人工核酸可能特别有用，所述人工核酸在其至少一个编码区中编码本文公开的治疗性(多)肽或蛋白质、抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质，例如可用于治疗选自以下疾病的蛋白质：遗传性疾病、过敏症、自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤、癌症和肿瘤相关疾病、炎性疾病、血液和造血器官疾病、内分泌疾病、营养和代谢疾病、神经系统疾病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、皮肤和皮下组织疾病、肌肉骨骼系统和结缔组织疾病以及泌尿生殖系统疾病(条件是这些疾病独立地是遗传性或获得性的)，及其组合。

在肿瘤和癌细胞中的表达

在一些实施方案中，根据本发明的人工核酸分子可以包含如上限定的根据e-1(TUBB4B/RPS9)；b-2(ASAH1/RPS9)；c-3(NDUFA4/COX6B1)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；c-4(NDUFA4/NDUFA1)；b-4(HSD17B4/CASP1)；d-2(ATP5A1/CASP1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；a-2(NDUFA4/PSMB3)；b-1(UBQLN/RPS9)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；f-4(HSD17B4/GNAS)；c-2(NOSIP/NDUFA1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；c-5(ATP5A1/PSMB3)；a-4(NOSIP/PSMB3)；d-5(SLC7A3/NDUFA1)；或f-3(HSD17B4/COX6B1)的UTR元件。这样的人工核酸分子对于在肿瘤或癌细胞，包括癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、生殖细胞肿瘤或母细胞瘤细胞中编码的目的(多肽)肽或蛋白质的表达是特别有用的。因此，本文特别设想了此类人工核酸分子用于肿瘤内、肌内、皮下、静脉内、皮内、腹膜内、胸膜内、骨内施用或注射。此外，在不希望暗示任何特定限制的情况下，上述UTR组合可能特别适用于人工核酸，所述人工核酸在其至少一个编码区中编码本文公开的治疗性(多)肽或蛋白质、抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质，例如可用于治疗选自癌症或肿瘤疾病的疾病的蛋白质。

在肾细胞中的表达

在一些实施方案中，根据本发明的人工核酸分子可以包含如上限定的根据b-2(ASAH1/RPS9)；c-1(NDUFA4/RPS9.1)；e-3(MP68/RPS9)；c-4(NDUFA4/NDUFA1)；c-2(NOSIP/NDUFA1)；h-2(RPL31/CASP1)；d-2(ATP5A1/CASP1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；a-2(NDUFA4/PSMB3)；f-4(HSD17B4/GNAS)；d-3(SLC7A3/GNAS)；g-1(MP68/NDUFA1)；c-3(NDUFA4/COX6B1)；e-5(ATP5A1/RPS9)；h-3(RPL31/NDUFA1)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；g-4(NOSIP/CASP1)；b-1(UQBLN/RPS9)；d-4(HSD17B4/NDUFA1)；或e-2(RPL31/RPS9)的UTR元件。这样的人工核酸分子对于在肾脏细胞中表达编码的目的(多)肽或蛋白质是特别有用的。因此，特别设想了这种人工核酸分子用于全身施用，特别是静脉内、腹膜内、肌内或气管内施用或注射，且任选地与本文的肾靶向元件组合。此外，不希望暗示任何特定限制，上述UTR组合对于人工核酸可能特别有用，所述人工核酸在其至少一个编码区中编码本文公开的治疗性(多)肽或蛋白质、抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质，例如可用于治疗选自以下疾病的蛋白质：遗传性疾病、过敏症、自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤、癌症和肿瘤相关疾病、炎性疾病、血液和造血器官疾病、内分泌疾病、营养和代谢疾病、神经系统疾病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、皮肤和皮下组织疾病、肌肉骨骼系统和结缔组织疾病以及泌尿生殖系统疾病(条件是这些疾病独立地是遗传性或获得性的)，及其组合。

鉴于以上所述，根据本发明的人工核酸分子可以如上所限定，其中

-所述衍生自HSD17B4基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：1的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：1的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：2的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：2的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自ASAH1基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：3的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：3的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：4的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：4的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自ATP5A1基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：5的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：5的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：6的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：6的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自MP68基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：7的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：7的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：8的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：8的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自NDUFA4基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：9的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：9的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：10的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：10的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自NOSIP基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：11的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：11的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：12的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：12的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自RPL31基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：13的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：13的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；根据SEQ IDNO：14的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：14的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自SLC7A3基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：15的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：15的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：16的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：16的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自TUBB4B基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：17的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：17的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：18的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：18的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自UBQLN2基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：19的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：19的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：20的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：20的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自PSMB3基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：23的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：23的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：24的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：24的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自CASP1基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：25的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：25的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：26的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：26的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自COX6B1基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：27的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：27的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：28的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：28的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自GNAS基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：29的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：29的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：30的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：30的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自NDUFA1基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：31的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：31的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：32的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：32的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-所述衍生自RPS9基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：33的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：33的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：34的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：34的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

编码区

根据本发明的人工核酸包含至少一个编码区或编码序列，所述编码区或编码序列可操作地连接至(通常在两侧连接)本文限定的至少一种3′-UTR元件和至少一种5′-UTR元件。术语“编码序列”或“cds”和“编码区”在本文可互换使用，是指编码目的(基因)产物的核酸的区段或部分。基因产物是基因表达的产物，包括(多)肽和核酸，例如(蛋白质)编码的RNA(例如mRNA)和非(蛋白质)编码的RNA(例如tRNA、rRNA、微RNA、siRNA)。通常，本发明的人工核酸分子的至少一个编码区可以编码至少一种(多)肽或蛋白质，以下称为“目的(多)肽或蛋白质”。编码区通常由在其5′端以起始密码子(例如AUG)为边界和在其3′端以终止密码子(例如UAG、UAA或UGA)为边界的外显子构成。在本发明的人工核酸分子中，编码区以如本文所限定的至少一种5′-UTR元件和至少一种3′-UTR元件为边界。

目的(多)肽或蛋白质通常包括可以由具有至少一个编码区的核酸序列编码的任何(多)肽或蛋白质，并且可以在适当条件下表达以产生功能性(多)肽或蛋白质产物。在本文中，术语“功能性”是指“能够发挥期望的生物学功能”和/或“表现出期望的生物学特性”。目的(多)肽或蛋白质可以具有多种功能，并且包括例如抗体、酶、信号传导蛋白、受体、受体配体、肽激素、转运蛋白、结构蛋白、神经递质、生长调节因子、血清蛋白、载体、药物、免疫调节剂、癌基因、抑癌剂、毒素、肿瘤抗原等。这些蛋白质可以被翻译后修饰为蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、磷蛋白等。此外，本发明设想了任何公开的(多)肽或蛋白质的天然存在的(野生型)形式、以及其变体、片段和衍生物。编码的(多)肽和蛋白质可具有不同的作用。不限于此，本文特别设想了编码治疗性、抗原性和变应原性(多)肽的编码区。

治疗性(多)肽或蛋白质

本发明的人工核酸分子的至少一个编码区可以编码至少一种“治疗性(多)肽或蛋白质”。术语“治疗性(多)肽或蛋白质”是指能够介导期望的诊断、预防或治疗效果，优选导致疾病的检测、预防、改善和/或治愈的(多)肽或蛋白质。

优选地，根据本发明的人工核酸分子可以包含至少一个编码区域，该编码区域编码替代缺失、缺陷或突变的蛋白质的治疗性蛋白质；对治疗遗传性或获得性疾病；感染性疾病或肿瘤，例如癌症或肿瘤疾病有益的治疗性蛋白质；辅助性或免疫刺激性治疗蛋白；治疗性抗体或抗体片段、变体或衍生物；肽激素；基因编辑剂；免疫检查点抑制剂；T细胞受体，或T细胞受体片段、变体或衍生物；和/或酶。

“替代缺失、缺陷或突变的蛋白质”的治疗性(多)肽或蛋白质可选自表现出期望的生物学特性和/或能够发挥野生型蛋白质的期望生物学功能的任何(多)肽或蛋白质，所述野生型蛋白质的缺失、缺陷或突变会导致疾病。在此，“缺失”是指蛋白质由其编码基因的表达被阻止或消除，其程度通常达到在受影响对象体内的其靶位点(即细胞区室、细胞类型、组织或器官)无法检测到该蛋白质。蛋白质表达可能会受到不同程度的影响，受影响的患者体内蛋白质的“缺失”或“产量缺乏”可能是由于编码基因的突变，例如表观遗传学改变或序列突变，包括其开放阅读框或其调控元件(例如无义突变或缺失，从而导致基因转录的阻碍或消除)、有缺陷的mRNA加工(例如有缺陷的mRNA剪接、成熟或从细胞核输出)、蛋白质翻译缺陷、或在蛋白质折叠、易位(即无法正确进入分泌途径)或运输(即无法正确进入其预定输出途径)过程中的错误。蛋白质“缺陷”，即在受影响的对象体内的靶位点(即细胞区室、细胞类型、组织或器官)可检测到的蛋白质的量减少，可能是由于上述举例的完全缺乏蛋白质表达的相同机制所引起的。但是，导致蛋白质“缺陷”的缺陷可能并不总是完全阻止或消除受影响基因的蛋白质表达，而是导致表达水平降低(例如，在一个等位基因受影响而另一个正常发挥功能的情况下)。术语“突变”涵盖氨基酸序列变体和蛋白质的翻译后修饰中的差异。蛋白质“突变体”通常可能是无功能的或功能错误的，并且可能表现出异常的折叠、易位或运输特性或特征。

“有益于治疗遗传性或获得性疾病例如感染性疾病或肿瘤如癌症或肿瘤疾病、血液和造血器官疾病、内分泌疾病、营养和代谢疾病、神经系统疾病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、皮肤和皮下组织疾病、肌肉骨骼系统和结缔组织疾病以及泌尿生殖系统疾病，而无论是遗传性还是获得性疾病的”的治疗性(多)肽或蛋白质包括其表达能够预防、改善或治愈遗传性或获得性疾病的任何治疗性(多)肽或蛋白质。这种(多)肽或蛋白质原则上可以通过发挥任何合适的生物学作用或功能来发挥其治疗功能。在一些实施方案中，这种(多)肽或蛋白质优选可以不通过替代缺失、缺陷或突变的蛋白质和/或不通过诱导免疫应答或变态反应而起作用。例如，有益于治疗遗传性或获得性疾病例如感染性疾病或肿瘤的(多)肽或蛋白质可以包括特别优选的治疗性蛋白质，其尤其有益于治疗选自以下疾病的获得性或遗传性代谢或内分泌疾病(括号中为治疗性蛋白质用于治疗的特定疾病)：酸性鞘磷脂酶(尼曼-皮克病)、Adipotide(肥胖症)、半乳糖酶-β(人半乳糖苷酶A)(法布里病；防止可能导致肾脏和心血管并发症的脂质堆积)、阿糖苷酶(庞贝氏症(糖原贮积症II型))、α-半乳糖苷酶A(α-GALA、半乳糖酶α)(法布里病)、α-葡萄糖苷酶(糖原贮积症(GSD)、糖原累积病)、α-L-艾杜糖醛酸酶(黏多糖症(MPS)、Hurler综合征、Scheie综合征)、α-N-乙酰葡糖胺糖苷酶(Sanfilippo综合征)、双调蛋白(癌症、代谢紊乱)、血管生成素((Ang1、Ang2、Ang3、Ang4、ANGPTL2、ANGPTL3、ANGPTL4、ANGPTL5、ANGPTL6、ANGPTL7)(血管生成，稳定血管)、乙胞素(代谢紊乱)、β-葡萄糖醛酸苷酶(Sly综合征)、骨形态发生蛋白BMP(BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP8b、BMP10、BMP15)(再生作用、骨相关疾病、慢性肾脏病(CKD))、CLN6蛋白(CLN6疾病(非典型性婴儿晚期型、迟发型变体、青少年早期型神经元蜡样质脂褐素沉积症(NCL))、表皮生长因子(EGF)(伤口愈合、细胞生长、增殖和分化的调节)、Epigen(代谢异常)、上皮调节蛋白(代谢异常)、成纤维细胞生长因子(FGF，FGF-1、FGF-2、FGF-3、FGF-4、FGF-5、FGF-6、FGF-7、FGF-8、FGF-9、FGF-10、FGF-11、FGF-12、FGF-13、FGF-14、FGF-16、FGF-17、FGF-17、FGF-18、FGF-19、FGF-20、FGF-21、FGF-22、FGF-23)(伤口愈合、血管生成、内分泌失调、组织再生)、加硫酶(Galsulphase)(黏多糖贮积症VI)、胃促生长素(肠易激综合征(IBS)、肥胖症、普拉德-威利综合征、II型糖尿病)、葡萄糖脑苷脂酶(戈谢病)、GM-CSF(再生作用、白细胞产生、癌症)、肝素结合性EGF样生长因子(HB-EGF)(伤口愈合、心脏肥大以及心脏发育和功能)、肝细胞生长因子HGF(再生作用、伤口愈合)、铁调素(铁代谢紊乱、β地中海贫血)、人白蛋白(白蛋白产生减少(低蛋白血症)、白蛋白损失增加(肾病综合征)、低血容量症、高胆红素血症)、艾杜硫酶(Idursulphase，艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶)(黏多糖贮积症II(Hunter综合征))、整联蛋白αVβ3、αVβ5和α5β1(结合基质大分子和蛋白酶、血管生成)、碘脲酸硫酸酯酶(Hunter综合征)、拉罗尼酶(黏多糖贮积病I的贺勒氏和贺勒氏-施艾氏形式)、N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶(rhASB；加硫酶、芳基硫酸酯酶A(ARSA)、芳基硫酸酯酶B(ARSB))(芳基硫酸酯酶B缺乏症、拉米氏症综合征、黏多糖贮积症VI)、N-乙酰葡糖胺6硫酸酯酶(Sanfilippo综合征)、神经生长因子(NGF、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)和神经营养因子4/5(NT-4/5)(再生作用、心血管疾病、冠状动脉粥样硬化、肥胖症、2型糖尿病、代谢综合征、急性冠状动脉综合征、痴呆、抑郁症、精神分裂症、自闭症、雷特综合征、神经性厌食症、神经性贪食症、伤口愈合、皮肤溃疡、角膜溃疡、阿尔茨海默氏病)、神经调节蛋白(NRG1、NRG2、NRG3、NRG4)(代谢紊乱、精神分裂症)、神经纤毛蛋白(NRP-1、NRP-2)(血管生成、轴突指导、细胞存活、迁移)、肥胖抑制素(肠易激综合征(IBS)、肥胖症、普拉德-威利综合征、II型糖尿病)、血小板衍生生长因子(PDGF(PDFF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D)(再生作用、伤口愈合、血管生成障碍、动脉硬化、纤维化、癌症)、TGFβ受体(内皮联蛋白、TGF-β1受体、TGF-β2受体、TGF-β3受体)(肾纤维化、肾脏疾病、糖尿病、最终终末期肾脏疾病(ESRD)、血管生成)、血小板生成素(THPO)(巨核细胞生长和发育因子(MGDF))(血小板紊乱、捐赠血小板、骨髓抑制化疗后血小板计数的恢复)、转化生长因子(TGF(TGF-a、TGF-β(TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3)))(再生作用、伤口愈合、免疫力、癌症、心脏病、糖尿病、Marfan综合征、Loeys-Dietz综合征)、VEGF(VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和PIGF)(再生作用、血管生成、伤口愈合、癌症、渗透性)、奈西立肽(急性失代偿性充血性心力衰竭)、胰蛋白酶(褥疮性溃疡、静脉曲张性溃疡、焦痂清创术、伤口裂开、晒伤、胎粪性肠梗阻)、肾上腺皮质营养激素(ACTH)(阿狄森氏病、小细胞癌、肾上腺皮质营养不良、先天性肾上腺皮质增生、库欣综合征、尼尔森综合征、小儿痉挛)、利钠肽(ANP)(内分泌失调)、胆囊收缩素(多种)、胃泌素(低胃泌素血症)、瘦素(糖尿病、高甘油三酯血症、肥胖症)、催产素(刺激母乳喂养、分娩不进展)、生长抑素(对症治疗类癌综合征、急性静脉曲张破裂出血、肢端肥大症、肝肾多囊性疾病、肢端肥大症和神经内分泌肿瘤引起的症状)、加压素(抗利尿激素)(尿崩症)、降钙素(绝经后骨质疏松症、高钙血症、佩吉特氏病、骨转移、幻肢痛、椎管狭窄)、艾塞那肽(对二甲双胍和磺脲类药物产生耐药性的2型糖尿病)、生长激素(GH)、生长激素(由于GH缺乏导致的生长异常或慢性肾功能不全、普拉德-威利综合征、特纳综合征、采用抗病毒治疗的艾滋病所致的消瘦或恶病质)、胰岛素(糖尿病、糖尿病性酮症酸中毒、高钾血症)、胰岛素样生长因子1，IGF-1(GH基因缺失导致的儿童生长异常或严重原发性IGF1缺乏症、神经退行性疾病、心血管疾病、心力衰竭)、美卡舍明林菲培，IGF-1类似物(GH基因缺失导致的儿童生长异常或严重原发性IGF1缺乏症、神经退行性疾病、心血管疾病、心力衰竭)、美卡舍明，IGF-1类似物(GH基因缺失导致的儿童生长异常或严重原发性IGF1缺乏症、神经退行性疾病、心血管疾病、心力衰竭)、培维索孟(肢端肥大症)、普兰林肽(糖尿病、与胰岛素组合)、特立帕肽(人甲状旁腺素残基1-34)(严重骨质疏松)、贝卡培林(糖尿病溃疡清创术的辅助药物)、Dibotermin-α(骨形态发生蛋白2)(脊椎融合手术、骨损伤修复)、醋酸组氨瑞林(促性腺激素释放激素GnRH)(性早熟)、奥曲肽(肢端肥大症、VIP分泌腺瘤和转移性类癌肿瘤的症状缓解)和帕利夫明(角质形成细胞生长因子；KGF)(正在接受化疗的患者中的严重口腔黏膜炎、伤口愈合)或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

这些蛋白质和其他蛋白质被理解为治疗性的，因为它们意在通过以足够的量来替换功能性蛋白质的有缺陷的内源性产物来治疗对象。

因此，这样的治疗性蛋白质通常是哺乳动物蛋白质，特别是人蛋白质。

为了治疗获得性或遗传性血液疾病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、癌症或肿瘤疾病、感染性疾病或免疫缺陷疾病，可以使用以下治疗性蛋白质(括号中是治疗性蛋白质用于治疗的特定疾病)：阿替普酶(组织纤维蛋白溶酶原激活物；tPA)(肺栓塞、心肌梗塞、急性缺血性中风、中央静脉通道阻塞)、阿尼司替酶(血栓溶解)、抗凝血酶III(AT-III)(遗传性AT-III缺乏症、血栓栓塞)、比伐卢定(降低冠状动脉成形术和肝素诱导的血小板减少症的凝血风险)、达贝泊汀α(慢性肾功能不全和慢性肾衰竭(+/-透析)患者的贫血的治疗)、替加色罗α(活化蛋白C)(具有高死亡风险的严重败血症)、促红细胞生成素、依泊汀α、红细胞生成素、促红细胞生长素(慢性病导致的贫血、骨髓增生异常、肾衰竭或化疗导致的贫血、术前准备)、因子IX(血友病B)、因子VIIa(患有血友病A或B以及带有因子VIII或因子IX抑制剂的患者的出血)、因子VIII(血友病A)、来匹芦定(肝素诱导的血小板减少症)、蛋白C浓缩物(静脉血栓形成、暴发性紫癜)、瑞替普酶(tPA突变蛋白缺失)(急性心肌梗死的管理、心室功能的改善)、链激酶(急性发展的透壁性心肌梗死、肺栓塞、深静脉血栓形成、动脉血栓形成或栓塞、动静脉插管的栓塞)、替奈普酶(急性心肌梗死)、尿激酶(肺栓塞)、血管抑素(癌症)、抗CD22免疫毒素(复发性CD33+急性髓细胞白血病)、地尼白介素(慢性T细胞淋巴瘤(CTCL))、免疫蓝蛋白(膀胱和前列腺癌)、MPS(金属硫蛋白)(癌症)、阿柏西普(非小细胞肺癌(NSCLC)、转移性结直肠癌(mCRC)、激素难治性转移性前列腺癌、湿性黄斑变性)、内皮抑素(癌症、炎性疾病例如类风湿性关节炎以及克罗恩氏病、糖尿病性视网膜病、银屑病和子宫内膜异位症)、胶原酶(慢性皮肤溃疡和严重烧伤区域的清创术、掌腱膜挛缩、阴茎硬结症)、人脱氧核糖核酸酶I、链道酶(囊性纤维化；降低FVC大于预期值40％的所选患者的呼吸道感染)、透明质酸酶(用作佐剂以增加注射药物的吸收和分散、特别是眼科手术中的麻醉剂和某些显像剂的吸收和分散)、木瓜蛋白酶(急性和慢性病变的坏死组织的清创或蜕皮液化，如压疮、静脉曲张和糖尿病性溃疡、烧伤、术后伤口、毛囊囊肿伤口、痈和其他伤口)、L-天冬酰胺酶(急性淋巴细胞白血病，其需要外源天冬酰胺用于增殖)、PEG-天冬酰胺酶(急性淋巴细胞性白血病，其需要外源天冬酰胺用于增殖)、拉布立酶(正在接受可能导致肿瘤溶解综合征的抗癌治疗的患有白血病、淋巴瘤和实体瘤的儿科患者)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)(辅助生殖)、人卵泡刺激素(FSH)(辅助生殖)、促性腺激素-α(黄体生成素缺乏症的不育症)、催乳素(低泌乳素血症、血清催乳素缺乏症、妇女的卵巢功能障碍、焦虑症、动脉硬化性勃起功能障碍、早泄、少精子症、弱精子症、精囊腺功能低下、男性雄激素缺乏)、α-1-蛋白酶抑制剂(先天性抗胰蛋白酶缺乏症)、乳糖酶(由于无法消化乳糖导致的气体、腹胀、痉挛和腹泻)、胰腺酶(脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶)(囊性纤维化、慢性胰腺炎、胰腺功能不全、后比尔罗特II胃旁路手术、胰管阻塞、脂肪性肝炎、消化不良、气体、腹胀)、腺苷脱氨酶(牛培加酶、PEG-ADA)(由于腺苷脱氨酶缺乏而导致的严重合并免疫缺陷疾病)、阿巴西普(类风湿关节炎(尤其是对TNFa耐药))、阿法赛特(斑块状银屑病)、阿那白滞素(类风湿关节炎)、依那西普(类风湿关节炎、多关节型少年类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、斑块状银屑病、强直性脊柱炎)、白介素-1(IL-1)受体拮抗剂、阿那白滞素(与类风湿性关节炎相关的炎症和软骨退化)、胸腺肽(神经退行性疾病、风湿病、神经性厌食症)、TNF-α拮抗剂(自身免疫性疾病，例如类风湿关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病、银屑病、化脓性汗腺炎、难治性哮喘)、恩夫韦肽(HIV-1感染)和胸腺素α1(乙肝和丙肝)或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

其他治疗性(多)肽或蛋白质可以选自：

其他治疗性(多)肽或蛋白质可以选自凋亡因子或与凋亡相关的蛋白质，包括AIF、Apaf例如Apaf-1、Apaf-2、Apaf-3、或APO-2(L)、APO-3(L)、凋亡酶(Apopain)、Bad、Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-x[L]、Bcl-x[s]、bik、CAD、钙蛋白酶、胱天蛋白酶例如胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-11、ced-3、ced-9、c-Jun、c-Myc、crmA、细胞色素C、CdR1、DcR1、DD、DED、DISC、DNA-PKc[S]、DR3、DR4、DR5、FADD/MORT-1、FAK、Fas(Fas-配体CD95/fas(受体))、FLICE/MACH、FLIP、胞衬蛋白、fos、G-肌动蛋白、Gas-2、凝溶胶蛋白、颗粒酶A/B、ICAD、ICE、JNK、核纤层蛋白A/B、MAP、MCL-1、Mdm-2、MEKK-1、MORT-1、NEDD、NF-κB、NuMa、p53、PAK-2、PARP、穿孔素、PITSLRE、PKCδ、pRb、早老素、prICE、RAIDD、Ras、RIP、鞘磷脂酶、来自单纯疱疹的胸苷激酶、TRADD、TRAF2、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRAIL-R3、转谷氨酰胺酶等、或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

“辅助”(多)肽或蛋白质通常是指能够改变其他试剂作用的任意(多)肽或蛋白质，该其他试剂通常是同时施用的其他活性剂。优选地，“辅助或免疫刺激性”(多)肽或蛋白质能够增强或调节对(优选地共同施用的)抗原的期望的免疫应答。特别地，当与特定抗原组合使用时，“辅助或免疫刺激性”(多)肽或蛋白质可起到加速、延长或增强免疫应答的作用。为此，“辅助或免疫刺激性”(多肽)或蛋白质可支持共同施用的抗原的施用和输送、增强共同施用的抗原的(抗原特异性)免疫刺激特性、和/或引发或增加先天免疫系统的免疫应答，即非特异性免疫应答。本发明中设想的示例性“辅助或免疫刺激性(多)肽或蛋白质”包括哺乳动物蛋白，特别是人辅助蛋白，其通常包括任何人蛋白质或肽，其能够引发先天免疫应答(在哺乳动物中)，例如作为外源TLR配体与TLR结合的反应。更优选地，人辅助蛋白选自作为模式识别受体的信号网络的组分和配体的蛋白，该受体包括TLR、NLR和RLH，包括TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11；NOD1、NOD2、NOD3、NOD4、NOD5、NALP1、NALP2、NALP3、NALP4、NALP5、NALP6、NALP6、NALP7、NALP7、NALP8、NALP9、NALP10、NALP11、NALP12、NALP13、NALP14、lIPAF、NAIP、CIITA、RIG-I、MDA5和LGP2，TLR信号传导的信号转导子，包括衔接子蛋白、包括例如Trif和Cardif；小GTP酶信号传导的组分(RhoA、Ras、Rac1、Cdc42、Rab等)、PIP信号传导的组分(PI3K、Src-激酶等)、依赖MyD88的信号传导的组分(MyD88、IRAK1、IRAK2、IRAK4、TIRAP、TRAF6等)、不依赖MyD88的信号传导的组分(TICAM1、TICAM2、TRAF6、TBK1、IRF3、TAK1、IRAK1等)；活化的激酶，包括例如Akt、MEKK1、MKK1、MKK3、MKK4、MKK6、MKK7、ERK1、ERK2、GSK3、PKC激酶、PKD激酶、GSK3激酶、JNK、p38MAPK、TAK1、IKK和TAK1；活化的转录因子，包括例如NF-κB、c-Fos、c-Jun、c-Myc、CREB、AP-1、Elk-1、ATF2、IRF-3、IRF-7或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

辅助(优选哺乳动物)(多)肽或蛋白质还可以选自热休克蛋白质，例如HSP10、HSP60、HSP65、HSP70、HSP75和HSP90、gp96、纤维蛋白原、纤连蛋白TypIII重复域A；或补体系统的组分，包括C1q、MBL、C1r、C1s、C2b、Bb、D、MASP-1、MASP-2、C4b、C3b、C5a、C3a、C4a、C5b、C6、C7、C8、C9、CR1、CR2、CR3、CR4、C1qR、C1INH、C4bp、MCP、DAF、H、I、P和CD59或诱导的靶基因，包括例如β-防御素、细胞表面蛋白；或人辅助蛋白，包括trif、flt-3配体、Gp96或纤连蛋白等，或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

辅助(优选哺乳动物)(多)肽或蛋白质还可以选自诱导或增强先天免疫应答的细胞因子，包括IL-1α、IL1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、TNFα、IFNα、IFNβ、IFNγ、GM-CSF、G-CSF、M-CSF；趋化因子，包括IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1α、RANTES、嗜酸性粒细胞趋化因子、CCL21；从巨噬细胞释放的细胞因子，包括IL-1、IL-6、IL-8、IL-12和TNF-α；IL-1R1和IL-1α，或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

本文使用的术语“抗体”(Ab)包括单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体和多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段、变体和衍生物，只要它们表现出所需的生物学功能，这通常是特异性结合靶标的能力。如本文所用，术语“特异性结合”是指抗体与其预期靶标的结合比与不同的非特异性靶标的结合更容易。换句话说，即使存在可通过定量测定(例如放射性配体结合测定、ELISA、基于荧光的技术(例如荧光偏振(FP)、荧光共振能量转移(FRET))或表面等离子体共振)可测量的非靶标的情况下，如果抗体优先结合或识别靶标，则抗体“特异性结合”其靶标或表现出与其靶标的“结合特异性”。“特异性结合”其靶标的抗体可能会或可能不会与衍生自不同物种的(同源)靶标发生交叉反应。

天然存在的基本抗体是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)组成的异四聚体糖蛋白。一些抗体可能包含其他多肽链，例如IgM和IgA抗体中的J链。每条L链通过一个共价二硫键与H链相连，而两条H链则根据H链的同种型通过一个或多于一个二硫键彼此相连。每条H链和L链也包含链内二硫键。每条H链均包含一个N端可变域(V_H)，然后是针对每条α链和γ链的三个恒定域(C_H)、以及针对μ和ε同种型的四个C_H域。每条L链在N端都有一个可变域(V_L)，然后是在其另一端的恒定域。V_L与V_H对齐，C_L与重链的第一恒定域(C_H1)对齐。据信，特定的氨基酸残基在轻链和重链可变域之间相互作用。

可以将来自任何脊椎动物的L链根据其恒定域的氨基酸序列，分为两种明显不同的类型中的一种，称为κ和λ。根据其重链恒定结构域(C_H)的氨基酸序列，免疫球蛋白可分为不同类别或同种型。免疫球蛋白分为五类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其重链分别命名为α、β、ε、γ和μ。γ和μ类根据C_H序列和功能的相对较小的差异进一步分为亚类，例如，人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。

V_H和V_L的配对一起形成单个抗原结合位点。术语“可变的”是指可变结构域的某些片段在抗体之间的序列差异很大。V结构域介导抗原结合并决定特定抗体对其特定抗原的特异性。但是，可变性并未在可变域的整个范围内均匀分布。相反，V区由相对不变的片段组成，该片段称为框架区(FR)，其具有约15个至30个氨基酸残基，其间被称为“高变区”的更短的极端变异区分开，其也称为“互补决定区”(CDR)，每个CDR的长度为约9个至12个氨基酸残基。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR，主要采用β-折叠结构，并通过三个高变区连接，这三个高变区形成环从而连接β-折叠，并在某些情况下形成β-折叠结构一部分。每条链中的高变区通过FR紧密结合在一起，并且与另一条链中的高变区一起，有助于抗体的抗原结合位点的形成。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，而是表现出各种效应子功能，例如参与抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)。当在本文中使用时，术语“高变区”(也称为“互补决定区”或CDR)是指抗体的氨基酸残基，其位于形成抗原结合位点的免疫球蛋白的V区结构域内(通常为三个或四个具有极端序列变异性的短区)，并且是抗原结合特异性的主要决定因素。CDR残基可以基于跨物种的序列变异性或抗原-抗体复合物的晶体学研究来鉴定。

因此，本文所用的术语“抗体”优选是指能够通过至少一个互补决定区与靶表位特异性结合的免疫球蛋白分子或其变体、片段或衍生物。该术语包括单多克隆抗体和多克隆抗体、单特异性抗体、双特异性抗体和多特异性抗体、任何同种型的抗体，包括IgM、IgD、IgG、IgA和IgE抗体，以及通过任何方式获得的抗体，包括天然存在的抗体、通过宿主生物体内免疫产生的抗体、从天然存在的抗体或通过宿主生物体内免疫产生的抗体中分离和鉴定的抗体以及通过本领域已知的生物分子方法重组产生的抗体，以及嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、细胞内抗体，即在细胞中表达并任选定位于特定细胞区室的抗体，以及这些抗体中的任何的变体、片段和衍生物。

如本文所用，术语“单克隆抗体”(mab)是指从基本上均质的抗体群体中获得的抗体，即，除了可能以较少的量存在的可能天然存在的突变以外，构成该群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体针对单个抗原位点具有高度特异性。此外，与包括针对不同表位的不同抗体的“多克隆”抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单个表位。除了其特异性之外，单克隆抗体的优势在于它们可以被合成而不受其他抗体的污染。形容词“单克隆”不应解释为要求通过任何特定方法产生抗体。例如，可用于本发明的单克隆抗体可以通过Kohler等人，Nature 256：495(1975)中首次描述的杂交瘤方法制备，或者它们可以在细菌或真核动物或植物细胞中使用重组DNA方法制备(参见，例如，美国专利第4816567号)。还可以使用例如Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)和Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1991)中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。

单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源。嵌合抗体包括例如“人源化”抗体，其包含来源于非人类动物(例如小鼠或非人类灵长类动物(例如旧大陆猴、猿等))的可变结构域抗原结合序列(部分或全部)、和人恒定区序列，其优选能够有效介导Fc效应子功能、和/或当引入人体时表现出降低的免疫原性。可以通过创建“嵌合”抗体(接枝到人Fc上的非人Fab)作为起始步骤，并对分子的Fab部分中的(非CDR)氨基酸进行选择性突变来制备“人源化”抗体。备选地，可以通过将衍生自非人动物的合适的“供体”CDR编码区段接枝到人抗体“受体”支架上，并任选地突变(非CDR)氨基酸以优化结合而直接获得“人源化”抗体。

“抗体变体”或“抗体突变体”是指包含或组成为以下氨基酸序列的抗体，其中与参考或“亲本”抗体相比，一个或多于一个氨基酸残基被修饰。这样的抗体变体可以因此显示出与参考抗体或“亲本”抗体或其轻链或重链具有按优先级升序排列的至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％，优选至少约70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％，更优选至少约90％、91％、92％、93％、94％，最优选至少约95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性百分比。可能的氨基酸突变包括一个或多于一个氨基酸残基的缺失、插入或改变。突变可以位于恒定区或抗原结合区(例如，高变区或可变区)中。保守氨基酸突变是优选的，其将氨基酸改变为具有相似生化特性(例如电荷、疏水性和大小)的不同氨基酸。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分(即包含抗原结合位点以及C_L和至少重链结构域C_H1、C_H2和C_H3的抗体)，优选包含完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体；线性抗体、单链抗体和包含这种抗体片段的双特异性抗体或多特异性抗体。

木瓜蛋白酶对抗体的消化产生了两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段(抗原结合片段)，和剩余的“Fc”片段(可结晶片段)。Fab片段由完整的L链以及H链的可变区结构域(V_H)和一条重链的第一恒定结构域(C_H1)组成。每个Fab片段就抗原结合而言是单价的，即，它具有单个抗原结合位点。胃蛋白酶对抗体的处理产生单个大的F(ab′)₂片段，该片段大致对应于两个具有不同抗原结合活性但仍能够交联抗原的二硫键连接的Fab片段、以及pFc′片段。F(ab′)₂片段可分为两个Fab′片段。Fab′片段与Fab片段的区别在于，在C_H1结构域的羧基末端具有一些额外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多于一个半胱氨酸。Fab′-SH在本发明中表示其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离硫醇基的Fab′。F(ab′)₂抗体片段最初作为成对的Fab′片段产生，它们之间具有铰链半胱氨酸。其他抗体片段及其化学片段也是已知的。Fab/c或Fabc抗体片段缺少一个Fab区。Fd片段对应于Fab的重链部分，并包含C端恒定结构域(C_H1)和N端可变(VH)结构域。

Fc片段包含由二硫键连接在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能由Fc区中的序列决定，该区也被某些类型细胞上的Fc受体(FcR)识别。

“Fv”是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密的、非共价结合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中，产生六个高变环(每个来自H链和L链的3个环)，所述环贡献了用于抗原结合的氨基酸残基，并赋予了抗原与抗体的结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，但亲和力低于整个结合位点。

“单链Fv”也称为“sFv”或“scFv”，是包含连接到单个多肽链中的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽还包含在VH结构域和VL结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成所需的抗原结合结构。

术语“双抗体”(也称为二价(或双价)单链可变片段，“di-scFv”、“bi-scFv”)是指通过连接两个scFv片段(见上一段)而制备的抗体片段，其通常在V_H结构域和V_L结构域之间具有短接头(约5个至10个残基)，从而实现V结构域的链间配对而不是链内配对。另一种可能性是构建具有两个V_H区和两个V_L区的单肽链(“串联scFv”)。所得的二价片段具有两个抗原结合位点。同样，可以产生三价scFv三聚体(也称为“三抗体”或“三价抗体”)和四价scFv四聚体(“四抗体”)。二价或多价抗体或抗体片段可以是单特异性的，即每个抗原结合位点可以针对相同的靶标。这样的单特异性二价或多价抗体或抗体片段优选表现出高结合亲和力。替代地，二价或多价抗体或抗体片段的抗原结合位点可以针对不同的靶标，从而形成双特异性或多特异性抗体或抗体片段。

“双特异性或多特异性抗体或抗体片段”包含多于一个特异性抗原结合区，每个特异性抗原结合区能够特异性结合不同的靶标。“双特异性抗体”通常是两个“交叉”scFv片段的异二聚体，其中两个抗体的V_H结构域和V_L结构域存在于不同的多肽链上。双特异性或多特异性抗体可以充当效应子和相应靶标之间的衔接分子，从而将效应子(例如毒素、药物和细胞因子或效应细胞，例如CTL、NK细胞、巨噬细胞和粒细胞)募集到通常由靶细胞例如癌细胞表达的目标抗原。因此，“双特异性或多特异性抗体”优选使效应分子或细胞与期望靶标紧密接近和/或介导效应子与靶标之间的相互作用。在本发明的上下文中，被称为双特异性T细胞衔接子(BiTE抗体构建体)的双特异性串联di-scFv是双价双特异性抗体的一个实例。

抗体的结构和性质在本领域中是众所周知的，尤其是在Janeway’sImmunobiology，第9版(修订)，Kenneth Murphy和Casey Weaver(编)，Taylor&FrancisLtd.2008中进行了描述。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。示例性抗体可选自AAB-003；阿巴伏单抗；阿昔单抗；阿比珠单抗(Abituzumab)；阿布里单抗；阿卡单抗(Actoxumab)；阿达木单抗；阿杜单抗(Aducanumab)；Afasevikumab；阿柏西普；Afutuzuab；阿夫土珠单抗(Afutuzumab)；PEG化的阿拉西马单抗(Alacizumab_pegol)；阿仑单抗；阿利库单抗(Alirocumab)；ALX-0061；阿马昔单抗(Amatuximab)；安替单抗瑞伐坦(Anetumab_ravtansine)；、阿尼弗洛姆单抗(Anifrolumab)；安鲁单抗(Anrukinzumab)；阿泊珠单抗(Apolizumab)；Apomab；Aquaporumab；阿西莫单抗_99tc；阿斯库昔单抗(Ascrinvacumab)；阿塞珠单抗(Aselizuab)；阿特珠单抗(Atezolizumab)；安妥明单抗(Atinumab)；阿特利单抗(Atlizuab)；Aurograb；阿维拉姆单抗(Avelumab)；巴匹珠单抗(Bapineuzumab)；巴利昔单抗；巴维昔单抗(Bavituximab)；贝格洛姆单抗(Begelomab)；贝拉珠单抗(Benralizumab)；倍他卢汀单抗(Betalutin)；Bevacituzuab；贝伐单抗_154-天冬氨酸；贝伐单抗_154-置换；贝伐单抗_180-丝氨酸；贝伐单抗_180-置换；贝伐单抗_β；贝伐单抗；贝伐单抗-rhuMAb-VEGF；贝洛他珠单抗；比格鲁单抗；比美珠单抗；Bleselumab；博纳吐单抗；Blinatumumab；Blontuvetmab；布洛唑单抗(Blosozumab)；博科齐单抗(Bococizumab)；维本妥昔单抗(Brentuximab_vedotin)；布里亚明单抗(Briakinumab)；溴达拉单抗(Brodalumab)；溴化丙单抗(Brolucizumab)；支舒巴单抗(Brontictuzumab)；BTT-1023；Burosumab；康纳单抗(Canakinumab)；坎妥珠单抗(Cantuzumab)；莫坎妥珠单抗(Cantuzumab_mertansine)；坎妥单抗瑞伐坦(Cantuzumab_ravtansine)；卡普利单抗(Caplacizumab)；卡伦单抗(Carlumab)；Cergutuzumab_amunaleukin；聚乙二醇结合赛妥珠单抗；西妥昔单抗；伯格西他土珠单抗(Citatuzumab_bogatox)；西妥木单抗(Cixutumumab)；克拉扎珠单抗(Clazakizumab)；Clivatuzumab_tetraxetan；钴妥珠单抗(Codrituzumab)；考土昔单抗瑞伐坦(Coltuximab_ravtansine)；Conatumumab_CV；康妥单抗(Conatumumab)；康昔单抗(Concizumab)；克伦单抗(Crenezumab)；Crotedumab；达塞珠单抗(Dacetuzumab)；达昔单抗(Dacliximab)；达利珠单抗；达妥珠单抗(Dalotuzumab)；PEG化的达匹罗单抗(Dapirolizumab_pegol)；达雷木单抗(Daratumumab)；癸曲单抗(Dectrekumab)；地昔单抗(Demcizumab)；Denintuzumab_mafodotin；狄诺塞麦；Depatuxizumab；Depatuxizumab_mafodotin；丁妥昔单抗_β(Dinutuximab_β)；丁妥昔单抗(Dinutuximab)；地利达莫单抗(Diridavumab)；Domagrozumab；Drozituab；屈西他单抗(Drozitumab)；杜利他单抗(Duligotumab)；Duligotuzumab；杜普单抗(Dupilumab)；杜伐单抗(Durvalumab)；杜昔单抗(Dusigitumab)；依美昔单抗(Ecromeximab)；依库珠单抗；依法珠单抗；依芬古单抗(Efungumab)；埃尔德单抗(Eldelumab)；埃格曼图姆单抗(Elgemtumab)；艾洛珠单抗(Elotuzumab)；艾马珠单抗(Emactuzumab)；依米妥珠单抗(Emibetuzumab)；Emicizumab；恩伐珠单抗(Enavatuzumab)；伊凡珠单抗(Enfortumab)；伊凡珠单抗-维多汀偶联物(Enfortumab_vedotin)；恩比利珠单抗(Enoblituzumab)；依诺珠单抗(Enokizumab)；依诺替单抗(Enoticumab)；恩师妥昔单抗(Ensituximab)；Entolimod；依帕珠单抗(Epratuzumab)；Eptacog_β；Erlizuab；依他珠单抗(Etaracizumab)；Etrolizuab；依曲利珠单抗(Etrolizumab)；依伐单抗(Evinacumab)；依伏库单抗(Evolocumab)；艾韦单抗(Exbivirumab)；法鲁珠单抗(Farletuzumab)；法辛单抗(Fasinumab)；费扎尼单抗(Fezakinumab)；FG-3019；Fibatuzumab；非卡妥珠单抗(Ficlatuzumab)；菲妥木单抗(Figitumumab)；福利木单抗(Firivumab)；法兰妥单抗(Flanvotumab)；福利替单抗(Fletikumab)；芬特妥珠单抗(Fontolizumab)；福拉木单抗(Foralumab)；福韦单抗(Foravirumab)；Fresolimumab；富拉单抗(Fulranumab)；伏妥昔单抗(Futuximab)；Galcanezumab；加利昔单抗(Galiximab)；甘露单抗(Ganitumab)；冈特莫单抗(Gantenerumab)；吉妥珠单抗；吉妥珠单抗_奥唑米星；格伐克单抗(Gevokizumab)；吉妥昔单抗(Girentuximab)；Glembatumumab；Goilixiab；古塞尔库姆单抗(Guselkumab)；HuMab-001；HuMab-005；HuMab-006；HuMab-019；HuMab-021；HuMab-025；HuMab-027；HuMab-032；HuMab-033；HuMab-035；HuMab-036；HuMab-041；HuMab-044；HuMab-049；HuMab-050；HuMab-054；HuMab-055；HuMab-059；HuMab-060；HuMab-067；HuMab-072；HuMab-084；HuMab-091；HuMab-093；HuMab-098；HuMab-100；HuMab-106；HuMab_10F8；HuMab-111；HuMab-123；HuMab-124；HuMab-125；HuMab-127；HuMab-129；HuMab-132；HuMab-143；HuMab-150；HuMab-152；HuMab-153；HuMab-159；HuMab-160；HuMab-162；HuMab-163；HuMab-166；HuMab-167；HuMab-169；HuMab-7D8；huMAb-抗MSP10.1；huMAb-抗MSP10.2；HUMAB-克隆_18；HUMAB-克隆_22；HuMab-L612；HuMab_LC5002-002；HuMab_LC5002-003；HuMab_LC5002-005；HuMab_LC5002-007；HuMab_LC5002-018；伊巴珠单抗(Ibalizumab)；伊替莫单抗替西坦(Ibritumomab_tiuxetan)；伊鲁库单抗(Icrucumab)；依达鲁单抗(Idarucizumab)；Igatuzuab；IGF-IR_HUMAB-1A；IGF-IR_HUMAB-23；IGF-IR_HUMAB-8；ImAb1；伊马单抗(Imalumab)；伊马曲单抗(Imgatuzumab)；依克拉单抗(Inclacumab)；吲妥昔单抗瑞伐坦(Indatuximab_ravtansine)；维因度单抗(Indusatumab_vedotin)；Inebilizumab；胰岛素_peglispro；干扰素β-1b；英特单抗(Intetumumab)；碘_(124I)_Girentuximab；碘_(131I)_Derlotuxiab_生物素；碘_(131I)_Derlotuximab_生物素；易普利姆玛(Ipilimumab)；伊拉单抗(Iratumumab)；伊沙昔单抗(Isatuximab)；伊托珠单抗(Itolizumab)；衣克珠单抗(Ixekizumab)；拉托唑单抗-格维他偶联物(Labetuzumab_govitecan)；兰布利单抗(Lambrolizumab)；拉帕单抗(Lampalizumab)；Lanadelumab；Landogrozumab；Laprituximab_emtansine；Lealesoab；利勃珠单抗(Lebrikizumab)；来那西普_链1；仑齐鲁单抗(Lenzilumab)；勒德利木单抗(Lerdelimumab)；来沙木单抗(Lexatumumab)；利比维单抗(Libivirumab)；利伐妥单抗(Lifastuzumab)；维利伐妥单抗(Lifastuzumab_vedotin)；利格珠单抗(Ligelizumab)；利洛单抗(Lilotomab)；林妥珠单抗(Lintuzumab)；利鲁单抗(Lirilumab)；洛德昔单抗(Lodelcizumab)；洛克韦单抗(Lokivetmab)；莫洛伐妥单抗(Lorvotuzumab_mertansine)；Lpathomab；卢卡珠单抗(Lucatumumab)；PEG化的卢利珠单抗(Lulizumab_pegol)；鲁昔单抗(Lumiliximab)；鲁曲单抗(Lumretuzumab)；镥_(177Lu)_lilotomab_satetraxetan；马妥昔单抗(Margetuximab)；Marzeptacog_alfa；马妥珠单抗(Matuzumab)；马维里单抗(Mavrilimumab)；MDX-1303；美泊利单抗(Mepolizumab)；迈他珠单抗(Metelimumab)；米拉珠单抗(Milatuzumab)；米维妥昔单抗(Mirvetuximab)；Modotuximab；莫加利单抗(Mogamulizumab)；Monalizumab；莫他珠单抗(Motavizumab)；莫昔单抗-帕多毒素偶联物(Moxetumomab_pasudotox)；莫罗单抗-CD3；纳霉单抗(Namilumab)；Naptumomab_estafenatox；纳妥单抗(Narnatumab)；那他珠单抗(Natalizumab)；Navicixizumab；Navivumab；Ndimab-varB；Necitumumab；Neliximab；奈莫珠单抗(Nemolizumab)；奈西伐单抗(Nesvacumab)；Neuradiab；尼妥珠单抗(Nimotuzumab)；纳武单抗(Nivolumab)；奥比妥昔单抗(Obiltoxaximab)；奥匹妥珠单抗(Obinutuzumab)；奥卡鲁单抗(Ocaratuzumab)；奥克里昔单抗(Ocrelizumab)；奥法木单抗(Ofatumumab)；奥拉他单抗(Olaratumab)；Olizuab；Olokizumab；奥马珠单抗(Omalizumab)；阿那妥单抗(Onartuzumab)；恩妥昔单抗(Ontuxizumab)；阿昔单抗(Opicinumab)；Oportuzumab_monatox；Oreptacog_alfa；奥替单抗(Orticumab)；奥立昔单抗(Otelixizumab)；奥特鲁单抗(Otlertuzumab)；奥索单抗(Oxelumab)；奥扎尼珠单抗(Ozanezumab)；奥索利单抗(Ozoralizumab)；帕利珠单抗；Pamrevlumab；帕尼单抗；Pankoab；PankoMab；泛巴单抗(Panobacumab)；帕撒单抗(Parsatuzumab)；帕昔单抗(Pascolizumab)；帕索妥昔单抗(Pasotuxizumab)；帕替利单抗(Pateclizumab)；帕特利单抗(Patritumab)；派姆单抗；哌拉单抗(Perakizumab)；Pertuzuab；帕妥珠单抗(Pertuzumab)；培克珠单抗_h5g1.1-scFv；培克珠单抗；PF-05082566；PF-05082568；匹利珠单抗(Pidilizumab)；维匹那妥单抗(Pinatuzumab_vedotin)；普鲁单抗(Placulumab)；Plozalizumab；Pogalizumab；维波达单抗(Polatuzumab_vedotin)；庞尼泽单抗(Ponezumab)；普罗昔单抗(Pritoxaximab)；普托木单抗；奎珠单抗(Quilizumab)；拉托单抗(Racotumomab)；拉德鲁单抗(Radretumab)；瑞非韦鲁；拉潘昔单抗(Ralpancizumab)；雷莫芦单抗；雷尼珠单抗(Ranibiziuab)；兰尼单抗；瑞伐珠单抗(Refanezumab)；REGN2810；rhuMab_HER2(9CI)；rhuMab_HER2；rhuMAb-VEGF；利妥珠单抗(Rilotumumab)；利努单抗(Rinucumab)；Risankizumab；利妥昔单抗；Rivabazumab_pegol；罗巴单抗(Robatumumab)；罗乐单抗(Roledumab)；罗莫索单抗(Romosozumab)；Rontalizuab；罗他珠单抗(Rontalizumab)；Rovalpituzumab_tesirine；罗维珠单抗(Rovelizumab)；鲁普单抗(Ruplizumab)；Sacituzumab_govitecan；沙马利单抗(Samalizumab)；沙利鲁单抗(Sarilumab)；沙妥莫单抗_喷地肽；苏金单抗；塞巴坦单抗(Seribantumab)；塞妥昔单抗(Setoxaximab)；西法木单抗(Sifalimumab)；司妥昔单抗(Siltuximab)；西妥珠单抗(Simtuzumab)；西鲁库单抗(Sirukumab)；维索菲妥单抗(Sofituzumab_vedotin)；索拉珠单抗(Solanezumab)；索利单抗(Solitomab)；索普昔单抗(Sonepcizumab)；丝塔单抗(Stamulumab)；Suptavumab；苏维珠单抗(Suvizumab)；他巴单抗(Tabalumab)；塔卡珠单抗Tacatuzuab)；他度珠单抗(Tadocizumab)；他利珠单抗；Tamtuvetmab；坦纳单抗(Tanezumab)；Tarextumab；替非珠单抗(Tefibazumab)；替纳单抗(Tenatumomab)；替奈昔单抗；替普珠单抗(Teplizumab)；四丙珠单抗(Teprotumumab)；司他洛单抗(Tesidolumab)；Tezepelumab；ThioMAb-chMA79b-HC(A118C)；ThioMab-hu10A8.v1-HC(A118C)；ThioMab-hu10A8.v1-HC(V205C)；ThioMab-hu10A8.v1-LC(A118C)；ThioMab-hu10A8.v1-LC(V205C)；ThioMAb-huMA79b.v17-HC(A118C)；ThioMAb-huMA79b.v18-HC(A118C)；ThioMAb-huMA79b.v28-HC(A118C)；ThioMAb-huMA79b.v28-LC(V205C)；Ticiliuab；替加珠单抗；替拉珠单抗(Tildrakizumab)；Tisotumab_vedotin；塔西单抗(Tocilizumab)；托沙单抗(Tosatoxumab)；托西莫单抗(Tositumomab)；托维单抗(Tovetumab)；曲洛单抗(Tralokinumab)；Trastuzuab；曲妥珠单抗_美坦新偶联物；曲妥珠单抗；TRC-105；曲利单抗(Tregalizumab)；曲美单抗(Tremelimumab)；特伐单抗(Trevogrumab)；图卡珠单抗-西莫白介素偶联物(Tucotuzumab_celmoleukin)；乌布妥昔单抗(Ublituximab)；优隆单抗(Ulocuplumab)；乌洛单抗(Urelumab)；乌索单抗(Urtoxazumab)；优特克单抗(Ustekinumab)；Vadastuximab_talirine；Vandortuzumab_vedotin；范蒂姆单抗(Vantictumab)；维库珠单抗(Vanucizumab)；伐利单抗(Varlilumab)；伐他珠单抗(Vatelizumab)；维多珠单抗(Vedolizumab)；维妥珠单抗；维森单抗(Vesencumab)；维西珠单抗(Visilizumab)；伏洛昔单抗；Vorsetuzumab；Vorsetuzumab_mafodotin；钇_(90Y)_clivatuzumab_tetraxetan；钇_Y_90_依帕珠单抗_tetraxetan；钇_Y_90_依帕珠单抗；扎鲁木单抗；扎诺米单抗(Zanolimumab)；扎妥昔单抗(Zatuximab)；Andecaliximab；Aprutumab；Azintuxizumab；Brazikumab；Cabiralizumab；Camrelizumab；Cosfroviximab；Crizanlizumab；Dezamizumab；Duvortuxizumab；Elezanumab；Emapalumab；Eptinezumab；Erenumab；Fremanezumab；Frunevetmab；Gatipotuzumab；Gedivumab；Gemetuzumab；Gilvetmab；Ifabotuzumab；Lacnotuzumab；Larcaviximab；Lendalizumab；Lesofavumab；Letolizumab；Losatuxizumab；Lupartumab；Lutikizumab；Oleclumab；Porgaviximab；Prezalumab；Ranevetmab；Remtolumab；Rosmantuzumab；Rozanolixizumab；Sapelizumab；Selicrelumab；Suvratoxumab；Tavolixizumab；Telisotuzumab；Telisotuzumab_vedotin；Timigutuzumab；Timolumab；Tomuzotuximab；曲妥珠单抗_duocarmazine；Varisacumab；Vunakizumab；Xentuzumab；抗狂犬病_SO57；抗狂犬病_SOJB；抗狂犬病_SOJA；抗狂犬病；抗RSV_5ITB；抗α-毒素_4U6V；抗IsdB_5D1Q；抗IsdB_5D1X；抗IsdB_5D1Z；抗HIV_b12；抗HIV_2G12；抗HIV_4E10；抗HIV_VRC01；抗HIV_PG9；抗HIV_VRC07；抗HIV_3BNC117；抗HIV_10-1074；抗HIV_PGT121；抗HIV_PGDM1400；抗HIV_N6；抗HIV_10E8；抗HIV_12A12；抗HIV_12A21；抗HIV_35022；抗HIV_3BC176；抗HIV_3BNC55；抗HIV_3BNC60；抗HIV_447-52D；抗HIV_5H/I1-BMY-D5；抗HIV_8ANC195；抗HIV_cap256-176-723043/600049/531926/504134；抗HIV_CAP256-VRC26.01/VRC26.02/VRC26.03/VRC26.04/VRC26.05/VRC26.06/VRC26.07/VRC26.08/VRC26.09/VRC26.10/VRC26.11/VRC26.12/VRC26.I1/VRC26.I2/VRC26.UCA；抗HIV_cap256-206-252885/249183/220956/220629/200599/186347/186226/179686/173707/173339/172689/162744/146057/139519/136316/116098/115862/107018/098644/098135/096276/092794/086817/086446/086180/083708/079556/078657/075802/0

抗HIV_038-030557；抗HIV_038-024298；抗HIV_038-011154；抗HIV_5CIN；抗HIV_5CIL；抗HIV_5CIP；抗HIV_4JKP；抗HIV_3TNN；抗HIV_3BQU；抗HIV_IgG；抗HIV_4P9M；抗HIV_4P9H；抗HIV_Ig；抗HIV；抗流感；抗流感_Apo；抗流感-A；和抗OX40、或这些抗体中的任何的同源物、片段、变体或衍生物。

编码优选抗体的本发明的人工核酸分子可优选包含编码区，该编码区包含或组成为根据如国际专利申请PCT/EP2017/060226中所述的SEQ ID NO：1至61734中的任一项的核酸序列或表3、表4、表5、表6或表9中的各个核酸序列，特别是与这些序列或任意这些RNA序列的片段或变体相同或具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在这种情况下，PCT/EP2017/060226的公开内容也通过引用并入本文。本领域技术人员知道，其他(丰余)mRNA序列也可以编码如上述参考文献中所示的蛋白质，因此mRNA序列不限于此。

编码优选的治疗性蛋白质的本发明的人工核酸分子可优选包含编码区，该编码区包含或组成为根据如美国申请第15/585561号中所述的SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：345916或表I中所示的任何SEQ ID NO的核酸序列，特别是与这些序列或任何这些RNA序列的片段或变体相同或具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在这种情况下，美国专利申请第15/585561号的公开内容也通过引用方式并入本文。本领域技术人员知道，其他(丰余)mRNA序列也可以编码如上述参考文献中所示的蛋白质，因此mRNA序列不限于此。

进一步地，编码优选的治疗性蛋白质的本发明的人工核酸分子可优选包含编码区，该编码区包含或组成为根据如国际专利申请PCT/EP2017/060692中所述的SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：345916或表I中所示的任何SEQ ID NO的核酸序列，特别是与这些序列或任何这些RNA序列的片段或变体相同或具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在这种情况下，国际专利申请PCT/EP2017/060692的公开内容也通过引用并入本文。本领域技术人员知道，其他(丰余)mRNA序列也可以编码如上述参考文献中所示的蛋白质，因此mRNA序列不限于此。

术语“肽激素”是指在活的动物中具有内分泌功能的一类肽或蛋白质。通常，肽激素通过与靶细胞表面的受体结合并通过细胞内第二信使传递信号来发挥其功能。示例性肽激素包括脂联素，即Acrp30；促肾上腺皮质激素(或皮促素)，即ACTH；胰淀素(或胰岛淀粉样多肽)，即IAPP；血管紧张素原和血管紧张素，即AGT；抗苗勒氏激素(或苗勒氏抑制因子或激素)，即AMH；抗利尿激素(或加压素、精氨酸加压素)，即ADH；心钠素(或心房肽)，即ANP；脑利钠肽，即BNP；降钙素即CT；胆囊收缩素，即CCK；促肾上腺皮质激素释放激素，即CRH；皮质抑素，即CORT；内皮素；脑啡肽；促红细胞生成素，即EPO；促卵泡激素，即FSH；甘丙肽，即GAL；胃抑制多肽，即GIP；胃泌素，即GAS；胃促生长素；胰高血糖素，即GCG；胰高血糖素样肽-1，即GLP1；促性腺激素释放激素，即GnRH；生长激素，即GH或hGH；生长激素释放激素，即GHRH；鸟苷肽，即GN；铁调素，即HAMP；人绒毛膜促性腺激素，即hCG；人胎盘催乳素，即HPL；抑制素；胰岛素即INS；胰岛素样生长因子(或生长调节素)，即IGF；瘦素，即LEP；脂蛋白，即LPH；黄体生成素即LH；黑色素细胞刺激激素，即MSH或a-MSH；胃动素，即MLN；食欲肽；骨钙素，即OCN；催产素，即OXT；胰多肽，即甲状旁腺激素，即PTH；垂体腺苷酸环化酶激活肽，即PACAP；催乳素，即PRL；催乳激素释放激素，即PRH；松弛素，即RLN；肾素；促胰液素，即SCT；生长抑素，即SRIF；血小板生成素，即TPO；甲状腺刺激激素(或促甲状腺激素)，即TSH；促甲状腺激素释放激素，即TRH；尿鸟苷素，即UGN；或血管活性肠肽，即VIP，或这些蛋白中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

术语“基因编辑剂”是指能够修饰(即改变、诱导、增加、减少、抑制、消除或阻止)基因表达的(多)肽或蛋白质。基因表达可以在几个水平上被修饰。基因编辑剂通常可以通过以下方式起作用：(a)引入或去除表观遗传修饰，(b)改变基因的序列，例如通过在目的基因的核酸序列中引入、删除或改变核酸残基来改变基因的序列，(c)修饰与目的基因可操作地连接的调控元件的生物学功能，(d)修饰mRNA的转录、加工、剪接、成熟或输出至细胞质，(e)修饰mRNA翻译，(f)修饰翻译后修饰，(g)修饰蛋白质易位或输出。从狭义上讲，术语“基因编辑剂”可以指靶向细胞基因组以修饰基因表达的(多)肽或蛋白质，优选地通过发挥功能(a)-(d)，更优选地通过发挥功能(a)-(c)来修饰基因表达。因此，本文所用的术语“基因编辑剂”优选包括切割或改变靶DNA以诱导突变(例如，通过同源定向修复或非同源末端连接)的基因编辑剂，但也包括可在没有靶切割的情况下减少表达的基因编辑剂(例如，与能减少基因表达的表达调节剂如转录抑制因子或表观遗传修饰因子融合或缀合的基因编辑剂)。特定的基因编辑剂包括：转录活化剂、转录阻遏物、重组酶、核酸酶、DNA结合蛋白或其组合。

本发明还涉及编码CRISPR相关蛋白的人工核酸，特别是RNA、以及包含它们的(药物)组合物和试剂盒。所述人工核酸，特别是RNA，(药物)组合物和试剂盒尤其被设想用于医学，例如基因治疗，特别是用于治疗和/或预防适合用CRISPR相关蛋白进行治疗的疾病，例如通过基因编辑、敲入、敲除或调节目标靶基因的表达。

术语“CRISPR相关蛋白”是指作为CRISPR(成簇的规律间隔的短回文重复序列)系统的一部分的RNA指导的核酸内切酶(及其同源物、变体、片段或衍生物)，原核生物使用该系统来赋予针对外源DNA元件的适应性免疫。CRISPR相关蛋白包括但不限于Cas9、Cpf1(Cas12)、C2c1、C2c3、C2c2、Cas13、CasX和CasY。如本文所用，术语“CRISPR相关蛋白”包括野生型蛋白及其同源物、变体、片段和衍生物。因此，当提及编码Cas9、Cpf1(Cas12)、C2c1、C2c3和C2c2、Cas13、CasX和CasY的人工核酸分子时，所述人工核酸分子可以编码各自的野生型蛋白或其同源物、变体、片段和衍生物。

优选地，至少一个5′UTR元件和至少一个3′UTR元件协同作用，以增加可操作地连接至所述UTR的至少一个编码序列的表达。本文中设想以任何可用的组合来利用所列举的5′-UTR和3′-UTR。本发明的其他特别优选的实施方案包括所选的CDS，即选自Cas9、Cpf1、CasX、CasY和Cas13的CDS与选自HSD17B4/Gnas.1；Slc7a3.1/Gnas.1；ATP5A1/CASP.1；Ndufa4.1/PSMB3.1；HSD17B4/PSMB3.1；RPL32var/白蛋白7；32L4/白蛋白7；HSD17B4/CASP1.1；Slc7a3.1/CASP1.1；Slc7a3.1/PSMB3.1；Nosip.1/PSMB3.1；Ndufa4.1/RPS9.1；HSD17B4/RPS9.1；ATP5A1/Gnas.1；Ndufa4.1/COX6B1.1；Ndufa4.1/Gnas.1；Ndufa4.1/Ndufa1.1；Nosip.1/Ndufa1.1；Rpl31.1/Gnas.1；TUBB4B.1/RPS9.1；和Ubqln2.1/RPS9.1的UTR组合的组合。

术语“免疫检查点抑制剂”是指能够抑制(即干扰、阻断、中和、减少、抑制、消除、阻止)免疫检查点蛋白质的生物学活性的任意(多)肽或蛋白质。免疫检查点蛋白通常调节T细胞活化或功能，并且在本领域中是众所周知的。免疫检查点蛋白包括但不限于CTLA-4、PD-1、VISTA、B7-H2、B7-H3、PD-L1(B7-H1、CD274)、B7-H4、B7-H6、2B4、ICOS、HVEM、PD-L2(B7-DC、CD273)、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD226、CD276、CD160、gp49B、PIR-B、KIR家族受体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、LAG-3、BTLA、SIRPα(CD47)、CD48、2B4(CD244)、B7.1、B7.2、ILT-2、ILT-4、TIGIT、A2aR、DR3、IDOL、IDO2、LAIR-2、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、PS(磷脂酰丝氨酸)、OX-40、SLAM、TIGHT、VISTA和/或VTCN1。可用于抑制免疫检查点蛋白的示例性试剂包括抗体(和抗体片段、变体或衍生物)、肽、天然配体(和配体片段、变体或衍生物)、融合蛋白，其可以直接结合(从而灭活或抑制)或间接灭活或抑制免疫检查点蛋白，例如通过结合、灭活和/或抑制它们的受体或下游信号传导分子来阻断一种或多于一种免疫检查点蛋白和它们的天然受体之间的相互作用和/或防止由所述免疫检查点蛋白和它们的天然受体的结合介导的抑制性信号传导。示例性的免疫检查点抑制剂包括A2AR；B7-H3，即cD276；B7-H4，即VTCN1；BTLA；CTLA-4；IDO，即吲哚胺2，3-双加氧酶；KIR，即杀伤细胞免疫球蛋白样受体；LAG3，即淋巴细胞激活基因3；PD-1，即程序性死亡1(PD-1)受体；PD-L1，TIM-3，即T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3；VISTA(蛋白质)，即T细胞活化的V区Ig抑制剂；GITR，即糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因；刺激性检查点分子，即CD27、CD40、CD122、OX40、GITR和CD137或属于B7-CD28超家族的刺激性检查点分子，即CD28和ICOS，或这些蛋白中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

术语“T细胞受体”或“TCR”是指由可变的、二硫键连接的α链和β链，或γ和δ(γ/δ)链的异二聚体组成的T细胞特异性蛋白受体，其任选地与用于额外(共)刺激信号传导的结构域形成复合物，例如不变的CD3-ζ链和/或FcR、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、DAP10和/或OX40。术语“T细胞受体”包括这种天然存在的TCR的(工程化)变体、片段和衍生物，包括嵌合抗原受体(CAR)。术语“嵌合抗原受体(CAR)”通常是指工程化的融合蛋白，其包含与能够激活T细胞的细胞内信号传导域融合的结合域。通常，CAR是嵌合多肽构建体，其至少包含细胞外抗原结合域、跨膜域和胞质信号传导域(本文也称为“胞内信号传导域”)，该胞质信号传导域包含衍生自(共)刺激分子，例如CD3-ζ链、FcR、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、DAP10和/或OX40的功能性信号传导域。细胞外抗原结合域通常可以衍生自单克隆抗体或其片段、变体或衍生物。在特定方面，CAR包含衍生自单克隆抗体的单链可变片段(scFv)、融合至CD3-ζ跨膜和细胞内内结构域的融合物。

编码用于治疗肿瘤或癌症疾病的优选序列的本发明的人工核酸分子可优选包含编码区，该编码区包含或组成为根据如国际专利申请WO2016170176A1中所述的SEQ ID NO：1至10071，优选SEQ ID NO：1、3、5、6、389或399或各个表1至12或表14至17中所示的任一个核酸序列，特别是与这些序列或任何这些RNA序列的片段或变体相同或具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，WO2016170176A1的公开内容也通过引用并入本文。本领域技术人员知道，其他(丰余)mRNA序列也可以编码如上述参考文献中所示的蛋白质，因此mRNA序列不限于此。

进一步地，编码用于治疗肿瘤或癌症疾病的优选序列的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据如国际专利申请WO2009046974、WO2015024666、WO2009046739、WO2015024664、WO2003051401、WO2012089338、WO2013120627、WO2014127917、WO2016170176、或WO2015135558中所示的任一项SEQ ID NO的核酸序列，特别是与这些序列或任何这些RNA序列的片段或变体相同或具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在本文中，WO2009046974、WO2015024666、WO2009046739、WO2015024664、WO2003051401、WO2012089338、WO2013120627、WO2014127917、WO2016170176或WO2015135558的公开内容也通过引用并入本文。本领域技术人员知道，其他(丰余)mRNA序列也可以编码如上述参考文献中所示的蛋白质，因此mRNA序列不限于此。

术语“酶”在本领域中是众所周知的，并且是指化学反应的(多)肽和蛋白质催化剂。酶包括完整的完整酶或其片段、变体或衍生物。示例性的酶包括氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶和连接酶。

还可设想将前述治疗性蛋白质的片段、变体和衍生物作为目的(多)肽或蛋白质，条件是它们优选是功能性的并因此能够介导期望的生物学作用或功能。

抗原性(多)肽或蛋白质

本发明的人工核酸分子的至少一个编码区可以编码至少一种“抗原性(多)肽或蛋白质”。术语“抗原性(多)肽或蛋白质”或简称“抗原”通常指在适当条件下能够与免疫系统的组分(例如抗体或免疫细胞通过其抗原受体，例如B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR))相互作用/被其识别，并优选能够引发(适应性)免疫应答的任何(多)肽或蛋白质。术语“免疫系统的组分”优选是指适应性免疫系统的免疫细胞、免疫细胞受体和抗体。“抗原性肽或蛋白质”优选通过其“表位”或“抗原决定簇”与免疫系统的组分相互作用/被其识别。

术语“表位”或“抗原决定簇”是指被免疫系统识别的抗原性肽或蛋白质的部分或片段。所述片段通常可以包含约5个至约20个或甚至多于20个氨基酸。表位可以是“构象的”(或“不连续的”)，即由衍生出表位的抗原性肽或蛋白质的氨基酸不连续序列组成，但是表位在例如MHC复合物的三维结构中结合在一起；或者表位可以是“线性的”，即由衍生出表位的抗原性肽或蛋白质的氨基酸连续序列组成。术语“表位”通常包括“T细胞表位”(由T细胞通过其T细胞受体识别)和“B细胞表位”(由B细胞通过其B细胞受体识别)。“B细胞表位”通常位于本文所定义的(天然)蛋白质或肽抗原的外表面，并且可优选地包含或组成为5个至15个氨基酸、更优选地5个至12个氨基酸、甚至更优选地6个至9个氨基酸。“T细胞表位”通常被T细胞以MHC-1或MHC-II结合的形式识别，即作为由包含表位的抗原性蛋白或肽片段与MHC-1或MHC-II表面分子形成的复合物。“T细胞表位”通常可具有约6个至约20个或甚至多于20个氨基酸的长度，由MHC I类分子呈递的T细胞表位可优选具有约8个至约10个氨基酸的长度，例如8个、9个或10个(或甚至11个或12个氨基酸)的长度。由MHC II类分子呈递的T细胞表位可优选具有约13个或多于13个氨基酸的长度，例如13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或甚至多于20个的氨基酸的长度。在本发明的上下文中，术语“表位”可以特别是指T细胞表位。

因此，术语“抗原性(多)肽或蛋白质”是指包含、组成为或能够提供至少一个(功能性)表位的(多)肽。本发明的人工核酸(RNA)分子可以编码全长抗原性(多)肽或蛋白质，或者优选其片段。所述片段可以包含或组成为或能够提供所述抗原性(多)肽或蛋白质的(功能性)表位。“功能性”表位是指能够在对象中诱导期望的适应性免疫应答的表位。

在至少一个编码区中编码至少一种抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子可以进入靶细胞(例如专门的抗原呈递细胞(APC)，其中至少一种抗原性(多)肽或蛋白质被表达、加工并呈递给MHC分子上的免疫细胞(例如T细胞)，优选导致抗原特异性免疫应答(例如细胞介导的免疫或抗体的形成)。替代地，在至少一个编码区中编码至少一种抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子可进入靶细胞(例如，肌肉细胞、真皮细胞)，其中至少一种抗原性(多)肽或蛋白质被表达并例如被靶细胞分泌到细胞外环境，在细胞外环境中其遇到免疫系统的细胞(例如B细胞、巨噬细胞)，并且优选诱导抗原特异性免疫应答(例如形成抗体)。

当在本文中提及编码“至少一种抗原性肽或蛋白质”的人工核酸(RNA)分子时，设想所述人工核酸(RNA)分子可编码一种或多于一种全长抗原性(多)肽或蛋白质，或所述抗原性(多)肽或蛋白质的一种或多于一种片段，特别是(功能性)表位。所述全长抗原性(多)肽或蛋白质或其片段优选包含、组成为或能够提供至少一个(功能性)表位，即所述抗原性(多)肽或蛋白质或其片段优选包含或组成为天然表位(优选被B细胞识别)，或能够被MHC-I或MHC-II分子加工和呈递以提供MHC结合表位(优选被T细胞识别)。

特定抗原性(多)肽或蛋白质的选择通常取决于要治疗或预防的疾病。一般而言，人工核酸(RNA)分子可以编码任何与疾病(例如，癌症、感染性疾病)相关的抗原性(多)肽或蛋白质，所述疾病可以通过诱导针对所述抗原感染性疾病的免疫应答来治疗。

优选地，根据本发明的人工核酸分子可包含至少一个编码区，其编码肿瘤抗原、病原性抗原、自身抗原、同种抗原或变应原性抗原。

术语“肿瘤抗原”是指衍生自(优选为恶性的)肿瘤或癌症疾病或与之相关的抗原性(多)肽或蛋白质。如本文所用，术语“癌症”和“肿瘤”可互换使用，是指赘生物，其特征在于细胞不受控制且通常迅速增殖，从而趋于侵入周围组织并转移至远处身体部位。该术语包括良性肿瘤和恶性肿瘤。癌症中的恶性肿瘤通常以间变、侵袭和转移为特征；而良性肿瘤通常不具备这些性质。术语“癌症”和“肿瘤”尤其是指以肿瘤生长为特征的赘生物，还指血液和淋巴系统癌症。“肿瘤抗原”通常源自肿瘤/癌细胞，优选哺乳动物的肿瘤/癌细胞，并且可以位于源自哺乳动物、优选人的肿瘤例如全身性肿瘤或实体瘤的肿瘤细胞的表面中或表面上。“肿瘤抗原”通常包括肿瘤特异性抗原(TSA)和肿瘤相关抗原(TAA)。TSA通常由肿瘤特异性突变产生，并由肿瘤细胞特异性表达。更常见的TAA通常由肿瘤和“正常”(健康的非肿瘤)细胞共同呈递。

蛋白质或多肽可以包含或组成为肿瘤抗原，肿瘤抗原的片段、变体或衍生物。这样的核酸分子对于治疗目的特别是遗传疫苗接种是特别有用的。

优选地，肿瘤抗原可以选自黑素细胞特异性抗原、癌-睾丸抗原或肿瘤特异性抗原，优选CT-X抗原、非X CT抗原、CT-X抗原的结合配偶体或非X CT抗原的结合配偶体，或肿瘤特异性抗原，更优选CT-X抗原，非X CT抗原的结合配偶体或肿瘤特异性抗原或所述肿瘤抗原的片段、变体或衍生物；其中每个核酸序列编码不同的肽或蛋白质；并且其中至少一个核酸序列编码5T4、707-AP、9D7、AFP、AlbZIP HPG1、α-5-β-1-整联蛋白、α-5-β-6-整联蛋白、α-辅肌动蛋白-4/m、α-甲基酰基辅酶A消旋酶、AT-4、ARTC1/m、B7H4、BAGE-1、BCL-2、bcr/abl、β-连环蛋白/m、BING-4、BRCAI/m、BRCA2/m、CA 1 5-3/CA27-29、CA 19-9、CA72-4、CA125、钙网蛋白、CAMEL、CASP-8/m、组织蛋白酶B、组织蛋白酶L、CD19、CD20、CD22、CD25、CDE30、CD33、CD4、CD52、CD55、CD56、CD80、CDC27/m、CDK4/m、CDKN2A/m、CEA、CLCA2、CML28、CML66、COA-1/m、毛状蛋白样蛋白、胶原蛋白XXIII、COX-2、CT-9/BRD6、Cten、细胞周期蛋白B1、细胞周期蛋白D1、cyp-B、CYPB1、DAM-10、DAM-6、DEK-CAN、EFTUD2/m、EGFR、ELF2/m、EMMPRIN、EpCam、EphA2、EphA3、ErbB3、ETV6-AML1、EZH2、FGF-5、FN、Frau-1、G250、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE7b、GAGE-8、GDEP、GnT-V、gp100、GPC3、GPNMB/m、HAGE、HAST-2、hepsin、Her2/neu、HERV-K-MEL、HLA-A^*0201-R1 7I、HLA-A1 1/m、HLA-A2/m、HNE、同源异型框NKX3.1、HOM-TES-14/SCP-1、HOM-TES-85、HPV-E6、HPV-E7、HSP70-2M、HST-2、hTERT、iCE、IGF-1 R、IL-13Ra2、IL-2R、IL-5、未成熟层粘连蛋白受体、激肽释放酶-2、激肽释放酶-4、i67、KIAA0205、KIAA0205/m、KK-LC-1、K-Ras/m、LAGE-A1、LDLR-FUT、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A12、MAGE-B1、MAGE-B2、MAGE-B3、MAGE-B4、MAGE-B5、MAGE-B6、MAGE-B10、MAGE-B1 6、MAGE-B1 7、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-D1、MAGE-D2、MAGE-D4、MAGE-E1、MAGE-E2、MAGE-F1、MAGE-H I、MAGEL2、乳房珠蛋白A、MART-1/黑色素A、MART-2、MART-2/m、基质蛋白22、MC1 R、M-CSF、ME 1/m、间皮素、MG50/PXDN、MMP1 1、MN/CA IX抗原、MRP-3、MUC-1、MUC-2、MUM-1/m、MUM-2/m、MUM-3/m、肌球蛋白I类/m、NA88-A、N-乙酰葡糖胺转移酶-V、Neo-PAP、Neo-PAP/m、NFYC/m、NGEP、NMP22、NPM/ALK、N-Ras/m、NSE、NY-ESO-1、NY-ESO-B、OA1、OFA-iLRP、OGT、OGT/m、OS-9、OS-9/m、骨钙素、骨桥蛋白、pi 5、p190小bcr-abl、p53、p53/m、PAGE-4、PAI-1、PAI-2、PAP、PART-1、PATE、PDEF、Pim-1-激酶、Pin-1、Pml/PARα、POTE、PRAME、PRDX5/m、前列腺特异性蛋白(prostein)、蛋白酶3、PSA、PSCA、PSGR、PSM、PSMA、PTPPK/m、RAGE-1、RBAF600/m、RHAMM/CD168、RU1、RU2、S-100、SAGE、SART-1、SART-2、SART-3、SCC、SIRT2/m、Sp1 7、SSX-1、SSX-2/HOM-MEL-40、SSX-4、STAMP-1、STEAP-1、存活蛋白、存活蛋白-2B、SYT-SSX-1、SYT-SSX-2、TA-90、TAG-72、TARP、TEL-AML1、TGFβ、TGFβRII、TGM-4、TPI/m、TRAG-3、TRG、TRP-1、TRP-2/6b、TRP/INT2、TRP-p8、酪氨酸酶、UPA、VEGFR1、VEGFR-2/FLK-1、WT1和淋巴血细胞的免疫球蛋白独特型或淋巴血细胞的T细胞受体独特型、或这些肿瘤抗原中的任何的同源物、片段、变体或衍生物；优选存活蛋白或其同源物、来自MAGE家族的抗原或其结合配偶体或所述肿瘤抗原的片段、变体或衍生物。

在这种情况下，特别优选的是肿瘤抗原NY-ESO-1、5T4、MAGE-C1、MAGE-C2、存活蛋白、Muc-1、PSA、PSMA、PSCA、STEAP和PAP、或这些肿瘤抗原中的任何的同源物、片段、变体或衍生物。

术语“病原性抗原”是指来源于病原体或与病原体相关的抗原性(多)肽或蛋白质，病原体为病毒、微生物或引起感染和典型疾病的其他物质，除了病毒之外，还包括细菌、原生动物或真菌。特别地，这样的“病原性抗原”可能能够在对象，优选哺乳动物对象，更优选人中引发免疫应答。通常，病原性抗原可以是表面抗原，例如位于病原体表面(例如其衣壳、质膜或细胞壁)的(多)肽或蛋白质(或蛋白质片段，例如表面抗原的外部)。

因此，在一些优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子可以在其至少一个编码区中编码选自细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原或原生动物抗原的至少一种病原性抗原。编码的(多)肽或蛋白质可以包含或组成为病原性抗原或其片段、变体或衍生物。

病原性抗原可优选选自衍生自以下病原体的抗原：鲍曼不动杆菌、无形体属、嗜吞噬细胞无形体、巴西钩虫、十二指肠钩虫、溶血隐秘杆菌、Ascaris lumbricoide、曲霉菌属、星状病毒科、巴贝西虫属、炭疽杆菌、蜡样芽胞杆菌、汉赛巴尔通体、BK病毒、人酵母菌、皮炎芽生菌、百日咳鲍特菌、伯氏疏螺旋体、疏螺旋体属、疏螺旋体、布鲁氏菌属、马来丝虫、布尼亚病毒科、洋葱伯克霍尔德菌和其他伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌、杯状病毒科、弯曲杆菌属、白色念珠菌、念珠菌、沙眼衣原体、肺炎衣原体、羊牛流产衣原体、CJD朊病毒、华支睾吸虫、肉毒梭菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、产气荚膜梭菌、梭状芽孢杆菌、破伤风梭菌、球孢子菌、冠状病毒、白喉杆菌、贝纳柯克斯体、克里木-刚果出血热病毒、新型隐球菌、隐孢子虫属、巨细胞病毒(CMV)、登革热病毒(DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)、脆双核阿米巴、埃博拉病毒(EBOV)、棘球蚴属、查菲埃立克体、尤因埃立克体、埃立克体属、痢疾阿米巴、肠球菌属、肠病毒属、肠病毒、主要柯萨奇病毒和肠病毒71(EV71)、表皮癣菌、EB病毒(EBV)、大肠杆菌01 57：H7、01 1 1和O1 04：H4、肝片吸虫和大片吸虫、FFI朊病毒、丝虫目超家族、黄病毒、土拉弗朗西斯氏菌(Francisella tularensis)、梭形杆菌属、白地霉、肠贾第虫、颚口虫属物种、GSS朊病毒、瓜纳瑞托病毒、杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌、尼帕病毒属(Henclra病毒、尼帕病毒)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)、荚膜组织胞浆菌、HIV(人免疫缺陷病毒)、威尼克外瓶霉(Hortaea werneckii)、人博卡病毒(HBoV)、人疱疹病毒6型(HHV-6)和人疱疹病毒7型(HHV-7)、人偏肺病毒(hMPV)、人乳头瘤病毒(HPV)、人副流感病毒(HPIV)、日本脑炎病毒、JC病毒、胡宁病毒、金格杆菌、肉芽肿杆菌、库鲁病朊病毒、拉沙病毒、嗜肺性军团菌、利什曼虫属、钩端螺旋体属、单核细胞增多性李斯特氏菌、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、马丘波病毒、马拉色菌、马尔堡病毒、麻疹病毒、横川后殖吸虫(Metagonimus yokagawai)、微孢子门、接触传染性软疣病毒(MCV)、流行性腮腺炎病毒、麻风分枝杆菌和弥漫型麻疯分枝杆菌、结核分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、肺炎支原体、福氏耐格里变形虫、美洲板口线虫、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟菌、星形诺卡氏菌、诺卡氏菌、盘尾丝虫、恙虫病东方体、正黏病毒科(流感)、巴西副球孢子菌、并殖吸虫、卫氏并殖吸虫、细小病毒B19、巴斯德菌属、疟原虫属、耶氏肺孢子虫、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(Rhinovirus)、鼻病毒(rhinoviruses)、小蛛立克次体、立克次氏体属、普氏立克次体、立氏立克次体、地方性斑疹伤寒立克次体、裂谷热病毒、轮状病毒、风疹病毒、萨比亚病毒、沙门氏菌属、疥螨(Sarcoptes scabiei)、SARS冠状病毒、血吸虫属、志贺氏杆菌属、辛诺柏病毒、汉坦病毒、申克孢子丝菌、葡萄球菌属、葡萄球菌属、无乳链球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌、粪类圆线虫、绦虫属、有钩绦虫、蜱传脑炎病毒(TBEV)、犬弓蛔虫或猫弓蛔线虫、刚地弓形虫、梅毒螺旋体、旋毛虫、阴道毛滴虫、毛癣菌、毛首鞭形线虫、布氏锥虫、克氏锥虫、解脲支原体、水痘带状疱疹病毒(VZV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、大天花或小天花病毒、vCJD朊病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、霍乱弧菌、西尼罗河病毒、西方马脑炎病毒、班氏丝虫、黄热病病毒、小肠结肠炎耶尔森菌、鼠疫耶尔森菌、和假结核耶尔森菌、或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

其他优选的病原性抗原可衍生自流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)，单纯疱疹病毒(HSV)、人乳头瘤病毒(HPV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、疟原虫、金黄色葡萄球菌、登革热病毒、沙眼衣原体、巨细胞病毒(CMV)、乙型肝炎病毒(HBV)、结核分枝杆菌、狂犬病病毒和黄热病毒、或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

其他优选的病原性抗原可衍生自根癌农杆菌、皮炎芽生菌ATCC 60636、α乳头状瘤病毒10、安第斯正汉坦病毒(Andes orthohantavirus)、安第斯病毒CHI-7913、土曲霉NIH2624、禽戊型肝炎病毒、微小巴贝虫、炭疽芽孢杆菌、细菌、英国β冠状病毒(Betacoronavirus England)1、德国小蠊、百日咳博德特氏菌、博尔纳病病毒吉森菌株He/80、博氏疏螺旋体B31、博氏疏螺旋体CA12、博氏疏螺旋体N40、博氏疏螺旋体ZS7、加尔氏疏螺旋体IP90、埃莫氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋、博氏疏螺旋体、加尔氏疏螺旋体、牛(Bostaurus)、马尔他布鲁氏杆菌、马来丝虫、本迪布焦型埃博拉病毒、类鼻疽伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌K96243、空肠弯曲杆菌、乌普萨拉弯曲杆菌、白色念珠菌、加拿大豚鼠、基孔肯雅病毒、基孔肯雅病毒MY/08/065、基孔肯雅病毒新加坡/11/2008、基孔肯雅病毒株LR2006_OPY1 IMT/留尼汪/2006、基孔肯雅病毒株S27-非洲原型、肺炎衣原体、沙眼衣原体、沙眼衣原体血清型变种D、衣原体、艰难梭菌、艰难梭菌BI/NAP1/027、破伤风梭菌、ConvictCreek 107病毒、白喉棒状杆菌、牛痘病毒(布赖顿红)白痘、柯萨奇病毒A16、柯萨奇病毒A9、柯萨奇病毒B1、柯萨奇病毒B2、柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B4、克里米亚-刚果出血热正内罗病毒、小隐孢子虫、登革热病毒、登革热病毒1、登革热病毒1瑙鲁/西太平洋/1974、登革热病毒1PVP159、登革热病毒1新加坡/S275/1990、登革热病毒2、登革热病毒2 D2/SG/05K4155DK1/2005、登革热病毒2牙买加/1409/1983、登革热病毒2波多黎各/PR159-S1/1969、登革热病毒2株43、登革热病毒2泰国/16681/84、登革热病毒2泰国/NGS-C/1944、登革热病毒3、登革热病毒4、登革热病毒4多米尼加/814669/1981、登革热病毒4泰国/0348/1991、登革热病毒1型夏威夷、埃博拉病毒-马英嘉扎伊尔1976、埃博拉病毒、细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、艾柯病毒E11、艾柯病毒E9、犬埃立克体杰克株、查菲埃立克体、查菲埃立克体阿肯色株、溶组织内阿米巴、溶组织内阿米巴YS-27、屎肠球菌、肠病毒A、肠病毒A71、肠病毒C、大肠杆菌、大片吸虫、肝片吸虫、四角汉坦病毒、土拉弗朗西斯菌、土拉弗朗西斯菌亚种holarctica LVS、土拉弗朗西斯菌亚种土拉弗氏菌SCHU S4、毒性甘比尔鞭毛虫、GB病毒C、采采蝇、双核鄂口线虫、Gp160、H1N1亚型、H5N1亚型、流感嗜血杆菌NTHi 1128、流感嗜血杆菌血清型B、流感嗜血杆菌亚型1H、汉坦正汉坦病毒、汉坦病毒76-118、HBV基因型D、幽门螺杆菌、幽门螺杆菌26695、多聚螺旋体(Heligmosomoides polygyrus)、乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒adr4、乙型肝炎病毒ayw/法国/蒂奥莱/1979、乙型肝炎病毒基因型D、乙型肝炎病毒亚型adr、乙型肝炎病毒亚型adw、乙型肝炎病毒亚型adw2、乙型肝炎病毒亚型adyw、乙型肝炎病毒亚型AYR、乙型肝炎病毒亚型ayw、丙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒(分离株1)、丙型肝炎病毒(BK分离株)、丙型肝炎病毒(Con1分离株)、丙型肝炎病毒(格拉斯哥分离株)、丙型肝炎病毒(H分离株)、丙型肝炎病毒(H77分离株)、丙型肝炎病毒(HC-G9分离株)、丙型肝炎病毒(HCV-K3a/650分离株)、丙型肝炎病毒(日本分离株)、丙型肝炎病毒(JK049分离株)、丙型肝炎病毒(NZL1分离株)、丙型肝炎病毒(台湾分离株)、丙型肝炎病毒基因型1、丙型肝炎病毒基因型2、丙型肝炎病毒基因型3、丙型肝炎病毒基因型4、丙型肝炎病毒基因型5、丙型肝炎病毒基因型6、丙型肝炎病毒HCT18、丙型肝炎病毒HCV-KF、丙型肝炎病毒分离株HC-J1、丙型肝炎病毒分离株HC-J6、丙型肝炎病毒分离株HC-J8、丙型肝炎病毒JFH-1、丙型肝炎病毒亚型1a、丙型肝炎病毒亚型1a奇隆公司、丙型肝炎病毒亚型1b、丙型肝炎病毒亚型1b AD78、丙型肝炎病毒亚型1b分离株BE-11、丙型肝炎病毒亚型1b JK1、丙型肝炎病毒亚型2a、丙型肝炎病毒亚型2b、丙型肝炎病毒亚型3a、丙型肝炎病毒亚型5a、丙型肝炎病毒亚型6a、丁型肝炎病毒、丁型肝炎病毒TW2667、戊型肝炎病毒、戊型肝炎病毒(缅甸菌株)、戊型肝炎病毒(墨西哥菌株)、戊型肝炎病毒SAR-55、戊型肝炎病毒3型康沃尔-C1、戊型肝炎病毒4型JAK-Sai、甲型肝炎病毒、苍鹭乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒(1型/菌株17)、泡疹病毒、HIV-1CRF01_AE、HIV-1 O亚型、HIV-1 M：A、HIV-1 M：B、HIV-1 M：B_89.6、HIV-1 M：B_HXB2R、HIV-1M：B_MN、HIV-1 M：C、HIV-1 M：CRF01_AE、HIV-1 M：G、HIV-1 O_ANT70、人腺病毒11、人腺病毒2、人腺病毒40、人腺病毒5、人α疱疹病毒1、人α疱疹病毒2、人α疱疹病毒3、人β疱疹病毒5、人β疱疹病毒6B、人博卡病毒1、人博卡病毒2、人博卡病毒3、人冠状病毒229E、人冠状病毒OC43、人内源性逆转录病毒、人内源性逆转录病毒H、人内源性逆转录病毒K、人肠病毒71亚基因型C4、人γ疱疹病毒4、人γ疱疹病毒8、人甲型肝炎病毒Hu/澳大利亚/HM175/1976、人疱疹病毒1株KOS、人疱疹病毒2株333、人疱疹病毒2株HG52、人疱疹病毒3H-551、人疱疹病毒3株Oka疫苗、人疱疹病毒4株B95-8、人疱疹病毒4型1、人疱疹病毒4型2、人疱疹病毒5株AD169、人疱疹病毒5株Towne、人疱疹病毒6(乌干达1102株)、人疱疹病毒7株JI、人免疫缺陷病毒1、人免疫缺陷病毒2、人免疫缺陷病毒1型(YU2分离株)、人免疫缺陷病毒1型(JRCSF分离株)、人免疫缺陷病毒1型(纽约5分离株)、人免疫缺陷病毒1型(SF162分离株)、人免疫缺陷病毒1型(SF33分离株)、人免疫缺陷病毒1型BH10、人偏肺病毒、人正肺病毒、人乳头瘤病毒、人乳头瘤病毒11型、人乳头瘤病毒16型、人乳头瘤病毒18型、人乳头瘤病毒29型、人乳头瘤病毒31型、人乳头瘤病毒33型、人乳头瘤病毒35型、人乳头瘤病毒39型、人乳头瘤病毒44型、人乳头瘤病毒45型、人乳头瘤病毒51型、人乳头瘤病毒52型、人乳头瘤病毒58型、人乳头瘤病毒59型、人乳头瘤病毒6型、人乳头瘤病毒68型、人乳头瘤病毒6b型、人乳头瘤病毒73型、人副流感3病毒(NIH 47885株)、人副肠孤病毒1、人细小病毒4、人细小病毒B19、人脊髓灰质炎病毒1、人脊髓灰质炎病毒1 Mahoney、人脊髓灰质炎病毒3、人多瘤病毒1、人呼吸道合胞体病毒(RSB1734株)、人呼吸道合胞体病毒(RSB6190株)、人呼吸道合胞体病毒(RSB6256株)、人呼吸道合胞体病毒(RSB642株)、人呼吸道合胞体病毒(B亚型/18537株)、人呼吸道合胞体病毒A、人呼吸道合胞体病毒A Long株、人呼吸道合胞体病毒A2、人呼吸道合胞体病毒S2、人呼吸道病毒3、人鼻病毒A89、人轮状病毒A、人T细胞淋巴营养病毒1型(加勒比分离株)、人T细胞淋巴营养病毒1型(MT-2分离株)、人T细胞淋巴营养病毒1型(ATK株)、人T细胞淋巴营养病毒1型(非洲分离株)、人T型淋巴营养病毒1、人T型淋巴营养病毒2、甲型流感病毒、甲型流感病毒(A/安徽/1/2005(H5N1))、甲型流感病毒(A/安徽/PA-1/2013(H7N9))、甲型流感病毒(A/阿根廷/3779/94(H3N2))、甲型流感病毒(A/奥克兰/1/2009(H1N1))、甲型流感病毒(A/斑头雁/青海/61/05(H5N1))、甲型流感病毒(A/布雷维格教区/1/1918(H1N1))、甲型流感病毒(A/加利福尼亚/04/2009(H1N1))、甲型流感病毒(A/加利福尼亚/07/2009(H1N1))、甲型流感病毒(A/加利福尼亚/08/2009(H1N1))、甲型流感病毒(A/加利福尼亚/10/1978(H1N1))、甲型流感病毒(A/克赖斯特彻奇/2/1988(H3N2))、甲型流感病毒(A/科尔多瓦/3278/96(H3N2))、甲型流感病毒(A/法国/75/97(H3N2))、甲型流感病毒(A/福建/411/2002(H3N2))、甲型流感病毒(A/香港/01/2009(H1N1))、甲型流感病毒(A/香港/1/1968(H3N2))、甲型流感病毒(A/印度尼西亚/CDC699/2006(H5N1))、甲型流感病毒(A/伊朗/1/1957(H2N2))、甲型流感病毒(A/孟菲斯/13/1978(H1N1))、甲型流感病毒(A/孟斐斯/4/1980(H3N2))、甲型流感病毒(A/南昌/58/1993(H3N2))、甲型流感病毒(A/纽约/232/2004(H3N2))、甲型流感病毒(A/纽约/15/94(H3N2))、甲型流感病毒(A/纽约/17/94(H3N2))、甲型流感病毒(A/俄亥俄州/3/95(H3N2))、甲型流感病毒(A/奥塔戈/5/2005(H1N1))、甲型流感病毒(A/波多黎各/8/1934(H1N1))、甲型流感病毒(A/山东/5/94(H3N2))、甲型流感病毒(A/所罗门群岛/3/2006(鸡胚传代)(H1N1))、甲型流感病毒(A/南卡罗来纳州/1/1918(H1N1))、甲型流感病毒(A/猪/香港/126/1982(H3N2))、甲型流感病毒(A/猪/爱荷华州/15/1930(H1N1))、甲型流感病毒(A/悉尼/05/97-样(H3N2))、甲型流感病毒(A/德克萨斯州/1/1977(H3N2))、甲型流感病毒(A/乌隆/307/1972(H3N2))、甲型流感病毒(A/乌拉圭/716/2007(H3N2))、甲型流感病毒(A/USSR/26/1985(H3N2))、甲型流感病毒(A/越南/1203/2004(H5N1))、甲型流感病毒(A/越南/1194/2004(H5N1))、甲型流感病毒(A/惠灵顿/75/2006(H1N1))、甲型流感病毒(A/威尔逊史密斯/1933(H1N1))、甲型流感病毒(A/武汉/359/1995(H3N2))、甲型流感病毒(A株/马科/纽马克特/76)、乙型流感病毒、日本脑炎病毒、日本脑炎病毒中山株、日本脑炎病毒韦洛尔P20778、JC多瘤病毒、胡宁哺乳动物沙粒病毒、肺炎克雷伯菌、库姆灵厄病毒、维多利亚湖马尔堡病毒-Popp、拉沙哺乳动物沙粒病毒、拉沙病毒Josiah株、利什曼原虫、埃塞俄比亚利什曼原虫、巴西利什曼原虫、巴西利什曼原虫MHOM/BR/75/M2904、恰氏利什曼原虫、杜氏利什曼原虫、婴儿利什曼原虫、主要利什曼原虫、主要利什曼原虫Friedlin株、巴拿马利什曼原虫、皮氏利什曼原虫、问号状钩端螺旋体、问号状钩端螺旋体血清型变种Australis、问号状钩端螺旋体血清型变种Copenhageni、问号状钩端螺旋体血清型变种Copenhageni株Fiocruz L1-130、问号状钩端螺旋体血清型变种Lai、问号状钩端螺旋体血清型变种Lai株HY-1、问号状钩端螺旋体血清型变种Pomona、小樱桃病毒1、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒、麻疹病毒、麻疹病毒埃德蒙斯顿株、默克尔细胞多瘤病毒、Mobala哺乳动物沙粒病毒、改良牛痘安卡拉病毒、卡他莫拉菌O35E、丑乳头瘤病毒1、小家鼠(Mus musculus)、分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、鸟分枝杆菌血清型变种8、鸟分枝杆菌亚种副结核菌、牛分枝杆菌AN5、牛分枝杆菌BCG、牛分枝杆菌BCG株巴斯德菌1173P2、偶发分枝杆菌偶发亚种、浅黄分枝杆菌、胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、麻风分枝杆菌、麻风分枝杆菌TN、海洋分枝杆菌、新分枝杆菌、草分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌、结核分枝杆菌CDC1551、结核分枝杆菌H37Ra、结核分枝杆菌H37Rv、溃疡分枝杆菌、肺炎支原体、肺炎支原体FH、肺炎支原体M129、美洲钩虫、淋病奈瑟氏球菌、脑膜炎奈瑟氏球菌血清型B H44/76、尼帕亨尼病毒(Nipah henipavirus)、诺如病毒基因型2坎伯韦尔1890、旋盘尾丝虫、恙虫病东方体、穴兔(Oryctolagus cuniculus)、黑猩猩(Pantroglodytes)、巴西副球孢子菌、巴西副球孢子菌B339、恶性疟原虫、恶性疟原虫3D7、恶性疟原虫7G8、恶性疟原虫FC27/巴布亚新几内亚、恶性疟原虫FCR-3/冈比亚、恶性疟原虫分离株WELLCOME、恶性疟原虫K1、恶性疟原虫LE5、恶性疟原虫Mad20/巴布亚新几内亚、恶性疟原虫NF54、恶性疟原虫帕洛阿尔托/乌干达、恶性疟原虫RO-33、里氏疟原虫(Plasmodiumreichenowi)、间日疟原虫、间日疟原虫NK、间日疟原虫Sal-1、间日疟原虫菌株Belem、间日疟原虫样种、牙龈卟啉单胞菌、牙龈卟啉单胞菌381、牙龈卟啉单胞菌OMZ 409、普氏菌口腔型472株F0295、铜绿假单胞菌、普马拉型正汉坦病毒、普马拉型病毒(Umea/hu株)、普马拉型病毒sotkamo/v-2969/81、隐袭腐霉、Ravn病毒-Ravn肯尼亚1987、呼吸道合胞体病毒、带化红球菌、Rhodococcus hoagii、风疹病毒、风疹病毒株M33、风疹病毒株Therien、风疹病毒疫苗株RA27/3、酿酒酵母、猿猴γ疱疹病毒(Saimiriine gammaherpesvirus)2型、肠炎沙门氏菌肠炎亚种伤寒血清型变种、沙门氏菌A组、沙门氏菌D组、沙门氏菌B组、札幌大鼠病毒、SARS冠状病毒、SARS冠状病毒BJ01、SARS冠状病毒TJF、SARS冠状病毒Tor2、SARS冠状病毒Urbani、血吸虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、曼氏血吸虫波多黎各、辛农布雷正汉坦病毒、辛德比斯病毒、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌金黄色亚种COL、金黄色葡萄球菌金黄色亚种MRSA252、链球菌、变形链球菌、变形链球菌MT 8148、口腔链球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、化脓性链球菌血清型M24、化脓性链球菌血清型M3 D58、化脓性链球菌血清型M5、化脓性链球菌血清型M6、链球菌A组、肥头绦虫、牛带绦虫、猪带绦虫、蜱传脑炎病毒、犬弓蛔虫、刚地弓形虫、刚地弓形虫ME49、刚地弓形虫RH、刚地弓形虫I型、刚地弓形虫II型、刚地弓形虫III型、刚地弓形虫VEG、梅毒螺旋体、苍白螺旋体苍白亚种Nichols株、阴道毛滴虫、小麦(Triticum aestivum)、布氏锥虫、布氏甘比亚锥虫、克氏锥虫、克氏锥虫Dm28c、克氏锥虫CLBrener株、牛痘病毒、水泡性口炎病毒、霍乱弧菌、西尼罗河病毒、西尼罗河病毒NY-99、班氏吴策线虫、黄热病病毒17D/Tiantan、小肠结肠炎耶尔森菌、扎伊尔埃博拉病毒、寨卡病毒、或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

编码优选的流感病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请PCT/EP2017/060663的图1、图2、图3和图4或分别在表1、表2、表3或表4中所示的任一项SEQ ID NO的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，PCT/EP2017/060663的公开内容通过引用并入本文。

编码进一步优选的流感病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请PCT/EP2017/064066的图20、图21、图22和图23或分别在表1、表2、表3或表4中所示的任一项SEQ ID NO的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，PCT/EP2017/064066的公开内容通过引用并入本文。

编码优选的狂犬病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请WO 2015/024665 A1的SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的核酸序列、或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，WO 2015/024665 A1的公开内容通过引用并入本文。

编码进一步优选的狂犬病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请PCT/EP2017/064066的SEQ IDNO：24或表5的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，PCT/EP2017/064066的公开内容通过引用并入本文。

编码优选的RSV衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请WO 2015/024668 A2的SEQ ID NO 31至35的任一项的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，WO 2015/024668 A2的公开内容通过引用并入本文。

编码优选的埃博拉病毒或马尔堡病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请WO 2016/097065 A1的SEQ ID NO 20至233的任一项的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，WO 2016/097065 A1的公开内容通过引用并入本文。

编码优选的寨卡病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请WO 2017/140905 A1的SEQ ID NO：1至11759或表1、表1A、表2、表2A、表3、表3A、表4、表4A、表5、表5A、表6、表6A、表7、表8或表14中的任一项的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，WO 2017/140905 A1的公开内容通过引用并入本文。

编码优选的诺如病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请PCT/EP2017/060673的SEQ ID NO：1至39746或表1中的任一项的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，PCT/EP2017/060673的公开内容通过引用并入本文。

编码优选的轮状病毒衍生的病原性抗原的本发明的人工核酸分子可以优选地包含编码区，该编码区包含或组成为根据国际专利申请WO 2017/081110 A1的SEQ ID NO：1至3593或表1至20中的任一项的核酸序列，或任意这些序列的片段或变体，特别是与任意这些序列具有至少50％、60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少80％的序列同一性的核酸序列。在此上下文中，WO 2017/081110 A1的公开内容通过引用并入本文。

术语“自身抗原”是指内源性“自体”抗原，尽管它是正常的身体成分，但可以在宿主中诱导自身免疫反应。在本发明的上下文中，自身抗原优选是人来源的。提供编码衍生自自身抗原的抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子可以例如用于诱导对所述自身抗原的免疫耐受。本发明上下文中的示例性自身抗原包括但不限于，衍生自或选自以下的自身抗原：60kDa伴侣蛋白2、脂蛋白LpqH、被T细胞识别的黑色素瘤抗原1、MHC I类多肽相关序列A、亲本蛋白、结构多蛋白、酪氨酸酶、髓磷脂蛋白脂蛋白、EB核抗原1、包膜糖蛋白GP350、基因组多蛋白、胶原蛋白α-1(II)链、聚集蛋白聚糖核心蛋白、刺激黑素细胞的激素受体、乙酰胆碱受体亚基α、60kDa热休克蛋白、线粒体组蛋白H4、肌球蛋白11、谷氨酸脱羧酶2、60kDa伴侣蛋白、PqqC样蛋白、胸腺素β-10、髓磷脂碱性蛋白、EB核抗原4、黑素细胞蛋白PMEL、HLAII类组织相容性抗原DQβ1链、潜在膜蛋白2、整联蛋白β-3、核蛋白、60S核糖体蛋白L10、蛋白BOLF1、60S酸性核糖体蛋白P2、潜在膜蛋白1、胶原蛋白α-2(VI)链、脱氧核糖核酸外切酶V、γ反式激活蛋白BZLF1、S-抑制蛋白、HLA I类组织相容性抗原A-3α链、蛋白CT_579、基质蛋白-3、包膜糖蛋白B、ATP依赖性锌金属蛋白酶FtsH、70kDa的U1小核内核糖核蛋白、CD48抗原、微管蛋白β链、肌动蛋白、细胞质1、EB核抗原3、NEDD4家族相互作用蛋白1、60S核糖体蛋白L28、立即早期蛋白2、胰岛素异形体2、角蛋白II型细胞骨架3、基质蛋白1、组蛋白H2A.Z、mRNA输出因子ICP27同源物、小核内核糖核蛋白相关蛋白B和B′、大的富含半胱氨酸的周质蛋白OmcB、Smoothelin、小核内核糖核蛋白Sm D1、乙酰胆碱受体亚基ε、侵袭素重复家族磷酸酶、α-晶状蛋白B链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-13β链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-4β链、丙酮酸脱氢酶复合物的二氢脂酰赖氨酸残基乙酰转移酶成分、线粒体角蛋白I型细胞骨架18、EB核抗原6、蛋白Tax-1、波形蛋白、角蛋白I型细胞骨架16、角蛋白I型细胞骨架10、HLA I类组织相容性抗原B-27α链、甲状腺球蛋白、乙酰胆碱受体亚基γ、伴侣蛋白DnaK、蛋白U24、转运Na(+)的NADH-醌还原酶亚基A、65kDa磷蛋白、可能的ATP依赖性Clp蛋白酶ATP结合亚基、可能的外膜蛋白PmpC、70kDa热休克蛋白1B、血凝素、破伤风毒素、烯醇酶、Ras相关含普列克底物蛋白同源结构域的蛋白1、角蛋白II型细胞骨架7、肌球蛋白9、组蛋白H1样蛋白Hc1、包膜糖蛋白gp160、脲酶亚基β、血管活性肠多肽受体1、病毒白介素10同源物、组蛋白H3.3、复制蛋白A 32kDa亚基、可能的外膜蛋白PmpD、胰岛素-2、L-多巴色素互变异构酶、角蛋白I型细胞骨架9、包膜糖蛋白H、DNA聚合酶催化亚基、β-2-糖蛋白1、包膜糖蛋白gp62、血清白蛋白、主要DNA结合蛋白、HLA I类组织相容性抗原A-2α链、成髓细胞蛋白酶、POTE锚蛋白结构域家族成员I、蛋白E7、预测外排蛋白、复制和转录激活因子、Gag-Pro-Pol多蛋白、衣壳蛋白VP26、主要衣壳蛋白、凋亡调节因子BHRF1、EB核抗原2、HLA I类组织相容性抗原B-7α链、钙网蛋白、γ-分泌酶C末端片段59、胰岛素、葡萄糖6磷酸酶2、胰岛淀粉样多肽、受体型酪氨酸蛋白磷酸酶N2、受体型酪氨酸蛋白磷酸酶样N、胰岛细胞自身抗原1、Bos d6、谷氨酸脱羧酶1、60S核糖体蛋白L29、28S核糖体蛋白S31、线粒体HLA II类组织相容性抗原DRB1-16β链、胶原蛋白α-3(IV)链、葡萄糖6磷酸酶、葡萄糖6磷酸酶3、胶原蛋白α-5(IV)链、Nef蛋白、胶质纤维酸性蛋白、原纤蛋白-1、腱生蛋白、溶基质蛋白酶-1、间质胶原酶、钙蛋白酶2催化亚基、硫酸软骨素蛋白聚糖4、纤维蛋白原β链、伴侣蛋白DnaJ、几丁质酶3样蛋白1、基质金属蛋白酶16、DNA拓扑异构酶1、卵泡抑素相关蛋白1、Igγ-1链C区、Igγ-3链C区、胶原蛋白α-2(XI)链、桥粒黏蛋白3、纤维蛋白原α链、丝聚蛋白、T细胞受体β链V区CTL-L17、T细胞受体β-1链C区、Ig重链V-I区EU、胶原蛋白α-1(IV)链、HLA I类组织相容性抗原Cw-7α链、HLA I类组织相容性抗原B-35α链、HLA I类组织相容性抗原B-38α链、高迁移率族蛋白B2、Ig重链V-II区ARH-77、HLA II类组织相容性抗原DRβ4链、Igκ链C区、α-烯醇酶、溶酶体相关跨膜蛋白5、HLAI类组织相容性抗原B-52α链、异质核内核糖核蛋白A2/B1、T细胞受体β链V区YT35、Igγ-4链C区、T细胞受体β-2链C区、DnaJ同源亚家族B成员2、DnaJ同源亚家族A成员1、Igκ链V-IV区Len、Ig重链V-II区OU、Igκ链V-IV区B17、2′，3′-环核苷酸3′-磷酸二酯酶、Ig重链V-II区MCE、Igκ链V-III区HIC、Ig重链V-II区COR、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白、Igκ链V-II区RPMI 6410、Igκ链V-II区GM607、免疫球蛋白λ样多肽5、Ig重链V-II区WAH、生物素蛋白连接酶、少突胶质细胞鞘糖蛋白、转醛缩酶、DNA解旋酶/引发酶复合物相关蛋白、干扰素β、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白、髓鞘相关糖蛋白、融合糖蛋白F0、髓鞘蛋白P0、Igλ链V-II区MGC、DNA引发酶、次要衣壳蛋白L2、髓鞘P2蛋白、周围髓鞘蛋白22、视黄醇结合蛋白3、嗜乳脂蛋白亚家族1成员A1、碱性核酸酶、密封蛋白-11、N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶CwlH、GTP酶Der、可能的转座酶、ABC转运蛋白、ATP结合蛋白、假定的胶原蛋白α-2(IV)链、钙抑素、Igκ链V-III区SIE、E3泛素蛋白连接酶TRIM68、谷氨酸受体离子型NMDA 2A、血影蛋白α链、非红细胞生成素1、狼疮La蛋白、补体C1q子组分亚基A、U1小核内核糖核蛋白A、60kDaSS-A/Ro核糖核蛋白、DNA修复蛋白XRCC4、组蛋白H3样着丝粒蛋白A、组蛋白H1.4、推定的HTLV-1相关内源序列、HLA II类组织相容性抗原DRB1-3链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-1β链、小核内核糖核蛋白Sm D3、肿瘤坏死因子受体超家族成员6、磷酸甘露糖变位酶/磷酸葡萄糖变位酶、三分体末端酶亚基UL15、蛋白酶体亚基β3型、增殖细胞核抗原、内衣壳蛋白σ-2、组蛋白H2B 1型、E3泛素蛋白连接酶TRIM21、DNA指导的RNA聚合酶II亚基RPB1、X射线修复交叉互补蛋白6、U1小核内核糖核蛋白C、胱天蛋白酶-8、60S核糖体蛋白L7、5-羟色胺受体4、小核内核糖核蛋白相关蛋白N、输出蛋白-1、60S酸性核糖体蛋白P0、神经丝重多肽、假定的膜蛋白、T细胞受体α链C区、T细胞受体α链V区CTL-L17、RNA聚合酶σ因子SigA、小核内核糖核蛋白Sm D2、免疫球蛋白ι链、Igκ链V-III区WOL、组蛋白H2B类型1-F/J/L、高迁移率族蛋白B1、X射线修复交叉互补蛋白5、毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3、主要病毒转录因子ICP4、电压依赖性P/Q型钙通道亚基α-1A、热休克蛋白HSP90-β、DNA拓扑异构酶2-β、组蛋白H3.1、肿瘤坏死因子配体超家族成员6、磷酸N-乙酰胞壁酰-五肽转移酶、血红蛋白亚基α、载脂蛋白E、CD99抗原、ATP合酶亚基β、线粒体乙酰胆碱受体亚基δ、酰基辅酶A脱氢酶家族成员10、含KN基序和锚蛋白重复结构域的蛋白3、含SAM和SH3结构域的蛋白1、延伸因子1-α1、GTP结合核蛋白Ran、肌球蛋白-7、Sal样蛋白1、IgGFc结合蛋白、E3泛素蛋白连接酶SIAH1、肌盲样蛋白2、膜联蛋白A1、蛋白PET117同源物、线粒体核普适酪蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1、多效调节蛋白1、NADH脱氢酶[泛醌]1α亚复合物亚基3、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G(o)亚基α、微管相关蛋白1B、L-丝氨酸脱水酶/L-苏氨酸脱氨酶、着丝粒蛋白J、SH3和多个锚蛋白重复结构域蛋白3、延胡索酸水合酶、线粒体丝切蛋白-1、Rho GTP酶激活蛋白9、磷脂酸酰胞苷酰转移酶1、神经丝轻多肽、钙同线蛋白-1、GPI转酰胺酶组分PIG-T、脂滴包被蛋白-3、蛋白unc-13同源物D、含WD40重复序列的蛋白SMU1、神经丝介质多肽、蛋白S100-B、羧肽酶E、神经连接蛋白2-β、NAD依赖性蛋白脱乙酰酶去乙酰化酶-2、含三分体基序的蛋白40、神经连接蛋白1-β、膜联蛋白A11、血红蛋白亚基β、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、组氨酸三联体核苷酸结合蛋白3、ATP合酶亚基e、线粒体10kDa热休克蛋白、线粒体细胞肿瘤抗原p53、白细胞相关免疫球蛋白样受体1、微管蛋白α-1B链、剪接因子、富含脯氨酸和谷氨酰胺的嗅觉受体10A4、组蛋白H2B2-F型、钙调蛋白、RNA结合蛋白Raly、磷脂酰肌醇-3-激酶相互作用蛋白1、α-2-巨球蛋白、糖原磷酸化酶脑型、THO复合物亚基4、神经母细胞分化相关蛋白AHNAK、磷酸丝氨酸转氨酶、线粒体叶酸转运蛋白/载体、Sentrin特异性蛋白酶3、胞质Fe-S簇组装因子NUBP2、组蛋白脱乙酰酶7、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A 55kDa调节亚基Bα亚型、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A调节亚基B″亚基α、凝溶胶蛋白、胰岛素样生长因子II、紧密连接蛋白ZO-1、Hsc70相互作用蛋白、含FXYD结构域的离子转运调节因子6、AP-1复合体亚基mu-1、同线蛋白-1、NADH脱氢酶[泛醌]铁硫蛋白7、线粒体低密度脂蛋白受体、LIM结构域转录因子LMO4、血影蛋白β链、非红细胞1、ATP结合盒亚家族A成员2、NADH脱氢酶[泛醌]1亚基C2、SPARC样蛋白1、电子转移黄素蛋白亚基α、线粒体谷氨酸脱氢酶1、线粒体Complexin-2、蛋白丝氨酸O-棕榈油酰转移酶porcupine、含丛状蛋白结构域的蛋白2、苏氨酸合酶样2、睾丸蛋白聚糖-2、C-X-C趋化因子受体1型、花生四烯酸5-脂氧合酶激活蛋白、Neuroguidin、脂肪酸2-羟化酶、核因子1X型、LanC样蛋白1、谷氨酰胺合成酶、溶酶体相关膜糖蛋白1、载脂蛋白AI、α-内收蛋白、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白G(I)/G(S)/G(T)亚基β-3、整合膜蛋白GPR137B、泛醌蛋白-1、醛糖还原酶、网格蛋白轻链B、V-型质子ATP酶亚基F、载脂蛋白D、40S核糖体蛋白SA、Bcl-2相关转录因子1、磷脂酸胞苷酰转移酶2、线粒体ATP合酶偶联因子6、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2、棘皮动物微管相关蛋白样5、磷脂酰乙醇胺结合蛋白1、Myc盒依赖性相互作用蛋白1、膜相关磷脂酰肌醇转移蛋白1、40S核糖体蛋白S29、小酸性蛋白、半乳凝素-3结合蛋白、脂肪酸合酶、含杆状病毒IAP重复序列的蛋白5、隔膜蛋白-2、cAMP依赖性蛋白激酶II-α型调节亚基、络丝蛋白、凋亡促进因子Bcl-2-样蛋白14、含葡萄球菌核酸酶结构域的蛋白1、甲基CpG结合结构域蛋白2、转化/转录结构域相关蛋白、转录因子HES-1、蛋白转运蛋白Sec23B、Paralemmin-2、C-C基序趋化因子15、钠/钾转运ATP酶亚基α-1、抑微管装配蛋白(Stathmin)、异质核内核糖核蛋白L样、节点调节蛋白3、干扰素诱导的GTP结合蛋白Mx2、整联蛋白α-D、低密度脂蛋白受体相关蛋白5样蛋白、巨噬细胞迁移抑制因子、铁蛋白轻链、二氢嘧啶酶相关蛋白2、神经元膜糖蛋白M6-b、ATP结合盒亚家族A成员5、突触体相关蛋白25、胰岛素样生长因子I、含锚蛋白重复结构域的蛋白29、蛋白纺锤体同源物3、Peflin、接触蛋白-1、微纤维相关糖蛋白3、血管性假血友病因子、小核内核糖核糖核蛋白G、白介素12受体亚基β-1、环氧化物水解酶1、细胞色素b-c1复合物亚基10、单酸甘油酯脂肪酶、血清转铁蛋白、α-突触核蛋白、胞质非特异性二肽酶、转胶蛋白-2、睾丸素(Testisin)、Fms相关酪氨酸激酶3配体、Noelin-2、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶DCLK1、干扰素α-2、乙酰胆碱受体β亚基、组蛋白H2A 1型、β2肾上腺素能受体、腐胺转氨酶、干扰素α-1/13、蛋白NEDD1、DnaJ同源物亚家族B成员1、微管蛋白β-6链、非组蛋白染色体蛋白HMG-17、多蛋白、外泌体组分10、天然细胞毒性触发受体3配体1、Gag多蛋白、Band 3阴离子转运蛋白、蛋白酶、组氨酸-tRNA连接酶、细胞质胶原α-1(XVII)链、Envoplakin、组蛋白H2B型1-C/E/F/G/I、二氨基庚二酸脱羧酶、组蛋白H2B型2-E、细胞色素P450 2D6、2-氧戊二酸脱氢酶复合物的二氢脂酰赖氨酸残基琥珀酰转移酶组分、组蛋白H2B型1-H、甲状腺过氧化物酶、富含脯氨酸的跨膜蛋白2、旁血小板溶蛋白、整联蛋白α-6、肌张力障碍蛋白、桥粒斑蛋白、组蛋白H2B型1-J、组蛋白H2B型1-B、6，7-二甲基-8-核糖醇基二氧四氢喋啶合酶、促甲状腺素受体、整联蛋白α-IIb、核孔膜糖蛋白210、U2蛋白、DST蛋白、网蛋白、SII0397蛋白、Bos d 10、外衣壳蛋白VP4、5，6-二羟基吲哚-2-羧酸氧化酶、O-磷酸硒基-tRNA(Sec)硒转移酶、ATP依赖性Clp蛋白酶蛋白水解亚基、淋巴细胞活化基因3蛋白、磷酸蛋白85、L1蛋白、肌动蛋白、α骨骼肌二氢脂酰脱氢酶、2-氧戊二酸脱氢酶复合物的二氢脂酰赖氨酸残基琥珀酰转移酶组分、线粒体肝羧酸酯酶1、丙酮酸脱氢酶复合物的二氢脂酰赖氨酸残基乙酰基转移酶组分、丙酮酸脱氢酶复合物的乙酰基转移酶组分、丙酮酸脱氢酶蛋白X组分、线粒体二氢脂酰胺乙酰转移酶、蛋白二硫键异构酶A3、阀蛋白-2、β-半乳糖苷酶、TSHR蛋白、支链α-酮酸脱氢酶复合物的脂酰胺酰基转移酶组分、线粒体核自身抗原Sp-100、桥粒黏蛋白1、胰高血糖素受体、膜糖蛋白US8、钠/碘共转运蛋白、ORF2、衣壳蛋白、未表征的蛋白LF3、甲酰亚胺基转移酶-环脱氨酶、核心衣壳桥接蛋白、神经毒性因子ICP34.5、可能的RNA结合蛋白、胆固醇侧链裂解酶、线粒体组蛋白H1.0、非组蛋白染色体蛋白HMG-14、组蛋白H5、60S酸性核糖体蛋白P1、丙酮酸脱氢酶E1组分亚基α体细胞形式、线粒体平滑肌蛋白-1、未表征的蛋白RP382、未表征的蛋白U95、(IV型)菌毛组装蛋白PilB、2-琥珀酰苯甲酸酯-CoA连接酶、TAZ蛋白、Tafazzin、假定的乳糖特异性磷酸转移酶系统(PTS)、IIBC组分、密封蛋白17、中心粒外周物质1蛋白、Yop蛋白转运蛋白L、层黏连蛋白亚基α-1、A解整联蛋白和具有血小板反应蛋白基序13的金属蛋白酶、角蛋白I型细胞骨架14、凝血因子VIII、角蛋白I型细胞骨架17、中性粒细胞防御素1、Igα-1链C区、BRCA1相关RING结构域蛋白1、含三核苷酸重复序列的基因6A蛋白、血小板生成素、纤溶酶原结合蛋白PgbA、类固醇17-α-羟化酶/17，20裂解酶、核仁RNA解旋酶2、组蛋白H2B 1-N型、类固醇21-羟化酶UreB、黑色素浓缩激素受体1、血型Rh(CE)多肽、HLA II类组织相容性抗原DPβ1链、血小板糖蛋白Ibα链、毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1、外衣壳糖蛋白VP7、纤连蛋白、HLA I类组织相容性抗原B-8α链、AhpC、细胞骨架相关蛋白5、蔗糖异麦芽糖酶、肠白三烯B4受体2、谷胱甘肽过氧化物酶2、胶原蛋白α-1(VII)链、核小体组装蛋白1样4、丙氨酸-tRNA连接酶、胞质细胞外钙敏感受体、主要着丝粒自身抗原B、大被膜蛋白树突化酶、血型Rh(D)多肽、激肽原-1、过氧化物氧还蛋白-2、埃兹蛋白、DNA复制和修复蛋白RecF、角蛋白II型细胞骨架6C、触发因子、丝氨酸蛋白酶抑制剂B5、热休克蛋白β-1、蛋白精氨酸脱亚氨酶4型、钾转运ATP酶α链1、钾转运ATP酶亚基β、F叉头框蛋白E3、凝缩蛋白-2复合体亚基D3、肌强直素蛋白激酶、锌转运蛋白8、ABC转运蛋白、底物结合蛋白、假定的水通道蛋白4、软骨中间层蛋白1、HLA II类组织相容性抗原DRβ5链、小核内核糖核蛋白F、小核内核糖核蛋白E、Igκ链V-V区L7、Ig重链Mem5、Ig重链V-III区J606、血红蛋白亚基δ、胶原蛋白α-1(XV)链、78kDa葡萄糖调节蛋白、60S核糖体蛋白L22、α-1酸糖蛋白1、苹果酸脱氢酶、线粒体60S核糖体蛋白L8、丝氨酸蛋白酶HTRA2、线粒体60S核糖体蛋白L23a、补体C3、胶原蛋白α-1(XII)链、血管紧张素原、蛋白S100-A9、膜联蛋白A2、α-肌动蛋白-4、HLA II类组织相容性抗原、DQα1链、载脂蛋白A-IV、肌动蛋白、主动脉平滑肌、HLA II类组织相容性抗原DPα1链、肌酸激酶B型、HLA II类组织相容性抗原DR β3链、组蛋白H1x、异质核内核糖核蛋白U样蛋白2、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白、钙黏着蛋白-5、40S核糖体蛋白S13、α-1-抗胰蛋白酶、多聚蛋白-2、着丝粒蛋白F、40S核糖体蛋白S18、40S核糖体蛋白S25、Na(+)/H(+)交换调节辅因子NHE-RF1、肌动蛋白、胞质2、血红蛋白亚基γ-1、血红蛋白亚基γ-2、蛋白NipSnap同源物3A、组织蛋白酶D、1-磷脂酰肌醇4，5-双磷酸磷酸二酯酶ε-1、40S核糖体蛋白S17、载脂蛋白B-100、组蛋白H2B 1-K型、胶原蛋白α-1(I)链、胶原蛋白α-2(I)链、2型3-羟基酰基辅酶A脱氢酶、60S核糖体蛋白L27、组蛋白H1.2、巢蛋白-2、钙黏着蛋白-1、60S核糖体蛋白L27a、HLA II类组织相容性抗原DRα链、二肽基肽酶1、泛素-40S核糖体蛋白S27a、线粒体柠檬酸合酶、Tax1结合蛋白1、髓过氧化物酶、含丛状蛋白结构域的蛋白1、糖原合酶、[丙酮酸脱氢酶[乙酰转移]]-磷酸酶1、线粒体佛波醇-12-肉豆蔻酸13-乙酸盐诱导的蛋白1、过氧化物氧还蛋白-5、线粒体14-3-3蛋白质ζ/δ、线粒体ATP合酶亚基d、玻连蛋白、脂多糖结合蛋白、Ig重链V-III区GAL、蛋白CREG1、60S核糖体蛋白L6、Stabilin-1、血浆蛋白酶C1抑制剂、Igκ链V-III区VG、间α-胰蛋白酶抑制剂重链H4、α-1B糖蛋白、抗酒石酸的酸性磷酸酶5型、巯基氧化酶1、补体成分C6、糖原磷酸化酶肌肉形式、SH3结构域结合的富含谷氨酸样蛋白3、转化蛋白RhoA、白蛋白亚型CRA_k、V型质子ATP酶亚基G1、黄素还原酶(NADPH)、热休克同源蛋白71kDa蛋白、脂蛋白脂酶、纤溶酶原、膜联蛋白、突触融合蛋白-7、跨膜糖蛋白NMB、凝血因子XIII A链、载脂蛋白A-II、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶、补体C1q子组分亚基B亚基、蛋白S100-A10、微纤维相关糖蛋白4、72kDa IV型胶原酶、胶原蛋白α-1(XI)链、组织蛋白酶B、棕榈酰蛋白硫酯酶1、巨涎蛋白、组蛋白H1.1、组蛋白H1.5、纤维调节蛋白、血小板反应蛋白-1、Rho GDP解离抑制剂2、α-半乳糖苷酶A、超氧化物歧化酶[Cu-Zn]、HLA I类组织相容性抗原α链E、磷脂酰胆碱-固醇酰基转移酶、豆荚蛋白、低亲和力免疫球蛋白γFc区受体II-c、果糖-双磷酸醛缩酶A、线粒体细胞色素c氧化酶亚基8A、丙酮酸激酶PKM、内皮糖蛋白、Nesh-SH3的靶标、线粒体细胞色素c氧化酶亚基5A、含EGF的类纤维蛋白样细胞外基质蛋白2、附睾分泌蛋白E1、组织蛋白酶S、膜联蛋白A5、同种异体炎症因子1、饰胶蛋白聚糖、补体C1s亚成分、低亲和力免疫球蛋白γFc区受体II-b、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白、溶酶体α-葡萄糖苷酶、解整联蛋白和含金属蛋白酶结构域的蛋白9、运甲状腺素蛋白、苹果酸脱氢酶、胞质细丝蛋白-A、视黄酸受体应答蛋白1、T细胞表面糖蛋白CD4、前胶原蛋白赖氨酸、2-氧戊二酸5-双加氧酶1、纤维蛋白原γ链、胶原蛋白α-2(V)链、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-B、溶酶体保护蛋白、颗粒体蛋白、胶原蛋白α-1(XIV)链、C反应蛋白、β-1，4-半乳糖基转移酶1、低密度脂蛋白受体相关蛋白1、Ig重链V-III区23、磷酸甘油酸激酶1、α-2-抗纤溶酶、含V-set和免疫球蛋白结构域的蛋白4、可能的丝氨酸羧肽酶CPVL、NEDD8、神经节苷脂GM2激活剂、簇蛋白、α-2-HS-糖蛋白、HLA I类组织相容性抗原B-37α链、腺苷脱氨酶CECR1、HLA II类组织相容性抗原DRB1-11β链、单核细胞分化抗原CD14、红细胞带7整合膜蛋白、组装抑制蛋白-1、E3泛素蛋白连接酶TRIM9、含三分体基序的蛋白67、TNF受体相关因子1、α-晶状体蛋白A链、有丝分裂检查点丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶BUB1、TATA结合蛋白相关因子2N、细胞周期蛋白-F、着丝粒蛋白C、凋亡调节因子Bcl-2、线粒体2-氧代异戊酸脱氢酶亚基β、螺旋蛋白、核质蛋白-3、同源盒蛋白Hox-A1、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Chk1、有丝分裂检查点蛋白BUB3、脱氧核糖核酸酶-1、rRNA 2′-O-甲基转移酶原纤维蛋白、组蛋白H1.3、DNA指导的RNA聚合酶III亚基RPC1、DNA指导的RNA聚合酶III亚基RPC2、着丝粒相关蛋白E、驱动蛋白样蛋白KIF11、组蛋白H4样蛋白G、酪氨酸3-单加氧酶、ABC转运蛋白、通透酶/ATP结合蛋白、翻译起始因子IF-1、蛋白FAN、网状内皮素-4(Reticulon-4)受体、髓样细胞核分化抗原、葡萄糖-6-磷酸异构酶、高亲和力免疫球蛋白γFc受体I、色氨酸5-羟化酶1、色氨酸5-羟化酶2、分泌性磷脂酶A2受体、水通道蛋白TIP4-1、组蛋白H2B F-S、组蛋白H2AX、组蛋白H2A 1-C、ATP敏感的内向整流钾通道10、pVII、假定的蛋白TTV27_gp4、假定的蛋白TTV25_gp2、α-1D肾上腺素能受体、α-1B肾上腺素能受体、包装蛋白3、假定的蛋白TTV14_gp2、KRR1小亚基加工体组分同源物、Bestrophin-4、α-2C肾上腺素能受体、未表征的ORF3蛋白、视黄酸受体β、视黄酸受体α、B细胞淋巴瘤3蛋白、碳水化合物磺基转移酶8、谐波蛋白、催乳素释放肽受体、鞘氨醇1-磷酸受体1、含酰基辅酶A结合结构域的蛋白5、ORF1、假定的蛋白TTMV3_gp2、线粒体导入内膜转位酶亚基Tim17-B、假定的蛋白TTV2_gp2、黑色素瘤1缺乏蛋白、假定的蛋白TTV28_gp1、假定的蛋白TTV26_gp2、假定的蛋白TTV4_gp2、假定的蛋白TTV28_gp4、中脑星形胶质细胞源性神经营养因子、假定的蛋白TTMV7_gp2、假定的蛋白TTV19_gp2、pORF1、前组蛋白样核蛋白、假定的蛋白TTV8_gp4、假定的蛋白TTV16_gp2、假定的蛋白TTV15_gp2、ORF2/4蛋白、P2X嘌呤受体2、膜糖蛋白E3CR1-β、D(2)多巴胺受体、Toll样受体9、磷脂酰胆碱转移蛋白、转录因子HIVEP2、可能的肽基精氨酸脱亚氨酶、60S核糖体蛋白L9、整联蛋白β-4、角蛋白II型细胞骨架1、嗜铬粒蛋白A、组蛋白H3.1t、电压依赖性L型钙通道亚基α-1D、70kDa热休克蛋白1样、ABC转运蛋白相关UDP-N-乙酰葡糖胺焦磷酸化酶、蛋白GREB1、醛基/酮还原酶、TOM(外膜转位酶)复合物的组分、核酸外切酶ABC C亚基结构域蛋白、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、芳基乙酰胺脱乙酰酶样4、纤毛轴动力蛋白重链10、推定的尿嘧啶DNA糖基化酶、孢子萌发蛋白PE、Teneurin-1、推定的脱氢酶、多糖生物合成蛋白、VCBS、谷氨酸/天冬氨酸转运系统通透酶蛋白GltK、头蛋白、硬化蛋白、HLA I类组织相容性抗原A-30α链、HLA I类组织相容性抗原A-69α链、HLA I类组织相容性抗原B-15α链、谷氨酸受体离子型NMDA 1、NarH、40S核糖体蛋白S21、铜蓝蛋白、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶、60S核糖体蛋白L30、HLA II类组织相容性抗原γ链、HLA I类组织相容性抗原Cw-6α链、HLA I类组织相容性抗原Cw-16α链、溶酶体α-甘露糖苷酶、热休克蛋白HSP 90-α、组蛋白H3.2、组蛋白H2A.J、电压依赖性T型钙通道亚基α-1G、合胞体蛋白-1、Cathelicidin抗菌肽、微管蛋白β-3链、线粒体应力70蛋白、可能的1，4-α-葡聚糖分支酶Rv3031、核酸酶敏感元件结合蛋白1、补体因子H相关蛋白1、谷氧还蛋白-1、γ-烯醇酶、血小板衍生生长因子受体α、胶原蛋白α-1(VIII)链、基质金属蛋白酶-25、干扰素调节因子5、线粒体细胞色素c氧化酶亚基7C、70kDa热休克相关蛋白2、富含半胱氨酸的蛋白1、线粒体NADH脱氢酶[泛醌]黄素蛋白2、谷胱甘肽S-转移酶P、HLA I类组织相容性抗原A-68α链、HLA II类组织相容性抗原DMβ链、果糖-双磷酸醛缩酶C、β-2-微球蛋白、线粒体细胞色素c氧化酶亚基5B、70kDa热休克蛋白13、ATP合酶蛋白8、60S核糖体蛋白L13a、TRNA核苷酸转移酶家族酶、铁氧还蛋白依赖性谷氨酸合酶2、碱性磷酸酶、组织非特异性同工酶、SLAM家族成员5、Slit同源物3蛋白、转化生长因子-β诱导蛋白ig-h3、甘露糖结合蛋白C、钙蛋白酶1催化亚基、肠平滑肌肌动蛋白γ、肌酸激酶M型、蛋白THEM6、组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶ASH1L、含C2钙依赖性结构域的蛋白4A、含Ras结合结构域的蛋白10、肝细胞黏附分子、ADAMTS样蛋白5、HLA II类组织相容性抗原DRB1-15β链、Anoctamin-2、磷酸甘油酸变位酶1、Por分泌系统蛋白porV(Pg27，lptO)、β-烯醇酶、受体抗原A、3-氧代酰基-[酰基载体蛋白]合酶2、推定的热休克蛋白HSP 90-β2、根蛋白、微管蛋白β-1链、卵泡蛋白分选相关蛋白26A、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶5、过氧化氢酶、转酮醇酶、蛋白S100-A1、α中心体肌动蛋白、微管蛋白β-4A链、β-中心体肌动蛋白、可能的磷酸甘油酸变位酶4、β-肌动蛋白样蛋白2、微管蛋白β-4B链、磷酸甘油酸变位酶2、α-内毒素、微管蛋白β-2A链、二氢嘧啶酶相关蛋白3、推定的热休克蛋白HSP90-β-3、果糖-双磷酸醛缩酶B、蛋白P、内啡肽、线粒体ATP合酶亚基O、70kDa热休克蛋白6、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、睾丸特异性新生多肽相关复合体亚基α-2、碳酸酐酶2、膜联蛋白A6、E3泛素蛋白连接酶RNF13、髓样衍生的生长因子、酪氨酸蛋白磷酸酶非受体型底物1、层黏连蛋白亚基γ-1、毛透明蛋白、血小板反应蛋白2、唾液酸黏附蛋白、GTP酶IMAP家族成员1、C4b结合蛋白α链、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1、血红素结合蛋白、补体C5、含FYVE、RhoGEF和PH结构域的蛋白2、触珠蛋白、细胞色素P450 1B1、肌巨蛋白、骨髓瘤过表达的基因2蛋白、脂肪细胞增强因子结合蛋白1、蛋白谷氨酰胺γ-谷氨酰转移酶2、蛋白Trim21、ADAMTS样蛋白3、N-α-乙酰基转移酶16、NatA辅助亚基、转化生长因子β-1、弹性蛋白、蛋白质二硫键异构酶A5、丝束蛋白-2、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员1、组胺H2受体、延伸因子2、陷窝蛋白-1、Igγ-2链C区、含富含亮氨酸的重复蛋白的免疫球蛋白超家族、40S核糖体蛋白S9、脯氨酰4-羟化酶亚基α-1、内质网-高尔基体中间区蛋白1、四联蛋白、丝氨酸蛋白酶HTRA1、异质核内核糖核蛋白A1、类光传感因子(Phosducin)蛋白3、Igλ链V-VI区EB4、含纤连蛋白III型结构域的蛋白1、表皮角蛋白II型细胞骨架2、铁蛋白重链、Y盒结合蛋白3、补体C4-B、HLAI类组织相容性抗原Cw-15α链、HLA I类组织相容性抗原B-42α链、胶原蛋白α-1(V)链、HLA I类组织相容性抗原B-73α链、整合膜蛋白2B、溶酶体相关膜糖蛋白3、蛋白聚糖4、核糖体蛋白S6激酶α-6、金属蛋白酶抑制剂2、HLA II类组织相容性抗原DRB1-12β链、ATP敏感的内向整流钾通道15、维生素D结合蛋白、骨桥蛋白、脱氧核苷酸转移酶末端相互作用蛋白2、嗅觉受体5K4、骨骼肌/心肌肌球蛋白轻链激酶2、含非POU结构域的八聚体结合蛋白、泛醌蛋白-2、HLA I类组织相容性抗原B-51α链、次要组织相容性抗原H13、血型糖蛋白C、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、SWI/SNF复合物亚基SMARCC2、巨噬细胞甘露糖受体1、tRNA剪接连接酶RtcB同源物、网钙结合蛋白-2、异质核内核糖核蛋白L、40S核糖体蛋白S30、胶原蛋白α-3(VI)链、基质金属蛋白酶-14、抗凝血酶III、60S核糖体蛋白L10a、视黄醇结合蛋白4、异质核内核糖核蛋白R、胰石蛋白-1-α、Ret指蛋白样2、锌-α-2-糖蛋白、羧肽酶Q、HLA I类组织相容性抗原、B-56α链、软骨黏蛋白、富含半胱氨酸的蛋白2、鞘脂激活蛋白原(Prosaposin)、补体成分C9、载脂蛋白C-II、原钙黏蛋白16、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4、半乳糖激酶、补体因子H、未表征的蛋白YEL014C、甘油磷酸胆碱磷酸二酯酶GPCPD1、棘皮动物微管相关蛋白样6、或这些蛋白中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

术语“同种抗原”(也称为“同种异体抗原”或“同种异型抗原”)是指在一个物种中以替代(等位)形式存在并因此例如在输血、组织或器官移植或有时怀孕时可以在同一物种的成员中诱导同种异体免疫(或同种免疫)的抗原。典型的同种异体抗原包括组织相容性抗原和血型抗原。在本发明的上下文中，同种抗原优选是人来源的。编码来自同种抗原的抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子可以例如用于诱导对所述同种抗原的免疫耐受。

在本发明的上下文中，示例性的同种异体抗原包括但不限于衍生自或选自以下的同种异体抗原：UDP-葡糖醛酸糖基转移酶2B17前体、MHC I类抗原HLA-A2、凝血因子VIII前体、凝血因子VIII、血小板生成素前体(巨核细胞集落刺激因子)(骨髓增生性白血病病毒致癌基因配体)(C-mpl配体)(ML)(巨核细胞生长和发育因子)(MGDF)、整联蛋白β-3、组织相容性(次要)HA-1、SMCY、胸腺素β-4、Y染色体、组蛋白脱甲基酶UTY、HLA II类组织相容性抗原DP(W2)β链、赖氨酸特异性脱甲基酶5D亚型1、肌球蛋白Ig、可能的泛素羧基末端水解酶FAF-Y、前组织蛋白酶H、DRB1、MHC DRβDRw13变体、HLA II类组织相容性抗原DRB1-15β链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-1β链前体、次要组织相容性蛋白HMSD变体形式HLA-DR3 B链、Hla-Dr1(Dra，Drb10101)、复合内源肽的人II类组织相容性蛋白(细胞外结构域)、MHC II类HLA-DRB1、MHC I类HLA-A、人白细胞抗原B、RAS蛋白激活因子样3、anoctamin-9、ATP依赖性RNA解旋酶DDX3Y、原钙黏蛋白-11Y连锁、KIAA0020、血小板糖蛋白IIIa亮氨酸33型特异性抗体轻链可变区、DEAD盒、Y亚型、ATP依赖性RNA解旋酶DDX3X异形体2、HLA-DRB1蛋白、截短的整联蛋白β3、糖蛋白IIIa、血小板膜糖蛋白IIb、碳酸酐酶1、HLAI类组织相容性抗原A-11α链前体、HLA-A11抗原A11.2、HLA I类组织相容性抗原A-68α链、MHC HLA-B51、MHC I类抗原HLA-A30、HLA I类组织相容性抗原A-1α链前体变体、HLA I类组织相容性抗原B-57、MHC I类抗原、MHC II类抗原、MHC HLA-DR-β细胞表面糖蛋白、DR7β-链糖蛋白、MHC DR-β、淋巴细胞抗原、V型胶原蛋白α1、胶原蛋白α-2(V)链原蛋白、sp110核体蛋白异形体d、整联蛋白、α2b(IIb/IIIa复合物的血小板糖蛋白IIb、抗原CD41)、异形体CRA_c、40S核糖体蛋白S4、Y异形体1、未表征的蛋白KIAA1551、因子VIII、UDP-葡糖醛酸糖基转移酶2B17、HLA I类组织相容性抗原A-2α链、血小板生成素、次要组织相容性蛋白HA-1、赖氨酸特异性脱甲基酶5D、HLAII类组织相容性抗原DPβ1链、非常规肌球蛋白Ig、HLA II类组织相容性抗原DRB1-13β链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-1β链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-3链、HLA I类组织相容性抗原B-46α链、Pumilio同源物3、ATP依赖性RNA解旋酶DDX3X、整联蛋白α-IIb、HLA I类组织相容性抗原A-11α链、HLA I类组织相容性抗原B-51α链、HLA I类组织相容性抗原A-30α链、HLA I类组织相容性抗原A-1α链、HLA I类组织相容性抗原B-57α链、HLA I类组织相容性抗原B-40α链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-7β链、HLA II类组织相容性抗原DRB1-12β链、胶原蛋白α-1(V)链、胶原蛋白α-2(V)链、Sp110核体蛋白、或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

变应原性(多)肽或蛋白质

本发明的人工核酸分子的至少一个编码区可以编码至少一种“变应原性(多)肽或蛋白质”。术语“变应原性(多)肽或蛋白质”或“变应原”是指当暴露于对象时，能够诱导变态反应，即以改变的身体反应性(如超敏反应)为特征的病理性免疫反应的(多)肽或蛋白质。通常，“变应原”与“特应性”有关，即涉及免疫球蛋白E(IgE)的不利免疫反应。因此，术语“变应原”通常是指与特应性有关并诱导IgE抗体的物质(此处为(多)肽或蛋白质)。本文设想的典型的变应原包括蛋白质甲壳动物衍生的变应原、昆虫衍生的变应原、哺乳动物变应原、软体动物衍生的变应原、植物变应原和真菌变应原。

本发明上下文中的示例性变应原包括但不限于，衍生自或选自以下的变应原：变应原Pen n 18(抗原名称Ara h 2.01变应原)、被T细胞识别的黑色素瘤抗原1、非特异性脂质转移蛋白前体(LTP)(变应原Mal d 3)、卵清蛋白、小清蛋白β、花粉变应原Lol p VA前体、花粉变应原Phl p 5b前体、pru p 1、花粉变应原Phl p 5a、Der p 1变应原前体、花粉变应原KBG 60前体、主要变应原Tur c1-角蝾螺、螨2类变应原Lep d 2前体、Lep D 2前体、主要乳胶变应原Hev b 5、主要变应原Cor a 1.0401、主要花粉变应原Art v 1前体、主要花粉变应原Bet v 1-A、β-乳球蛋白前体、α-淀粉酶抑制剂0.28前体(CIII)(WMAI-1)、V组变应原Phl p 5.0203前体、聚半乳糖醛酸酶前体、花粉变应原Phl pI、Der f 2变应原、可能的非特异性脂质转移蛋白2前体、毒液变应原5前体、花粉变应原Phl p 1前体、V组变应原链A、钙结合的花粉变应原Phl P 7(Polcalcin)的1.75埃晶体结构、Tri r 2变应原、发病相关蛋白前体、球蛋白CTT-III前体、主要变应原Alt a 1、13S球蛋白种子贮藏蛋白3前体(豆球蛋白样蛋白3)(变应原Fag e 1)、Lit v 1原肌球蛋白、橡胶延伸因子蛋白、卵类黏蛋白前体、小橡胶颗粒蛋白、Mag3、变应原Arah 1、克隆P41B前体、13S球蛋白种子贮藏蛋白1前体(豆球蛋白样蛋白1)、花粉变应原Lol p 1前体、主要花粉变应原Jun a 1前体、Sugi碱性蛋白前体、组装抑制蛋白、珠蛋白CTT-IV前体、碱性丝氨酸蛋白酶、大豆球蛋白、羽扇豆球蛋白-7前体、2S蛋白1、球蛋白CTT-VI前体、核糖核酸酶丝裂霉素前体、主要花粉变应原Cyn d 1、黑素细胞刺激激素受体、P34可能的硫醇蛋白酶前体、豌豆球蛋白样蛋白、主要变应原Equ c 1前体、主要变应原Bet v 1、主要变应原Can f 1前体、Bd 30K(34kDa成熟种子蛋白)、主要花粉变应原、主要花粉变应原Hol l 1前体、κ-酪蛋白前体、主要变应原Dau c 1/1、应力诱导蛋白SAM22、主要变应原Api g 1、大豆球蛋白G2前体、变应原Arah3/Arah4、Der f 1变应原、肽酶1前体(螨1类变应原Eur m 1)(变应原Eur m I)、Oryzin前体、αS1酪蛋白、主要花粉变应原Cha o 1前体、非特异性脂质转移蛋白1、胶原蛋白I型α2 Der P 1肽酶1前体(主要螨类粪便变应原Der p 1)(变应原Der p I)、花粉变应原Bet v 1、磷脂酶A2前体、螨2类变应原Der p2、变应原Mag、主要尿蛋白前体、主要变应原I多肽链2前体、Pen a 1变应原、Fag e 1、血清白蛋白前体、花粉变应原Amb a 3、推定的α-淀粉酶抑制剂0.28、白蛋白种子贮藏蛋白、2S富硫种子贮藏蛋白前体(变应原Ber e 1)、种子贮藏蛋白SSP2、橡胶蛋白前体、花粉变应原、Derp 2变应原前体、2S种子贮藏蛋白1前体、橡胶蛋白前体(prohevein)、2s白蛋白、主要变应原I多肽链1、主要变应原I多肽链1前体、Cry j IB前体、螨2类变应原Der f 2前体、β-酪蛋白前体、Lep D 2变应原前体、变应原Cry j 2(花粉变应原)、KIAA1224蛋白、疏水性种子蛋白、变应原Bos d 2前体、变应原II、螨2类变应原Derp 2前体、螨类变应原Blo t 5、肽酶1前体(主要螨类粪便变应原Der f 1)(变应原Der f 1)、Par j、Can f I、花粉变应原Lol p2-A(Lol p II-A)、副肌球蛋白、α-S2-酪蛋白前体、P34可能的巯基蛋白酶、β-乳球蛋白、主要变应原Phl p 5链A、以1.4埃分辨率精制的不同配体状态的无脊椎动物血红蛋白的结构、球蛋白CTT-VIII、主要变应原Asp f 2前体、原肌球蛋白、核心蛋白[乙型肝炎病毒]、ω麦醇溶蛋白储存蛋白、α/β-麦醇溶蛋白A-V、14类变应原蛋白、花粉变应原Amb a 1.1的前体、大豆球蛋白G1前体、花粉变应原Amb a 2前体、Cry j 1前体、变应原Ziz m 1、富含甘氨酸的细胞壁结构蛋白1.8前体、推定的果胶酸裂解酶17前体、果胶酸裂解酶、果胶酸裂解酶前体、可能的果胶酸裂解酶18前体、主要变应原β-乳球蛋白、主要变应原Mal d 1、α-S1-酪蛋白前体、2S种子贮藏蛋白1、锤型病毒(plectrovirus)spv1-r8a2b orf 14跨膜蛋白、变应原I/a、变应原Cr-PI、可能的非特异性脂质转移蛋白1、Cr-PII变应原、黑色素瘤抗原gp100、α-乳白蛋白前体链A、α-乳白蛋白的异常亚结构、Pilosulin-1前体(主要变应原Myr p 1)(Myr pI)、花粉变应原Lol p 3(Lol p III)、脂质运载蛋白1(撕裂前白蛋白)、主要花粉变应原Cupa 1、黑素细胞蛋白Pmel 17前体、主要屋尘变应原、非特异性脂质转移蛋白1(LTP 1)(主要变应原Pru d 3)、非特异性脂质转移蛋白1(LTP 1)(主要变应原Pru ar 3)、花粉变应原Lolp 1、α-麦醇溶蛋白、Cr-PII、白蛋白、α-S1-酪蛋白、主要变应原I、核糖核酸酶丝裂霉素、β-酪蛋白、UA3识别的变应原、2S富硫种子贮藏蛋白1、未命名的蛋白产物、聚半乳糖醛酸酶、主要变应原Pru av 1、Der p 1变应原、裂解酶变应原、主要花粉变应原Bet v 1-F/I、γ-麦醇溶蛋白前体、5-羟色胺受体2C(5-HT-2C)(5-羟色胺受体2C)(5-HT2C)(5-HTR2C)(5HT-1C)、ω-5麦醇溶蛋白、烯醇酶1(2-磷酸甘油酸脱水酶)(2-磷酸-D-甘油酸水解酶)、可能的非特异性脂质转移蛋白、变应原Sin a 1、谷蛋白、低分子量亚基前体、主要花生变应原Ara H 1、mal d 3、真核翻译起始因子3亚基D、酪氨酸酶相关蛋白2、PC4和SFRS1相互作用蛋白、RAD51样1亚型1、抗菌肽2、蛋白酶体亚基α3型、神经丝重多肽(NF-H)(神经丝三联体H蛋白)(200kDa神经丝蛋白)、超氧化物歧化酶、主要花粉变应原Cor a 1亚型5、6、11和16、樱桃变应原PRUA1、变应原Asp f 4前体链A、主要屋尘螨变应原Der P 2的三级结构、Nmr 10结构、RNA结合蛋白NOB1、硫酸皮肤素差向异构酶前体、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3、肽基脯氨酰顺反异构酶B前体、可能的糖苷酶crf1链A、桦木花粉组装抑制蛋白、组装抑制蛋白-1、燕麦蛋白前体(克隆pAv122)-燕麦、γ3燕麦蛋白、腹腔免疫反应蛋白2CIP-2、醇溶谷蛋白2{N-末端}、燕麦蛋白γ-3-小裸燕麦(片段)、主要花粉变应原Ole e 1、细胞色素P450 3A1、Olee 1蛋白、Ole e 1.0102蛋白、Der f 2、GroEL样伴侣蛋白、主要变应原Arah1、锰超氧化物歧化酶、β-1，3-葡聚糖酶样蛋白、Ara h 1变应原、主要变应原Alt a 1前体、Bla g 4变应原、Per a 4变应原变体1、Lyc e 2.0101、果胶酸裂解酶2、变应原、假定的蛋白、可能的果胶酸裂解酶P59、花粉变应原Amb a 1.4、Patatin-2-Kuras 1、钙结合蛋白、豌豆球蛋白种子贮藏蛋白、主要变应原蛋白Mal f4、pel蛋白、与成熟相关的果胶酸裂解酶、果胶酸裂解酶/Amb变应原、Bet v 4、Polcalcin Bet v 4、螨变应原Der f 6、变应原Alt a 2、细胞外弹性蛋白酶解金属蛋白酶、果胶酸裂解酶样蛋白、果胶酸裂解酶E、组装抑制蛋白-2、毒液变应原5、黄瓜蛋白酶、推定的过氧化物酶、推定的果胶酸裂解酶前体、血清白蛋白、花粉变应原Phl p 11、丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制剂进化枝B(卵清蛋白)成员3、变应原Bla g 4前体(Bla gIV)、变应原Pen n 13、透明质酸酶A、果胶酸裂解酶同源物、推定的变应原Cup a 1、主要花粉变应原Jun v 1、推定的变应原jun o 1、花粉变应原Amb a 1.2、可能的果胶酸裂解酶13、P8蛋白、细胞色素c、葡聚糖内切1，3-β-葡糖苷酶、碱性液泡亚型、13S球蛋白、β-1，3-葡聚糖酶、β-1，3-葡聚糖酶、谷蛋白高分子量亚基DX5前体、X型HMW谷蛋白、谷蛋白高分子量亚基DX5、高分子量谷蛋白亚基1Dx2.1、高分子量谷蛋白亚基11S球蛋白样蛋白、种子贮藏蛋白、α-L-Fucp-(1-＞3)-[α-D-Manp-(1-＞6)-[β-D-Xylp-(1-＞2)]-β-D-Manp-(1-＞4)-β-D-GlcpNAc-(1-＞4)]-D-GlcpNAc、β酪蛋白B、1型非特异性脂质转移蛋白前体、Fas AMA、胱天蛋白酶-8前体、H抗原糖蛋白、H抗原gl、热休克蛋白HSP 90-β、二氢脂酰胺S-乙酰基转移酶(丙酮酸脱氢酶复合物的E2组分)亚型CRA_a、V组变应原Phl p 5.0103前体、Phl p6变应原前体、V组变应原Phl p 5、主要花粉变应原Phl p 4前体、花粉变应原Phl p V、Phl p 3变应原、花粉变应原Phl pI前体链A、Phl P 1的晶体结构、主要梯牧草花粉变应原、花粉变应原Phl p 4、组装抑制蛋白-3、组装抑制蛋白-2/4、花粉变应原Phl p 2、Phl p6 IgE结合片段、Phlp5链N、与锌共结晶的主要梯牧草花粉变应原晶体结构的Phl P 6、V组变应原Phl p5.0206前体、致敏蛋白、主要变应原Ani s 1、变应原Aha o 2、ENSP样蛋白、BW 16kDa变应原、α2(I)胶原蛋白、胶原蛋白a2(I)、1型胶原蛋白α2、Cyn d 1、主要花粉变应原Aln g 1(变应原Aln g I)、变应原Len c 1.0101、半乳甘露聚糖、天冬氨酸蛋白酶Bla g 2、醇脱氢酶、脂质转移蛋白前体、α/β醇溶蛋白前体、Der f 7变应原、Der p 7变应原多肽、非特异性脂质转移蛋白、主要变应原I多肽链1、樱桃苷1前体、樱桃苷2前体、11S豆球蛋白、Ara h 7变应原前体、豌豆球蛋白样蛋白前体、变应原Arah6、小清蛋白样2、小清蛋白样1、酪蛋白κ、核糖体生物发生蛋白LAS1L、Pen c 1、SchS21蛋白、非活性透明质酸酶B、Mup1蛋白、巨噬细胞迁移抑制因子、真核翻译起始因子2亚基3、CR2/CD21/C3d/EB病毒受体前体、DNA拓扑异构酶2-α、花粉变应原Cyn d 23、主要变应原Bla g 1.02、果胶甲基酯酶变应原蛋白、主要变应原Phaa 5亚型、2S白蛋白种子贮藏蛋白、醛脱氢酶(NAD+)、花粉变应原Poa p 5、Bla g 1.02部分变体变应原、主要花粉变应原Lol p 5b、变应原Bla g 6.0301、蛋白二硫键异构酶、推定的甘露醇脱氢酶、花粉变应原Lol p 4、天冬氨酸蛋白酶pep1、烯醇酶、IgE结合蛋白、次要变应原Alt a 5、HDM变应原链A、Mbp-Der P 7融合蛋白的晶体结构、变应原Bla g 6.0201、主要变应原Bla g 1.0101、α-淀粉酶、次要变应原、核糖体蛋白P2、金属蛋白酶(MEP)、自噬丝氨酸蛋白酶Alp2、变应原异黄酮还原酶样蛋白Bet v 6.0102链A、抗体和变应原Bla G 2的晶体结构、次要变应原、硫氧还蛋白TrxA、烯醇酶、变应原Cla h 6、谷胱甘肽S-转移酶、分子伴侣和变应原Mod-E/Hsp90/Hsp1、主要变应原Asp F2、螨变应原p 3链B、晶体结构的烟曲霉锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽S-转移酶(GSTσ类)(主要变应原Bla g 5)、次要变应原Cla h 7、未知蛋白、致敏性cerato-platanin Asp F13、art v 2变应原、Polcalcin Aln g 4、主要变应原和细胞毒素AspF1、花粉变应原Que a 1亚型、胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶、螨6类变应原Der p 6、变应原Asp F7、细胞壁蛋白PhiA、60kDa变应原Der f 18p、hsp70、Sal k 3花粉变应原、酸性核糖体蛋白P2链B、晶体结构的草本枝孢菌的Nadp依赖性甘露醇脱氢酶、Art v3.0301变应原前体、60S核糖体蛋白L3、Der p 20变应原、花粉变应原Sal k 1、Per a 6变应原、凝溶胶蛋白样变应原Der f 16链A、结构表征的四聚体形式的主要猫变应原Fel D 1、谷胱甘肽S-转移酶、Fel d 4变应原、主要花粉变应原Dac g 4、I组变应原Ant o I(形式1)、花粉、变应原Bla g 6.0101、胱抑素、螨变应原Der p 5、变应原Fra e 1、变应原Asp F4、主要抗原样蛋白、PR5变应原Cup s 3.1前体、热休克蛋白、变应原前体、精氨酸酯酶前体、Sal k4花粉变应原、60S酸性核糖体蛋白P1、花粉变应原Jun o 4、Polcalcin Cyn d 7、I组花粉变应原、肽基-脯氨酰顺反异构酶/亲环蛋白、推定的组装抑制蛋白2、花粉变应原Cyn d 15、Der f 13变应原、Can f 2、过氧化物酶体样蛋白、肽基脯氨酰异构酶(亲环蛋白)、MHC II类抗原、BETV4蛋白、主要花粉变应原Pla I 1、肽酶、MPA3变应原、车前草花粉主要变应原PlaI 1.0103、部分主要变应原Bla g 1.0101、花粉变应原Amb p 5a、Der f 16变应原、花粉变应原Dac g 2、IgE结合蛋白C末端片段(148AA)、花粉变应原Dac g 3、PPIase、rAsp f 9、螨变应原Der p 7、硫氧还蛋白、水解酶、主要花粉变应原Pha a 1、Der p 13变应原链B、X射线结构的Der P 2、主要屋尘螨变应原、油质蛋白3、肽基脯氨酰顺反异构酶链A、晶体结构的主要屋尘螨变应原Derf2链A、晶体结构的主要变应原蟑螂Bla G 4、Amb a-1样蛋白、D型LMW谷蛋白亚基、谷胱甘肽S-转移酶2、酸性Cyn d 1同种型变应原亚型4前体、白蛋白种子贮藏蛋白前体、酪氨酸3-单加氧酶亚型b、N-糖蛋白、FAD联氧化还原酶BG60、Blo t 21变应原、泛素D、核蛋白Nup37、含非POU结构域的八聚体结合蛋白、转录延伸因子SPT5、主要变应原Mal d1(Ypr10蛋白)、丝氨酸蛋白酶抑制剂-Z2B、Pas n 1变应原前体、精氨酸激酶、Lit v 3变应原肌球蛋白轻链、肌浆钙结合蛋白、β伴大豆球蛋白的α亚基、樱桃苷变应原Cry j 2、丛状蛋白-A4、非特异性脂质转移蛋白、低分子量谷蛋白亚基前体、γ-麦醇溶蛋白、GATA-1类似物、威尔姆氏瘤蛋白、泛素结合酶E2C、脂肪酸合酶、组蛋白H4、果糖二磷酸醛缩酶A、氧化还原酶、乳球蛋白β、免疫球蛋白γ3重链恒定区、Phlp5前体、尘螨变应原前体、热休克蛋白70、主要变应原I多肽链2、α-乳白蛋白前体蛋白、30kDa花粉变应原、5组变应原前体、1组变应原Dac g 1.01前体、未表征的蛋白、未知的梯牧草蛋白、κ-酪蛋白、α-S1酪蛋白、SXP/RAL-2家族蛋白、脂质运载蛋白-1前体、α嘌呤硫素、主要变应原Bet v 1.01A、P2蛋白、渗调蛋白、主要花生变应原Ara H 2、Der f 3变应原、羽扇豆球蛋白、Ara h 6变应原、Cathelicidin抗菌肽、胆碱酯酶、Per a 2变应原、颌下腺雄激素调节蛋白3B、几丁质酶、部分变应原Can f 4前体、Can f 4变体变应原前体、新生多肽相关复合体亚基α-2、Polcalcin Phl p 7(钙结合花粉变应原Phl p 7)(P7)、Der p II变应原、主要变应原Ara h1、变应原Ara h 2.02、脂肪酸结合蛋白、谷氨酸受体、大豆球蛋白A3B4亚基、组装抑制蛋白同种型变应原2、花粉变应原Amb p 5b、钙结合蛋白同种型变应原2、钙结合蛋白同种型变应原1、半胱氨酸蛋白酶、组装抑制蛋白同种型变应原1、Art v 1前体的豚草属同源物、Amb p 5、部分Art v 1的豚草属同源物(亚型1)、抗原E、推定的部分果胶酸裂解酶前体、花粉变应原Amb a 5、Amb p V变应原、血蓝蛋白亚基6、主要花粉变应原Cha o 2、毛透明蛋白、天冬氨酰内肽酶、NCRA10、变应原bla g 8、卵黄蛋白原、NCRA3、NCRA4、部分变应原Bla g 3亚型2前体、NCRA2、NCRA13、NCRA8、NCRA1、Bla g 11、活化蛋白激酶C样受体、NCRA5、NCRA14、磷酸丙糖异构酶、NCRA12、NCRA7、NCRA11、胰蛋白酶、部分磷酸丙糖异构酶、NCRA6、结构蛋白、NCRA15、NCRA9、NCRA16、Der f 4变应原、Der f 5变应原、Phl p6变应原、Der f Gal d 2变应原、Derp_19830、葡萄糖基神经酰胺酶、羧肽酶、部分Der f 8变应原、果糖二磷酸醛缩酶、ATP合酶、Der f Alt a 10变应原、谷氨酰胺合成酶、Derp_c23425、肌球蛋白、Der f 8变应原、LytFM、Der f 11变应原、丝氨酸蛋白酶、谷胱甘肽转移酶、磷酸丙糖异构酶、泛醇-细胞色素c还原酶结合蛋白样蛋白、铁蛋白、异构酶、细丝蛋白C、Der p 5、部分Mag44、毒液、肌肉特异性蛋白、Der f 5.02变应原、Mag44、Derp_c21462、18组变应原蛋白、Derf_c9409、油菜贮藏蛋白型2S白蛋白1前体、油菜贮藏蛋白型2S白蛋白3、异黄酮还原酶样蛋白CJP-6、果胶酸裂解酶1、部分变应原Cry j2、主要变应原Dau c 1、推定的细丝蛋白-C、Pis v 5.0101变应原11S球蛋白前体Pis v 5、48kDa糖蛋白前体、豌豆球蛋白的变应原、或这些变应原中的任何的同源物、片段、变体或衍生物。

报告蛋白

本发明的人工核酸(RNA)分子的至少一个编码区可以编码至少一种“报告(多)肽或蛋白质”。

术语“报告(多)肽或蛋白质”是指由报告基因表达的(多)肽或蛋白质。报告(多)肽或蛋白质通常与所使用的表达系统是异源的。它们的存在和/或功能可以优选地容易被检测、可视化和/或测量(例如通过荧光、光谱学、发光法等)。

报告(多)肽或蛋白质的实例包括β-半乳糖苷酶(由细菌基因IacZ编码)；萤光素酶；氯霉素乙酰基转移酶(CAT)；GUS(β-葡萄糖醛酸酶)；碱性磷酸酶；绿色荧光蛋白(GFP)及其变体和衍生物，例如增强型绿色荧光蛋白(eGFP)、CFP、YFP、GFP+；碱性磷酸酶或分泌型碱性磷酸酶；过氧化物酶、β-木糖苷酶；XylE(儿茶酚双加氧酶)；TreA(海藻糖酶)；香菇珊瑚(Discosoma sp.)红色荧光蛋白(dsRED)及其变体和衍生物，例如mCherry；HcRed；AmCyan；ZsGreen；ZsYellow；AsRed；以及其他生物发光和荧光蛋白。术语“萤光素酶”是指能够产生生物发光的一类氧化酶。许多萤光素酶是本领域已知的，例如萤火虫萤光素酶(例如来自萤火虫(Photinus pyralis)的萤光素酶)；海肾萤光素酶；Metridia萤光素酶(MetLuc，来源于海洋桡足类长足类)、多管水母(Aequorea)萤光素酶、腰鞭毛虫(Dinoflagellate)萤光素酶或高斯(Gaussia)萤光素酶(Gluc)或这些蛋白质中的任何的异形体、同源物、片段、变体或衍生物。

其他结构域、标签、接头、序列或元件

优选地除了编码至少一种目的(多)肽或蛋白质之外，本发明的人工核酸分子的至少一个编码区还可以编码其他(多)肽结构域、标签、接头、序列或元件。可以预见，将编码所述其他结构域、标签、接头、序列或元件的核酸序列在框内可操作地连接至编码目的(多)肽或蛋白质的区域，使得编码序列的表达优选产生目的(多)肽或蛋白质与其他结构域、标签、接头、序列或元件偶联的融合产物(或衍生物)。

例如，编码其他(多)肽结构域、标签、接头、序列或元件的核酸序列优选与编码目的(多)肽或蛋白质的核酸序列在同一框内。密码子选用可以适合于预期用于表达本发明的人工核酸(RNA)分子的宿主。

优选地，本发明的人工核酸分子的至少一个编码区还可以编码至少一个(a)效应域；(b)肽或蛋白质标签；(c)定位信号或序列；(d)核定位信号(NLS)；(e)信号肽；(f)肽接头；(g)分泌信号肽(SSP)，(h)多聚元件，包括二聚、三聚、四聚或寡聚元件；(i)病毒样颗粒(VLP)形成元件；(j)跨膜元件；(k)树突细胞靶向元件；(l)免疫辅助元件；(m)促进抗原呈递的元件；(n)2A肽；(o)延长蛋白质半衰期的元件；和/或(p)用于翻译后修饰(例如糖基化)的元件。

效应域

术语“效应域”是指通常通过与靶标相互作用而赋予生物学效应功能的(多)肽或蛋白质结构域，生物学效应功能例如为酶活性、靶标(例如配体、受体、蛋白质、核酸、激素、神经递质小有机分子)结合、信号转导、免疫刺激等。

效应域可以适当地(另外)由编码本文公开的任何目的(多-)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。融合或插入到目的(多)肽或蛋白质中的效应域可以有利地赋予所述(多)肽或蛋白质额外的生物学功能或活性。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，效应域可以位于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部或其组合。可以组合不同的效应域。在核酸水平上，通常将这种效应域的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的3′、5′或内部，或其组合。

肽或蛋白质标签

“肽或蛋白质标签”是引入目的(多)肽或蛋白质中以赋予所需的生物学功能或特性的短氨基酸序列。通常，“肽标签”可用于检测、纯化、分离或添加某些所需的生物学特性或功能。

因此可以将肽或蛋白质标签用于不同目的。几乎所有的肽标签都可用于通过蛋白免疫印迹法、ELISA、ChIP、免疫细胞化学、免疫组织化学和荧光测量来检测目的(多)肽或蛋白质。大多数蛋白质或肽标签可用于纯化目的多肽或蛋白质。可以探索一些标签以延长生物蛋白的半衰期或增加目的多肽和蛋白质的溶解度、或帮助将多肽或蛋白质定位到细胞区室。

蛋白质或肽标签可以适当地(另外)由编码本文公开的任何目的(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。融合或插入目的(多)肽或蛋白质的蛋白质或肽标签可以有利地实现例如检测、纯化或分离所述(多)肽或蛋白质。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，可以将蛋白质或肽标签置于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部、或其组合。可以组合不同的蛋白质或肽标签。蛋白质或肽标签可以重复，例如以串联或三联形式表达。在核酸水平上，通常将这种蛋白质或肽标签的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的3′、5′或内部，或其组合。

蛋白质和肽标签可以根据其(主要)功能进行分类。在本发明的上下文中设想的示例性蛋白质和肽标签包括但不限于选自以下组的标签。亲和标签可以纯化目的多肽或蛋白质，包括但不限于几丁质结合蛋白(CBP)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、Strep标签、谷胱甘肽S转移酶(GST)标签和通常包含形成镍结合结构的六个串联组氨酸残基的聚(His)标签。增溶标签有助于正确折叠并防止目的(多)肽或蛋白质沉淀，且包括硫氧还蛋白(TRX)和聚(NANP)。MBP和GST标签也可以用作增溶标签。色谱标签会改变目的蛋白质或(多)肽的色谱特性，并使其能够通过色谱技术进行分离。通常，色谱标签由聚阴离子氨基酸组成，例如FLAG标签(其通常可以包含氨基酸序列N-DYKDDDDK-C(SEQ ID NO：378)。表位标签是能够例如在蛋白质印迹、免疫荧光或免疫沉淀中结合高亲和力抗体，但也可用于纯化目的(多)肽或蛋白质的短肽序列。表位标签可以衍生自诸如病毒的病原性抗原，并且包括但不限于V5标签(通常可包含来源于副黏病毒SV5的P/V蛋白的短氨基酸序列GKPIPNPLLGLDST)、Myc标签(通常可包含人原癌基因Myc的10个氨基酸区段(EQKLISEEDL(SEQ ID NO：379)))、HA标签(通常可包含人流感血凝素蛋白的短区段YPYDVPDYA(SEQ ID NO：380))和NE标签。荧光标签如GFP及其变体和衍生物(例如mfGFP、EGFP)可用于检测(多)肽或蛋白质(通过直接视觉读数或通过结合抗GFP抗体)或作为报告基因。蛋白质标签可以进行特定的酶促修饰(例如通过生物素连接酶进行生物素化)或化学修饰(例如与FlAsH-EDT2反应以用于荧光成像)。诸如硫氧还蛋白、聚(NANP)的标签可以增加蛋白质的溶解度，而其他标签则可以帮助将目标蛋白质定位到所需的细胞区室。其他标签包括ABDz1标签、腺苷酸激酶(AK标签)、钙调蛋白结合肽、CusF、Fh8、Halo标签、肝素结合肽(HB标签)、酮类固醇异构酶(KSI)、Inntag、PA(NZ-1)、聚Arg标签、聚Lys标签、S标签和SUMO。肽或蛋白质标签可以是组合或重复的。纯化后，有时可以通过特异性蛋白水解(例如，通过TEV蛋白酶、凝血酶、因子Xa或肠肽酶)去除蛋白质或肽标签。

核定位信号或序列(NLS)

“核定位信号”或“核定位序列”(NLS)是能够将目的(多)肽或蛋白质靶向至核的氨基酸序列，换句话说，核定位信号“标记”目的(多)肽或蛋白质用于核输入。通常，蛋白质通过核被膜进入核内。核被膜由同心膜、外膜和内膜组成。内膜和外膜在多个位点连接，从而在细胞质和核质之间形成通道。这些通道被核孔复合体(NPC)占据，核孔复合体是介导跨核膜运输的复杂多蛋白结构。

核定位信号可以适当地(另外)由编码本文公开的任何目的(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。融合或插入到目的(多)肽或蛋白质的核定位信号可以有利地促进所述(多)肽或蛋白质的输入蛋白(aka核转运蛋白)结合和/或核输入。不希望受特定理论的束缚，当NLS融合或插入到用于核靶向的治疗性(多)肽或蛋白质，例如基因编辑剂、转录诱导剂或阻遏物时，NLS可能是特别有用的。但是，NLS也可以由本文公开的任何其他(多)肽或蛋白质编码。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，可以将这种核定位信号置于目的多肽或蛋白质的N端、C端和/或内部，或其组合。还可以设想，人工核酸(RNA)分子可以编码两个或多于两个融合/插入到所编码的目的(多)肽或蛋白质中的NLS。在核酸水平上，通常将这种核定位信号的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的3′、5′或内部，或其组合。

通常，“NLS”可以包含或组成为带正电荷的赖氨酸或精氨酸的一个或多于一个短序列，其优选地暴露于蛋白质表面上。多种NLS序列是本领域已知的。可以选择用于本发明的示例性NLS序列包括但不限于以下序列。最具代表性的转运信号是用于核蛋白输入的经典NLS(cNLS)，它由一个(单部分)或两个(两部分)碱性氨基酸片段组成。通常，单部分基序的特征是在碱性残基簇之前有一个破坏螺旋的残基。类似地，两部分基序由被9个至12个残基分隔开的两个碱性残基簇组成。单部分cNLS的实例为SV40大T抗原NLS(¹²⁶PKKKRRV¹³²(SEQID NO：381)，而两部分cNLS的实例为核质蛋白NLS(¹⁵⁵KRPAATKKAGQAKKKK¹⁷⁰(SEQ ID NO：382)。单部分NLS的N端赖氨酸的连续残基称为P1、P2等。单部分cNLS通常要求在P1位置为赖氨酸，然后在P2和P4位置为碱性残基以产生K(K/R)X(K/R)(SEQ ID NO：384)的宽松共有序列(Lange等人J Biol Chem.2007年2月23日；282(8)：5101-5105)。

信号肽

术语“信号肽”(有时称为分泌信号肽或SSP、信号序列、前导序列或前导肽)是指通常存在于注定走向分泌途径的新合成的蛋白质N端的典型短肽(通常长度为16个至30个氨基酸)。这些蛋白质包括驻留在某些细胞器(内质网、高尔基体或内体)中，从细胞分泌或插入大多数细胞膜中的蛋白质。在真核细胞中，信号肽通常在新生多肽链转移到内质网膜后立即从新生多肽链上切割下来。翻译同时发生易位，并且易位依赖于胞质蛋白-RNA复合物(信号识别颗粒，SRP)。蛋白质折叠和某些翻译后修饰(例如糖基化)通常发生在ER内。随后，蛋白质通常被运输到高尔基囊泡中并分泌。

信号肽可以适当地(另外)由编码本文公开的任何目的(多-)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。融合或插入到目的(多)肽或蛋白质的信号肽可以有利地介导所述目的(多)肽或蛋白质向确定的细胞区室(例如细胞表面、内质网(ER)或内体溶酶体区室)(中)的转运。优选地，可以将信号肽引入目的(多)肽或蛋白质中以促进所述(多)肽或蛋白质的分泌。特别是在编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸与信号肽融合的情况下，适当的分泌可能有助于触发针对所述抗原的免疫应答，因为其释放和分布优选模拟自然发生的病毒感染并且确保专门抗原呈递细胞(APC)暴露于编码的抗原。但是，信号肽也可以有效地与本文公开的任何其他(多-)肽或蛋白质组合。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，这种信号肽可以位于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部，优选位于N端。在核酸水平上，通常将这种信号肽的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′或3′或内部，或其组合，优选所述编码序列的3′。

信号肽通常可具有三部分结构，其由侧接n区和c区的疏水核心区组成。通常，n区的长度为一个至五个氨基酸，并且主要包含带正电荷的氨基酸。位于疏水性核心区和信号肽酶切割位点之间的c区通常由三个至七个极性但大部分不带电荷的氨基酸组成。在切割位点附近发现了一种特定的氨基酸模式(符合所谓的“(3，1)-规则”)：在位置3和1(相对于切割位点)的氨基酸残基通常很小，并且是中性的。

在本发明的上下文中设想的示例性信号肽包括但不限于经典或非经典MHC分子的信号序列(例如MHC I分子和MHC II分子的信号序列，例如MHC I类分子HLA-A*0201的信号序列)，细胞因子或免疫球蛋白的信号序列，免疫球蛋白或抗体恒定链的信号序列，Lamp1、Tapasin、Erp57、Calretikulin、钙连蛋白、PLAT、EPO、或白蛋白的信号序列，以及其他膜相关蛋白的信号序列或与内质网(ER)或内体-溶酶体区室相关的蛋白的信号序列。最优选地，信号序列可以源自(人)HLA-A2、(人)PLAT、(人)sEPO、(人)ALB、(人)IgE-前导序列、(人)CD5、(人)IL2、(人)CTRB2、(人)IgG-HC、(人)Ig-HC、(人)Ig-LC、GpLuc、(人)Igκ或任意上述蛋白质的片段或变体，特别是HLA-A2、HsPLAT、sHsEPO、HsALB、HsPLAT(氨基酸1-21)、HsPLAT(氨基酸1-22)、IgE-前导序列、HsCD5(氨基酸1-24)、HsIL2(氨基酸1-20)、HsCTRB2(氨基酸1-18)、IgG-HC(氨基酸1-19)、Ig-HC(氨基酸1-19)、Ig-LC(氨基酸1-19)、GpLuc(1-17)或MmIgκ。

设想在本发明中使用的特定信号肽和编码其的核酸序列尤其在WO 2017/081082A2中公开，其通过引用整体并入本文。

肽接头

“肽接头”或“间隔子”是连接本文所公开的目的(多)肽或蛋白质的结构域、部分或部件，例如多结构域蛋白质或融合蛋白的结构域、部分或部件的短氨基酸序列。(多)肽或蛋白质、或其结构域、部分或部件优选是功能性的，即实现特定的生物学功能。

肽接头可以适当地(另外)由编码本文公开的任何目的(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。可以将肽接头插入目的(多)肽或蛋白质中，可以有利地确保目的(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件的正确折叠、柔性和功能。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，这种肽接头通常置于所述(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件之间。在核酸水平上，通常将这种肽接头的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、编码(多)肽或蛋白质、其结构域、部分或部件的编码序列的5′、3′或内部，或其组合。

肽接头通常是短的(包含1个至150个氨基酸，优选1个至50个氨基酸，更优选1个至20个氨基酸)，并且可以优选地由小的、非极性(例如Gly)或极性(例如Ser或Thr)氨基酸组成。肽接头在本领域中通常是已知的，并且可以分为三种类型：柔性接头、刚性接头和可切割接头。当连接的(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件需要一定程度的运动、柔性和/或相互作用时，通常使用柔性接头。柔性接头通常富含小的非极性(例如Gly)或极性(例如Ser或Thr)氨基酸，以提供良好的柔性和溶解性，并支持连接的(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件的移动性。示例性的柔性接头臂序列通常包含约4个至约10个甘氨酸残基。Ser或Thr的并入可通过与水分子形成氢键来维持接头在水溶液中的稳定性，并因此减少接头与蛋白质部分之间的不利相互作用。

最常用的柔性接头具有主要由Gly和Ser残基的片段组成的序列(“GS”接头)。例如，该接头可具有以下序列：GS、GSG、SGG、SG、GGS、SGS、GSS和SSG。相同的序列可以重复多次(例如两次、三次、四次、五次或六次)以创建更长的接头。也可以考虑引入单个氨基酸残基例如S或G作为肽接头。最广泛使用的柔性接头的实例具有(G-G-G-G-S)n序列(SEQ ID NO：383)。通过调节拷贝数“n”，可以优化该GS接头的长度，以实现所连接的(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件的适当分离和/或柔性、或保持必要的结构域间相互作用。除GS接头外，本领域还已知许多其他柔性接头。这些柔性接头还富含小的或极性的氨基酸例如Gly和Ser，但也可以包含其他氨基酸例如Thr和Ala以保持柔性，还可以包含极性氨基酸例如Lys和Glu以提高溶解度。可以使用刚性接头来确保连接的(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件的分离，并减少干扰或空间位阻。另一方面，可引入可切割接头以在体内释放游离的功能性(多)肽或蛋白质或其结构域、部分或部件。例如，可切割接头可以是对酶例如组织蛋白酶或胰蛋白酶的切割敏感的Arg-Arg或Lys-Lys。肽接头可以是或可以不是非免疫原性的(即能够触发免疫应答)。Chen等人Adv Drug Deliv Rev.2013年10月15日；65(10)：1357-1369综述了最常用的肽接头及其应用，其通过引用整体并入本文。特别地，在WO 2017/081082 A2、WO 2017/WO 2002/014478 A2、WO 2001/008636 A2、WO 2013/171505 A2、WO2008/017517 A1和WO 1997/047648 A1中公开了特定的感兴趣肽接头和编码它们的核酸序列，这些内容通过引用整体并入本文。

多聚化元件

术语“多聚化元件”或“多聚化结构域”是指能够诱导或促进目的(多)肽或蛋白质的多聚化的(多)肽或蛋白质。该术语包括寡聚化元件、四聚化元件、三聚化元件或二聚化元件。

例如，多聚化元件可以适当地(额外地)由编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。插入或融合到目的抗原性(多)肽或蛋白质中的多聚化元件可以有利地介导多聚体抗原复合物或抗原性纳米颗粒的形成，其优选能够诱导、促进或增强对所述抗原的免疫应答。因此，多聚化元件可用于模拟病原体(例如，病毒)的“自然”感染性疾病感染，所述病原体显示出多个彼此相邻的抗原(例如，流感病毒的血细胞凝聚素(HA)抗原)。然而，多聚化元件也可以有效地与任何其他目的(多)肽或蛋白质组合。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，这种多聚化元件可置于其N端或C端或两者处。在核酸水平上，通常将这种多聚化元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′或3′。

当在本发明的上下文中与目的多肽或蛋白质组合使用时，这种多聚化元件可以位于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部。在核酸水平上，通常将这种多聚化元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的多肽或蛋白质的编码序列的5′或3′。

示例性二聚化元件可以选自例如热休克蛋白、免疫球蛋白Fc结构域和亮氨酸拉链(转录因子的碱性区域亮氨酸拉链类的二聚化结构域)的二聚化元件/结构域。示例性的三聚化元件和四聚化元件可以选自例如工程化亮氨酸拉链(采用平行三聚体状态的工程化α螺旋卷曲肽)、来自肠杆菌噬菌体T4的纤维蛋白折叠结构域、GCN4pll、CCN4-pLI和p53。示例性的寡聚化元件可选自例如铁蛋白、表面活性剂D、副黏病毒磷蛋白的寡聚化结构域、补体抑制剂C4结合蛋白(C4bp)寡聚化结构域、病毒感染因子(Vif)寡聚化结构域、无菌α基序(SAM)结构域和血管性假血友病因子D型结构域。

铁蛋白形成寡聚物，是在所有动物、细菌和植物中存在的高度保守的蛋白质。铁蛋白是一种自发形成24个相同亚基的纳米颗粒的蛋白质。铁蛋白-抗原融合构建体能够形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。表面活性剂D蛋白(SPD)是一种亲水性糖蛋白，其可自发地自组装形成寡聚物。SPD-抗原融合构建体能够形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。副黏病毒(反义RNA病毒)的磷蛋白充当病毒聚合酶的转录反式激活因子。磷蛋白的寡聚化对于病毒基因组复制至关重要。磷蛋白-抗原融合构建体能够形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。补体抑制剂C4结合蛋白(C4bp)也可用作融合配偶体，以产生寡聚抗原聚集体。C4bp的C端结构域(在人类中是57个氨基酸残基，在小鼠中是54个氨基酸残基)对于C4bp或与其融合的其他多肽的寡聚化都是必要和充分的。C4bp-抗原融合构建体能够形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。病毒感染因子(Vif)多聚化结构域已显示在体内和体外均形成寡聚物。Vif的寡聚化涉及C端结构域中的残基151至164之间的序列映射，即161 PPLP 164基序(对于人类HIV-1为TPKKIKPPLP)。Vif-抗原融合构建体能够形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。

无菌α基序(SAM)结构域是存在于多种涉及许多生物学过程的蛋白质中的蛋白质相互作用模块。在各种真核生物中发现了跨越大约70个残基的SAM结构域。SAM结构域已显示为同源和异源寡聚，形成多个自缔合寡聚结构。SAM-抗原融合构建体能够形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。血管性假血友病因子(vWF)包含多个D型结构域：D1和D2存在于N端前肽中，而其余的D结构域是寡聚化所必需的。vWF结构域存在于多种血浆蛋白中：补体因子B、C2、C3和CR4；整联蛋白(1结构域)；VI、VII、XII和XIV型胶原蛋白；和其他细胞外蛋白。vWF-抗原融合构建体能形成可增强免疫应答的抗原的寡聚聚集体或“簇”。

设想在本发明中使用的特定多聚化元件和编码其的核酸序列尤其在WO 2017/081082 A2中公开，其通过引用整体并入本文。

病毒样颗粒形成元件

术语“病毒样颗粒形成元件”或“VLP形成元件”是指能够组装成在结构上类似于病毒颗粒的非复制和/或非感染性病毒样颗粒的(多)肽或蛋白质。VLP基本上没有感染性和/或复制性病毒基因组或基因组功能。通常，VLP缺乏病毒基因组的全部或部分复制和感染性组分。

VLP形成元件通常是病毒或噬菌体结构蛋白(即包膜蛋白或衣壳蛋白)，其优选包含形成构象表位的抗原的重复高密度展示，所述构象表位可引起强烈的适应性免疫应答。

VLP形成元件可以例如适当地(另外地)由编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码，但是也可以有效地与任何其他目的(多)肽或蛋白质组合。插入或融合到目的(多)肽或蛋白质中的VLP形成元件可以例如用于促进或改善目的抗原性(多)肽或蛋白质的抗原簇集和免疫原性。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，这种VLP形成元件可置于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部。在核酸水平上，通常将这种VLP形成元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′、3′或内部。

示例性VLP形成元件可衍生自RNA噬菌体、噬菌体、乙型肝炎病毒(HBV)，优选其衣壳蛋白或其包膜蛋白，麻疹病毒、辛德比斯病毒、轮状病毒、口蹄疫病病毒、诺沃克病毒、α病毒、逆转录病毒，优选其GAG蛋白，逆转录转座子Ty，优选蛋白pi，人乳头瘤病毒、多瘤病毒、烟草花叶病毒、禽兽棚病毒、豇豆花叶病毒(CPMV)、豇豆萎黄斑点病毒(CCMV)或南方菜豆花叶病毒。设想在本发明中使用的特定VLP形成元件和编码其的核酸序列尤其在WO 2017/081082A2中公开，其通过引用整体并入本文。

跨膜元件

“跨膜元件”或“跨膜多肽元件”(也称为“跨膜结构域”或“TM”)存在于整合或锚定在细胞质膜中的蛋白质中。因此，跨膜元件优选包含或组成为能够跨越并因此优选地将融合的(多)肽或蛋白质锚定在磷脂膜中的氨基酸残基序列。跨膜元件可包含至少约15个氨基酸残基，优选至少18个、20个、22个、24个、25个、30个、35个或40个氨基酸残基。典型的跨膜元件的长度为约20±5个氨基酸。构成跨膜元件的氨基酸残基优选选自非极性的主要疏水性氨基酸。优选地，跨膜元件的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或多于90％的氨基酸可以是疏水的，例如亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸或色氨酸。跨膜元件可以特别地包含一系列保守的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基。典型的跨膜元件是α螺旋跨膜元件。跨膜元件可包含单个疏水性α螺旋或β桶状结构；而疏水性α螺旋通常存在于膜锚定蛋白(例如七个跨膜结构域受体)中，β桶状结构通常存在于产生孔或通道的蛋白中。

跨膜元件可以例如适当地(另外地)由编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码，但是也可以有效地与任何其他目的(多)肽或蛋白质组合。融合或插入到目的(多)肽或蛋白质的TM元件可以有利地将所述(多)肽或蛋白质锚定在细胞质膜中。在抗原性(多)肽或蛋白质的情况下，这种锚定可以促进抗原簇集，优选地导致增强的免疫应答。然而，TM元件也可以与任何其他(多)肽或蛋白质组合。当与目的(多)肽或蛋白质组合编码时，这样的跨膜元件可以位于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部。在核酸水平上，通常将这种跨膜元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′、3′或内部。

示例性的跨膜元件可以选自流感病毒的血细胞凝聚素(HA)、HIV-1的Env、EIAV(马科传染性贫血病毒)、MLV(鼠白血病病毒)、小鼠乳腺肿瘤病毒、VSV(水泡性口炎病毒)的G蛋白、狂犬病病毒的跨膜元件或具有七个跨膜结构域受体的跨膜元件。设想在本发明中使用的特定跨膜元件和编码其的核酸序列尤其在WO 2017/081082A2中公开，其通过引用整体并入本文。

树突细胞靶向元件

术语“树突细胞靶向元件”是指能够靶向树突细胞(CD)的(多)肽或蛋白质。树突细胞(DC)是最有效的抗原呈递细胞(APC)，其将先天免疫应答与适应性免疫应答联系起来。它们结合并内化病原体/抗原，并在其膜上展示抗原片段(通过MHC分子)，以刺激针对这些病原体/抗原的T细胞应答。

树突细胞靶向元件可以例如适当地(另外地)由编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码，以将抗原靶向至DC以刺激和诱导有效的免疫应答。但是，树突细胞靶向元件也可以与任何其他目的多肽或蛋白质组合使用。当在本发明的上下文中与目的多肽或蛋白质组合使用时，这种树突细胞靶向元件可以位于目的(多)肽或蛋白质N端、C端和/或内部。在核酸水平上，通常将这种树突细胞靶向元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′或3′。

树突细胞靶向元件包括优选能够与DC表面受体相互作用或结合的(多)肽和蛋白质(例如，抗体片段、受体配体)，该DC表面受体例如为C型凝集素(甘露糖受体(例如，MR1、DEC-205(CD205))、CD206、DC-SIGN(CD209)、Clec9a、DCIR、Lox-1、MGL、MGL-2、Clec12A、Dectin-1、Dectin-2、胰岛蛋白(langerin)(CD207))、清道夫受体、F4/80受体(EMR1)、DC-STAMP、抗体Fc部分的受体(Fc受体)、toll样受体(例如TLR2、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9)和补体受体(如CR1、CR2)。

示例性树突细胞靶向元件可选自抗DC-SIGN抗体、CD1.1c特异性单链片段(scFv)、DEC205特异性单链片段(scFv)、可溶性PD-1、趋化因子(C基序)配体XCL1、CD40配体、人IgG1、鼠IgG2a、抗Celec 9A、抗MHCII scFv。WO 2017/081082 A2以及Apostolopoulos等人JDrug Deliv.2013；2013：869718和Kastenmüller等人Nat Rev Immunol.2014 Oct；14(10)：705-11特别公开了设想用于本发明的特定树突细胞靶向元件和编码其的核酸序列，其全部通过引用整体并入本文。

免疫辅助元件

术语“免疫辅助元件”或“辅助元件”是指例如通过触发危险应答(例如，损伤相关分子模式分子(DAMP))、激活补体系统(例如，涉及经典补体途径、替代补体途径和凝集素途径的肽/蛋白质)或触发先天免疫应答(例如，病原体相关分子模式分子，PAMP)来增强免疫应答的(多)肽或蛋白质。

免疫辅助元件可以例如适当地(另外地)由编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码，以增强对所编码抗原的免疫应答。然而，免疫辅助元件也可以有效地与任何其他目的(多)肽或蛋白质组合。当在本发明的上下文中与目的多肽或蛋白质组合使用时，免疫辅助元件可以位于目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部。在核酸水平上，通常将这种免疫辅助元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′、3′或内部。

示例性免疫辅助元件可以选自热休克蛋白(例如，HSP60、HSP70、gp96)、鞭毛蛋白FliC、高迁移率族蛋白盒1蛋白(例如，HMGN1)、纤连蛋白的额外结构域A(EDA)、C3蛋白片段(例如，C3d)、转铁蛋白、β-防御素或任何其他肽/蛋白，PAMP受体(PR)配体、DAMP或激活补体系统的元件。设想在本发明中使用的特定免疫辅助元件和编码其的核酸序列尤其公开在WO2017/081082A2中，其通过引用整体并入本文。

促进抗原呈递的元件

术语“促进抗原呈递的元件”是指能够介导促进进入溶酶体/蛋白酶体或外排体途径和/或将加工的(多)肽或蛋白质装载和呈递到主要组织相容性复合物(MHC)分子(MHC-I或MHC-II)上并以MHC结合形式呈递在细胞表面上的(多)肽或蛋白质。

促进抗原呈递的元件可以例如适当地(另外地)由编码抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码，以增强对所编码抗原的加工和MHC呈递。但是，促进抗原呈递的元件也可以与任何其他目的多肽或蛋白质组合使用。当与目的(多)肽或蛋白质组合使用时，可将促进抗原呈递的元件置于所述目的(多)肽或蛋白质的N端、C端和/或内部，或其组合。在核酸水平上，通常将这种促进抗原呈递的元件的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′、3′或内部。

示例性的促进抗原呈递的元件可以选自MHC恒定链(li)、恒定链(li)溶酶体靶向信号、溶酶体相关膜蛋白LAMP-1的分选信号、溶酶体整合膜蛋白II(LIMP-11)和C1C2乳凝集素(Lactadherin)结构域。设想在本发明中使用的特定促进抗原呈递的元件和编码其的核酸序列尤其公开在WO 2017/081082A2中，其通过引用整体并入本文。

2A肽

病毒“2A肽”(也称为“自切割”肽)是允许从单个开放阅读框表达多种蛋白质的(多)肽或蛋白质。术语“2A肽”和“2A元件”在本文中可交换使用。2A序列从一个转录物生成两种蛋白质的机制是通过核糖体跳跃——正常的肽键在2A处受损，从而导致由一次翻译事件产生两个不连续的蛋白质片段。

2A肽可以例如适当地(另外地)由编码需要切割的(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子编码。例如，可将2A肽插入两个或多于两个抗原性(多)肽之间的多肽融合体中，或插入目的蛋白与信号肽之间。这种2A肽的编码序列通常位于(多)肽或蛋白质编码序列之间。2A肽的自切割优选产生至少一种单独的目的(多)肽或蛋白(例如，没有其信号肽的目的蛋白，或两种目的抗原性(多)肽或蛋白)。2A肽也可以适当地由编码目的多链(多)肽或蛋白质(例如抗体)的人工核酸(RNA)分子编码。这样的人工核酸(RNA)分子可以包含例如编码两条抗体链的被编码2A肽的核酸序列分开的两个编码序列。

当在本发明的上下文中与目的多肽或蛋白质组合使用时，2A肽可以位于目的多肽或蛋白质的N端、C端和/或内部、或其组合。在核酸水平上，通常将这种2A肽的编码序列置于框内(即，在同一阅读框中)、目的(多)肽或蛋白质的编码序列的5′、3′或内部。

示例性的2A肽可以衍生自口蹄疫病病毒、马鼻炎A病毒、明脉扁刺蛾β四体病毒(Thosea asigna virus)、猪捷申病毒1。设想在本发明中使用的特定2A肽和编码其的核酸序列尤其公开在WO 2017/081082A2中，其通过引用整体并入本文。

异形体、同源物、变体、片段和衍生物

本文公开的每种目的(多)肽和蛋白质，以及在适用的情况下，本文公开的每种其他标签、序列、接头、元件或结构域也包括其异形体、异形体、变体、片段和衍生物。因此，本发明的人工核酸(RNA)分子可在其至少一个编码区中编码至少一种治疗性、抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质，以及任选地如本文所公开的至少一种其他标签、序列、接头、元件或结构域、或其异形体、同源物、变体、片段或衍生物。这种异形体、同源物、变体、片段和衍生物优选是功能性的，即表现出与相应的参考(多)肽、蛋白质、标签、序列、接头、元件或结构域相同的期望生物学特性，和/或能够发挥相同的期望生物学功能。例如，治疗性(多)肽或蛋白质的异形体、同源物、变体、片段和衍生物优选能够介导期望的治疗作用。抗原性或变应原性(多)肽或蛋白质的异形体、同源物、变体、片段和衍生物优选能够介导期望的抗原效应或变应原效应，即更优选地能够诱导免疫应答或过敏反应。

术语“异形体”是指本文所公开的(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的翻译后修饰(PTM)变体。PTM可导致给定蛋白质的共价或非共价修饰。常见的翻译后修饰包括糖基化、磷酸化、泛素化、S-亚硝基化、甲基化、N-乙酰化、脂质化、二硫键形成、硫酸化、酰化、脱氨基等。不同的PTM可导致例如不同的化学反应、活性、定位、相互作用或构象。

术语“同源物”涵盖“直系同源物”和“旁系同源物”。“直系同源物”是由不同物种的基因编码的(多)肽或蛋白质或氨基酸序列，其通过物种形成从共同祖先基因进化而来。“旁系同源物”是通过基因组内的基因复制产生的基因。

在(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的上下文中，术语“变体”是指“(氨基酸)序列变体”，即与参考(或“亲本”)氨基酸序列相比，具有至少一个氨基酸突变的(多)肽、蛋白质或氨基酸序列。氨基酸突变包括氨基酸置换、插入或缺失。术语(氨基酸)“置换”可以指保守或非保守氨基酸置换。在一些实施方案中，可能优选的是，“变体”主要包含保守氨基酸置换，其中源自同一类别的氨基酸彼此交换。特别是，这些氨基酸是具有脂肪族侧链、具有带正电荷或负电荷的侧链、在侧链中具有芳香族基团的氨基酸，或侧链可以形成氢桥，例如具有羟基功能的侧链的氨基酸。对于保守构成，例如，具有极性侧链的氨基酸可以被具有相应极性侧链的另一个氨基酸替换，或者例如，以疏水侧链为特征的氨基酸可以被具有相应疏水侧链的另一个氨基酸替换(例如，丝氨酸(苏氨酸)被苏氨酸(丝氨酸)替换，或者亮氨酸(异亮氨酸)被异亮氨酸(亮氨酸)替换)。

优选地，本文所用的术语“变体”包括已经经历翻译后蛋白水解加工(这可能涉及去除N端甲硫氨酸、信号肽和/或将无活性或无功能的蛋白质转换为有活性或有功能的蛋白质)的天然存在的变体，例如前肽、前蛋白、前体蛋白，转录变体，以及天然存在和工程化的突变(多)肽、蛋白质和氨基酸序列。术语“转录变体”或“剪接变体”是指由信使RNA产生的(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的变体，其最初从同一基因转录而来，但随后经历选择性(或差异)剪接，其中基因的特定外显子可以包含在最终加工的信使RNA(mRNA)内或从最终加工的信使RNA中排除。本文所定义的“变体”可以衍生自、分离自参考(多)肽、蛋白或氨基酸序列，与参考(多)肽、蛋白或氨基酸序列相关，基于参考(多)肽、蛋白或氨基酸序列或与参考(多)肽、蛋白或氨基酸序列同源。“变体”(多)肽、蛋白质或氨基酸序列可优选与相应的参考(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的氨基酸序列具有至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性。

在(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的上下文中的术语“片段”是指由参考(或“亲本”)(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的全长氨基酸序列的连续子序列组成的(多)肽、蛋白质或氨基酸序列。“片段”的氨基酸序列与参考氨基酸序列相比在N端、C端和/或序列内被截短。这种截短可分别在氨基酸水平或核酸水平上发生。换句话说，“片段”通常可以由全长氨基酸序列的较短部分组成，因此优选由与全长参考氨基酸序列内的相应区段相同的氨基酸序列组成。该术语包括天然存在的片段(例如由天然存在的体内蛋白酶活性产生的片段)以及工程化片段。片段可以衍生自本文公开的天然存在的(多)肽、蛋白质或氨基酸序列、或衍生自其异形体、同源物或变体。

“片段”可包含相应参考氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基至少连续125个氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基。

可以优选的是，“片段”由对应于参考氨基酸序列中的连续氨基酸区段的连续氨基酸区段组成，其中该片段对应于总(即全长)参考氨基酸序列的至少20％，优选至少30％，更优选至少40％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，甚至更优选至少70％，最优选至少80％。关于“片段”指示的序列同一性可以优选是指全长参考氨基酸序列。(多)肽、蛋白质或氨基酸序列“片段”可优选与参考氨基酸序列优选具有至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的氨基酸序列同一性。

在(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的上下文中，术语“衍生物”是指参考或“亲本”(多)肽、蛋白质或氨基酸序列的修饰，从而包括或缺少额外的生物学特性或功能。例如，(多)肽或蛋白质“衍生物”可以通过引入或去除赋予特定生物学功能例如结合(另一)靶标的能力或酶活性的结构域来修饰。其他修饰可以调节药代动力学/药效学特性，例如稳定性、生物半衰期、生物利用度、吸收；分布和/或减小的清除率。可通过在翻译后或在核酸序列水平上引入或删除氨基酸序列来制备“衍生物”(参见使用标准基因工程技术(参见Sambrook J等人，2012年(第4版)，Molecular cloning：a laboratory manual.ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，New York)。“衍生物”可以衍生自，即对应于经修饰的全长野生型(多)肽、蛋白质或氨基酸序列，或其异形体、同源物、片段或变体。术语“衍生物”还包括在翻译后被化学修饰或是可修饰的，例如通过PEG化或PAS化修饰的(多)肽、蛋白质或氨基酸序列。

根据一些实施方案，特别优选的是，如果除了目的(多)肽或蛋白质之外，另一个(多)肽或蛋白质由本文定义的至少一个编码序列编码，则编码的肽或蛋白质优选无组蛋白、无报告蛋白(例如萤光素酶、GFP及其变体(例如eGFP、RFP或BFP)、和/或无标记物或选择蛋白，包括α-珠蛋白、半乳糖激酶和黄嘌呤：鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(GPT)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT)、β-半乳糖苷酶、半乳糖激酶、碱性磷酸酶、分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)或抗性基因(例如针对新霉素、嘌呤霉素、潮霉素和博来霉素的抗性基因)。在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子不编码报告基因或标记基因。在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子不编码萤光素酶。在其他实施方案中，人工核酸(RNA)分子不编码GFP或其变体。

核酸序列

本发明的人工核酸(RNA)分子可以编码本文公开的任何所需的(多)肽或蛋白质。具体而言，所述人工核酸(RNA)分子可包含编码(多)肽或蛋白质的至少一个编码区，该(多)肽或蛋白质包含或组成为根据SEQ ID NO：42至45中任一项的氨基酸序列、或其同源物、变体、片段或衍生物，优选与根据SEQ ID NO：42至45中任一项的氨基酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列或任意这些系列的变体或片段。

因此，本发明的人工核酸(RNA)分子可以优选包含或组成为根据SEQ ID NO：46至49中任一项的核酸序列；或与所述核酸序列中的任一个具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的核酸序列。

本发明设想了与本文定义的UTR元件可操作地连接、编码目的(多)肽或蛋白质的编码区的有利组合，以便优选地增加所述编码蛋白的表达。因此，优选地，所述人工核酸分子可以包含或组成为根据SEQ ID NO：50至368中任一项的核酸序列、或其(功能性)变体、片段或衍生物，特别是与这些序列的任一个具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％序列同一性的核酸序列。

核酸分子和RNA

术语“核酸”、“核酸分子”或“人工核酸分子”是指任何DNA或RNA分子，并且与多核苷酸同义使用。在此提及编码特定蛋白质和/或肽的核酸或核酸序列时，所述核酸或核酸序列分别优选还包含调节序列，从而允许在合适的宿主例如人类中表达，即，转录和/或翻译编码特定蛋白质或肽的核酸序列。

本发明的人工核酸分子可以优选地是RNA。将理解的是，术语“RNA”是指核糖核酸分子，其特征在于其核苷酸的特定连续连接以形成所述分子(即，其RNA序列)。因此，术语“RNA”可以用来指RNA分子或RNA序列，如本领域技术人员在相应情况下将容易理解的。例如，在本发明的上下文中使用的术语“RNA”优选是指RNA分子(所述分子尤其以其特定的RNA序列为特征)。在本文公开的序列修饰的上下文中，术语“RNA”将被理解为涉及(修饰的)RNA序列，但通常也包括所得到的RNA分子(其RNA序列被修饰)。在优选的实施方案中，RNA可以是mRNA、病毒RNA、自我复制RNA或复制子RNA，优选为mRNA。

单顺反子、双顺反子或多顺反子RNA

在优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子可以是单顺反子、双顺反子或多顺反子。双顺反子或多顺反子RNA通常包含两个(双顺反子)或多于两个(多顺反子)开放阅读框(ORF)。

上下文中的“开放阅读框”是可翻译为肽或蛋白质的密码子序列。双顺反子或多顺反子人工核酸(RNA)分子中的编码序列可以编码相同或优选不同的目的多肽或蛋白质。在本文中，“不同的”(多)肽或蛋白质是指由不同基因编码的(多)肽或蛋白质，它们具有不同的氨基酸序列、表现出不同的生物化学特性或生物学特性、具有不同的生物学功能和/或衍生自不同的物种。换句话说，编码两个或多于两个“不同”(多)肽或蛋白质的编码序列可以例如编码：(a)蛋白质A和蛋白质B，其中A和B分别衍生自基因A′和B′，或(b)人蛋白质A和小鼠蛋白质A，或(c)蛋白质A和蛋白质A′，其中蛋白质A′是A的变体、片段或衍生物，并且与A相比，任选地具有不同的氨基酸序列和/或不同的生物化学特性或生物学特性。

双顺反子或甚至多顺反子人工核酸(RNA)分子可编码例如两个或多于两个，即至少两个、三个、四个、五个、六个或多于六个(优选不同的)目的多肽或蛋白质。

在一些实施方案中，编码两种或多于两种(优选不同的)目的(多)肽或蛋白质的编码序列可以在双顺反子或多顺反子人工核酸(RNA)分子中被至少一个IRES(内部核糖体进入位点)序列隔开。术语“IRES”(内部核糖体进入位点)是指允许翻译起始的RNA序列。IRES可以作为唯一的核糖体结合位点，但是它也可以用于提供双顺反子或甚至多顺反子人工核酸(RNA)分子，其编码几个(优选不同的)目的(多)肽或蛋白质(或其同源物、变体、片段或衍生物)，这些目的(多)肽或蛋白质由核糖体彼此独立地翻译。可以根据本发明使用的IRES序列的实例是衍生自微小RNA病毒(例如FMDV)、瘟病毒(CFFV)、脊髓灰质炎病毒(PV)、脑心肌炎病毒(ECMV)、口蹄疫病病毒(FMDV)、丙型肝炎病毒(HCV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、小鼠白血病病毒(MLV)、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)或蟋蟀麻痹病毒(CrPV)的那些。

根据另外的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子的至少一个编码序列可以编码至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个和多于八个(优选不同的)、连接或不连接氨基酸接头序列的目的(多)肽或蛋白质，其中所述接头序列可以包括刚性接头、柔性接头、可切割接头(例如自切割肽)或其组合。

优选地，人工核酸(RNA)分子包含长度为约50至约20000、或100至约20000个核苷酸，优选长度为约250至约20000个核苷酸，更优选长度为约500至约10000个核苷酸，甚至更优选地为约500至约5000个核苷酸。

人工核酸(RNA)分子还可以是单链的或双链的。当提供为双链RNA或DNA时，人工核酸分子优选包含有义链和相应的反义链。

核酸修饰

本发明的人工核酸分子，优选RNA可以以修饰核酸的形式提供。下面描述了在本发明的上下文中设想的合适的核酸修饰。

根据优选的实施方案，本发明的至少一种人工核酸(RNA)分子可以被“修饰”，即包括至少一种如本文所定义的修饰。所述修饰优选可以是如本文所述的序列修饰或(化学)核碱基修饰。如本文所定义的“修饰”优选导致所述人工核酸(RNA)分子的稳定化。因此，本发明更优选提供“稳定的”人工核酸(RNA)分子。根据优选的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子因此可以作为“稳定的”人工核酸(RNA)分子提供，特别是mRNA，即其基本上抵抗体内降解(例如外切核酸酶或内切核酸酶)。

核碱基修饰

本发明的人工核酸分子可以在其核苷酸中，更具体地在磷酸骨架、糖部分或核碱基中被修饰。换句话说，本发明设想“修饰的”人工核酸(RNA)分子可以包含核苷酸/核苷类似物修饰(修饰的核苷酸或核苷)，例如骨架修饰、糖修饰或核碱基修饰。

磷酸骨架修饰

本发明的人工核酸分子可以包含骨架修饰，即核苷酸的磷酸骨架被修饰。术语“骨架修饰”是指核苷酸的磷酸骨架的化学修饰，其可以稳定骨架经修饰的核酸分子。因此，“骨架修饰”被理解为其中所述人工核酸(RNA)分子中包含的核苷酸的磷酸骨架被化学修饰的修饰。

可以通过用不同的取代基替代一个或多于一个氧原子来修饰骨架的磷酸基团。此外，修饰的核苷酸可包括用本文所述的经修饰的磷酸酯完全替代未修饰的磷酸酯部分。

经修饰的磷酸酯基团的实例包括但不限于硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、磷酸硼、硼代磷酸酯、膦酸氢酯、氨基磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯和磷酸三酯。二硫代磷酸酯的两个非连接氧都被硫替代。磷酸酯接头也可以通过用氮(桥连的氨基磷酸酯)、硫(桥连的硫代磷酸酯)和碳(桥连的亚甲基膦酸酯)替代连接的氧进行修饰。

优选地，“骨架经修饰的”人工核酸分子，优选RNA，可以包含硫代磷酸酯修饰的骨架，其中优选地，包含在磷酸骨架中的磷酸氧中的至少一个被硫原子替代。其他合适的磷酸骨架修饰包括掺入非离子型磷酸酯类似物，例如烷基和芳基膦酸酯，其中带电荷的膦酸酯氧被烷基或芳基替代；或磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中带电荷的氧残基以烷基化形式存在。这样的骨架修饰通常包括但不限于选自甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯(例如胞苷-5′-O-(1-硫代磷酸酯))的修饰。

糖修饰：

本发明的人工核酸分子可以包含糖修饰，即在其糖部分中被修饰的核苷酸。术语“糖修饰”是指核苷酸的糖部分的化学修饰。因此，“糖修饰”被理解为人工核酸(RNA)分子的核苷酸的糖的化学修饰。

例如，2′羟基(OH)可以被许多不同的“氧”或“脱氧”取代基修饰或取代。“氧”-2′羟基修饰的实例包括但不限于烷氧基或芳氧基(-OR，例如，R＝H、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或糖)；聚乙二醇(PEG)、-O(CH₂CH₂O)nCH₂CH₂OR；“锁”核酸(LNA)，其中2′羟基例如通过亚甲基桥连接到相同核糖的4′碳上；和氨基(-O-氨基，其中氨基例如NRR可以是烷基氨基、二烷基氨基、杂环基、芳基氨基、二芳基氨基、杂芳基氨基或二杂芳基氨基、乙二胺、聚氨基)或氨基烷氧基。

“脱氧”修饰包括氢、氨基(例如NH₂；烷基氨基、二烷基氨基、杂环基、芳基氨基、二芳基氨基、杂芳基氨基、二杂芳基氨基、或氨基酸)；或可以通过接头连接至糖的氨基，其中该接头包含原子C、N和O中的一个或多于一个。

修饰的糖部分可以含有一个或多于一个碳，其立体化学构型与核糖中相应碳的立体化学构型相反。因此，糖修饰的人工核酸(RNA)分子可以包括含有例如阿拉伯糖作为糖的核苷酸。

核碱基修饰：

本发明的人工核酸分子可包含核碱基修饰，即在其核碱基部分被修饰的核苷酸。术语“核碱基修饰”是指核苷酸的核碱基部分的化学修饰。因此，“核碱基修饰”被理解为人工核酸(RNA)分子的核苷酸的核碱基的化学修饰。在其核碱基部分被修饰的合适的核苷酸或核苷(也称为“核苷类似物”或“核苷酸类似物”)可以有利地增加人工核酸(RNA)分子的稳定性和/或增强由其至少一个编码区编码的(多)肽或蛋白质的表达。

RNA中存在的核碱基的实例包括但不限于腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶。例如，本文所述的核苷酸可在大沟面上进行化学修饰。在一些实施方案中，大沟化学修饰可包括氨基、硫醇基、烷基或卤素基团。

当在下面提及优选的“核苷修饰(核苷类似物)”时，同等地设想各种修饰的核苷酸(核苷酸类似物)，反之亦然。

在一些实施方案中，核苷酸类似物/修饰选自核碱基修饰，其优选选自2-氨基-6-氯嘌呤核糖核苷-5′-三磷酸、2-氨基嘌呤核糖核苷-5′-三磷酸；2-氨基腺苷-5′-三磷酸、2′-氨基-2′-脱氧胞苷-三磷酸、2-硫代胞苷-5′-三磷酸、2-硫代尿苷-5′-三磷酸、2′-氟胸苷-5′-三磷酸、2′-O-甲基-肌苷-5′-三磷酸、4-硫代尿苷-5′-三磷酸、5-氨基烯丙基胞苷-5′-三磷酸、5-氨基烯丙基尿苷-5′-三磷酸、5-溴胞苷-5′-三磷酸、5-溴尿苷5′-三磷酸、5-溴-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸、5-溴-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸、5-碘胞苷-5′-三磷酸、5-碘-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸、5-碘尿苷-5′-三磷酸、5-碘-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸、5-甲基胞苷-5′-三磷酸、5-甲基尿苷-5′-三磷酸、5-丙炔基-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸、5-丙炔基-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸、6-氮杂胞苷-5′-三磷酸、6-氮杂尿苷-5′-三磷酸、6-氯嘌呤核苷-5′-三磷酸、7-脱氮腺苷-5′-三磷酸、7-脱氮鸟苷-5′-三磷酸、8-氮杂腺苷-5′-三磷酸、8-叠氮腺苷-5′-三磷酸、苯并咪唑-核苷-5′-三磷酸、N1-甲基腺苷-5′-三磷酸、N1-甲基鸟苷-5′-三磷酸、N6-甲基腺苷-5′-三磷酸、O6-甲基鸟苷-5′-三磷酸、假尿苷-5′-三磷酸、或嘌呤霉素-5′-三磷酸、黄嘌呤核苷-5′-三磷酸。特别优选选自5-甲基胞苷-5′-三磷酸、7-脱氮鸟苷-5′-三磷酸、5-溴胞苷-5′-三磷酸、和假尿苷-5′-三磷酸的碱基修饰核苷酸。

在一些实施方案中，修饰的核苷包含吡啶-4-酮核糖核苷、5-氮杂-尿苷、2-硫代-5-氮杂-尿苷、2-硫代尿苷、4-硫代-假尿苷、2-硫代-假尿苷、5-羟尿苷、3-甲基尿苷、5-羧甲基尿苷、1-羧甲基-假尿苷、5-丙炔基尿苷、1-丙炔基-假尿苷、5-牛磺甲基尿苷、1-牛磺甲基-假尿苷、5-牛磺甲基-2-硫代尿苷、1-牛磺甲基-4-硫代尿苷、5-甲基尿苷、1-甲基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-脱氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-1-脱氮-假尿苷、二氢尿苷、二氢假尿苷、2-硫代-二氢尿苷、2-硫代-二氢假尿苷、2-甲氧基尿苷、2-甲氧基-4-硫代-尿苷、4-甲氧基-假尿苷、和4-甲氧基-2-硫代-假尿苷。

在一些实施方案中，修饰的核苷包含5-氮杂胞苷、假异胞苷、3-甲基胞苷、N4-乙酰基胞苷、5-甲酰基胞苷、N4-甲基胞苷、5-羟甲基胞苷、1-甲基-假异胞苷、吡咯并胞苷、吡咯并假异胞苷、2-硫代-胞苷、2-硫代-5-甲基胞苷、4-硫代-假异胞苷、4-硫代-1-甲基-假异胞苷、4-硫代-1-甲基-1-脱氮-假异胞苷、1-甲基-1-脱氮-假异胞苷、泽布拉林(zebularine)、5-氮杂-泽布拉林、5-甲基-泽布拉林、5-氮杂-2-硫代-泽布拉林、2-硫代-泽布拉林、2-甲氧基胞苷、2-甲氧基-5-甲基胞苷、4-甲氧基-假异胞苷和4-甲氧基-1-甲基-假异胞苷。

在其他实施方案中，修饰的核苷包含2-氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-腺嘌呤、7-脱氮-2-氨基嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-2-氨基嘌呤、7-脱氮-2，6-二氨基嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-2，6-二氨基嘌呤、1-甲基腺苷、N6-甲基腺苷、N6-异戊烯基腺苷、N6-(顺式-羟基异戊烯基)腺苷、2-甲硫基-N6-(顺式-羟基异戊烯基)腺苷、N6-甘氨酰基氨甲酰基腺苷、N6-苏氨酰基氨甲酰基腺苷、2-甲硫基-N6-苏氨酰基氨甲酰基腺苷、N6，N6-二甲基腺苷、7-甲基腺嘌呤、2-甲硫基腺嘌呤和2-甲氧基腺嘌呤。

在其他实施方案中，修饰的核苷包含肌苷、1-甲基肌苷、怀俄苷、怀丁苷、7-脱氮-鸟苷、7-脱氮-8-氮杂-鸟苷、6-硫代-鸟苷、6-硫代-7-脱氮-鸟苷、6-硫代-7-脱氮-8-氮杂-鸟苷、7-甲基-鸟苷、6-硫代-7-甲基-鸟苷、7-甲基肌苷、6-甲氧基-鸟苷、1-甲基鸟苷、N2-甲基鸟苷、N2，N2-二甲基鸟苷、8-氧代-鸟苷、7-甲基-8-氧代-鸟苷、1-甲基-6-硫代-鸟苷、N2-甲基-6-硫代-鸟苷和N2，N2-二甲基-6-硫代-鸟苷。

在一些实施方案中，核苷酸可以在大沟面上被修饰并且可以包括用甲基或卤素基团取代尿嘧啶C-5上的氢。在特定的实施方案中，修饰的核苷是5′-O-(1-硫代磷酸酯)-腺苷、5′-O-(1-硫代磷酸酯)-胞苷、5′-O-(1-硫代磷酸酯)-鸟苷、5′-O-(1-硫代磷酸酯)-尿苷或5′-O-(1-硫代磷酸酯)-假尿苷。

在一些实施方案中，本发明的修饰的人工核酸(RNA)分子可包含选自以下的核苷修饰：6-氮杂-胞苷、2-硫代-胞苷、α-硫代-胞苷、假异胞苷、5-氨基烯丙基-尿苷、5-碘代-尿苷、N1-甲基-假尿苷、5，6-二氢尿苷、α-硫代-尿苷、4-硫代-尿苷、6-氮杂-尿苷、5-羟基-尿苷、脱氧胸苷、5-甲基-尿苷、吡咯并胞苷、肌苷、α-硫代-鸟苷、6-甲基-鸟苷、5-甲基-胞苷、8-氧代-鸟苷、7-脱氮-鸟苷、N1-甲基-腺苷、2-氨基-6-氯-嘌呤、N6-甲基-2-氨基嘌呤、假异胞苷、6-氯-嘌呤、N6-甲基腺苷、α-硫代-腺苷、8-叠氮-腺苷、7-脱氮-腺苷。

在一些实施方案中，修饰的人工核酸(RNA)分子(或本文定义的任何其他核酸，特别是RNA)不包含本文描述的任何化学修饰。此类修饰的人工核酸仍然可以包含如下所述的脂质修饰或序列修饰。

脂质修饰

根据另外的实施方案，本发明的人工核酸分子(RNA)可以包含至少一种脂质修饰。

这种脂质修饰的本发明的人工核酸分子(RNA)通常包含(i)如本文定义的人工核酸分子(RNA)，(ii)与所述人工核酸分子(RNA)共价连接的至少一个接头，(iii)与各自的接头共价连接的至少一种脂质。

替代地，“脂质修饰”的人工核酸分子(RNA)可包含至少一种人工核酸分子(RNA)、以及与所述人工核酸分子(RNA)共价连接(无接头)的至少一种(双功能性)脂质。

替代，“脂质修饰”的人工核酸分子(RNA)可包含(i)人工核酸分子(RNA)，(ii)与所述人工核酸分子(RNA)共价连接的至少一个接头，和(iii)与各自的接头共价连接的至少一种脂质，以及(iv)与所述人工核酸分子(RNA)共价连接(无接头)的至少一种(双功能性)脂质。

在这种情况下，特别优选地，脂质修饰存在于线性人工核酸分子(RNA)的末端。

序列修饰

根据优选的实施方案，本发明的人工核酸分子(RNA，优选mRNA)是“序列修饰的”，即包含至少一种如下所述的序列修饰。不希望受特定理论的束缚，这样的序列修饰可以增加本发明的人工核酸分子(RNA)的稳定性和/或增强本发明的人工核酸分子(RNA)的表达。

G/C含量修饰

根据优选的实施方案，可以通过修饰鸟苷/胞嘧啶(G/C)含量，优选通过修饰至少一个编码序列的G/C含量来修饰本发明的人工核酸(RNA)分子，更优选mRNA，从而使其稳定。换句话说，人工核酸分子(RNA)可以优选地是G/C修饰的，即，优选地包含G/C修饰的(编码)序列。

“G/C修饰的”核酸(RNA)序列通常是指包含以下核酸(优选RNA)序列的核酸(优选RNA)，该核酸(优选RNA)序列基于修饰的野生型核酸(RNA)序列，并且与所述野生型核酸(RNA)序列相比，包含改变数量的鸟嘌呤和/或胞嘧啶核苷酸的核酸(RNA)。可以通过用含有鸟苷或胞苷核苷酸的“同义”密码子替代含有腺苷或胸苷的密码子来产生这种改变G/C数目的核苷酸。因此，密码子替代优选不改变编码的氨基酸残基，而是专门改变核酸(RNA)的G/C含量。

在本发明特定优选的实施方案中，与相应的野生型，即未修饰的核酸的编码序列的G/C含量相比，本发明的人工核酸分子(RNA)的编码序列的G/C含量改变，特别是增加。与由相应的野生型核酸(RNA)编码的氨基酸序列相比，由本发明的人工核酸分子(RNA)编码的氨基酸序列优选未改变。

提供“G/C修饰”核酸分子(RNA)是基于以下发现：具有增加的G(鸟苷)/C(胞嘧啶)含量的核酸(RNA)序列通常比具有增加的A(腺苷)/U(尿嘧啶)含量的核酸(RNA)序列更稳定。

根据本发明，因此，与相应的野生型核酸(RNA)相比，本发明的人工核酸分子(RNA)的密码子是变化的，同时保留翻译的氨基酸序列，以使得它们包括增加的G/C核苷酸含量。

关于几个密码子编码一个相同氨基酸的事实(所谓的遗传密码的简并性)，可以确定对于稳定性最有利的密码子(所谓的替代密码子选用)。取决于由本发明的人工核酸分子(RNA)编码的氨基酸，与其野生型序列相比，存在多种修饰其核酸序列的可能性。对于由仅包含G或C核苷酸的密码子编码的氨基酸，不需要密码子的修饰。

因此，Pro(CCC或CCG)、Arg(CGC或CGG)、Ala(GCC或GCG)和Gly(GGC或GGG)的密码子不需要修饰，因为不存在A或U。相比之下，含有A和/或U核苷酸的密码子可以通过编码相同的氨基酸但不含A和/或U的其他密码子的替代来修饰。这些实例为：Pro的密码子可以从CCU或CCA修饰为CCC或CCG；Arg的密码子可以从CGU或CGA或AGA或AGG修饰为CGC或CGG；Ala的密码子可以从GCU或GCA修饰为GCC或GCG；Gly的密码子可以从GGU或GGA修饰为GGC或GGG。在其他情况下，尽管不能从密码子中消除A或U核苷酸，但是可以通过使用含有较低含量的A和/或U核苷酸的密码子来降低A和U含量。这些实例为：Phe的密码子可以从UUU修饰为UUC；Leu的密码子可以从UUA、UUG、CUU或CUA修饰为CUC或CUG；Ser的密码子可以从UCU或UCA或AGU修饰为UCC、UCG或AGC；Tyr的密码子可以从UAU修饰为UAC；Cys的密码子可以从UGU修饰为UGC；His的密码子可以从CAU修饰为CAC；Gln的密码子可以从CAA修饰为CAG；Ile的密码子可以从AUU或AUA修饰为AUC；Thr的密码子可以从ACU或ACA修饰为ACC或ACG；Asn的密码子可以从AAU修饰为AAC；Lys的密码子可以从AAA修饰为AAG；Val的密码子可以从GUU或GUA修饰为GUC或GUG；Asp的密码子可以从GAU修饰为GAC；Glu的密码子可以从GAA修饰为GAG；终止密码子UAA可以修饰为UAG或UGA。另一方面，在Met(AUG)和Trp(UGG)的密码子的情况下，没有进行序列修饰的可能性。以上列出的替代可以单独使用或以所有可能的组合使用，以增加本发明的人工核酸序列，优选RNA序列(或本文定义的任何其他核酸序列)与其特定的野生型核酸序列(即原始序列)相比的G/C含量。因此，例如可以将野生型序列中出现的所有Thr密码子修饰为ACC(或ACG)。但是，优选地，例如，使用上述替代可能性的组合：

将原始序列(野生型RNA)中编码Thr的所有密码子替代为ACC(或ACG)和

将原始编码Ser的所有密码子替代为UCC(或UCG或AGC)；将原始序列中编码Ile的所有密码子替代为AUC和

将原始编码Lys的所有密码子替代为AAG和

将原始编码Tyr的所有密码子替代为UAC；将原始序列中编码Val的所有密码子替代为GUC(或GUG)和

将原始编码Glu的所有密码子替代为GAG和

将原始编码Ala的所有密码子替代为GCC(或GCG)和

将原始编码Arg的所有密码子替代为CGC(或CGG)；将原始序列中编码Val的所有密码子替代为GUC(或GUG)和

将原始编码Glu的所有密码子替代为GAG和

将原始编码Ala的所有密码子替代为GCC(或GCG)和

将原始编码Gly的所有密码子替代为GGC(或GGG)和

将原始编码Asn的所有密码子替代为AAC；将原始序列中编码Val的所有密码子替代为GUC(或GUG)和

将原始编码Phe的所有密码子替代为UUC和

将原来编码Cys的所有密码子替代为UGC和

将原始编码Leu的所有密码子替代为CUG(或CUC)和

将原始编码Gln的所有密码子替代为CAG和

将原始编码Pro的所有密码子替代为CCC(或CCG)；等。

优选地，与编码相同目的(多)肽或蛋白质的野生型核酸(RNA)的编码序列的G/C含量相比，本发明的人工核酸分子(RNA)的编码序列的G/C含量可以增加至少7％，更优选增加至少15％，特别优选增加至少20％。

根据优选的实施方案，在编码目的(多)肽或蛋白质或野生型核酸(RNA)序列的整个序列的区域中，可替代密码子的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％，更优选至少70％，甚至更优选至少80％，最优选至少90％、95％或甚至100％可以被替代，从而增加所得“G/C修饰的”序列的G/C含量。

在这种情况下，与野生型核酸(RNA)序列相比，特别优选将人工核酸分子(RNA)，优选其至少一个编码序列的G/C含量增加到最大值(即100％的可替代密码子)。

罕见密码子的替代

人工核酸分子(RNA)的另一优选修饰基于以下发现：翻译效率也由细胞中tRNA出现的不同频率决定。因此，如果所谓的“罕见密码子”以增加的程度存在于人工核酸分子(RNA)中，则相应的修饰的核酸(RNA)序列的翻译效率不如包含编码相对“常见”的tRNA密码子的核酸(RNA)序列。

因此，在一些优选的实施方案中，在本发明的经修饰的人工核酸分子(RNA)中，与相应的野生型核酸(RNA)的编码区相比，编码区被修饰，以使得将编码细胞中相对罕见的tRNA的野生型序列的至少一个密码子被替代为编码细胞中相对常见并运载与相对罕见的tRNA相同的氨基酸的tRNA的密码子。

由此，对本发明的人工核酸分子(RNA)的序列进行修饰，以使得可以插入常见可用的tRNA的密码子。

因此，可以将编码在细胞中相对罕见tRNA的野生型核酸(RNA)序列的所有密码子在每种情况下替换为编码在细胞中相对常见并在每种情况下运载与相对罕见tRNA相同的氨基酸的tRNA的密码子。细胞中特定tRNA的频率是本领域技术人员众所周知的；参见例如Akashi，Curr.Opin.Genet.2001年12月，11(6)：660-666。特别优选在(人)细胞中针对给定氨基酸(例如Gly)募集最频繁的tRNA的密码子。

根据本发明，特别优选将修饰的(优选增加的，更优选最大化的)G/C与如上所述的“常见”密码子的使用相组合，而不修饰由所述人工核酸分子(RNA)的编码序列编码的氨基酸序列。这种“组合”修饰优选导致提高的翻译效率和所得经修饰的人工核酸分子(RNA)的稳定化。

可以借助WO 02/098443中所述的计算机程序提供具有本文所述序列修饰(例如，增加的G/C含量和tRNA的替换)的经修饰的人工核酸分子(RNA)，其公开内容包括在本发明的全部范围内。使用该计算机程序，可以在计算机上修饰任何所需核酸，特别是RNA的核苷酸序列，以获得修饰的人工核酸分子(RNA)，其核酸(RNA)序列具有最大的G/C含量，并且密码子募集常见的tRNA，同时编码与相应野生型核酸(RNA)序列相同(未修饰)的氨基酸序列。

或者，与参考序列相比，也可以单独地改变G/C含量或密码子选用。WO 02/098443中也描述了Visual Basic 6.0中的源代码(使用的开发环境：具有Servicepack 3的Microsoft Visual Studio企业版6.0)。

A/U含量修饰

根据另外的优选实施方案，与在相应的野生型核酸(RNA)的核糖体结合位点处或附近的A/U含量相比，本发明的人工核酸分子(RNA)的核糖体结合位点处或附近的A/U含量增加。增加核糖体结合位点周围的A/U含量可优选增强核糖体结合效率。核糖体与核糖体结合位点(Kozak序列)的有效结合优选地促进了人工核酸分子(RNA)的有效翻译。

DSE修饰

根据另外的优选实施方案，可以针对潜在的不稳定序列元件对人工核酸分子(RNA)进行修饰。特别地，所述人工核酸分子(RNA)的编码序列和/或5′和/或3′非翻译区可以通过去除任何不稳定序列元件(DSE)而与相应的野生型核酸(RNA)相比进行修饰，而修饰的人工核酸分子(RNA)的编码氨基酸序列与其相应的野生型核酸(RNA)相比优选不进行修饰。

真核RNA可包含不稳定序列元件(DSE)，其可在体内吸引介导核酸分子(RNA)酶促降解的信号蛋白。示例性DSE包含例如富含AU的序列(AURES)，其出现在许多不稳定RNA的3′-UTR中(Caput等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1986，83：1670至1674)。该术语还涵盖被可能的内切核酸酶识别的那些序列基序例如序列GAACAAG，其包含在编码转铁蛋白受体的基因的3′-UTR片段中(Binder等人，EMBO J.1994，13：1969至1980)。

通过从本发明的人工核酸分子(RNA)的核酸序列，特别是从其编码区和/或其3′-UTR元件和/或5′-UTR元件中去除或基本上去除这种DSE，优选地使人工核酸酸分子(RNA稳定化。

因此，与相应的野生型核酸(RNA)相比，本发明的人工核酸分子(RNA)可以被修饰，使得所述人工核酸分子(RNA)没有不稳定序列元件(DSE)。

适应于人类密码子选用的序列：

本发明的人工核酸(RNA)分子的进一步优选的修饰基于以下发现：编码相同氨基酸的密码子通常以不同的频率出现。

根据另外的优选实施方案，在修饰的人工核酸分子(RNA)中，与相应的野生型核酸(RNA)的相应区域相比，对编码序列进行修饰，以使得编码相同氨基酸的密码子的频率根据人类密码子选用而对应于该密码子的自然出现频率，例如如表2所示。

例如，野生型核酸分子(RNA)的编码序列可以以以下方式进行调整：密码子“GCC”(Ala)的使用频率为0.40、密码子“GCT”(Ala)的使用频率为0.28、密码子“GCA”(Ala)的使用频率为0.22、密码子“GCG”(Ala)的使用频率为0.10等(参见表2)。

表2：人类密码子选用表

*：最常见的密码子

密码子优化的序列：

如上所述，在本发明的优选实施方案中，可以将编码相对罕见的tRNA的野生型核酸序列的所有密码子替代为编码相对常见的运载与相对罕见tRNA相同的氨基酸的tRNA的密码子。

特别优选将最常见的密码子用于每个编码的氨基酸(参见表2，最常见的密码子用星号标记)。这种优化程序增加了密码子适应指数(CAI)并最终使CAI最大化。在本发明的上下文中，具有增加或最大化的CAI的核酸(RNA)序列通常被称为“密码子优化的”核酸(RNA)序列和/或“CAI增加的”核酸(RNA)序列和/或“CAI最大化的”核酸(RNA)序列。根据优选的实施方案，本发明的人工核酸分子(RNA)包含至少一个编码序列，其中该编码序列是如本文所述的密码子优化的。更优选地，至少一个编码序列的密码子适应指数(CAI)可以为至少0.5、至少0.8、至少0.9或至少0.95。最优选地，至少一个编码序列的密码子适应指数(CAI)可以是1。

例如，野生型核酸分子(RNA)的编码序列可以以最常见的(人)密码子总是用于每个编码的氨基酸的方式进行调整，例如用于Ala的“GCC”或用于Cys的“TGC”。

C优化序列：

根据优选的实施方案，通过改变，优选增加其核酸(RNA)序列，特别是其至少一个编码序列中的胞嘧啶(C)含量来修饰人工核酸分子(RNA)。

在优选的实施方案中，与相应的野生型(未修饰的)核酸(RNA)的编码序列的C含量相比，本发明的人工核酸分子(RNA)的编码序列的C含量改变，优选增加。与由相应的野生型核酸(RNA)编码的氨基酸序列相比，由本发明的人工核酸分子(RNA)的至少一个编码序列编码的氨基酸序列优选不改变。

在优选的实施方案中，可以对所述修饰的人工核酸分子(RNA)进行修饰，以获得理论上可能的最大胞嘧啶含量的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％、或至少90％或甚至最大胞嘧啶含量。

在其他优选的实施方案中，“胞嘧啶含量可优化”的野生型核酸(RNA)序列的密码子的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或甚至100％被其中胞嘧啶含量高于野生型序列中存在的胞嘧啶含量的密码子所替代。

在其他优选的实施方案中，野生型编码序列的一些密码子可以另外被修饰，使得细胞中相对罕见的tRNA的密码子被细胞中相对常见的tRNA的密码子替换，条件是相对常见的tRNA的替换密码子运载与原始野生型密码子的相对罕见的tRNA相同的氨基酸。优选地，除仅由不含任何胞嘧啶的密码子编码的编码氨基酸的密码子之外，或除由两个密码子编码，每个密码子含有相同数量的胞嘧啶的谷氨酰胺(Gln)的密码子之外，细胞中所有相对罕见的tRNA的密码子都可以被相对常见的tRNA的密码子替代。

在本发明的其他优选实施方案中，修饰的人工核酸分子(RNA)被修饰，以使得通过编码细胞中相对常见的tRNA的密码子来达到理论上可能的最大胞嘧啶含量的至少80％或至少90％，或者甚至最大胞嘧啶含量，其中由至少一个编码区编码的氨基酸序列保持不变。

由于遗传密码的天然简并性，一个以上的密码子可以编码特定的氨基酸。因此，在20种天然存在的氨基酸中，有18种由一个以上的密码子编码(Tryp和Met除外)，例如由2个密码子编码(例如Cys、Asp、Glu)、由3个密码子编码(例如Ile)、由4个密码子编码(例如Al、Gly、Pro)或由6个密码子编码(例如Leu、Arg、Ser)。但是，并非所有编码相同氨基酸的密码子在体内条件下都以相同的频率使用。根据每个单一生物体，建立典型的密码子选用简况。

术语“胞嘧啶含量可优化的密码子”是指与编码相同氨基酸的其他密码子相比，胞嘧啶含量更低的密码子。因此，可以被编码相同氨基酸并且在密码子中表现出更高的胞嘧啶数量的另一个密码子替代的任何野生型密码子都可以被视为胞嘧啶可优化的(C可优化的)。野生型编码序列内用特定的C可优化密码子对C可优化的野生型密码子进行的任何此类替代均会增加其总体C含量，并反映出富含C的修饰核酸(RNA)序列。

根据一些优选的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子，特别是在其至少一个编码序列中，包含或组成为C最大化的序列，该C最大化的序列包含针对所有潜在的C可优化密码子的C优化密码子。因此，在编码序列的整个长度上，100％或所有理论上可替代的C可优化密码子可优选被C优化密码子替代。

在这种情况下，胞嘧啶含量可优化的密码子是与编码相同氨基酸的其他密码子相比含有更少数量的胞嘧啶的密码子。

密码子GCG、GCA、GCU中的任何密码子都编码氨基酸Ala，其可以被编码相同氨基酸的密码子GCC替换，和/或

编码Cys的密码子UGU可以被编码相同氨基酸的密码子UGC替换，和/或

编码Asp的密码子GAU可以被编码相同氨基酸的密码子GAC替换，和/或

编码Phe的密码子UUU可以被编码相同氨基酸的密码子UUC替换，和/或

编码Gly的密码子GGG、GGA、GGU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子GGC替换，和/或

编码His的密码子CAU可以被编码相同氨基酸的密码子CAC替换，和/或

编码Ile的密码子AUA、AUU中的任何密码子可以被密码子AUC替换，和/或

编码Leu的密码子UUG、UUA、CUG、CUA、CUU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子CUC替换，和/或

编码Asn的密码子AAU可以被编码相同氨基酸的密码子AAC替换，和/或

编码Pro的密码子CCG、CCA、CCU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子CCC替换，和/或

编码Arg的密码子AGG、AGA、CGG、CGA、CGU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子CGC替换，和/或

编码Ser的密码子AGU、AGC、UCG、UCA、UCU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子UCC替换，和/或

编码Thr的密码子ACG、ACA、ACU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子ACC替换，和/或

编码Val的密码子GUG、GUA、GUU中的任何密码子可以被编码相同氨基酸的密码子GUC替换，和/或

编码Tyr的密码子UAU可以被编码相同氨基酸的密码子UAC替换。

在以上任何情况下，每个替换的密码子使胞嘧啶的数量增加1。替换编码序列的所有非C优化的密码子(对应于C可优化的密码子)产生“C最大化”的编码序列。在本发明的上下文中，本发明的人工核酸(RNA)分子的至少一个编码序列中的至少70％，优选至少80％，更优选至少90％的非C优化的密码子可以被C优化的密码子替代。

可优选的是，对于某些氨基酸，被C优化的密码子替代的C可优化的密码子的百分比小于70％，而对于其他氨基酸，替代密码子的百分比可以高于70％，以满足C优化的总百分比为编码序列的所有C可优化的野生型密码子的至少70％。

优选地，在“C优化”的人工核酸(RNA)分子中，对于任何给定氨基酸，至少50％的C可优化的野生型密码子被C优化的密码子替代，例如任何修饰的富含C核酸(RNA)分子优选在编码上述氨基酸Ala、Cys、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val和Tyr中的任一种的C可优化的野生型密码子位置处包含至少50％，优选至少60％的C优化的密码子。

在这种情况下，可以使用编码不是胞嘧啶含量可优化的，但是其由至少两个密码子编码的氨基酸的密码子而无需任何进一步的选择过程。然而，编码细胞例如人类细胞中相对罕见的tRNA的野生型序列的密码子可以被替换为编码细胞中相对常见的tRNA的密码子，其中两者编码相同的氨基酸。

因此，编码Glu的相对罕见的密码子GAA可以被编码相同氨基酸的相对常见的密码子GAG替换，和/或

编码Lys的相对罕见的密码子AAA可以被编码相同氨基酸的相对常见的密码子AAG替换，和/或

编码Gln的相对罕见的密码子CAA可以被编码相同氨基酸的相对常见的密码子CAG替换。

在这种情况下，分别仅由一个密码子编码的氨基酸Met(AUG)和Trp(UGG)保持不变。终止密码子不进行胞嘧啶含量优化，但是相对罕见的琥珀终止密码子、赭石终止密码子(UAA，UAG)可以被相对常见的蛋白石终止密码子(UGA)替换。

与相应的野生型核酸(RNA)序列相比，上面列出的单个替换可以单独使用并且可以以所有可能的组合使用，以优化修饰的人工核酸分子(RNA)的胞嘧啶含量。

因此，与相应的野生型核酸(RNA)序列的编码序列相比，本文定义的至少一个编码序列可以被修饰，使得密码子被替换为包含额外的胞嘧啶并编码相同氨基酸的C优化密码子，即编码的氨基酸序列与编码的野生型氨基酸序列相比优选未改变。

根据特别优选的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子包含(除了本文指定的5’UTR元件和3’UTR元件之外)至少一种本文定义的编码序列，其中(a)所述人工核酸(RNA)分子的至少一个编码序列的G/C含量与相应的野生型核酸(RNA)的编码序列的G/C含量相比增加，和/或(b)其中所述人工核酸分子(RNA)的至少一个编码序列的C含量与相应的野生型核酸(RNA)的编码序列的C含量相比增加，和/或(c)其中所述人工核酸(RNA)分子的至少一个编码序列中的密码子适应于人类密码子选用，其中所述人工核酸(RNA)分子的至少一个编码序列中的密码子适应指数(CAI)优选增加或最大化，且其中由所述人工核酸(RNA)分子编码的氨基酸序列与由相应的野生型核酸(RNA)编码的氨基酸序列相比优选未改变。

修饰的核酸序列

上述序列修饰通常可应用于本文所述的任何核酸(RNA)序列，并且特别设想应用于包含或组成为编码本文所定义的目的(多)肽或蛋白质的核酸序列的编码序列。如果合适或必要，修饰(包括化学修饰、脂质修饰和序列修饰)可以以任何组合彼此组合，条件是组合的修饰不相互干扰，并且优选条件是目的编码(多)肽或蛋白质优选是功能性的，即表现出期望的生物特性或发挥期望的生物功能。

因此，在优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含至少一种编码目的(多)肽或蛋白质的编码序列，其中所述编码序列如上所述被修饰。

因此，在一些优选的实施方案中，根据本发明的人工核酸(RNA)分子包含至少一个如本文所定义的5’UTR元件、至少一个如本文所定义的3’UTR元件和编码目的(多)肽或蛋白质的编码序列，其中所述人工核酸(RNA)分子包含或组成为根据SEQ ID NO：50至368的核酸序列或所述序列中的任一种的变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

5′帽

根据本发明的另外的优选实施方案，修饰的人工核酸(RNA)分子通过添加所谓的“5′帽”来修饰，这样可以优选地使所述人工核酸(RNA)分子稳定化。

“5′-帽”是实体，通常是修饰的核苷酸实体，其通常在成熟mRNA的5′-端“加帽”。5′-帽通常可以由修饰的核苷酸，特别是由鸟嘌呤核苷酸的衍生物形成。优选地，5′-帽通过5′-5′-三磷酸键连接至5′末端。5′帽可被甲基化，例如m7GpppN，其中N是带有5′-帽的核酸的5′末端核苷酸，通常是mRNA的5′-端。m7GpppN是5′-帽结构，其天然存在于由聚合酶II转录的mRNA中，因此在这种情况下，优选不被视为修饰的mRNA中所包含的“修饰”。因此，“修饰的”人工核酸(RNA)分子(或本文定义的任何其他核酸，特别是RNA)可包含m7GpppN作为5′-帽，但另外地，所述修饰的人工核酸(RNA)分子(或其他核酸)通常包含至少一种本文定义的其他修饰。

5′帽结构的其他实例包括甘油基、反向脱氧无碱基残基(部分)、4′，5′亚甲基核苷酸、1-(β-D-赤型呋喃核糖基)核苷酸、4′-硫代核苷酸、碳环核苷酸、1，5-脱水己糖醇核苷酸、L-核苷酸、α-核苷酸、修饰的碱基核苷酸、苏型戊呋喃核糖核苷酸、无环3′，4′-断核苷酸、无环3，4-二羟基丁基核苷酸、无环3，5-二羟基戊基核苷酸、3′-3′-反向核苷酸部分、3′-3′反向无碱基部分、3′-2′反向核苷酸部分、3′-2′反向无碱基部分、1，4-丁二醇磷酸酯、3′-氨基磷酸酯、磷酸己酯、氨基己基磷酸酯、3′-磷酸酯、3′-硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或桥连或非桥连的甲基膦酸酯部分。在这种情况下，这些修饰的5′-帽结构被视为至少一种修饰。

特别优选的修饰的5′-帽结构是帽1(m7G的相邻核苷酸的核糖被甲基化)、帽2(m7G下游的第2个核苷酸的核糖被额外甲基化)、帽3(m7G下游的第3个核苷酸的核糖被额外甲基化)、帽4(m7G下游的第4个核苷酸的核糖被甲基化)、ARCA(抗反向帽类似物)、修饰的ARCA(例如硫代磷酸酯修饰的ARCA)、肌苷、N1-甲基-鸟苷、2′-氟代-鸟苷、7-脱氮-鸟苷、8-氧代-鸟苷、2-氨基-鸟苷、LNA-鸟苷和2-叠氮基-鸟苷。

根据优选的实施方案，人工核酸在与RNA5′端帽结构(帽-1)相邻的第一个核苷酸的核糖-2′-O位的2′-O位包含甲基。通常，甲基化可以通过帽2′-O-甲基转移酶的作用来实现，其利用m7GpppN加帽的人工核酸(优选RNA)作为底物，S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基化加帽的RNA(帽-0)的甲基供体，从而形成帽-1结构。据报道，帽-1结构增强mRNA翻译效率，因此可以帮助改善本文所述的本发明人工核酸，优选RNA的表达效率。

聚腺苷酸

根据另外的优选实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子可以包含聚腺苷酸序列。

术语“聚腺苷酸序列”也称为“聚腺苷酸尾”或“3′-聚腺苷酸尾”，指腺苷核苷酸的序列，例如最多约400个腺苷核苷酸，例如约20个至约400个，优选约50个至约400个，更优选约50个至约300个，甚至更优选约50个至约250个，最优选约60个至约250个腺苷核苷酸的序列。如本文所用，“聚腺苷酸序列”还可包含约10个至200个腺苷核苷酸，优选约10个至100个腺苷核苷酸，更优选约40个至80个腺苷核苷酸或甚至更优选约50个至70个腺苷核苷酸。聚腺苷酸序列通常位于RNA，特别是mRNA的3′末端。

另外地，在其他优选实施方案中，本发明的人工核酸核酸(RNA)分子可以在其3′末端含有通常约10个至200个腺苷核苷酸，优选约10个至100个腺苷核苷酸，更优选约40个至80个腺苷核苷酸或甚至更优选约50个至70个腺苷核苷酸的聚腺嘌呤尾。

人工核酸(RNA)分子中的聚腺苷酸序列可以优选地由DNA模板通过RNA体外转录获得。或者，也可以通过化学合成的常规方法在体外获得聚腺苷酸序列，而不必从DNA模板转录而来。

此外，可以使用可商购获得的聚腺苷酸化试剂盒和本领域已知的相应方案，通过人工核酸(RNA)分子的酶促聚腺苷酸化来产生聚腺苷酸序列或聚腺苷酸尾。通常将聚腺苷酸化理解为将聚腺苷酸序列添加至核酸(RNA)分子，例如成熟前mRNA。聚腺苷酸化可以通过所谓的聚腺苷酸化信号来诱导。该信号优选位于待聚腺苷酸化的核酸(RNA)序列的3′末端的核苷酸片段内。聚腺苷酸化信号通常包含由腺嘌呤和尿嘧啶/胸腺嘧啶核苷酸组成的六聚体，优选六聚体序列AAUAAA。也可以考虑其他序列，优选六聚体序列。聚腺苷酸化可以例如发生在mRNA前体(也称为成熟前mRNA)的加工过程中。通常，RNA成熟(从mRNA前体到成熟mRNA)包括聚腺苷酸化步骤。

因此，本发明的人工核酸(RNA)分子可以包含聚腺苷酸化信号，其通过特定的蛋白质因子(例如切割和聚腺苷酸化特异性因子(CPSF)、切割刺激因子(CstF)、切割因子I和II(CF I和CF II)、聚腺苷酸聚合酶(PAP))使(转录的)RNA聚腺苷酸化。

在这种情况下，优选包含NN(U/T)ANA共有序列的共有聚腺苷酸化信号。在特别优选的方面，聚腺苷酸化信号包含以下序列之一：AA(U/T)AAA或A(U/T)(U/T)AAA(其中尿苷通常存在于RNA中，而胸苷通常存在于DNA中)。

聚胞苷酸

根据一些实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子可在3′末端包含通常约10个至200个胞嘧啶核苷酸，优选约10个至100个胞嘧啶核苷酸、更优选20至70个胞嘧啶核苷酸，或甚至更优选约20个至60个或甚至10个至40个胞嘧啶核苷酸的聚胞苷酸尾。

组蛋白茎环(组蛋白SL或HSL)

根据一些实施方案，人工核酸(RNA)分子可以包含组蛋白茎环序列/结构。这样的组蛋白茎环序列优选选自WO 2012/019780中公开的组蛋白茎环序列，其公开内容通过引用并入本文。

适用于本发明的组蛋白茎环序列优选选自下式(I)或(II)中的至少一个：

式(I)(不具有茎邻接元件的茎环序列)：

式(II)(具有茎邻接元件的茎环序列)：

其中：

茎1邻接元件或茎2邻接元件N_1-6是1个至6个，优选2个至6个，更优选2个至5个，甚至更优选3个至5个，最优选4个至5个或5个N的连续序列，其中每个N各自彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；

茎1[N_0-2GN_3-5]与元件茎2反向互补或部分反向互补，并且是5个至7个核苷酸的连续序列；

其中N_0-2是0个至2个，优选0个至1个，更优选1个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；

其中N_3-5是3个至5个，优选4个至5个，更优选4个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物，和

其中G是鸟苷或其类似物，并且可以任选地被胞苷或其类似物替代，条件是其在茎2中的互补核苷酸胞苷被鸟苷替代；

环序列[N_0-4(U/T)N_0-4]位于元件茎1和茎2之间，并且是3个至5个核苷酸，更优选4个核苷酸的连续序列；

其中N_0-4彼此独立地是0个至4个，优选地1个至3个，更优选地1个至2个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；和

其中U/T代表尿苷，或任选的胸苷；

茎2[N_3-5CN_0-2]与元件茎1反向互补或部分反向互补，并且是5个至7个核苷酸的连续序列；

其中N_3-5是3个至5个，优选4个至5个，更优选4个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；

其中N_0-2是0个至2个，优选0个至1个，更优选1个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G或C的核苷酸或其核苷酸类似物；和

其中C是胞苷或其类似物，并且可以任选地被鸟苷或其类似物替代，条件是其在茎1中的互补核苷鸟苷被胞苷替代；

其中

茎1和茎2能够彼此碱基配对以形成反向互补序列，其中碱基配对可以发生在茎1和茎2之间，例如通过核苷酸A和U/T或G和C的沃森-克里克碱基配对，或通过非沃森-克里克碱基配对例如摆动碱基配对、反向沃森-克里克碱基配对、胡斯坦碱基配对、反向胡斯坦碱基配对进行，或能够彼此碱基配对形成部分反向互补序列，其中不完全碱基配对可以发生在茎1和茎2之间，基于一个茎中的一个或多于一个碱基在另一个茎的反向互补序列中不具有互补碱基。

根据另一个实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子，可以包含根据以下特定式(Ia)或(IIa)中至少一个的至少一个组蛋白茎环序列：

式(Ia)(不具有茎邻接元件的茎环序列)：

式(IIa)(具有茎邻接元件的茎环序列)：

其中：

N、C、G、T和U如上所述。

根据另一个实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子，可以包含根据以下特定式(Ib)或(IIb)中至少一个的至少一个组蛋白茎环序列：

式(Ib)(不具有茎邻接元件的茎环序列)：

式(IIb)(具有茎邻接元件的茎环序列)：

其中：

N、C、G、T和U如上所述。

特别优选的组蛋白茎环序列是序列CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA(SEQ ID NO：37)，或更优选是相应的RNA序列CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA(SEQ ID NO：38)。

构建体

包含本文定义的至少一个5′UTR元件、至少一个3′UTR元件和任选的至少一种编码序列的本发明的人工核酸(RNA)分子可以任选地还包含至少一个组蛋白茎环、聚腺苷酸序列和/或聚胞苷酸序列。这些元件可以沿着人工核酸(RNA)分子的序列以5′到3′的任何顺序出现在人工核酸(RNA)分子中。

另外，本发明的人工核酸(RNA)分子可包含本文所述的其他元件，例如本文定义的稳定化序列(例如衍生自球蛋白基因的UTR)、IRES序列等。每个元件也可在本发明的人工核酸(RNA)分子中重复至少一次(特别是在双顺反子或多顺反子构建体中)，例如两次或多于两次。例如，单个元件可以按以下顺序存在于本发明的人工核酸分子，优选RNA中：

5′-编码序列-组蛋白茎环-聚腺苷酸/胞苷酸序列-3′；或

5′-编码序列-聚腺苷酸/胞苷酸序列-组蛋白茎环-3′；或

5′-编码序列-组蛋白茎环-聚腺苷酸化信号-3′；或

5′-编码序列-聚腺苷酸化信号-组蛋白茎环-3′；或

5′-编码序列-组蛋白茎环-组蛋白茎环-聚腺苷酸/胞苷酸序列-3′；或

5′-编码序列-组蛋白茎环-组蛋白茎环-聚腺苷酸化信号-3′；或

5′-编码序列-稳定化序列-聚腺苷酸/胞苷酸序列-组蛋白茎环-3′；或

5′-编码序列-稳定化序列-聚腺苷酸/胞苷酸序列-聚腺苷酸/胞苷酸序列-组蛋白茎环-3′；等。

根据另外的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子任选地还可以包含以下结构元件中的至少一个：组蛋白-茎环结构，优选在其3′非翻译区中的组蛋白-茎环；5′帽结构；聚腺苷酸尾；和/或聚胞苷酸序列。

具体而言，本发明的人工核酸核酸(RNA)分子可以优选在5′至3′方向上包含以下元件：

a)5′-帽结构，优选m7GpppN或帽1

b)5′-UTR元件，其包含或组成为衍生自如本文定义的5′-UTR的核酸序列，优选包含对应于根据SEQ ID NO：1至22的核酸序列、或其同源物、片段或变体；

c)至少一个本文定义的编码序列；

d)3′-UTR元件，其包含或组成为衍生自如本文定义的3′-UTR的核酸序列，优选包含对应于根据SEQ ID NO：23至36的核酸序列、或其同源物、片段或变体，

e)任选地，聚腺苷酸尾，其优选由10个至1000个、10个至500个、10个至300个、10个至200个、10个至100个、40个至80个或50个至70个腺苷核苷酸组成，

f)任选地，聚胞苷酸尾，其优选由10个至200个、10个至100个、20个至70个、20个至60个或10个至40个胞嘧啶核苷酸组成，和

g)任选地，组蛋白茎环。

优选的人工核酸构建体在下面详细讨论。

HSD17B4衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自HSD17B4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：54至60中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NDUFA4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自PSMB3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：188至193中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自SLC7A3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自PSMB3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：313至319中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NOSIP基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自PSMB3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：229至235中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件和GNAS衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NOSIP基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：250至256中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

MP68衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自MP68基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自PSMB3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：145至151中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

MP68衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自MP68基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：152至158中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

MP68衍生的5′UTR元件和GNAS衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自MP68基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：166至172中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

UBQLN2衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自UBQLN2基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：362至368中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ASAH1衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ASAH1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：96至102中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

HSD17B4衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自HSD17B4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：89至95中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

HSD17B4衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自HSD17B4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：61至67中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NOSIP基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：243至249中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，根据本发明的人工核酸包含衍生自NDUFA4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：222至228中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NOSIP基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：257至263中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NDUFA4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：201至207中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NDUFA4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：215至221中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ATP5A1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：110至116中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件和GNAS衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自SLC7A3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：334至340中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

HSD17B4衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自HSD17B4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：82至88中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自SLC7A3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：341至347中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自SLC7A3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：348至354中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

TUBB4B衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自TUBB4B基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：355至361中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

RPL31衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自RPL31基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：306至312中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

MP68衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自MP68基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：180至187中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NOSIP基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：264至270中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件和RPS9衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ATP5A1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自RPS9基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：138至144中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ATP5A1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：117至123中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件和GNAS1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ATP5A1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：124-130中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ATP5A1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：131至137中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

ATP5A1衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自ATP5A1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自PSMB3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：103至109中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

HSD17B4衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自HSD17B4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：68至74中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

HSD17B4衍生的5′UTR元件和GNAS1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自HSD17B4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：75至81中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

MP68衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自MP68基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：159至165中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

MP68衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自MP68基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：173至179中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NDUFA4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：194至200中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NDUFA4衍生的5′UTR元件和GNAS1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NDUFA4基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：208至214中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

NOSIP衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自NOSIP基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：236至242中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

RPL31衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自RPL31基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：278至284中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

RPL31衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自RPL31基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：285至291中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

RPL31衍生的5′UTR元件和GNAS1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自RPL31基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自GNAS1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：292至298中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

RPL31衍生的5′UTR元件和NDUFA1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自RPL31基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自NDUFA1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：299至305中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件和CASP1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自SLC7A3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自CASP1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：320至326中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

SLC7A3衍生的5′UTR元件和COX6B1衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自SLC7A3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自COX6B1基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：327至333中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

RPL31衍生的5′UTR元件和PSMB3衍生的3′UTR元件：

在一些优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子包含衍生自RPL31基因或其同源物、片段、变体或衍生物的5′UTR的至少一种5′UTR元件，和衍生自PSMB3基因或其同源物、片段、变体或衍生物的3′UTR的至少一种3′UTR元件；其中所述人工核酸(RNA)分子优选包含或组成为根据SEQ ID NO：271至277中任一项的核酸序列或其同源物、变体、片段或衍生物，特别是与任意这些序列具有按优先级升序排列的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％或甚至97％的序列同一性的核酸序列。

复合

在优选的实施方案中，本发明的至少一种人工核酸(RNA)分子可以以复合形式提供，即与一种或多于一种(聚)阳离子化合物复合或缔合，优选与(聚)阳离子聚合物、(聚)阳离子肽或蛋白质，例如鱼精蛋白、(聚)阳离子多糖和/或(聚)阳离子脂质复合或缔合。在本文中，术语“复合”或“缔合”是指至少一种人工核酸(RNA)分子与一种或多于一种上述化合物基本稳定地结合成更大的复合物或或装配体而通常没有共价结合。

脂质

根据优选的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子与脂质(特别是阳离子脂质和/或中性脂质)复合或缔合以形成一种或多于一种脂质体、脂质复合体(lipoplex)、脂质纳米颗粒或纳米脂质体。

因此，在一些实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子可以以基于脂质的制剂的形式提供，特别是以包含所述人工核酸(RNA)分子的脂质体、脂质复合体和/或脂质纳米颗粒的形式提供。

脂质纳米颗粒

根据一些优选的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子与脂质(特别是阳离子脂质和/或中性脂质)复合或缔合以形成一种或多于一种脂质纳米颗粒。

优选地，脂质纳米颗粒(LNP)可以包含：(a)至少一种本发明的人工核酸(RNA)分子，(b)阳离子脂质，(c)聚集减少剂(例如聚乙二醇(PEG)脂质或PEG改性脂质)，(d)任选的非阳离子脂质(例如中性脂质)和(e)任选的固醇。

在一些实施方案中，除了至少一种本发明的人工核酸(RNA)分子，LNP还可以包含(i)至少一种阳离子脂质；(ii)中性脂质；(iii)固醇例如胆固醇；和(iv)PEG脂质，其摩尔比为约20％至60％阳离子脂质∶5％至25％中性脂质∶25％至55％固醇∶0.5％至15％PEG脂质。

在一些实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子可以被配制成氨基醇类脂质。可用于本发明的氨基醇类脂质可以通过美国专利第8450298号中描述的方法制备，其通过引用整体并入本文。

(i)阳离子脂质

LNP可以包含适合于形成脂质纳米颗粒的任何阳离子脂质。优选地，阳离子脂质在约生理pH下带有净正电荷。

阳离子脂质可以是氨基脂质。如本文所用，术语“氨基脂质”是指包括具有一个或两个脂肪酸或脂肪烷基链和氨基头部基团(包括烷基氨基或二烷基氨基)的脂质，其可以在生理pH下质子化以形成阳离子脂质。

阳离子脂质可以是，例如，N，N-二油酰基-N，N-二甲基氯化铵(DODAC)、N，N-二硬脂基-N，N-二甲基溴化铵(DDAB)、1，2-二油酰基三甲基氯化铵丙烷(DOTAP)(也称为N-(2，3-二油酰氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵和1，2-二油酰氧基-3-三甲基氨基丙烷氯化物盐)、N-(1-(2，3-二油酰氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)、N，N-二甲基-2，3-二油酰氧基)丙胺(DODMA)、1，2-二亚油酰氧基-N，N-二甲基氨基丙烷(DLinDMA)、1，2-二亚麻基氧基-N，N-二甲基氨基丙烷(DLenDMA)、1，2-二-γ-亚麻酰基氧基-N，N-二甲基氨基丙烷(γ-DLenDMA)、1，2-二亚油酰基氨基甲酰基氧基-3-二甲基氨基丙烷(DLin-C-DAP)、1，2-二亚油酰氧基-3-(二甲基氨基)乙酰氧基丙烷(DLin-DAC)、1，2-二亚油酰氧基-3-吗啉基丙烷(DLin-MA)、1，2-二亚油酰基-3-二甲基氨基丙烷(DLinDAP)、1，2-二亚油基硫代-3-二甲基氨基丙烷(DLin-S-DMA)、1-亚油酰基-2-亚油基氧基-3-二甲基氨基丙烷(DLin-2-DMAP)、1，2-二亚油酰氧基-3-三甲基氨基丙烷氯化物盐(DLin-TMA.Cl)、1，2-二亚油酰基-3-三甲基氨基丙烷氯化物盐(DLin-TAP.Cl)、1，2-二亚油酰氧基-3-(N-甲基哌嗪)丙烷(DLin-MPZ)或3-(N，N-二亚油酰氨基)-1，2-丙二醇(DLinAP)、3-(N，N-二油酰氨基)-1，2-丙二醇(DOAP)、1，2-二亚油酰基羰基-3-(2-N，N-二甲基氨基)乙氧基丙烷(DLin-EG-DMA)、2，2-二亚油酰基-4-二甲基氨基甲基-[1，3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)或其类似物、(3aR，5s，6aS)-N，N-二甲基-2，2-二((9Z，12Z)-十八烷基-9，12-二烯基)四氢-3aH-环戊烷基-[d][1，3]二氧五环烷基-5-氨基、(6Z，9Z，28Z，31Z)-庚三十烷基-6，9，28，31-四亚乙基-19-基4-(二甲基氨基)丁酸酯(MC3)、1，1′-(2-(4-(2-((2-(双(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)乙基氮杂二基)-月桂基-2-醇(C_12-200)、2，2-二亚油基-4-(2-二甲基氨基乙基)-[1，3]-二氧戊环(DLin-K-C2-DMA)、2，2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1，3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)、(6Z，9Z，28Z，31Z)-庚三十烷基-6，9，28，31-四亚乙基-19-基4-(二甲基氨基)丁酸酯(DLin-M-C3-DMA)、3-((6Z，9Z，28Z，31Z)-庚三十烷基-6，9，28，3-1-四亚乙基-19-基氧基)-N，N-二甲基丙烷-1-氨基(MC3醚)、4-((6Z，9Z，28Z，31Z)-庚三十烷基-6，9，28，31-四亚乙基-19-基-氧基)-N，N-二甲基-丁-1-胺(MC4醚)、或前述任一种的任意组合。

其他合适的阳离子脂质包括但不限于N，N-二硬脂基-N，N-二甲基溴化铵(DDAB)、3P-(N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基)胆固醇(DC-Chol)、N-(1-(2，3-二油基氧基)丙基)-N-2-(精胺羧酰胺基)乙基)-N，N-二甲基三氟乙酸铵(DOSPA)、双十八烷基胺基糖基羧基精胺(DOGS)、1，2-二油酰基-sn-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1，2-二油酰基-3-二甲基铵基丙烷(DODAP)、N-(1，2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N，N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DMRIE)和2，2-二亚油基-4-二甲基氨基乙基-[1，3]-二氧戊环(XTC)。另外，可以使用阳离子脂质的商业制剂，例如LIPOFECTIN(包括可从GIBCO/BRL获得的DOTMA和DOPE)和LIPOFECTAMINE(包括可从GIBCO/BRL获得的DOSPA和DOPE)。

其他合适的阳离子脂质公开于国际公开第WO 09/086558号、第WO 09/127060号、第WO 10/048536号、第WO 10/054406号、第WO 10/088537号、第WO 10/129709号和第WO2011/153493号；美国专利公开第2011/0256175号、第2012/0128760号和第2012/0027803号；美国专利第8158601号；和Love等人，PNAS，107(5)，1864-69，2010。

其他合适的氨基脂质包括具有替代的脂肪酸基团和其他二烷基氨基的那些，包括其中烷基取代基不同的那些(例如，N-乙基-N-甲基氨基-和N-丙基-N-乙基氨基-)。通常，更容易确定具有较少的饱和酰基链的氨基脂质的尺寸，特别是当出于过滤器灭菌的目的，复合物的尺寸必须小于约0.3微米时。可以使用包含碳链长度为C₁₄至C₂₂的不饱和脂肪酸的氨基脂质。也可以使用其他支架来分离氨基脂质的氨基和脂肪酸或脂肪烷基部分。

在另一个优选的实施方案中，LNP包含根据专利申请PCT/EP2017/064066的具有式(III)的阳离子脂质。在此上下文中，PCT/EP2017/064066的公开内容也通过引用并入本文。

在一些实施方案中，氨基脂质或阳离子脂质具有至少一个可质子化或可去质子化的基团，使得该脂质在处于或低于生理pH(例如pH7.4)的pH下带正电荷，并且在第二pH下，优选在处于或高于生理pH的pH下为中性。当然，应当理解的是，随pH变化的质子的添加或移除是一种平衡过程，并且提及带电荷脂质或中性脂质是指主要物质的性质，而不需要所有的脂质以带电荷或中性形式存在。在本发明中不排除具有多于一个可质子化或可去质子化基团或作为两性离子的脂质。

在一些实施方案中，可质子化的脂质具有约4至约11的可质子化基团的pKa，例如，具有约5至约7的pKa。

LNP可以包含两种或多于两种阳离子脂质。可以选择阳离子脂质以贡献不同的有利性质。例如，可以在LNP中使用性质不同的阳离子脂质，这些性质例如为胺pKa、化学稳定性、血液循环半衰期、组织半衰期、组织净累积、或毒性。特别地，可以选择阳离子脂质，以使得混合LNP的特性比单独脂质的单一LNP的特性更理想。

在一些实施方案中，阳离子脂质以LNP中存在的总脂质的约20摩尔％至约70摩尔％或75摩尔％或约45摩尔％至约65摩尔％或约20摩尔％、25摩尔％、30摩尔％、35摩尔％、40摩尔％、45摩尔％、50摩尔％、55摩尔％、60摩尔％、65摩尔％或约70摩尔％的比例存在。在进一步的实施方案中，LNP包含约25％至约75％以摩尔基准计的阳离子脂质，例如约20％至约70％、约35％至约65％、约45％至约65％、约60％、约50％或约40％以摩尔基准计的阳离子脂质(基于脂质纳米颗粒中脂质的100％总摩尔)。在一些实施方案中，阳离子脂质与核酸的比例为约3至约15，例如约5至约13或约7至约11。

在一些实施方案中，脂质体的阳离子脂质中的氮原子与RNA中的磷酸的摩尔比(N∶P比)可为1∶1至20∶1，如国际公开WO 2013/006825 A1中所述，其通过引用整体并入本文。在其他实施方案中，脂质体的N∶P比可以大于20∶1或小于1∶1。

(ii)中性脂质和非阳离子脂质

“非阳离子脂质”可以是中性脂质、阴离子脂质或两亲性脂质。

中性脂质可以是在生理pH下以不带电荷形式或中性两性离子形式存在的多种脂质中的任何一种。此类脂质包括例如二酰基磷脂酰胆碱、二酰基磷脂酰乙醇胺、神经酰胺、鞘磷脂、二氢鞘磷脂、脑磷脂和脑苷脂。通常通过考虑例如LNP的尺寸和LNP在血流中的稳定性来指导选择本文所述LNP中使用的中性脂质。优选地，中性脂质可以是具有两个酰基的脂质(例如，二酰基磷脂酰胆碱和二酰基磷脂酰乙醇胺)。

在一些实施方案中，中性脂质包含碳链长度为C₁₀至C₂₀的饱和脂肪酸。在其他实施方案中，使用具有碳链长度为C₁₀至C₂₀的单不饱和或双不饱和脂肪酸的中性脂质。另外地，可以使用具有饱和脂肪酸链和不饱和脂肪酸链的混合物的中性脂质。

合适的中性脂质包括但不限于二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、SM、16-0-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰乙醇胺(SOPE)、胆固醇或其混合物。适用于LNP的阴离子脂质包括但不限于磷脂酰甘油、心磷脂、二酰基磷脂酰丝氨酸、二酰基磷脂酸、N-十二烷酰基磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰基磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰基磷脂酰乙醇胺、赖氨酰磷脂酰甘油和其他与中性脂质连接的阴离子修饰基团。

两亲性脂质是指其中脂质物质的疏水部分向疏水相取向，而亲水部分向水相取向的任何合适的物质。这样的化合物包括但不限于磷脂、氨基脂质和鞘脂。代表性的磷脂包括鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基-油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、或二亚油酰磷脂酰胆碱。也可以使用其他缺磷化合物例如鞘脂、鞘糖脂家族、二酰基甘油和β-酰氧基酸。

在一些实施方案中，非阳离子脂质可以以LNP中存在的总脂质的约5摩尔％至约90摩尔％、约5摩尔％至约10摩尔％、约5摩尔％、10摩尔％、15摩尔％、20摩尔％、25摩尔％、30摩尔％、35摩尔％、40摩尔％、45摩尔％、50摩尔％、55摩尔％、60摩尔％、65摩尔％、70摩尔％、75摩尔％、80摩尔％、85摩尔％或约90摩尔％的比例存在。

在一些实施方案中，LNP包含约0％至约15％或45％的以摩尔基准计的中性脂质，例如约3％至约12％或约5％至约10％的中性脂质。例如，LNP可包含约15％、约10％、约7.5％或约7.1％的以摩尔基准计的中性脂质(基于LNP中脂质的100％总摩尔)。

(iii)固醇

固醇可以优选是胆固醇。

固醇可以以LNP中存在的总脂质的约10摩尔％至约60摩尔％或约25摩尔％至约40摩尔％的比例存在。在一些实施方案中，固醇以LNP中存在的总脂质的约10摩尔％、15摩尔％、20摩尔％、25摩尔％、30摩尔％、35摩尔％、40摩尔％、45摩尔％、50摩尔％、55摩尔％或约60摩尔％的比例存在。在一些实施方案中，LNP可以包含约5％至约50％的以摩尔基准计的固醇，例如约15％至约45％、约20％至约40％、约48％、约40％、约38.5％、约35％、约34.4％、约31.5％或约31％的以摩尔基准计的固醇(基于LNP中脂质的100％总摩尔)。

(iv)聚集减少剂

聚集减少剂可以是能够减少聚集的脂质。

此类脂质的实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)改性的脂质、单唾液酸神经节苷脂Gm1和聚酰胺低聚物(PAO)，例如美国专利第6320017号中所述的那些，其全部内容通过引用并入本文。防止在配制过程中发生聚集的具有不带电荷、亲水、构成空间位阻的部分的其他化合物例如PEG、Gm1或ATTA也可以与脂质结合。例如在美国专利第6320017号中描述了ATTA-脂质，在例如美国专利第5820873号、第5534499号和第5885613号中描述了PEG-脂质缀合物，其各自通过引用整体并入。

聚集减少剂可以例如选自聚乙二醇(PEG)-脂质，其包括但不限于PEG-二酰基甘油(DAG)、PEG-二烷基甘油、PEG-二烷氧基丙基(DAA)、PEG-磷脂、PEG-神经酰胺(Cer)或其混合物(例如PEG-Cer₁₄或PEG-Cer₂₀)。PEG-DAA缀合物可以是例如PEG-二月桂酰氧丙基(C₁₂)、PEG-二肉豆蔻基氧丙基(C₁₄)、PEG-二棕榈基氧丙基(C₁₆)或PEG-二硬脂基氧丙基(C₁₈)。其他聚乙二醇化脂质包括但不限于聚乙二醇-二豆蔻酰甘油(C₁₄-PEG或PEG-C₁₄，其中PEG的平均分子量为2000Da)(PEG-DMG)；(R)-2，3-双(十八烷氧基)丙基-1-(甲氧基聚(乙二醇)2000)丙基氨基甲酸酯)(PEG-DSG)；PEG-氨基甲酰基-1，2-二肉豆蔻基氧基丙胺，其中PEG的平均分子量为2000Da(PEG-cDMA)；N-乙酰半乳糖胺((R)-2，3-双(十八烷氧基)丙基-1-(甲氧基聚(乙二醇)2000)丙基氨基甲酸酯))(GalNAc-PEG-DSG)；mPEG(mw2000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)；和聚乙二醇-二棕榈酰甘油(PEG-DPG)。

在一些实施方案中，聚集减少剂是PEG-DMG。在其他实施方案中，聚集减少剂是PEG-c-DMA。

在进一步优选的实施方案中，LNP包含无PEG的PEG-脂质替代物，和/或包含磷脂酰胆碱(PC)替代脂质(例如油酸或其类似物)。

在进一步的优选实施方案中，LNP包含根据专利申请PCT/EP2017/064066的具有式(IV)的聚集减少剂。

LNP组成

LNP的组成尤其可能受到阳离子脂质组分的选择、阳离子脂质饱和度、PEG化性质、所有组分的比例和生物物理参数例如其尺寸的影响。在Semple等人的一个实例中(Semple等人Nature Biotech.201028：172-176；其通过引用整体并入本文)，LNP组成由57.1％阳离子脂质、7.1％二棕榈酰磷脂酰胆碱、34.3％胆固醇和1.4％PEG-c-DMA构成(Basha等人MolTher.2011 19：2186-2200；其通过引用整体并入本文)。

在一些实施方案中，LNP可包含约35％至约45％的阳离子脂质、约40％至约50％的阳离子脂质、约50％至约60％的阳离子脂质和/或约55％至约65％的阳离子脂质。在一些实施方案中，脂质与核酸的比例可以为约5∶1至约20∶1、约10∶1至约25∶1、约15∶1至30∶1和/或至少30∶1。

PEG改性的脂质中的PEG部分的平均分子量可以为约500道尔顿至约8000道尔顿(例如，约1000道尔顿至约4000道尔顿)。在一个优选的实施方案中，PEG部分的平均分子量为约2000道尔顿。

相对于LNP中脂质的每100％总摩尔，聚集减少剂的浓度可以为约0.1摩尔％至约15摩尔％。在一些实施方案中，基于LNP中脂质的总摩尔数，LNP包含少于约3摩尔％、2摩尔％或1摩尔％的PEG化脂质或PEG改性的脂质。在进一步的实施方案中，LNP包含约0.1％至约20％的以摩尔基准计的PEG改性的脂质，例如约0.5％至约10％、约0.5至约5％、约10％、约5％、3.5％、约1.5％、约0.5％或约0.3％的以摩尔基准计的PEG改性的脂质(基于LNP中脂质的100％总摩尔数)。

如下表3所示，不同的LNP具有基于摩尔基准(基于脂质纳米颗粒中脂质的总摩尔数的)计的不同摩尔比的阳离子脂质、非阳离子(或中性)脂质、固醇(例如胆固醇)和聚集减少剂(例如PEG修饰的脂质)。在优选的实施方案中，本发明的脂质纳米颗粒制剂基本上由摩尔比为约20％至70％阳离子脂质∶5％至45％中性脂质∶20％至55％胆固醇∶0.5％至15％PEG改性的脂质，更优选摩尔比为约20％至60％阳离子脂质∶5％至25％中性脂质∶25％至55％胆固醇∶0.5％至15％PEG改性的脂质的脂质混合物组成。

表3：基于脂质的制剂

在一些实施方案中，LNP可以以脂质体或脂质复合体的形式存在，如下文进一步详述。

LNP尺寸

在一些实施方案中，LNP具有约50nm至约300nm，例如约50nm至约250nm，例如约50nm至约200nm的中值直径尺寸。

在一些实施方案中，可以使用较小的LNP。此类颗粒的直径可以为小于0.1um至最大100nm，例如但不限于为小于0.1um、小于1.0um、小于5um、小于10um、小于15um、小于20um、小于25um、小于30um、小于35um、小于40um、小于50um、小于55um、小于60um、小于65um、小于70um、小于75um、小于80um、小于85um、小于90um、小于95um、小于100um、小于125um、小于150um、小于175um、小于200um、小于225um、小于250um、小于275um、小于300um、小于325um、小于350um、小于375um、小于400um、小于425um、小于450um、小于475um、小于500um、小于525um、小于550um、小于575um、小于600um、小于625um、小于650um、小于675um、小于700um、小于725um、小于750um、小于775um、小于800um、小于825um、小于850um、小于875um、小于900um、小于925um、小于950um、小于975um。在另一个实施方案中，可以使用较小的LNP来递送核酸，该LNP的直径可以为约1nm至约100nm、约1nm至约10nm、约1nm至约20nm、约1nm至约30nm、约1nm至约40nm、约1nm至约50nm、约1nm至约60nm、约1nm至约70nm、约1nm至约80nm、约1nm至约90nm、约5nm至约100nm、约5nm至约10nm、约5nm至约20nm、约5nm至约30nm、约5nm至约40nm、约5nm至约50nm、约5nm至约60nm、约5nm至约70nm、约5nm至约80nm、约5nm至约90nm、约10nm至约50nm、约20nm至约50nm、约30nm至约50nm、约40nm至约50nm、约20nm至约60nm、约30nm至约60nm、约40nm至约60nm、约20nm至约70nm、约30nm至约70nm、约40nm至约70nm、约50nm至约70nm、约60nm至约70nm、约20nm至约80nm、约30nm至约80nm、约40nm至约80nm、约50nm至约80nm、约60nm至约80nm、约20nm至约90nm、约30nm至约90nm、约40nm至约90nm、约50nm至约90nm、约60nm至约90nm、和/或约70nm至约90nm。

在一些实施方案中，LNP的直径大于100nm、大于150nm、大于200nm、大于250nm、大于300nm、大于350nm、大于400nm、大于450nm、大于500nm、大于550nm、大于600nm、大于650nm、大于700nm、大于750nm、大于800nm、大于850nm、大于900nm、大于950nm、或大于1000nm。

在其他实施方案中，LNP具有单峰粒度分布(即，它们不是双模或多模的)。

其他组分

除上述那些之外，LNP还可包含一种或多于一种脂质和/或其他组分。

出于多种目的，脂质体组合物中可包括其他脂质，例如以防止脂质氧化或将配体连接到脂质体表面上。LNP中可存在任意多种脂质，包括两亲脂质、中性脂质、阳离子脂质和阴离子脂质。这些脂质可以单独或组合使用。

LNP中可存在的其他组分包括双层稳定化组分，例如聚酰胺低聚物(参见例如美国专利第6320017号，其通过引用整体并入本文)、肽、蛋白质和去污剂。

脂质体

在一些实施方案中，将本发明的人工核酸(RNA)分子配制成脂质体。

基于阳离子脂质的脂质体能够通过静电相互作用与带负电荷的核酸(例如RNA)复合，从而形成具有生物相容性、低毒性以及体内临床应用所需的大规模生产的复合物。脂质体可以与质膜融合，从而被摄取；一旦脂质体进入细胞内，脂质体就通过内吞途径被处理，然后核酸从内体/载体释放到细胞质中。鉴于脂质体基本上是生物膜的类似物，并且可以由天然和合成的磷脂制备，脂质体具有优异的生物相容性，因此长期以来被认为是药物递送的载体(Int J Nanomedicine.2014；9：1833-1843)。

脂质体通常可以由脂质双层组成，该脂质双层可以由阳离子脂质、阴离子脂质或中性(磷脂)脂质和胆固醇构成，该脂质双层包围水性核。脂质双层和水性空间均可分别掺入疏水化合物或亲水化合物。脂质体可具有一个或多于一个脂质膜。脂质体可以是单层的(称为单层脂质体)，也可以是多层的(称为多层脂质体)。

通过在脂质体表面添加亲水性聚合物涂层例如聚乙二醇(PEG)可以改变脂质体体内特性和行为，以赋予空间稳定性。此外，通过将配体(例如抗体、肽和碳水化合物)附着于LNP表面或附着于所附PEG链的末端，脂质体可用于特异性靶向(Front Pharmacol.2015年12月1日；6：286)。

脂质体通常可以以球形囊泡形式存在，尺寸为20nm至几微米。

脂质体可以具有不同的大小，例如但不限于多层囊泡(MLV)，其直径可为数百纳米并且可包含一系列由狭窄的水性区室分隔开的同心双层；小单层囊泡(SUV)，其直径可以小于50nm；和大单层囊泡(LUV)，其直径可以为50nm至500nm。脂质体设计可包括但不限于调理素或配体，以改善脂质体对不健康组织的附着、或激活例如但不限于胞吞作用的事件。脂质体可以包含低或高pH以改善药物制剂的递送。

作为非限制性实例，脂质体例如合成膜囊泡可以通过美国专利公开第US20130177638号、第US20130177637号、第US20130177636号、第US20130177635号、第US20130177634号、第US20130177633号、第US20130183375号、第US20130183373号和第US20130183372号中描述的方法、设备和装置来制备，其内容均通过引用整体并入本文。至少一种本发明的人工核酸(RNA)分子可以被脂质体包封和/或可以包含在水性核中，该水性核随后可以被脂质体包封(参见国际公开第WO2012031046号、第WO2012031043号、第WO2012030901号和第WO2012006378号以及美国专利公开第US20130189351号、第US20130195969号和第US20130202684号；其内容通过引用整体并入本文)。

在一些实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子可以配制在脂质体中，该脂质体例如但不限于DiLa2脂质体(Marina Biotech，Bothell，WA)、

(MarinaBiotech，Bothell，WA)、基于中性DOPC(1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)的脂质体(例如用于卵巢癌的siRNA递送)(Landen等人Cancer Biology&Therapy 20065(12)1708-1713)；其通过引用整体并入本文)和透明质酸包覆的脂质体(Quiet Therapeutics，以色列)。

脂质复合体(Lipoplex)

在一些实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子被配制成脂质复合体，即夹在核酸层之间的阳离子脂质双层。

阳离子脂质例如DOTAP、(1，2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷)和DOTMA(N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基甲基硫酸铵)可以与带负电荷的核酸通过静电相互作用形成复合体或脂质复合体，以形成纳米颗粒，从而提供较高的体外转染效率。

纳米脂质体

在一些实施方案中，将本发明的人工核酸(RNA)分子配制成中性的基于脂质的纳米脂质体，例如基于1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(DOPC)的纳米脂质体(Adv DrugDeliv Rev.2014年二月；66：110-116.)。

乳液

在一些实施方案中，将本发明的人工核酸(RNA)分子配制成乳液。在另一个实施方案中，将所述人工核酸(RNA)分子配制于阳离子水包油乳液中，其中乳液颗粒包含油核心和阳离子脂质，阳离子脂质可以与核酸相互作用从而将分子锚定到乳液颗粒上(参见国际公开第WO2012006380号；其通过引用整体并入本文)。在一些实施方案中，将所述人工核酸(RNA)分子配制于油包水乳液中，该油包水乳液包含其中分散有亲水相的连续疏水相。作为非限制性实例，可以通过国际公开第WO201087791号中描述的方法制备乳液，其通过引用整体并入本文。

(聚)阳离子化合物和载体

在优选的实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子与阳离子化合物或聚阳离子化合物(“(聚)阳离子化合物”)和/或聚合物载体复合或缔合。

术语“(聚)阳离子化合物”通常是指带电荷的分子，其通常在1至9的pH值下，优选等于或小于9的pH值(例如5至9)、等于或小于8的pH值(例如5至8)、等于或小于7的pH值(例如5至7)下，最优选生理pH(例如7.3至7.4)下带正电荷(阳离子)。

因此，“(聚)阳离子化合物”可以是在生理条件下，特别是在体内生理条件下带正电荷的任何带正电荷的化合物或聚合物，优选阳离子肽或蛋白质。“(聚)阳离子肽或蛋白质”可包含至少一种带正电荷的氨基酸，或多于一种带正电荷的氨基酸，例如选自Arg、His、Lys或Orn的氨基酸。

(聚)阳离子氨基酸、肽和蛋白质

作为用于与本发明的人工核酸(RNA)分子复合或缔合的特别优选的试剂，(聚)阳离子化合物包括鱼精蛋白、nucleoline、精胺或亚精胺、或其他阳离子肽或蛋白质例如聚-L-赖氨酸(PLL)、聚精氨酸、碱性多肽、细胞穿透肽(CPP)，包括HIV结合肽、HIV-1 Tat(HIV)、Tat衍生肽、穿透蛋白(Penetratin)、VP22衍生肽或类似肽、HSV VP22(单纯疱疹)、MAP、KALA或蛋白质转导域(PTD)、PpT620、富含脯氨酸的肽、富含精氨酸的肽、富含赖氨酸的肽、MPG肽、Pep-1、L-低聚物、降钙素肽、触角足虫衍生的肽(特别是来自果蝇触角足虫的)、pAntp、pIs1、FGF、乳铁蛋白、转运素(Transportan)、Buforin-2、Bac715-24、SynB、SynB(1)、pVEC、hCT衍生肽、SAP或组蛋白。

优选地，本发明的人工核酸(RNA)分子可以与一种或多于一种(聚)阳离子复合，优选与鱼精蛋白或oligofectamine复合(下文讨论)，最优选与鱼精蛋白复合。

进一步优选的(聚)阳离子蛋白或肽可以选自根据下式(III)的以下蛋白质或肽：

(Arg)_l；(Lys)_m；(His)_n；(Orn)_o；(Xaa)_x，(式(III))

其中l+m+n+o+x＝8至15，并且l、m、n或o彼此独立地可以是选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、l3、14或15的任何数字，条件是Arg、Lys、His和Orn的总含量至少占寡肽的所有氨基酸的50％；Xaa可以是选自天然(＝天然存在)或非天然氨基酸的任何氨基酸，但Arg、Lys、His或Orn除外；x可以是选自0、1、2、3或4的任何数字，条件是Xaa的总含量不超过寡肽的所有氨基酸的50％。在本文中特别优选的阳离子肽是例如Arg₇、Arg₈、Arg₉、H₃R₉、R₉H₃、H₃R₉H₃、YSSR₉SSY、(RKH)₄、Y(RKH)₂R等。在此背景下，WO 2009/030481的公开内容通过引用并入本文。

(聚)阳离子多糖

用于与本发明的人工核酸(RNA)分子复合或缔合的其他优选的(聚)阳离子化合物包括(聚)阳离子多糖例如壳聚糖、聚凝胺、阳离子聚合物例如聚乙烯亚胺(PEI)。

(聚)阳离子脂质

用于与本发明的人工核酸(RNA)分子复合或缔合的的其他优选的(聚)阳离子化合物包括(聚)阳离子脂质，例如DOTMA：[1-(2，3-硅油基氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化铵、DMRIE、二-C14-脒、DOTIM、SAINT、DC-Chol、BGTC、CTAP、DOPC、DODAP、DOPE：二油基磷脂酰乙醇胺、DOSPA、DODAB、DOIC、DMEPC、DOGS：双十八烷基酰胺基甘氨酰精胺、DIMRI：二肉豆蔻酰氧丙基二甲基羟乙基溴化铵、DOTAP：二油酰氧基-3-(三甲基铵)丙烷、DC-6-14：O，O-双四癸酰基-N-(α-三甲基氨乙酰基)二乙醇胺氯化物、CLIP1：rac-[(2，3-双十八烷基氧丙基)(2-羟乙基)]-二甲基氯化铵、CLIP6：rac-[2(2，3-双十六烷基氧丙基-氧基甲基氧基)乙基]三甲基铵、CLIP9：rac-[2(2，3-双十六烷基氧基丙基-氧琥珀酰氧基)乙基]-三甲基铵或oligofectamine。

(聚)阳离子聚合物

用于与本发明的人工核酸(RNA)分子复合或缔合的其他优选的(聚)阳离子化合物包括(聚)阳离子聚合物，例如改性的聚氨基酸如β-氨基酸聚合物或反向聚酰胺等；改性的聚乙烯如PVP(聚(N-乙基-4-乙烯基溴化吡啶

))等；改性的丙烯酸酯如pDMAEMA(聚(二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯))等；改性的酰胺基胺如pAMAM(聚(酰胺基胺))等；改性的聚β氨基酯(PBAE)如二胺端基改性的1，4-丁二醇二丙烯酸酯-co-5-氨基-1-戊醇聚合物等；树枝状聚合物如聚丙烯胺树枝状聚合物或基于pAMAM的树枝状聚合物等；聚亚胺如PEI：聚(乙烯亚胺)、聚(丙烯亚胺)等；聚烯丙胺；基于糖骨架的聚合物如基于环糊精的聚合物、基于葡聚糖的聚合物、壳聚糖等；基于硅烷(silan)骨架的聚合物如PMOXA-PDMS共聚物等；或由一种或多于一种阳离子嵌段(例如选自如上所述的阳离子聚合物)和一种或多于一种亲水或疏水嵌段(例如聚乙二醇)的组合组成的嵌段聚合物。

聚合物载体

根据优选的实施方案，本发明的人工核酸(RNA)分子可以与聚合物载体复合或缔合。

根据本发明使用的“聚合物载体”可以是由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体。二硫键交联的阳离子组分可以彼此相同或不同。聚合物载体还可包含其他组分。

可以特别优选地，根据本发明使用的聚合物载体包含阳离子肽、蛋白质或聚合物和任选地如本文定义的其他组分的混合物，它们通过如本文所述的二硫键交联。在此背景下，WO 2012/013326的公开内容通过引用并入本文。

在这种情况下，构成通过二硫键交联形成聚合物载体基础的阳离子组分通常选自任何适合用于此目的的(聚)阳离子肽、蛋白质或聚合物，特别是能够与本发明的人工核酸(RNA)分子复合从而优选与其缩合的任何(聚)阳离子肽、蛋白质或聚合物。(聚)阳离子肽、蛋白质或聚合物可以优选是直链分子，然而，也可以使用带支链的(聚)阳离子肽、蛋白质或聚合物。

可用于与人工核酸(RNA)分子复合的聚合物载体的每种二硫键交联的(聚)阳离子蛋白质、肽或聚合物通常包含至少一个-SH部分，最优选至少一个半胱氨酸残基或任何其他具有-SH部分的化学基团，从而在与至少一种作为本文提到的聚合物载体的阳离子组分的其他(聚)阳离子蛋白质、肽或聚合物缩合后能够形成二硫键。

如上所述，可用于与本发明的人工核酸(RNA)分子复合的聚合物载体可以由二硫键交联的阳离子(或聚阳离子)组分形成。优选地，聚合物载体的这种(聚)阳离子肽或蛋白质或聚合物包含或被额外修饰以包含至少一个-SH部分，并且选自本文定义的蛋白质、肽和聚合物。

在一些实施方案中，聚合物载体可以选自根据式(IV)的聚合物载体分子：

L-P¹-S-[S-P²-S]_n-S-P³-L 式(IV)

其中，

P¹和P³彼此不同或相同，并且代表直链或带支链亲水聚合物链，每个P¹和P³具有至少一个-SH-部分，能够在与组分P²缩合时形成二硫键，或者替代地在与(AA)、(AA)_x或[(AA)_x]_z(如果这些组分用作P¹和P²或P³和P²之间的接头)，和/或与其他组分(例如，(AA)、(AA)_x、[(AA)_x]_z或L)缩合时形成二硫键，直链或带支链的亲水聚合物链彼此独立地选自聚乙二醇(PEG)、聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚-2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱、聚(羟烷基L-天冬酰胺)、聚(2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱)、羟乙基淀粉或聚(羟烷基L-谷氨酰胺)，其中亲水聚合物链的分子量为约1kDa至约100kDa，优选约2kDa至约25kDa或更优选约2kDa至约10kDa，例如约5kDa至约25kDa或5kDa至约10kDa；

P²是(聚)阳离子肽或蛋白质，例如如上文针对由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体所定义的，并且优选具有约3个至约100个氨基酸的长度，更优选具有约3个至约50个氨基酸的长度，甚至更优选具有约3个至约25个氨基酸的长度，例如约3个至10个、5个至15个、10个至20个或15个至25个氨基酸的长度，更优选约5个至约20个氨基酸的长度，甚至更优选约10个至约20个氨基酸的长度；或

P²是(聚)阳离子聚合物，例如如上上文针对由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体所定义的，通常具有约0.5kDa至约30kDa的分子量，包括约1kDa至约20kDa的分子量，甚至更优选约1.5kDa至约10kDa，或者具有约0.5kDa至约100kDa的分子量，包括约10kDa至约50kDa的分子量，甚至更优选约10kDa至约30kDa；

每个P²具有至少两个-SH-部分，能够在与另外的组分P²或组分P¹和/或P³或替代地与另外的组分(例如(AA)、(AA)_x或[(AA)_x]_z)缩合时形成二硫键；

-S-S-是(可逆的)二硫键(为了更好的可读性，省略了括号)，其中S优选代表已经形成(可逆的)二硫键的硫或携带-SH的部分＝。(可逆的)二硫键优选通过组分P¹和P²、P²和P²、或P²和P³、或任选地如本文定义的其他组分(例如，L、(AA)、(AA)_x、[(AA)_x]_z等)的-SH-部分的缩合形成；-SH-部分可以是这些组分的结构的一部分，或者通过如下定义的修饰来添加；

L是任选的配体，其可以存在或不存在，并且可以彼此独立地选自RGD、转铁蛋白、叶酸、信号肽或信号序列、定位信号或序列、核定位信号或序列(NLS)、抗体、细胞穿透肽(例如TAT或KALA)、受体的配体(例如细胞因子、激素、生长因子等)、小分子(例如如甘露糖或半乳糖的碳水化合物或合成配体)、小分子激动剂、受体的抑制剂或拮抗剂(例如RGD拟肽类似物)或本文定义的任何其他蛋白质等；

n是整数，通常选自约1至50，优选选自约1、2或3至30，更优选选自约1、2、3、4或5至25，或约1、2、3、4或5至20，或约1、2、3、4，或5至15，或约1、2、3、4或5至10，包括例如约4至9、4至10、3至20、4至20、5至20或10至20、或约3至15、4至15、5至15或10至15、或约6至11或7至10。最优选地，n为约1、2、3、4或5至10，更优选为约1、2、3或4至9、约1、2、3或4至8、或约1、2或3至7。

在此背景下，WO 2011/026641的公开内容通过引用并入本文。亲水聚合物P¹和P³中的每一个通常具有至少一个-SH-部分，其中至少一个-SH-部分能够在与组分P²或与组分(AA)或(AA)_x(如果用作如下文定义的P¹和P²或P³和P²之间的接头)，并且任选地与另外的组分，例如L和/或(AA)或(AA)_x，(例如如果包含两个或多于两个-SH-部分)反应时形成二硫键。上述通式(IV)中的以下子式“P¹-S-S-P²”和“P²-S-S-P³”(为了更好的可读性，省略了括号)，其中S、P¹和P³中的任何一个如本文所定义，典型地代表以下情况：其中亲水聚合物P¹和P³的一个-SH-部分与上述通式(IV)的组分P²的一个-SH-部分缩合，其中这些-SH-部分的两个硫形成如本文通式(IV)中所定义的二硫键-S-S-部分。这些-SH-部分通常由亲水聚合物P¹和P³中的每一个提供，通过内部半胱氨酸或任何其他带有-SH部分的(修饰的)氨基酸或化合物提供。因此，如果-SH-部分由半胱氨酸提供，则子式“P¹-S-S-P²”和“P²-S-S-P³”也可以写成“P¹-Cys-Cys-P²”和“P²-Cys-Cys-P³”，其中术语Cys-Cys表示通过二硫键而不是肽键连接的两个半胱氨酸。在这种情况下，这些式中的术语“-S-S-”也可以写为“-S-Cys”、“-Cys-S”或“-Cys-Cys-”。在这种情况下，术语“-Cys-Cys-”不代表肽键，而是两个半胱氨酸通过它们的-SH-部分连接形成二硫键的连接。因此，术语“-Cys-Cys-”通常也可以理解为“-(Cys-S)-(S-Cys)-”，其中在这种特定情况下，S表示半胱氨酸-SH-部分的硫。同样，术语“-S-Cys”和“-Cys-S”表示含-SH的部分与半胱氨酸之间的二硫键，也可以写为“-S-(S-Cys)”和“-(Cys-S)-S”。或者，亲水聚合物P¹和P³可以用-SH部分进行修饰，优选通过与带有-SH部分的化合物进行化学反应而修饰，从而使得亲水聚合物P¹和P³中的每一个都带有至少一个这样的-SH部分。携带-SH部分的这样的化合物可以是例如(另外的)半胱氨酸或携带-SH部分的任何其他(改性的)氨基酸。这种化合物也可以是任何非氨基化合物或部分，其包含或允许将-SH部分引入本文定义的亲水聚合物P¹和P³。这种非氨基化合物可以通过化学反应或化合物的结合与本发明的聚合物载体的式(IV)的亲水聚合物P¹和P³结合，例如通过3-硫代丙酸或硫代亚胺的结合、通过酰胺的形成(例如羧酸、磺酸、胺等)、通过Michael加成(例如马来酰亚胺部分、α，β-不饱和羰基等)、通过点击化学(例如叠氮化物或链烷烃)、通过烯烃/炔烃转换(例如链烯烃或链炔烃)、亚胺或腙形成(醛或酮、肼、羟胺、胺)、复合反应(亲和素、生物素、蛋白G)与本发明的聚合物载体的式(IV)的亲水聚合物P¹和P³结合；或与允许进行S_n型取代反应的组分(例如卤代烷、硫醇、醇、胺、肼、酰肼、磺酸酯、氧基

盐)结合；或与可用于连接其他组分的其他化学部分结合。在这种情况下，特别优选的PEG衍生物是α-甲氧基-ω-巯基聚(乙二醇)。在每种情况下，SH部分，例如半胱氨酸或任何其他(修饰的)氨基酸或化合物的SH部分可以存在于亲水性聚合物P¹和P³的末端或内部。如本文所定义的，亲水聚合物P¹和P³中的每一个通常优选在一个末端具有至少一个-SH-部分，但是也可以包含两个或甚至多于两个-SH-部分，其可以用于附加地连接本文所定义的另外的组分，优选另外的功能性肽或蛋白质，例如配体、氨基酸组分(AA)或(AA)_x、抗体、细胞穿透肽或增强肽(例如TAT、KALA)等。

重量比和N/P比

在本发明的一些实施方案中，人工核酸(RNA)分子与(聚)阳离子化合物或聚合物载体缔合或复合，任选地，核酸与(聚)阳离子化合物和/或聚合载体的重量比选自约6∶1(重量/重量)至约0.25∶1(重量/重量)，更优选约5∶1(重量/重量)至约0.5∶1(重量/重量)，甚至更优选约4∶1(重量/重量)至约1∶1(重量/重量)或约3∶1(重量/重量)至约1∶1(重量/重量)，最优选约3∶1(重量/重量)至约2∶1(重量/重量)；或任选地，核酸(RNA)与(聚)阳离子化合物和/或聚合载体的氮/磷(N/P)比为约0.1至10，优选为约0.3至4或0.3至1，最优选为约0.5至1或0.7至1，甚至最优选为约0.3至0.9或0.5至0.9。更优选地，至少一种人工核酸(RNA)分子与一种或多于一种聚阳离子的N/P比为约0.1至10，包括约0.3至4、约0.5至2、约0.7至2和约0.7至1.5。

本发明的人工核酸(RNA)分子也可以与载剂、转染剂或复合剂缔合，以提高所述人工核酸(RNA)分子的转染效率。

在这种情况下，人工核酸(RNA)分子可以优选至少部分地与(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体，优选阳离子蛋白质或肽复合。在这种情况下，WO 2010/037539和WO 2012/113513的公开内容通过引用并入本文。“部分地”是指所述人工核酸(RNA)分子的仅一部分与(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体复合，而所述人工核酸(RNA)分子的其余部分以未复合(“游离”)的形式存在。

优选地，复合的人工核酸(RNA)分子与游离的人工核酸(RNA)分子的摩尔比可以选自约0.001∶1至约1∶0.001的摩尔比，包括约1∶1的摩尔比。更优选地，复合的人工核酸(RNA)分子与游离的人工核酸(RNA)分子的比可以选自约5∶1(重量/重量)至约1∶10(重量/重量)，更优选约4∶1(重量/重量)至约1∶8(重量/重量)，甚至更优选约3∶1(重量/重量)至约1∶5(重量/重量)或1∶3(重量/重量)，最优选1∶1(重量/重量)。

本发明的复合的人工核酸(RNA)分子优选根据第一步通过将人工核酸(RNA)分子与(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体，优选如本文所定义的聚合物载体以特定比例复合来制备，从而形成稳定的复合物。在这种情况下，非常优选的是，在所述人工核酸(RNA)分子复合之后，在复合的人工核酸(RNA)分子的部分中没有游离的(聚)阳离子化合物或聚合物载体，或只有可忽略的少量的游离的(聚)阳离子化合物或聚合物载体残留。因此，通常在一定范围内选择人工核酸(RNA)分子和(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体在复合的人工核酸(RNA)分子部分中的比例，使得人工核酸(RNA)分子完全复合，并且在所述部分中没有游离的(聚)阳离子化合物或聚合物载体，或只有可忽略的少量的游离的(聚)阳离子化合物或聚合物载体残留。

优选地，人工核酸(RNA)分子与(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体，优选与如本文所定义的(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体的比选自约6∶1(重量/重量)至约0.25∶1(重量/重量)，更优选约5∶1(重量/重量)至约0.5∶1(重量/重量)，甚至更优选约4∶1(重量/重量)至约1∶1(重量/重量)或约3∶1(重量/重量)至约1∶1(重量/重量)，最优选约3∶1(重量/重量)至约2∶1(重量/重量)。

替代地，人工核酸(RNA)分子与(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体的比也可以基于整个复合物的氮/磷酸比(N/P比)来计算。在本发明的上下文中，关于复合物中人工核酸(RNA)分子与(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体，优选与如本文所定义的(聚)阳离子化合物和/或聚合物载体的比，N/P比优选为约0.1至10，优选为约0.3至4，最优选为约0.5至2或0.7至2，最优选为约0.7至1.5、0.5至1或0.7至1，甚至最优选为约0.3至0.9或0.5至0.9，优选地，条件是复合物中的(聚)阳离子化合物是如上定义的(聚)阳离子蛋白质或肽和/或聚合物载体。

在其他实施方案中，以游离或裸形式提供和使用人工核酸(RNA)分子，而无需与任何其他载剂、转染剂或复合剂缔合。

靶向递送

在一些实施方案中，本发明的人工核酸(RNA)分子(或包含其的(药物)组合物或试剂盒)适于靶向递送至目的器官、组织或细胞。“靶向递送”通常涉及使用靶向元件，其特异性地增强人工核酸(RNA)分子向特定组织或细胞的转运。

这种(蛋白质)靶向元件可以由人工核酸(RNA)分子编码，优选与编码所需的治疗性蛋白、抗原性蛋白、变应原性蛋白或报告蛋白的编码序列在同一框内编码，使得所述蛋白表达为包含所述蛋白质靶向元件的融合蛋白。替代地，所述(蛋白质或非蛋白质)靶向元件可存在于复合所述人工核酸(RNA)分子的(聚)阳离子化合物或载体中、形成其一部分或与之缔合，和/或可存在于包封或复合所述人工核酸(RNA)分子作为脂质体、脂质纳米颗粒、脂质复合体等的脂质中、形成其一部分或与之缔合。

“靶标”是特定的器官、组织或细胞，旨在摄取人工核酸(RNA)分子并优选表达所编码的目的(多)肽或蛋白质。“摄取”是指人工核酸(RNA)分子从细胞外区室转移到细胞内区室。这可能涉及受体介导的过程、与细胞膜的融合、胞吞作用、摄液作用、胞饮作用或其他易位机制。人工核酸(RNA)分子可通过其自身被摄取或作为复合物的一部分被摄取。

作为非限制性实例，与本发明的人工核酸(RNA)分子缔合或复合的(聚)阳离子化合物、载体、脂质体或脂质纳米颗粒可被赋予靶向元件或靶向功能。另外地或替代地，人工核酸(RNA)分子可以编码携带(优选地通过共价键)靶向元件的(多)肽或蛋白质。靶向元件可以选自蛋白质(例如，糖蛋白或肽，例如对共配体具有特异性亲和力的分子、或抗体例如与特定细胞类型例如上皮细胞、角质形成细胞等结合的抗体)、激素和激素受体、非肽类物质例如脂质、凝集素、碳水化合物、维生素、辅因子、多价乳糖、多价半乳糖、N-乙酰基半乳糖胺、N-乙酰基葡糖胺多价甘露糖、多价岩藻糖或适体、以及能够将人工核酸(RNA)分子靶向至目标部位(例如器官、组织或细胞)的任何配体。

在一些实施方案中，人工核酸(RNA)分子或包含其的(药物)组合物或试剂盒适于靶向肝脏。此类人工核酸(RNA)分子或(药物)组合物或试剂盒可特别适用于治疗、预防、暴露后预防或减缓选自以下的疾病：遗传疾病、变态反应、自身免疫疾病、感染性疾病、肿瘤、癌症和肿瘤相关疾病、炎性疾病、血液和造血器官疾病、内分泌、营养和代谢疾病、神经系统疾病、遗传病、循环系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、皮肤和皮下组织疾病、肌肉骨骼系统和结缔组织疾病以及泌尿生殖系统疾病(条件是它们是遗传或获得性的)，及其组合。在一些实施方案中，适于靶向肝脏的人工核酸(RNA)分子包含根据如上定义的a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；c-1(NDUFA4/RPS9)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；e-3(MP68/RPS9)；e-4(NOSIP/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；e-5(ATP5A1/RPS9)；d-4(HSD17B4/NUDFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；b-1(UBQLN2/RPS9)；b-2(ASAH1/RPS9)；b-4(HSD17B4/CASP1)；e-6(ATP5A1/COX6B1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；g-5(RPL31/CASP1)；h-1(RPL31/COX6B1)；和/或c-5(ATP5A1/PSMB3)的UTR元件。这种人工核酸(RNA)分子或包含这种RNA分子的颗粒可以例如包含选自以下的靶向元件或修饰：半乳糖或乳糖(靶向去唾液酸糖蛋白受体)；载脂蛋白E；甘露糖；岩藻糖；透明质酸；甘露糖-6-磷酸；乳糖；甘露糖；维生素A；半乳糖胺；GalNac和针对突触素的抗体或片段，如Poelstra等人(JControl Release 161：188-197，2012)或Mishra等人(Biomed Res Int.2013：382184，2013)所述。

在一些实施方案中，人工核酸(RNA)分子或包含其的(药物)组合物或试剂盒适于靶向皮肤。在一些实施方案中，这种人工核酸(RNA)分子包含根据如上定义的a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；c-1(NDUFA4/RPS9)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；e-3(MP68/RPS9)；e-4(NOSIP/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；e-5(ATP5A1/RPS9)；d-4(HSD17B4/NUDFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；b-1(UBQLN2/RPS9)；b-2(ASAH1/RPS9)；b-4(HSD17B4/CASP1)；e-6(ATP5A1/COX6B1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；g-5(RPL31/CASP1)；h-1(RPL31/COX6B1)；和/或c-5(ATP5A1/PSMB3)的UTR元件。这种人工核酸(RNA)分子或包含这种RNA分子的颗粒可例如包含如下文所述的靶向元件。

在一些实施方案中，人工核酸(RNA)分子或包含其的(药物)组合物或试剂盒适于靶向肌肉。在一些实施方案中，这种人工核酸(RNA)分子包含根据如上定义的a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；c-1(NDUFA4/RPS9)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；e-3(MP68/RPS9)；e-4(NOSIP/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；e-5(ATP5A1/RPS9)；d-4(HSD17B4/NUDFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；b-1(UBQLN2/RPS9)；b-2(ASAH1/RPS9)；b-4(HSD17B4/CASP1)；e-6(ATP5A1/COX6B1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；g-5(RPL31/CASP1)；h-1(RPL31/COX6B1)；和/或c-5(ATP5A1/PSMB3)的UTR元件。这种人工核酸(RNA)分子或包含这种RNA分子的颗粒可例如包含如下文所述的靶向元件。

用于本发明的合适的靶向元件包括：凝集素、糖蛋白、脂质和蛋白质例如抗体。特别地，靶向元件可以选自促甲状腺素、促黑素、凝集素、糖蛋白、表面活性蛋白A、黏蛋白碳水化合物、多价乳糖、多价半乳糖、N-乙酰基半乳糖胺、N-乙酰基葡糖胺多价甘露糖、多价岩藻糖、糖基化聚氨基酸、多价半乳糖、转铁蛋白、双膦酸盐、聚谷氨酸盐、聚天冬氨酸盐、脂质、胆固醇、类固醇、胆汁酸、叶酸、维生素B12、生物素、RGD肽、RGD肽模拟物或适体。

其他靶向元件可以选自蛋白质例如糖蛋白，或肽，例如对共配体具有特异性亲和力的分子，或抗体例如能够结合特定细胞类型如肝脏、肿瘤、肌肉、皮肤或肾细胞的抗体。其他靶向元件可以选自激素和激素受体。其他靶向元件可以选自脂质、凝集素、碳水化合物、维生素、辅因子、多价乳糖、多价半乳糖、N-乙酰基-半乳糖胺、N-乙酰基-葡糖胺多价甘露糖、多价岩藻糖或适体。靶向元件可以结合任何合适的配体，例如选自脂多糖或p38MAP激酶的活化剂。

其他靶向元件可以选自能够靶向特定受体的配体。实例包括但不限于叶酸、GalNAc、半乳糖、甘露糖、甘露糖6P、适体、整联蛋白受体配体、趋化因子受体配体、转铁蛋白、生物素、血清素受体配体、PSMA、内皮素、GCPII、生长抑素、(KKEEE)3K、LDL和HDL配体。其他靶向元件可以选自适体。适体可以是未修饰的或可以具有本文公开的修饰的任何组合。

(药物)组合物和疫苗

在另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含本发明的人工核酸(RNA)分子，优选地包含至少一种药学上可接受的载剂和/或赋形剂。根据优选的实施方案，该组合物作为药物组合物提供。根据另外的优选实施方案，可以将(药物)组合物作为疫苗提供。“疫苗”通常被理解为提供至少一种抗原，优选抗原性肽或蛋白质的预防或治疗材料。“提供至少一种抗原”是指例如疫苗包含抗原或疫苗包含例如编码抗原的分子。因此，本文特别设想本发明的疫苗包含至少一种人工核酸(RNA)分子，其编码至少一种如本文所定义的抗原性(多)肽或蛋白质，该抗原性(多)肽或蛋白质可以例如衍生自肿瘤抗原、细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原或原生动物抗原、自身抗原、变应原或同种异体抗原，并且优选地当其被表达并呈递至免疫系统时诱导针对相应抗原的免疫应答。但是，在本发明的疫苗中也可以使用编码目的非抗原性(多)肽或蛋白质的人工核酸(RNA)分子。

本发明的(药物)组合物或疫苗优选包含本文所述的至少一种，优选至少两种的多种人工核酸(RNA)分子。所述至少两种的多种人工核酸(RNA)分子可以是本文所述的单顺反子、双顺反子或多顺反子。(药物)组合物或疫苗中的每个人工核酸(RNA)分子可以编码至少一种或至少两种(相同或不同)的多种目的(多)肽或蛋白质。人工核酸(RNA)分子可以以如上所述的“复合”或“游离”形式或其混合物的形式提供在(药物)组合物或疫苗中。(药物)组合物或疫苗还可以包含至少一种另外的活性剂，其用于治疗用人工核酸(RNA)分子或包含其的(药物)组合物或疫苗进行治疗的疾病或病症。

药学上可接受的赋形剂和载剂

优选地，根据本发明的(药物)组合物或疫苗包含至少一种药学上可接受的载剂和/或赋形剂。术语“药学上可接受的”是指与一种或多于一种活性剂(在此为：人工核酸(RNA)分子和任选的其他活性剂)相容并且不干扰和/或不显著降低其药物作用的化合物或试剂。药学上可接受的载剂和赋形剂优选具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使其适于施用于待治疗的对象。

赋形剂

药学上可接受的赋形剂可以发挥不同的功能作用，并且包括但不限于稀释剂、填充剂、膨胀剂、载剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、助流剂、包衣、溶剂和助溶剂、缓冲剂、防腐剂、佐剂、抗氧化剂、润湿剂、消泡剂、增稠剂、甜味剂、调味剂和保湿剂。

对于液体形式的(药物)组合物，有用的药学上可接受的载剂和赋形剂包括溶剂、稀释剂或载剂例如(无热原)水、(等渗)盐溶液例如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲盐水、固定油、植物油例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)；卵磷脂；表面活性剂；防腐剂例如苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等；等渗剂例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠；单硬脂酸铝或明胶；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂例如氯化钠或葡萄糖。可用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠调节pH。相对于特定参考介质，缓冲液可以是高渗的、等渗的或低渗的，即，相对于特定参考介质，缓冲液可以具有更高的、相同的或更低的盐含量，其中优选地可以使用上述盐的这种浓度，其不会由于渗透或其他浓度效应而导致细胞损伤。参考介质是例如以“体内”方法产生的液体，例如血液、淋巴液、胞浆液体、或其他体液、或例如可以在“体外”方法中用作参考介质的液体，例如常用的缓冲液或液体。这种常用的缓冲液或液体是技术人员已知的。

林格溶液或林格乳酸溶液特别优选作为液体载剂。

对于(半)固体形式的(药物)组合物，有用的药学上可接受的载剂和赋形剂包括黏合剂，例如微晶纤维素，黄蓍胶或明胶；淀粉或乳糖；糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉或马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、乙酸纤维素；崩解剂，例如藻酸；润滑剂，例如硬脂酸镁；助流剂，例如硬脂酸、硬脂酸镁；硫酸钙、胶体二氧化硅等；甜味剂，例如蔗糖或糖精；和/或调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橙味剂。

制剂

合适的药学上可接受的载剂和赋形剂通常可以基于(药物)组合物的所需配方来选择。

通过注射，特别是静脉注射施用的液体(药物)组合物在制造和储存条件下应该是无菌和稳定的。这种组合物通常配制成胃肠外可接受的水溶液，该水溶液不含热原、具有合适的酸碱度、等渗并保持活性成分的稳定性。用于根据本发明的液体(药物)组合物的特别有用的药学上可接受的载剂和赋形剂包括水，通常是无热原的水；等渗盐水或缓冲(水性)溶液，例如磷酸盐、柠檬酸盐等缓冲溶液。特别是对于本发明(药物)组合物的注射，可以使用水或优选缓冲液，更优选水性缓冲液，其包含钠盐，优选至少50mM的钠盐；钙盐，优选至少0.01mM的钙盐；和任选的钾盐，优选至少3mM的钾盐。

根据优选的实施方案，钠盐、钙盐和任选的钾盐可以以它们的卤化物的形式存在，例如氯化物、碘化物或溴化物，以它们的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐或硫酸盐等形式存在。不限于此，钠盐的实例包括例如NaCl、NaI、NaBr、Na₂CO₃、NaHCO₃、Na₂SO₄，任选的钾盐的实例包括例如KCl、KI、KBr、K₂CO₃、KHCO₃、K₂SO₄，钙盐的实例包括例如CaCl₂、CaI₂、CaBr₂、CaCO₃、CaSO₄、Ca(OH)₂。此外，缓冲液中可以包含上述阳离子的有机阴离子。

根据优选的实施方案，如上文所定义的适合于注射目的的缓冲液可包含选自氯化钠(NaCl)、氯化钙(CaCl₂)和任选的氯化钾(KCl)的盐，其中除氯离子外，还可存在其他阴离子。CaCl₂也可以用另一种盐例如KCl代替。通常，注射缓冲液中的盐的浓度为至少50mM氯化钠(NaCl)、至少3mM氯化钾(KCl)和至少0.01mM氯化钙(CaCl₂)。相对于特定参考介质，注射缓冲液可以是高渗的、等渗的或低渗的，即，相对于特定参考介质，缓冲液可以具有更高的、相同的或更低的盐含量，其中优选地可以使用上述盐的这种浓度，其不会由于渗透或其他浓度效应而导致细胞损伤。参考介质是例如以“体内”方法产生的液体，例如血液、淋巴液、胞浆液体、或其他体液、或例如可以在“体外”方法中用作参考介质的液体，例如常用的缓冲液或液体。

这种常用的缓冲液或液体是技术人员已知的。乳酸林格液特别优选作为液体基质。

用于局部施用的(药物)组合物可使用本文别处所述的合适的液体和/或(半)固体赋形剂或载剂配制成乳剂、软膏剂、凝胶剂、糊剂或散剂。经口施用的(药物)组合物可以使用本文其他地方所述的合适的液体和/或(半)固体赋形剂或载剂配制成片剂、胶囊剂、液体剂、散剂或持续释放形式。

根据一些优选的实施方案，本发明的(药物)组合物或疫苗通过肠胃外施用，特别是通过皮内或肌内注射、经口、鼻内、肺部、吸入、局部、直肠、颊部、阴道或通过植入的贮库施用，并且以液体或冻干制剂的形式提供以用于本文其他地方所讨论的肠胃外施用。肠胃外制剂通常储存在小瓶、静脉输液袋、安瓿、药筒或预装注射器中，并且可以以注射剂、吸入剂或气雾剂的形式施用，优选以注射剂的形式施用。

根据优选的实施方案，本发明的(药物)组合物或疫苗可以包含与脂质复合的本发明的人工核酸(RNA)分子，其优选为如本文其他地方所述的脂质纳米颗粒、脂质体、脂质复合体或乳液的形式。

根据其他优选的实施方案，(药物)组合物或疫苗以冻干形式提供。优选地，冻干的(药物)组合物或疫苗在施用前在合适的缓冲液中重构，该缓冲液有利地基于水性载剂，例如乳酸林格溶液、磷酸盐缓冲液，优选乳酸林格溶液。在一些实施方案中，本发明的(药物)组合物或疫苗包含至少两个、三个、四个、五个、六个或多于六个不同的本文定义的人工核酸(RNA)分子，其可以分别以冻干形式(任选地与至少一种另外的添加剂一起)提供，并且可以在使用前在合适的缓冲液(例如乳酸林格液)中单独重构，从而允许单独施用每种所述人工核酸(RNA)分子。

佐剂

根据优选的实施方案，本发明的(药物)组合物或疫苗还可以包含至少一种佐剂。

广义上的“佐剂”或“辅助组分”通常是可改变例如增强其他活性剂例如治疗剂或疫苗的作用的药理学和/或免疫学试剂。在本文中，“佐剂”可以理解为任何适合支持本发明(药物)组合物的施用和递送的化合物。具体而言，佐剂可优选增强添加其的(药物)组合物或疫苗的免疫刺激特性。此外，此类佐剂可以但不限于，引发或增强先天免疫系统的免疫应答，即非特异性免疫应答。

“佐剂”通常不引起适应性免疫应答。就此而言，“佐剂”不具备抗原的资格。换句话说，当施用时，本发明的(药物)组合物或疫苗通常由于抗原性肽或蛋白质而启动适应性免疫应答，该抗原性肽或蛋白质由包含在所述(药物)组合物或疫苗中的人工核酸分子(RNA)的至少一个编码序列编码。另外，存在于(药物)组合物或疫苗中的佐剂可产生(支持性)先天免疫应答。

合适的佐剂可以选自技术人员已知并且适合本情况的任何佐剂，即支持在哺乳动物中诱导免疫应答，并且包括但不限于TDM、MDP、胞壁酰二肽、普朗尼克、明矾溶液、氢氧化铝、ADJUMER^TM(聚磷腈)；磷酸铝凝胶；来自海藻的葡聚糖；algammulin；氢氧化铝凝胶(alum)；吸附高蛋白的氢氧化铝凝胶；低黏度氢氧化铝凝胶；AF或SPT(角鲨烷(5％)、吐温80(0.2％)、普朗尼克L121(1.25％)、磷酸盐缓冲盐水的乳液，pH7.4)；AVRIDINE^TM(丙二胺)；BAY R1005^TM((N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰氨基-b-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基-十二烷酰-酰胺氢乙酸盐)；CALCITRIOL^TM(1-α，25-二羟基维生素D3)；磷酸钙凝胶；CAP^TM(磷酸钙纳米颗粒)；霍乱全毒素、霍乱毒素-A1-蛋白-AD-片段融合蛋白、霍乱毒素的亚基B；CRL 1005(嵌段共聚物P1205)；含细胞因子的脂质体；DDA(二甲基二十八烷基溴化铵)；DHEA(脱氢表雄酮)；DMPC(二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱)；DMPG(二肉豆蔻酰磷脂酰甘油)；DOC/alum复合物(脱氧胆酸钠盐)；弗氏完全佐剂；弗氏不完全佐剂；γ菊粉；Gerbu佐剂(下述的混合物：i)N-乙酰基氨基葡萄糖氨基-(P1-4)-N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷氨酰胺(GMDP)、ii)二甲基二十八烷基氯化铵(DDA)、iii)锌-L-脯氨酸盐复合物(ZnPro-8)、GM-CSF)；GMDP(N-乙酰基氨基葡萄糖基-(b1-4)-N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺)；咪喹莫特(1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺)；ImmTher^TM(N-乙酰葡糖氨基-N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸-D-异谷氨酸-L-丙氨酸-甘油二棕榈酸酯)；DRV(由脱水-再水合囊泡制备的免疫脂质体)；干扰素γ；白介素1β；白介素2；白介素7；白介素12；ISCOMS^TM；ISCOPREP 7.0.3.^TM；脂质体；LOXORIBINE^TM(7-烯丙基-8-氧代鸟苷)；LT口服佐剂(大肠杆菌不稳定肠毒素-原毒素)；任何组成的微球和微粒；MF59^TM(角鲨烯-水乳液)；MONTANIDE ISA 51^TM(纯化的不完全弗氏佐剂)；MONTANIDE ISA 720^TM(可代谢的油性佐剂)；MPL^TM(3-Q-脱酰基-4”-单磷酰基脂质A)；MTP-PE和MTP-PE脂质体((N-乙酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰基-L-丙氨酸-2-(1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-(羟基磷酰氧基))-乙基酰胺，单钠盐)；MURAMETIDE^TM(Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3)；MURAPALMITINE^TM和D-MURAPALMITINE^TM(Nac-Mur-L-Thr-D-异谷氨酰胺-sn-甘油二棕榈酰)；NAGO(神经氨酸酶-半乳糖氧化酶)；任何组成的纳米球或纳米颗粒；NISV(非离子表面活性剂囊泡)；PLEURAN^TM(β-葡聚糖)；PLGA、PGA和PLA(乳酸和乙醇酸的均聚物和共聚物；微球/纳米球)；PLURONIC L121^TM；PMMA(聚甲基丙烯酸甲酯)；PODDS^TM(类蛋白微球)；聚乙烯氨基甲酸酯衍生物；聚-rA：聚-rU(聚腺苷酸-聚尿苷酸复合物)；聚山梨酸酯80(吐温80)；蛋白质cochleate(Avanti Polar Lipids，Inc.，Alabaster，AL)；STIMULON^TM(QS-21)；Quil-A(Quil-A皂苷)；S-28463(4-氨基-otec-二甲基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇)；SAF-1^TM(“Syntex佐剂制剂”)；仙台脂蛋白体和包含仙台的脂质基质；司盘-85(脱水山梨糖醇三油酸酯)；Specol(Marcol 52、司盘85和吐温85的乳液)；角鲨烯或

(2，6，10，15，19，23-六甲基二十四烷和2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳己烷)；硬脂酰酪氨酸(十八烷基酪氨酸盐酸盐)；

(N-乙酰基葡糖胺基-N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸-D-异谷氨酸-L-丙氨酸-二棕榈氧基丙酰胺)；苏氨酰-MDP(Termurtide^TM或[thr1]-MDP；N-乙酰基胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺)；Ty颗粒(Ty-VLP或病毒样颗粒)；Walter-Reed脂质体(包含吸附在氢氧化铝上的脂质A的脂质体)；和脂肽，包括Pam3Cys，特别是铝盐例如Adju-phos、铝水凝胶(Alhydrogel)、Rehydragel；乳液，包括CFA、SAF、IFA、MF59、Provax、TiterMax、Montanide、Vaxfectin；共聚物，包括Optivax(CRL1005)、L121、泊洛沙姆4010)等；脂质体，包括Stealth、脂质卷(cochleate)，包括BIORAL；植物衍生的佐剂，包括QS21、Quil A、Iscomatrix、ISCOM；适合于共刺激的佐剂，包括番茄素(Tomatine)、生物聚合物，包括PLG、PMM、菊粉；微生物衍生的佐剂，包括罗莫肽(Romurtide)、DETOX、MPL、CWS、甘露糖、CpG核酸序列、CpG7909、人TLR 1-10的配体、鼠TLR1-13的配体、ISS-1018、IC31、咪唑并喹啉、安普利近(Ampligen)、Ribi529、IMOxine、IRIV、VLP、霍乱毒素、热不稳定的毒素、Pam3Cys、鞭毛蛋白、GPI锚、LNFPIII/Lewis X、抗菌肽、UC-1V150、RSV融合蛋白、cdiGMP；和适合作为拮抗剂的佐剂，包括CGRP神经肽。

合适的佐剂也可以选自作为复合剂的本文所述的(聚)阳离子化合物(参见标题为“(聚)阳离子化合物和载体”的部分)，特别是本文所述的(聚)阳离子肽或蛋白质、(聚)阳离子多糖、(聚)阳离子脂质或聚合物载体。使(药物)组合物或疫苗的人工核酸(RNA)分子与这些(聚)阳离子化合物或载体缔合或复合可以优选提供佐剂性质并赋予稳定作用。

佐剂组分中的人工核酸(RNA)分子与(聚)阳离子化合物的比可以基于整个复合物的氮/磷酸比(N/P比)，即(聚)阳离子化合物的带正电荷的(氮)原子与人工核酸(RNA)分子的带负电荷的磷酸根原子的比来计算。

在下文中，当提及“RNA”时，应理解，相应的公开内容也可作必要修改而适用于其他人工核酸分子。

例如，如果RNA表现出碱基的统计分布，则1μgRNA可能包含约3nmol磷酸残基。此外，取决于分子量和碱性氨基酸的数量，1μg肽通常含有约x nmol的氮残基。当示例性地计算(Arg)₉(分子量1424g/mol，9个氮原子)时，1μg(Arg)₉包含约700pmol(Arg)₉，因此700×9＝6300pmol碱性氨基酸＝6.3nmol氮原子。对于约1∶1的RNA/(Arg)₉的质量比，可以计算出约2的N/P比。当示例性计算鱼精蛋白(当使用鲑鱼鱼精蛋白时，分子量为约4250g/mol，含21个氮原子)时，以约2∶1的质量比和2μg的RNA，计算出RNA的磷酸为6nmol；1μg鱼精蛋白含有约235pmol鱼精蛋白分子，因此235x21＝4935pmol碱性氮原子＝4.9nmol氮原子。对于约2∶1的RNA/鱼精蛋白质量比，可以计算出约0.81的N/P比。对于约8∶1的RNA/鱼精蛋白质量比，可以计算出约0.2的N/P比。在本发明的上下文中，相对于复合物中的RNA∶肽的比，N/P比优选为约0.1至10，优选为约0.3至4，最优选为约0.5至2或0.7至2，最优选为约0.7至1.5。

可以在两个单独的步骤中获得本发明的(药物)组合物或疫苗，以便同时实现所述(药物)组合物或疫苗中包含的人工核酸(RNA)分子的有效免疫刺激作用和有效翻译。

在第一步中，将RNA与(聚)阳离子化合物以特定比例复合以形成稳定的复合物(“复合RNA”)。在这种情况下，重要的是，在复合RNA的部分中没有游离的(聚)阳离子化合物或仅有可忽略的少量的(聚)阳离子化合物残留。因此，通常在RNA完全复合且组合物中没有游离的(聚)阳离子化合物或仅有可忽略的少量的(聚)阳离子化合物残留的范围内选择RNA和(聚)阳离子化合物的比。优选地，RNA与(聚)阳离子化合物的比选自约6∶1(重量/重量)至约0.25∶1(重量/重量)，更优选约5∶1(重量/重量)至约0.5∶1(重量/重量)，甚至更优选约4∶1(重量/重量)至约1∶1(重量/重量)或约3∶1(重量/重量)至约1∶1(重量/重量)，最优选约3∶1(重量/重量)至约2∶1(重量/重量)。

在第二步骤中，将RNA添加到复合的RNA中以获得本发明的(药物)组合物或疫苗。其中，所述添加的RNA以游离RNA，优选以游离mRNA的形式存在，其不与其他化合物复合。在添加之前，游离RNA不被复合，并且优选在添加至复合RNA后不经历任何可检测到的或显著的复合反应。这是由于(聚)阳离子化合物与复合RNA的牢固结合。换句话说，当游离RNA添加到复合RNA中时，优选不存在或基本上不存在可以与所述游离RNA形成复合物的的游离(聚)阳离子化合物。因此，本发明的(药物)组合物或疫苗的游离RNA可以在体内有效地转录。

可以优选的是，取决于治疗的具体要求，游离RNA可以与复合RNA相同或不同。甚至更优选地，包含在(药物)组合物或疫苗中的游离RNA与复合的编码表位的RNA相同，换句话说，组合(药物)组合物或疫苗包含游离和复合形式的本身相同的RNA。

因此，在特别优选的实施方案中，本发明的(药物)组合物或疫苗包含本文所定义的RNA，其中所述RNA在所述(药物)组合物或疫苗中部分以游离RNA的形式存在并且部分以复合RNA的形式存在。优选地，如上文所述复合如本文定义的RNA，优选mRNA，然后以游离RNA的形式加入相同的(m)RNA，其中优选地，用于复合RNA的化合物在加入游离RNA时不以游离形式存在于组合物中。

可以根据特定疗法的具体要求选择复合RNA和游离RNA的比。通常，选择复合RNA与游离RNA的比，以使得由于复合RNA的存在而引起先天免疫系统的显著刺激。同时，选择该比，使得可以在体内提供大量游离的编码表位的RNA，从而导致体内表达的抗原融合蛋白的有效翻译和集中。优选地，本发明的(药物)组合物或疫苗中复合RNA与游离RNA的比选自约5∶1(重量/重量)至约1∶10(重量/重量)，更优选选自约4∶1(重量/重量)至约1∶8(重量/重量)，甚至更优选约3∶1(重量/重量)至约1∶5(重量/重量)或1∶3(重量/重量)，最优选约1∶1(重量/重量)。

另外地或替代地，可以基于整个RNA复合物的氮/磷酸比(N/P比)来计算复合RNA与游离RNA的比。在本发明的上下文中，相对于复合物中的RNA∶肽的比，N/P比优选为约0.1至10，优选为约0.3至4，最优选为约0.5至2或0.7至2，最优选为约0.7至1.5。

另外地或替代地，还可以基于两种RNA彼此的摩尔比来选择复合RNA和游离RNA的比。通常，可以选择复合RNA与游离RNA的摩尔比，使得该摩尔比足以满足上述(重量/重量)和/或N/P定义。更优选地，复合RNA与游离RNA的摩尔比可以选自例如0.001∶1、0.01∶1、0.1∶1、0.2∶1、0.3∶1、0.4∶1、0.5∶1、0.6∶1、0.7∶1、0.8∶1、0.9∶1、1∶1、1∶0.9、1∶0.8、1∶0.7、1∶0.6、1∶0.5、1∶0.4、1∶0.3、1∶0.2、1∶0.1、1∶0.01、1∶0.001等、或选自上述任何两个值形成的任何范围，例如选自约0.001∶1至1∶001，包括约0.01∶1至1∶0.001、0.1∶1至1∶0.001、0.2∶1至1∶0.001、0.3∶1至1∶0.001、0.4∶1至1∶0.001、0.5∶1至1∶0.001、0.6∶1至1∶0.001、0.7∶1至1∶0.001、0.8∶1至1∶0.001、0.9∶1至1∶0.001、1∶1至1∶0.001、1∶0.9至1∶0.001、1∶0.8至1∶0.001、1∶0.7至1∶0.001、1∶0.6至1∶0.001、1∶0.5至1∶0.001、1∶0.4至1∶0.001、1∶0.3至1∶0.001、1∶0.2至1∶0.001、1∶0.1至1∶0.001、1∶0.01至1∶0.001、或约0.01∶1至1∶0.01、0.1∶1至1∶0.01、0.2∶1至1∶0.01、0.3∶1至1∶0.01、0.4∶1至1∶0.01、0.5∶1至1∶0.01、0.6∶1至1∶0.01、0.7∶1至1∶0.01、0.8∶1至1∶0.01、0.9∶1至1∶0.01、1∶1至1∶0.01、1∶0.9至1∶0.01、1∶0.8至1∶0.01、1∶0.7至1∶0.01、1∶0.6至1∶0.01、1∶0.5至1∶0.01、1∶0.4至1∶0.01、1∶0.3至1∶0.01、1∶0.2至1∶0.01、1∶0.1至1∶0.01、1∶0.01到1∶0.01、或包括约0.001∶1至1∶0.01、0.001∶1至1∶0.1、0.001∶1至1∶0.2、0.001∶1至1∶0.3、0.001∶1至1∶0.4、0.001∶1至1∶0.5、0.001∶1至1∶0.6、0.001∶1至1∶0.7、0.001∶1至1∶0.8、0.001∶1至1∶0.9、0.001∶1至1∶1、0.001至0.9∶1、0.001至0.8∶1、0.001至0.7∶1、0.001至0.6∶1、0.001至0.5∶1、0.001至0.4∶1、0.001至0.3∶1、0.001至0.2∶1、0.001至0.1∶1、或约0.01∶1至1∶0.01、0.01∶1至1∶0.1、0.01∶1至1∶0.2、0.01∶1至1∶0.3、0.01∶1至1∶0.4、0.01∶1至1∶0.5、0.01∶1至1∶0.6、0.01∶1至1∶0.7、0.01∶1至1∶0.8、0.01∶1至1∶0.9、0.01∶1至1∶1、0.001至0.9∶1、0.001至0.8∶1、0.001至0.7∶1、0.001至0.6∶1、0.001至0.5∶1、0.001至0.4∶1、0.001至0.3∶1、0.001至0.2∶1、0.001至0.1∶1等。

甚至更优选地，复合RNA与游离RNA的摩尔比可以选自例如约0.01∶1至1∶0.01。最优选地，复合RNA与游离RNA的摩尔比可以选自例如约1∶1。也可以适用关于(重量/重量)和/或N/P比的任何上述定义。

根据优选的实施方案，(药物)组合物或疫苗包含另一种核酸，优选作为佐剂。

因此，本发明的(药物)组合物或疫苗还包含非编码核酸，优选RNA，其选自小干扰RNA(siRNA)、反义RNA(asRNA)、环状RNA(circRNA)、核酶、适体、核糖开关、免疫刺激RNA(isRNA)、转运RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)、小核内RNA(snRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、微小RNA(miRNA)和与Piwi相互作用的RNA(piRNA)。

在本发明的上下文中，特别感兴趣的非编码核酸，优选RNA包括“免疫刺激性”或“IS”核酸，优选RNA。在根据本发明的(药物)组合物或疫苗中，通常将“免疫刺激性”或“IS”核酸或RNA用作佐剂。

根据一个特别优选的实施方案，佐剂核酸包括下式(VI)或(VII)的核酸：

G_lX_mG_n

(式(VI))

其中：

G是包含鸟嘌呤、尿嘧啶、或鸟嘌呤或尿嘧啶类似物的核苷酸；

X是包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸；

l是1到40的整数，

其中

当l＝1时，G是包含鸟嘌呤或其类似物的核苷酸，

当l＞1时，至少50％的核苷酸包含鸟嘌呤或其类似物；

m是整数且至少为3；

其中

当m＝3时，X是包含尿嘧啶或其类似物的核苷酸，

当m＞3时，出现至少3个连续的包含尿嘧啶或尿嘧啶类似物的核苷酸；

n是1到40的整数，

其中

当n＝1时，G是包含鸟嘌呤或其类似物的核苷酸，

当n＞1中，至少50％的核苷酸包含鸟嘌呤或其类似物；

C_lX_mC_n

(式(VII))

其中：

C是包含胞嘧啶、尿嘧啶、或胞嘧啶或尿嘧啶类似物的核苷酸；

X是包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸；

l是1到40的整数，

其中

当l＝1时，C是包含胞嘧啶或其类似物的核苷酸，

当l＞1中，至少50％的核苷酸包含胞嘧啶或其类似物；

m是整数且至少为3；

其中

当m＝3时，X包括尿嘧啶或其类似物，

当m＞3时，出现至少3个连续的包含尿嘧啶或尿嘧啶类似物的核苷酸；

n是1到40的整数，

其中

当n＝1时，C是包含胞嘧啶或其类似物的核苷酸，

当n＞1时，至少50％的核苷酸包含胞嘧啶或其类似物。

可用作isRNA的式(VI)或(VII)的核酸可以是相对较短的核酸分子，典型长度为约5个至100个核苷酸(但对于特定实施方案，也可以大于100个核苷酸，例如至多200个核苷酸)、5个至90个或5个至80个核苷酸，优选地长度为约5个至70个核苷酸，更优选地长度为约8个至60个核苷酸，且更优选地长度为约15个至60个核苷酸，更优选20个至60个核苷酸，最优选30个至60个核苷酸。如果编码表位的RNA(或本文公开的任何其他核酸，特别是RNA)的最大长度为例如100个核苷酸的，则m通常≤98。

式(VI)的核酸中的核苷酸“G”的数目由1或n确定。l和n彼此独立地是1至40的整数，其中当l或n＝1时，G是包含鸟嘌呤或其类似物的核苷酸，并且当l或n＞1时，至少50％的核苷酸包含鸟嘌呤或其类似物。

例如，在不暗示任何限制的情况下，当l或n＝4时，Gl或Gn可以是例如GUGU、GGUU、UGUG、UUGG、GUUG、GGGU、GGUG、GUGG、UGGG或GGGG等；当l或n＝5时，Gl或Gn可以是例如GGGUU、GGUGU、GUGGU、UGGGU、UGGUG、UGUGG、UUGGG、GUGUG、GGGGU、GGGUG、GGUGG、GUGGG、UGGGG或GGGGG等。

式(VI)的核酸中与X_m相邻的核苷酸优选不包含尿嘧啶。

类似地，式(VII)的核酸中的核苷酸“C”的数目由1或n确定。l和n彼此独立地是1至40的整数，其中当l或n＝1时，C是包含胞嘧啶或其类似物的核苷酸，而当l或n＞1时，至少50％的核苷酸包含胞嘧啶或其类似物。

例如，在不作任何限制的情况下，当l或n＝4时，Cl或Cn可以是例如CUCU、CCUU、UCUC、UUCC、CUUC、CCCU、CCUC、CUCC、UCCC或CCCC等；当l或n＝5时，Cl或Cn可以是例如CCCUU、CCUCU、CUCCU、UCCCU、UCCUC、UCUCC、UUCCC、CUCUC、CCCCU、CCCUC、CCUCC、CUCCC、UCCCC或CCCCC等。

式(VII)的核酸中与X_m相邻的核苷酸优选不包含尿嘧啶。优选地，如上文所限定的，对于式(VI)，当l或n＞1时，至少60％、70％、80％、90％或甚至100％的核苷酸包含鸟嘌呤或其类似物。

如前所限定的，侧翼序列Gl和/或Gn中剩余的100％核苷酸(当包含鸟嘌呤的核苷酸构成少于100％的核苷酸时)是尿苷或其类似物。同样优选地，l和n彼此独立地为2至30的整数，更优选为2至20的整数，并且还更优选为2至15的整数。如果需要，l或n的下限可以变化，且为至少1，优选为至少2，更优选为至少3、4、5、6、7、8、9或10。该限定相应地适用于式(VII)。

根据另一个优选的实施方案，如本文所述的isRNA组成为或包含式(VIII)或(IX)的核酸：

(N_uG_lX_mG_nN_v)_a

(式(VIII))

其中：

G是包含鸟嘌呤、尿嘧啶或鸟嘌呤或尿嘧啶类似物，优选包含鸟嘌呤或其类似物的核苷酸；

X是包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸，优选包含尿嘧啶或其类似物的核苷酸；

N是长度为约4个至50个，优选地约4个至40个，更优选地约4个至30个或4个至20个核苷酸的核酸序列，N各自独立地选自包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸；

a为1至20的整数，优选1至15的整数，最优选1至10的整数；

l是1到40的整数，

其中当l＝1时，G是包含鸟嘌呤或其类似物的核苷酸，

当l＞1中，至少50％的这些核苷酸包含鸟嘌呤或其类似物；

m是整数且至少为3；

其中当m＝3时，X是包含尿嘧啶或其类似物的核苷酸，和

当m＞3，出现至少3个连续的包含尿嘧啶或尿嘧啶类似物的核苷酸；

n是1到40的整数，

其中当n＝1时，G是包含鸟嘌呤或其类似物的核苷酸，

当n＞1时，至少50％的这些核苷酸包含鸟嘌呤或其类似物；

u、v可以彼此独立地为0至50的整数，

优选地，其中当u＝0时，v≥1，或者当v＝0时，u≥1；

其中式(VIII)的核酸分子的长度为至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸；

(N_uC_lX_mC_nN_v)_a

(式(IX))

其中：

C是包含胞嘧啶、尿嘧啶、或胞嘧啶或尿嘧啶类似物，优选胞嘧啶或其类似物的核苷酸；

X是包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸，优选包含尿嘧啶或其类似物的核苷酸；

N各自是彼此独立地具有约4个至50个，优选地约4个至40个，更优选地约4个至30个或4个至20个核苷酸的长度的核酸序列，N各自独立地选自包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸；

a为1至20的整数，优选1至15的整数，最优选1至10的整数；

l是1到40的整数，

其中当l＝1时，C是包含胞嘧啶或其类似物的核苷酸，

当l＞1中，至少50％的这些核苷酸包含胞嘧啶或其类似物；

m是整数且至少为3；

其中当m＝3时，X是包含尿嘧啶或其类似物的核苷酸，

当m＞3时，出现至少3个连续的包含尿嘧啶或尿嘧啶类似物的核苷酸；

n是1到40的整数，

其中当n＝1时，C是包含胞嘧啶或其类似物的核苷酸，

当n＞1中，至少50％的这些核苷酸包含胞嘧啶或其类似物。

u、v可以彼此独立地为0至50的整数，

优选地，其中当u＝0时，v≥1，或者当v＝0时，u≥1；

其中根据本发明的(IX)的核酸分子的长度为至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸。

对于式(IX)，上面给出的元件N(即N_u和N_v)和X(X_m)，特别是上面定义的核心结构，以及整数a、l、m、n、u和v的任何定义，同样相应地适用于式(V)的元件，其中在式(IX)中，核心结构由C_lX_mC_n定义。边界元件N_u和N_v的定义与上面针对N_u和N_v给出的定义相同。

特别是在以上式(VI)至(IX)的上下文中，“核苷酸”应理解为包含或优选组成为含氮碱基(优选选自腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))、戊糖(核糖或脱氧核糖)和至少一个磷酸基团的分子。“核苷”由核碱基和戊糖组成(即，可以称为“无磷酸基团的核苷酸”)。因此，除了一个(两个、三个或多于三个)磷酸基团之外，包含特定碱基(A、C、G、T或U)的“核苷酸”优选还包含相应的核苷(分别为腺苷、胞苷、鸟苷、胸苷或尿苷)。

也就是说，术语“核苷酸”包括单磷酸核苷(AMP、CMP、GMP、TMP和UMP)、二磷酸核苷(ADP、CDP、GDP、TDP和UDP)、三磷酸核苷(ATP、CTP、GTP、TTP和UTP)。在以上式(VI)至(IX)的上下文中，单磷酸核苷是特别优选的。表述“包含(......)或其类似物的核苷酸”是指包含改性的(磷酸)骨架、戊糖或核碱基的经修饰的核苷酸。在这种情况下，核碱基的修饰是特别优选的。举例来说，当提及“包含鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或其类似物的核苷酸”时，术语“其类似物”是指核苷酸和所列举的核碱基，优选地是指所列举的核碱基。

在优选的实施方案中，本发明的(药物)组合物或疫苗包含至少一种免疫刺激性RNA，其包含或组成为根据式(VI)(G_lX_mG_n)、式(VII)(C_lX_mC_n)、式(VIII)(N_uG_lX_mG_nN_v)_a和/或式(IX)(N_uC_lX_mC_nN_v)_a)的核酸序列。在特别优选的实施方案中，本发明的(药物)组合物或疫苗包含至少一种免疫刺激性RNA，其包含或组成为根据WO2008014979、WO2009030481、WO2009095226、或WO2015149944中所示的任意SEQ ID NO的核酸序列。

在特别优选的实施方案中，本发明的(药物)组合物或疫苗包含由聚合物载体和至少一个isRNA形成的聚合物载体货物复合物，该聚合物载体优选包含二硫键交联的阳离子肽，优选Cys-Arg₁₂和/或Cys-Arg₁₂-Cys，该isRNA优选包含或组成为根据WO2008014979、WO2009030481、WO2009095226、或WO2015149944中所示的任意SEQ ID NO的核酸序列。

如果需要，本发明的(药物)组合物或疫苗可以另外包含一种或多于一种辅助物质以增加其免疫原性或免疫刺激能力。由此优选实现如本文定义的本发明的聚合物载体货物复合物和辅助物质的协同作用，该辅助物质可以任选地包含在如本文定义的本发明的(药物)组合物或疫苗中。在这方面，取决于各种类型的辅助物质，可以考虑各种机制。例如，使树突状细胞(DC)成熟的化合物，例如脂多糖、TNF-α或CD40配体，形成第一类合适的辅助物质。通常，可以将任何以“危险信号”(LPS，GP96等)或细胞因子例如GM-CFS的方式影响免疫系统的试剂用作辅助物质，该“危险信号”或细胞因子可以有针对性地增强和/或影响免疫应答。特别优选的辅助物质是进一步促进先天免疫应答的细胞因子，例如单核因子、淋巴因子、白介素或趋化因子，例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、INF-α、IFN-β、INF-γ、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、LT-β或TNF-α、生长因子例如hGH。

本发明的(药物)组合物或疫苗还可以含有任何其他已知的免疫刺激性化合物，其免疫刺激性是由于其对人Toll样受体TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10的结合亲和力(作为配体)，或由于其对鼠Toll样受体TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11、TLR12或TLR13的结合亲和力(作为配体)。

本发明的(药物)组合物或疫苗可以另外包含CpG核酸，特别是CpG-RNA或CpG-DNA。CpG-RNA或CpG-DNA可以是单链CpG-DNA(ss CpG-DNA)、双链CpG-DNA(dsDNA)、单链CpG-RNA(ss CpG-RNA)或双链CpG-RNA(ds CpG-RNA)。CpG核酸优选为CpG-RNA的形式，更优选为单链CpG-RNA(ss CpG-RNA)的形式。CpG核酸优选包含至少一个或多于一个(促有丝分裂的)胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG基序)。根据第一优选替代方案，包含在这些序列中的至少一个CpG基序，即CpG基序的C(胞嘧啶)和G(鸟嘌呤)，是未甲基化的。任选包含在这些序列中的所有其他胞嘧啶或鸟嘌呤可以是甲基化的或未甲基化的。然而，根据另一个优选的替代方案，CpG基序的C(胞嘧啶)和G(鸟嘌呤)也可以以甲基化形式存在。

试剂盒

在另一方面，本发明涉及包含本发明的人工核酸(RNA)分子和/或(药物)组合物或疫苗的试剂盒或试剂套装。

在本发明的试剂盒或试剂套装中，至少一种冻干或液体形式的人工核酸(RNA)分子，任选地与一种或多种药学上可接受的载剂、赋形剂或药物组合物上下文中所述的其他试剂一起。

任选地，本发明的试剂盒或试剂套装可包含至少一种在药物组合物的上下文中如本文所定义的其他试剂、抗微生物剂、RNA酶抑制剂、增溶剂等。

试剂套装可以是两个或多于两个部分的套装，并且通常在合适的容器中包含其组分。例如，每个容器可以是小瓶、瓶子、挤压瓶、广口瓶、密封的套筒、封套或小袋、管或泡罩包装的形式，或任何其他合适的形式，条件是该容器被配置为防止组分的过早混合。可以分别提供每个不同的组分，或者可以与一些不同的组分一起提供(即，在同一容器中)。

容器也可以是小瓶、管、广口瓶或封套、或套筒、或泡罩包装或瓶子内的区室或隔室，条件是在药剂师或医生有意混合之前，一个隔室的内容物不能与另一个隔室的内容物物理关联。

试剂套装还可以包含有关其成分的任何施用和剂量信息的技术说明。

医疗用途和治疗

本发明的人工核酸(RNA)分子或(药物)组合物或疫苗或试剂盒可以用于人类，也可以用于兽医目的，优选用于人类医学目的。

根据另一方面，本发明因此涉及用作药物的本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗、或试剂盒。

本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒可用于治疗遗传病、癌症、自身免疫疾病、炎性疾病和感染性疾病或其他疾病或状况。

根据另一方面，本发明因此涉及本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒，其用于治疗遗传疾病、癌症、自身免疫疾病、炎性疾病和感染性疾病或其他疾病或状况。

“基因疗法”优选地涉及调节(即恢复、增强、减少或抑制)对象中的基因表达，以达到治疗效果。为此，基因疗法通常包括将核酸引入细胞。该术语通常指用于治疗目的操纵基因组并包括使用基因组编辑技术来校正导致疾病的突变、将治疗基因添加到基因组、去除有害基因或基因组序列、以及调节基因表达。基因疗法可能涉及宿主细胞的体内或体外转化。

术语“治疗”或“处理”疾病包括预防疾病(即，导致临床症状不发展)；抑制疾病(即，阻止或抑制临床症状的发展)；和/或缓解疾病(即，导致临床症状的消退)。应当理解的是，由于一个或多于一个最终诱发事件可能是未知的或潜在的，因此并非总是可能在“预防”和“抑制”疾病或病症之间进行区分。因此，术语“预防”将被理解为构成涵盖“预防”和“抑制”两者的“治疗”的类型。因此，术语“治疗”包括“预防”。

如本文所用，术语“对象”、“患者”或“个体”通常包括人和非人动物，并且优选地包括哺乳动物(例如非人灵长类动物，包括狨猴、绢毛猴、蜘蛛猴、猫头鹰猴、长尾黑颌猴、松鼠猴、以及狒狒、猕猴、黑猩猩、猩猩、大猩猩；牛；马；绵羊；猪；鸡；猫；狗；小鼠；大鼠；兔；豚鼠等)，包括嵌合和转基因动物和疾病模型。在本发明的上下文中，术语“对象”优选是指非人灵长类动物或人，最优选人。

因此，本发明还提供了通过向有需要的对象施用药学上有效量的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒来治疗本文公开的疾病的方法。这种方法可以包括任选的第一步：制备本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒，和第二步：包括向需要的患者/对象施用(药学上有效量的)所述人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒。

施用途径

可以例如全身或局部施用本发明的人工核酸(RNA)分子或(药物)组合物或疫苗或试剂盒。

全身施用途径通常包括例如透皮、经口、肠胃外途径，包括皮下、静脉内、肌内、动脉内、皮内和腹膜内注射和/或鼻内施用途径。

局部施用途径一般包括例如外用途径，但也包括皮内、透皮、皮下或肌内注射或病灶内、瘤内、颅内、肺内、心内、和舌下注射。

如果要施用不止一个不同的人工核酸(RNA)分子，则可以对每个所述不同的人工核酸(RNA)分子使用不同的施用途径。

根据优选的实施方案，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒通过肠胃外途径，优选通过皮内、皮下或肌内途径施用。优选地，所述人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒可通过注射例如皮下、肌内、或皮内注射施用，其可以是无针注射和/或针头注射。因此，在优选的实施方案中，根据本发明的医疗用途和/或治疗方法包括通过皮下、肌内或皮内注射，优选通过肌内或皮内注射，更优选通过皮内注射施用所述人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒。这种注射可以通过使用常规的针头注射或(无针)射流注射来进行，优选地通过使用(无针)射流注射来进行。

施用方案

本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒可以每天几次、每天、每隔一天、每周或每月施用于有需要的对象；并且可以依次或同时施用。

如果施用不同的人工核酸(RNA)分子、或(药物)组合物或疫苗或包含几种组分，例如不同的人工核酸(RNA)分子和任选单独本文所述的其他活性剂的试剂盒，则每种组分可以同时施用(通过相同或不同的施用途径同时施用)或分开施用(在不同时间通过相同或不同的施用途径施用)。这种顺序施用方案也称为“时间交错”施用。时间交错施用可以指本发明的人工核酸(RNA)分子例如在本发明的不同人工核酸(RNA)分子或任何其它附加活性剂之前、同时或之后施用。

剂量

本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒可以优选以安全和治疗有效量施用。

如本文所用，“安全和(治疗)有效量”是指足以在所寻求的组织、系统、动物或人类中引发期望的生物或药物反应的活性剂的量。安全和治疗有效量优选地足以诱导要治疗的疾病的阳性改变，即用于减轻待治疗疾病的症状、减少疾病进展或预防待预防疾病的症状。然而，与此同时，“安全和治疗有效量”优选小到足以避免严重的副作用，也就是说允许优势和风险之间的合理关系。

“安全和(治疗)有效量”还随待治疗的特定病症以及待治疗患者的年龄、身体状况、体重、性别和饮食、病症的严重程度、治疗持续时间、伴随治疗的性质、所用的特定药学上可接受的载剂或赋形剂、治疗方案和类似因素而变化。

人工核酸(RNA)分子的“安全和(治疗)有效量”还可以根据人工核酸(RNA)分子的类型来选择，例如单顺反子、双顺反子或甚至多顺反子RNA，因为在于单顺反子RNA的量相等的情况下，双顺反子或甚至多顺反子RNA可以导致目的编码(多)肽或蛋白质的显著更高的表达。

本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒的治疗功效和毒性可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序来确定，例如，用于确定LD50(对50％的群体致死的剂量)和ED50(对50％的群体治疗有效的剂量)。适用于确定本文公开的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或试剂盒的安全和(治疗)有效量的示例性动物模型，包括但不限于兔、羊、小鼠、大鼠、狗和非人灵长类动物模型。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，可以表示为LD50/ED50比。通常优选表现出大的治疗指数的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或试剂盒。从细胞培养测定法和动物研究中获得的数据可用于配制用于人类的剂量范围。这类化合物的剂量优选在包括几乎没有或没有毒性的ED50的循环浓度的范围内。

例如，本文所述的本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒的治疗有效剂量可以为每剂量单位约0.001mg至10mg，优选每剂量单位约0.01mg至5mg，更优选每剂量单位约0.1mg至2mg或每剂量单位约0.01nmol至1mmol，特别是每剂量单位1nmol至1mmol，优选每剂量单位1μmol至1mmol。还可以设想，本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒的治疗有效剂量可以为约0.01mg/kg至10g/kg，优选约0.05mg/kg至5g/kg，更优选约0.1mg/kg至2.5g/kg(每kg体重)。

遗传病

在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于治疗或预防遗传病。

如本文所用，术语“遗传病”包括由基因组异常(即偏离野生型、健康和无症状状态)引起的、以其为特征的或与之相关的任何疾病、障碍或病症。此类异常可包括染色体拷贝数的变化(例如，非整倍体)或其部分变化(例如，缺失、重复、扩增)；或染色体结构发生变化(例如，易位、点突变)。基因组异常可能是遗传性的(隐性或显性的)或非遗传性的。基因组异常可存在于生物体的某些细胞中或该生物体的所有细胞中，并且包括常染色体异常、X连锁异常、Y连锁异常和线粒体异常。

此外，本发明允许治疗如WO 2012/013326 A1中所提及的所有疾病、遗传病或遗传性疾病，其全部内容通过引用并入本文。

癌症

在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于治疗或预防癌症。

如本文所用，术语“癌症”指赘生物，其特征在于细胞不受控制且通常迅速增殖，从而趋于侵入周围组织并转移至远处身体部位。该术语包括良性肿瘤和恶性肿瘤。癌症中的恶性肿瘤通常以间变、侵袭和转移为特征；而良性肿瘤通常不具备这些性质。该术语包括以肿瘤生长的赘生物，以及血液和淋巴系统癌症。

在一些实施方案中，根据本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒可以用作药物，特别是用于治疗肿瘤或癌症疾病。在这种情况下，治疗优选涉及瘤内施用，特别是通过瘤内注射施用。因此，根据本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒可以用于制备用于治疗肿瘤或癌症疾病的药物，所述药物特别适合于瘤内应用(施用)以治疗肿瘤或癌症疾病。

优选地，本文提及的肿瘤和癌症疾病选自优选包括以下的肿瘤或癌症疾病：例如急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、肾上腺皮质癌、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、脑干胶质瘤、脑瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、伯基特淋巴瘤、儿童类癌肿瘤、胃肠道类癌肿瘤、未知原发性、原发性中枢神经系统淋巴瘤、儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、宫颈癌、儿童癌症、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性骨髓增生性疾病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤因家族肿瘤中的尤因肉瘤、儿童颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃(腹部)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、颅外、性腺外或卵巢生殖细胞瘤、妊娠滋养细胞瘤、脑干胶质瘤、儿童脑星形细胞瘤、儿童视觉途径和下丘脑胶质瘤、胃类癌、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌(肝癌)、霍奇金淋巴瘤、咽下癌、儿童下丘脑和视觉通路神经胶质瘤、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾癌(肾细胞癌)、喉癌、白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、多毛细胞白血病、唇和口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、

巨球蛋白血症、骨/骨肉瘤的恶性纤维组织细胞瘤、儿童髓母细胞瘤、黑色素瘤、眼内(眼)黑色素瘤、默克尔细胞癌、成人恶性间皮瘤、儿童间皮瘤、伴隐匿性原发性的转移性鳞状颈癌、口腔癌、儿童多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤/血浆细胞瘤、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、慢性粒细胞白血病、成人急性髓细胞白血病、儿童急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤(骨髓癌)、慢性骨髓增生异常、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌(表面上皮间质瘤)、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低度恶性潜能肿瘤、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽喉癌、嗜铬细胞瘤、松果星形细胞瘤、松果生殖细胞瘤、儿童松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体腺瘤、血浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌(肾脏癌)、肾盂和输尿管癌、视网膜母细胞瘤、儿童横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤因家族肉瘤、卡波西肉瘤、软组织肉瘤、子宫肉瘤、Sézary综合征、皮肤癌(非黑色素瘤)、皮肤癌(黑色素瘤)、默克尔细胞皮肤癌、小肠癌、鳞状细胞癌、伴隐匿性原发性的转移性鳞状颈癌、儿童幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、咽喉癌、儿童胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、儿童甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、妊娠滋养细胞肿瘤、尿道癌、子宫内膜子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、儿童视觉通路和下丘脑胶质瘤、外阴癌、

巨球蛋白血症和儿童威尔姆氏瘤(肾癌)。

此外，本发明允许治疗如WO 2012/013326 A1或WO 2017/109134 A1中提及的所有疾病或癌症疾病，其全部内容通过引用并入本文。

感染性疾病

在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于治疗或预防感染性疾病。

术语“感染”或“感染性疾病”涉及通常不存在于体内的微生物例如细菌、病毒和寄生虫的入侵和繁殖。感染可能不会引起任何症状并且是亚临床的，或者可能引起症状并且在临床上是明显的。感染可能保持局部性，或者可能通过血液或淋巴系统传播，以成为全身性感染。在这种情况下，感染性疾病优选包括病毒、细菌、真菌或原生动物感染性疾病。

特别地，感染性疾病可选自不动杆菌感染、非洲昏睡病(非洲锥虫病)、AIDS(获得性免疫缺陷综合症)、阿米巴病、无形体病、炭疽、阑尾炎、溶血弧菌感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲霉病、星状病毒感染、脚癣、巴贝虫病、蜡状芽孢杆菌感染、细菌性脑膜炎、细菌性肺炎、细菌性阴道炎(BV)、拟杆菌属感染、小袋虫病、贝蛔虫感染、裂体吸虫病、BK病毒感染、毛干黑结节病、人芽囊原虫感染、芽生菌病、玻利维亚出血热、包柔氏螺旋体感染(莱姆疏螺旋体病)、肉毒中毒(和婴儿肉毒中毒)、牛绦虫病、巴西出血热、布鲁氏菌病、伯克霍尔德氏菌感染、布鲁氏溃疡、杯状病毒感染(诺如病毒和沙波病毒)、弯曲杆菌病、念珠菌症(念珠菌病)、犬绦虫感染、猫爪病、恰加斯病(美国锥虫病)、软下疳、水痘、衣原体感染、沙眼衣原体感染、肺炎衣原体感染、霍乱、成色母细胞增多症、气候性腹股沟炎、支睾吸虫病、艰难梭菌感染、球孢子菌病、感冒、科罗拉多州蜱虫热(CTF)、普通感冒(急性病毒性鼻咽炎、急性鼻炎)、尖锐湿疣、结膜炎、克雅氏病(CJD)、克里米亚-刚果出血热(CCHF)、隐球菌病、隐孢子虫病、皮肤幼虫移行症(CLM)、皮肤利什曼病、环孢子虫病、囊尾幼虫病、巨细胞病毒感染、登革热、皮肤癣菌病、双鞭毛虫病、白喉、双叶鞭毛虫病、唐纳万病、麦地那龙线虫病、初夏脑膜脑炎(FSME)、埃博拉出血热、包虫病、埃立克体病、蛲虫病(蛲虫感染)、肠球菌感染、肠病毒感染、流行斑疹伤寒、会厌炎、爱泼斯坦-巴尔病毒感染性单核细胞增多症、传染性红斑病(第五病)、幼儿急疹(exanthem subitum)、姜片虫病、片吸虫病、致命性家族性失眠(FFI)、第五病、丝虫病、鱼中毒(鱼肉病)、鱼绦虫感染、流感、梭状芽胞杆菌的食物中毒、狐绦虫感染、自由生活的阿米巴感染、梭状芽孢杆菌感染、气性坏疽、地霉菌病、Gerstmann-Straussler-Scheinker综合征(GSS)、贾第鞭毛虫病、鼻疽病、颚口线虫病、淋病、腹股沟肉芽肿(杜诺凡病)、甲类链球菌感染、乙类链球菌感染、流感嗜血杆菌感染、手足口病(HFMD)、汉坦病毒肺综合症(HPS)、幽门螺杆菌感染、溶血尿毒综合征(HUS)、肾综合征出血热(HFRS)、肝炎病毒感染、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯性疱疹、I型单纯性疱疹、II型单纯性疱疹、带状疱疹、组织胞浆菌病、空心疣、钩虫感染、人博卡病毒感染、人尤文氏埃希氏菌病、人粒细胞性无形体病(HGA)、人偏肺病毒感染、人单核细胞埃希氏菌病、人乳头瘤病毒(HPV)感染、人副流感病毒感染、膜壳绦虫病、流行性感冒、等孢子虫病、日本脑炎、川崎病、角膜炎、金氏杆菌感染、库鲁病、贾第虫病(贾第鞭毛虫病)、拉沙热、军团病(军团症、庞蒂亚克热)、利什曼病、麻风病、钩端螺旋体病、虱子、李斯特菌病、莱姆疏螺旋体病、莱姆病、淋巴丝虫病(象皮病)、淋巴细胞性脉络膜脑膜炎、疟疾、马尔堡出血热(MHF)、马尔堡病毒感染、麻疹、类鼻疽(惠特莫尔病)、脑膜炎、脑膜炎球菌病、后殖吸虫病、微孢子虫病、微型绦虫感染、流产(前列腺发炎)、接触传染性软疣(MC)、单核细胞增多症、腮腺炎、鼠伤寒(地方性斑疹伤寒)、足分支菌病、人型支原体感染、支原体肺炎、蛆病、尿布红斑/尿布皮炎、新生儿结膜炎(新生儿眼炎)、新生儿败血症(绒毛膜炎)、诺卡狄克病、诺玛病(Noma)、诺沃克病毒感染、盘尾丝虫病(河盲症)、骨髓炎、中耳炎、副球孢子菌病(南美芽生菌病)、肺吸虫病、副伤寒、巴氏杆菌病、头虱病(头虱)、体虱病(体虱)、阴虱病(阴虱、蟹虱)、盆腔炎(PID)、百日咳(霍普咳嗽)、发否氏腺热、鼠疫、肺炎球菌感染、肺囊虫性肺炎(PCP)、肺炎、脊髓灰质炎(童年残废)、小儿麻痹症、猪绦虫感染、普氏菌感染、原发性阿米巴脑膜脑炎(PAM)、进行性多灶性白质脑病、喘鸣性喉痉挛(Pseudocroup)、鹦鹉热、Q热病、兔热病、狂犬病、鼠咬热、赖特综合征、呼吸道合胞病毒感染(RSV)、鼻孢子虫病、鼻病毒感染、立克次体感染、立克次体痘、裂谷热(RVF)、落基山斑热(RMSF)、轮状病毒感染、风疹、副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、沙门氏菌病、SARS(严重急性呼吸系统综合症)、疥疮、猩红热、血吸虫病(裂体吸虫病)、恙虫病、败血症、细菌性痢疾(菌痢)、带状疱疹、天花(痘症)、软下疳、孢子丝菌病、葡萄球菌食物中毒、葡萄球菌感染、类圆线虫病、梅毒、绦虫病、破伤风、三日热、蜱传脑炎、须癣、头癣(头皮癣)、体癣、股癣、手癣、黑癣(Tinea nigra)、脚癣(香港脚)、甲癣(甲真菌病)、花斑癣(花斑糠疹)、弓蛔虫病(眼幼虫移行症(OLM)和内脏幼虫移行症(VLM))、弓形虫病、旋毛虫病、毛滴虫病、鞭虫病(鞭虫感染)、Tripper、锥虫病(昏睡病)、恙虫病、结核病、兔热病、斑疹伤寒症、斑疹伤寒、解脲脲原体感染、阴道炎(鞘炎)、变异型克雅氏病(vCJD、nvCJD)、委内瑞拉马脑炎、委内瑞拉出血热、病毒性肺炎、内脏利什曼病、疣、西尼罗河热、西部马脑炎、白色毛结节菌病(白秃疮)、百日咳、酵母菌斑、黄热病、假结核耶尔森菌感染、耶尔森菌病和接合菌病。

其他感染性疾病包括由鲍曼不动杆菌、无形体属、嗜吞噬细胞无形体、巴西钩虫、十二指肠钩虫、溶血隐秘杆菌、Ascaris lumbricoide、曲霉菌属、星状病毒科、巴贝西虫属、炭疽杆菌、蜡样芽胞杆菌、汉赛巴尔通体、BK病毒、人酵母菌、皮炎芽生菌、百日咳鲍特菌、伯氏疏螺旋体、疏螺旋体属、疏螺旋体、布鲁氏菌属、马来丝虫、布尼亚病毒科、洋葱伯克霍尔德菌和其他伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌、杯状病毒科、弯曲杆菌属、白色念珠菌、念珠菌、沙眼衣原体、肺炎衣原体、羊牛流产衣原体、CJD朊病毒、华支睾吸虫、肉毒梭菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、产气荚膜梭菌、梭状芽孢杆菌、破伤风梭菌、球孢子菌、冠状病毒、白喉杆菌、贝纳柯克斯体、克里木-刚果出血热病毒、新型隐球菌、隐孢子虫属、巨细胞病毒、登革热病毒(DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)、脆双核阿米巴、埃博拉病毒(EBOV)、棘球蚴属、查菲埃立克体、尤因埃立克体、埃立克体属、痢疾阿米巴、肠球菌属、肠病毒属、肠病毒、主要柯萨奇病毒和肠病毒71(EV71)、表皮癣菌、E-B病毒(EBV)、大肠杆菌0157：H7、01 1 1和O1 04：H4、肝片吸虫和大片吸虫、FFI朊病毒、丝虫目超家族、黄病毒、土拉弗朗西斯氏菌、梭形杆菌属、白地霉、肠贾第虫、颚口虫属物种、GSS朊病毒、瓜纳瑞托病毒、杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌、尼帕病毒属(Henclra病毒、尼帕病毒)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)、荚膜组织胞浆菌、HIV(人免疫缺陷病毒)、威尼克外瓶霉、人博卡病毒(HBoV)、人疱疹病毒6型(HHV-6)和人疱疹病毒7型(HHV-7)、人偏肺病毒(hMPV)、人乳头瘤病毒(HPV)、人副流感病毒(HPIV)、日本脑炎病毒、JC病毒、胡宁病毒、金格杆菌、肉芽肿杆菌、库鲁病朊病毒、拉沙病毒、嗜肺性军团菌、利什曼虫属、钩端螺旋体属、单核细胞增多性李斯特氏菌、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、马丘波病毒、马拉色菌属、马尔堡病毒、麻疹病毒、横川后殖吸虫、微孢子门、接触传染性软疣病毒(MCV)、流行性腮腺炎病毒、麻风分枝杆菌和弥漫型麻疯分枝杆菌、结核分枝杆菌、溃疡分枝杆菌肺炎支原体、福氏耐格里变形虫、美洲板口线虫、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟菌、星形诺卡氏菌、诺卡氏菌、盘尾丝虫、恙虫病东方体、正黏病毒科、巴西副球孢子菌、并殖吸虫、卫氏并殖吸虫、细小病毒B19、巴斯德菌属、疟原虫属、耶氏肺孢子虫、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(Rhinovirus)、鼻病毒(rhinoviruses)、小蛛立克次体、立克次氏体属、普氏立克次体、立氏立克次体、地方性斑疹伤寒立克次体、裂谷热病毒、轮状病毒、风疹病毒、萨比亚病毒、沙门氏菌属、疥螨、SARS冠状病毒、血吸虫属、志贺氏杆菌属、辛诺柏病毒、汉坦病毒、申克孢子丝菌、葡萄球菌属、葡萄球菌属、无乳链球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌、粪类圆线虫、绦虫属、有钩绦虫、蜱传脑炎病毒(TBEV)、犬弓蛔虫或猫弓蛔虫、刚地弓形虫、梅毒螺旋体、旋毛虫、阴道毛滴虫、毛癣菌、毛首鞭形线虫、布氏锥虫、克氏锥虫、解脲支原体、水痘带状疱疹病毒(VZV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、大天花或小天花病毒、vCJD朊病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、霍乱弧菌、西尼罗河病毒、西方马脑炎病毒、班氏丝虫、黄热病病毒、小肠结肠炎耶尔森菌、鼠疫耶尔森菌、和假结核耶尔森菌引起的感染。在这种情况下，感染性疾病，优选病毒感染性疾病、细菌感染性疾病、或原生动物感染性疾病通常选自流感、疟疾、SARS、黄热病、AIDS、莱姆疏螺旋体病、利什曼病、炭疽、脑膜炎，病毒感染性疾病如AIDS、尖锐湿疣、空心疣、登革热、三日热、埃博拉病毒感染、感冒、初夏脑膜脑炎(FSME)、流感、带状疱疹、肝炎、I型单纯疱疹、II型单纯疱疹、带状疱疹病毒感染、流行性感冒、日本脑炎、拉沙热、马尔堡病毒、麻疹、口蹄疫、单核细胞增多症、流行性腮腺炎、诺沃克病毒感染、菲佛腺热、天花、小儿麻痹症(儿童残废)、喘鸣性喉痉挛、第五疾、狂犬病、疣、西尼罗河热、水痘、巨细胞病毒(CMV)感染，细菌感染性疾病如流产(前列腺炎症)、炭疽、阑尾炎、莱姆疏螺旋体病、肉毒中毒、弯曲杆菌属感染、沙眼衣原体感染(尿道炎、结膜炎)、霍乱、白喉、杜诺凡病、会厌炎、斑疹热、气性坏疽、淋病、兔热病、幽门螺杆菌感染、百日咳、气候腹股沟淋巴结炎、骨髓炎、军团病、麻风病、李斯特菌病、肺炎、脑膜炎、细菌性脑膜炎、炭疽、中耳炎、人型支原体感染、新生儿败血症(绒毛膜羊膜炎)、诺玛病、副伤寒、鼠疫、赖特综合征、落基山斑疹热、副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、猩红热、梅毒、破伤风、tripper、恙虫病、肺结核、斑疹伤寒、鞘炎(阴道炎)、软下疳、和由寄生虫、原生动物或真菌引起的感染性疾病如阿米巴虫病、血吸虫病、恰加斯病、棘球绦虫病、鱼绦虫病、鱼中毒(鱼肉病)、狐绦虫病、脚癣、犬绦虫病、念珠菌病、酵母菌斑、疥疮、皮肤利什曼病、贾第虫病(贾第鞭毛虫病)、虱子、疟疾、显微镜检查、盘尾丝虫病(河盲)、真菌病、牛绦虫病、血吸虫病、猪绦虫病、弓形虫病、滴虫病、锥虫病(昏睡病)、内脏利什曼病、尿布红斑/尿布皮炎或微型绦虫病。

自身免疫疾病

在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于治疗或预防自身免疫疾病。

术语“自身免疫疾病”是指对象中的任何疾病、病症或病状，其特征在于由对象对其自身的细胞、组织和/或器官的免疫反应引起的细胞、组织和/或器官损伤。通常，“自身免疫疾病”是由与自身抗原(即健康人体细胞表达的抗原)具有反应性的抗体引起或加剧的。

根据每种疾病的主要临床病理特征，自身免疫疾病可大致分为全身性自身免疫疾病和器官特异性或局部性自身免疫疾病。自身免疫疾病可以分为全身性症状，包括但不限于系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、硬皮病、类风湿关节炎和多发性肌炎；或局部综合征，其可以是内分泌性的(I型糖尿病、桥本甲状腺炎、艾迪生病等)、皮肤病学的(寻常性天疱疮)、血液病学的(自身免疫性溶血性贫血)、神经系统的(多发性硬化症)或几乎可以涉及任何限定的身体组织。在本发明的上下文中，自身免疫疾病可以选自I型自身免疫疾病或II型自身免疫疾病或III型自身免疫疾病或IV型自身免疫疾病，例如多发性硬化症(MS)、类风湿关节炎、糖尿病、I型糖尿病(1型糖尿病)、慢性多发性关节炎、突眼性甲状腺肿、慢性肝炎的自身免疫形式、溃疡性结肠炎、I型过敏性疾病、II型过敏性疾病、III型过敏性疾病、IV型过敏性疾病、纤维肌痛、脱发、别赫捷列夫症、克罗恩病、重症肌无力、神经性皮炎、风湿性多肌痛、进行性全身性硬化症(PSS)、赖特综合征、风湿性关节炎、银屑病、血管炎和II型糖尿病。

炎性疾病

在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于治疗或预防炎性疾病。

术语“炎性疾病”是指对象中的以炎症，优选为以慢性炎症为特征、由其引起、或伴随其的任何疾病、病症或病状。自身免疫疾病可能与炎症有关，也可能与炎症无关。而且，炎症可能是或不是由自身免疫疾病引起的。因此，某些疾病可以被表征为自身免疫疾病和炎性疾病两者。

在本发明的上下文中，示例性炎性疾病包括但不限于类风湿关节炎、克罗恩病、糖尿病性视网膜病、银屑病、子宫内膜异位症、阿尔茨海默氏病、强直性脊柱炎、关节炎(骨关节炎、类风湿关节炎(RA)、银屑病性关节炎)、哮喘、动脉粥样硬化、结肠炎、皮炎、憩室炎、纤维肌痛、肝炎、肠易激综合症(IBS)、系统性红斑狼疮(SLE)、肾炎、帕金森病和溃疡性结肠炎。

变态反应

在优选的实施方案中，人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于治疗或预防变态反应。

术语“变态反应”或“过敏性超敏反应”是指通常在遗传上易感的个体(特应性)中，由免疫机制针对物质(变应原)引发的超敏反应引起或以其为特征的任何疾病、病症或病状。变态反应可以是抗体介导的或细胞介导的。在大多数患者中，通常引起过敏反应的抗体属于IgE同种型(IgE介导的变态反应，I型变态反应)。在非IgE介导的变态反应中，抗体可能属于IgG同种型。可以根据引起过敏反应的抗原来源对变态反应进行分类。在本发明的上下文中，变态反应可以选自(a)食物过敏、(b)药物过敏、(c)屋尘过敏、(d)昆虫毒液或叮咬过敏、和(e)花粉过敏。或者，可以根据变态反应的主要症状对变态反应进行分类。在本发明的上下文中，变态反应可以选自(a)哮喘、(b)鼻炎、(c)结膜炎、(d)鼻结膜炎(rhinoconjuctivitis)、(e)皮炎、(f)荨麻疹和(g)过敏反应。

联合疗法

本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒也可以用于联合疗法。可用于治疗或预防本文限定的疾病和病症的任何其他疗法可与本文公开的用途和方法组合。

例如，接受本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒的对象可以是接受化学治疗(例如一线或二线化学治疗)、放射治疗、化学放射治疗(化学治疗和放射治疗的组合)、酪氨酸激酶抑制剂(例如EGFR酪氨酸激酶抑制剂)、抗体治疗和/或抑制性和/或刺激性检查点分子(例如CTLA4抑制剂)的患有优选如本文所定义的癌症或相关病症的患者，或在接受上述一种或多于一种治疗后已达到部分缓解或疾病稳定的患者。或者，接受本发明人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒的对象可以是接受抗生素、抗真菌剂或抗病毒治疗的优选如本文所定义的患有感染性疾病的患者。

在另一方面，本发明因此还涉及本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒用于支持癌症、感染性疾病或任何其他可通过用所述人工核酸分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒治疗的疾病的另一种治疗的用途。

本发明的人工核酸(RNA)分子、(药物)组合物或疫苗或试剂盒的施用可以在施用另一种治疗剂或使患者接受对治疗特定疾病或病症有用的另一种治疗之前、同时和/或随后进行。

体外方法

在其他的方面，本发明提供了有用的体外方法，其允许确定和制备合适的UTR组合、包含其的人工核酸分子，优选能够增加可操作地连接的编码序列的表达效率。

因此，本发明提供了一种用于提高人工核酸(RNA)分子的表达效率的方法，所述人工核酸(RNA)分子包含至少一个编码(多)肽或蛋白质，优选如本文所公开的(多)肽或蛋白质的编码区，所述方法包括(a)使所述编码区与至少一个衍生自选自HSD17B4、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B和UBQLN2的基因的5′UTR或衍生自其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件结合；(b)使所述编码区与至少一个衍生自选自PSMB3、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1和RPS9的基因的3′UTR或衍生自其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件结合；和(c)获得人工核酸(RNA)分子。

在另一方面，本发明提供了鉴定能够增加在期望组织或衍生自期望组织的细胞中的表达效率的5′UTR和3′UTR的组合的方法，其包括：a)生成人工核酸分子(“测试构建体”)的文库，每个包含编码可检测的报告多核苷酸，优选所选的萤光素酶或eGFP的“报告ORF”，该“报告ORF”可操作地连接至权利要求3中所限定的5′UTR之一和/或3′UTR之一；b)提供包含可操作地连接至参考5′UTR和3′UTR，优选RPL32和ALB7的“报告ORF”的人工核酸分子作为“参考构建体”；c)在合适的条件下将所述测试构建体和所述参考构建体引入期望的组织或细胞中以使其表达；d)由测试构建体和参考构建体的“报告ORF”检测和定量多肽的表达；e)比较测试构建体和参考构建体的多肽表达；其中将特征在于与参考构建体相比多肽表达增加的测试构建体鉴定为能够提高在期望组织或细胞中的表达效率。

附图说明

图1：包含本发明的UTR组合的RNA构建体的所选目的(多)肽和蛋白的平均表达谱。

图2：包含本发明的UTR组合和A64聚腺苷酸序列的RNA构建体的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区，该A64聚腺苷酸序列随后是N5作为3′UTR。

图3：除了本发明的UTR组合外还包含聚胞苷酸和组蛋白茎环的RNA构建体在不同细胞系中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区。

图4：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在不同细胞系中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码促红细胞生成素(EPO)的编码区。

图5：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在人二倍体成纤维细胞(HDF)中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区。

图6：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在不同细胞系中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码目的蛋白的抗原构建体的编码区。

图7：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在HeLa细胞中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区。

图8：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在HepG2细胞中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区。

图9：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在HSkMC细胞中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区。

图10：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在不同细胞系中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码狂犬病病毒糖蛋白(RAVG)的编码区。

图11：包含本发明的UTR组合的RNA构建体在HEK293T细胞中的平均表达谱，该UTR组合可操作地连接至编码不同目的(多)肽或蛋白的编码区。

实施例

在下文中，呈现了示出本发明的各种实施方案和方面的特定实施例。但是，本发明的范围不应受到本文所述的具体实施方案的限制。给出以下制备和实施例以使本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。但是，本发明的范围不受示例性实施方案的限制，这些示例性实施方案仅意图作为本发明的单个方面的说明，并且功能上等效的方法也在本发明的范围内。实际上，根据本文的前述描述、附图和以下实施例，除本文所述的内容外，本发明的各种修饰形式对于本领域技术人员而言将是显而易见的。所有这些修改都落入所附权利要求的范围内。

实施例1：通过使用特定的UTR组合增加RAV-G表达

将细胞接种在具有黑色边缘和透明光学底部的96孔板上(Nunc微孔板；ThermoFisher)。转染前24小时将HeLa细胞或HDF接种在相容的完全细胞培养基中(10000个细胞，200μl/孔)。转染前48小时，将HSkMC接种在含有2％马血清(Gibco)的分化培养基中以诱导分化(48000个细胞，200μl/孔)。将细胞维持在37℃、5％CO₂下。

转染当天，将HeLa或HDF的完全培养基替换为无血清的Opti-MEM培养基(ThermoFisher)。将HSkMC的培养基换成新鲜的完全分化培养基。

在Opti-MEM中，将每种RNA以1/1.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine2000复合20分钟(HeLa和HDF)或以1/2.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine3000(HSkMC)复合20分钟。

然后将脂质复合的mRNA添加到细胞中进行转染，其中总体积为200μl，每孔100ngRNA(HeLa和HDF)或70ng RNA(HSkMC)。

转染开始后90分钟，用150μl/孔的完全培养基替换150μl/孔的HeLa或HDF的转染溶液。在进行In-Cell-Western分析之前，将细胞进一步保持在37℃、5％CO₂下。

转染开始后24小时、48小时或72小时，使用针对E标签的一抗(兔多克隆IgG；Bethyl)和随后的IRDye结合的二抗(IRDye 800CW山羊抗兔IgG；LI-COR)通过In-Cell-Western对RAV-G表达进行定量。In-Cell-Western的所有步骤均在室温下进行。

首先，将细胞用PBS洗涤一次，并用3.7％甲醛的PBS溶液固定20分钟。用PBS洗涤一次后，用0.1％Triton X-100的PBS溶液透化细胞10分钟。用0.1％吐温20的PBS溶液洗涤3次后，用Odyssey封闭缓冲液(PBS)(LI-COR)封闭细胞30分钟。

接下来，将细胞与一抗(在Odyssey封闭缓冲液(PBS)中以1∶1000稀释)一起孵育90分钟。然后将细胞洗涤3次(吐温/PBS)。

随后，将细胞与二抗和Cell-Tag 700 Stain(LI-COR)的混合物(分别在Odyssey封闭缓冲液(PBS)中以1∶200和1∶1000稀释)在黑暗中一起孵育一小时。

洗涤4次(吐温/PBS)后，将PBS添加至细胞，并使用

CLx成像系统(LI-COR)对板进行扫描。

使用Image Studio Lite软件对荧光(800nm)进行定量，并将结果与设置为100％的包含RPL32/ALB7-UTR组合的参考构建体的表达进行比较。RPL32衍生的5′-UTR的序列示于SEQ ID NO：21(DNA)和SEQ ID NO：22(RNA)。ALB7衍生的3′-UTR的序列示于SEQ ID NO：35(DNA)和SEQ ID NO：36(RNA)。

图10显示了包含可操作地连接至编码狂犬病病毒糖蛋白(RAVG)的编码区的本发明UTR组合的RNA构建体的平均表达谱。

显然，通过使用可操作地连接至编码区的本发明的UTR组合，可以显著提高表达。

有关使用不同的mRNA 3′序列，即A64N5(即具有64A和随后为N5的聚腺苷酸序列)和C30-HSL(即具有30C和随后为组蛋白茎环的聚胞苷酸序列；组蛋白SL或HSL如上所述)作为3′序列的进一步详细结果显示在下文表4A-I中。表4A-I的左侧显示了A64N5的结果，右侧显示了C30-HSL的结果。如上所述的图10是两个实验的平均值。与所有实施例一样，将UTR组合RPL32/ALB7.1归一化为100％。

表4A-I：携带A64N5或C30-HSL 3′末端序列的RAV-G的详细结果

表4A-II中显示了该实施例中使用的序列。

表4A-II：实施例1中使用的序列

实施例2：通过使用特定的UTR组合增加HsEpo和Ppluc表达

将细胞接种在96孔板上。将HDF和HepG2(10000个细胞，200μl/孔)接种24小时，然后在相容的完全细胞培养基中转染。转染前48小时，将HSkMC(48000个细胞，200μl/孔)接种在含有2％马血清(Gibco)的分化培养基中以诱导分化。将细胞维持在37℃、5％CO₂下。

转染当天，将完全培养基(HDF和HepG2)替换为无血清的Opti-MEM培养基(ThermoFisher)。将HSkMC的培养基换成新鲜的完全分化培养基。

在Opti-MEM中，将每种RNA以1/1.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine2000复合20分钟(HDF和HepG2)或以1/2.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine3000(HSkMC)复合20分钟。

然后将脂质复合的mRNA添加到细胞中进行转染，其中每孔100ng，总体积为200μl。

转染开始后90分钟，用150μl/孔的完全培养基替换150μl/孔的HDF和HepG2的转染溶液。在进行In-Cell-Western分析之前，将细胞进一步保持在37℃、5％CO₂下。

HsEPO：

转染开始后24小时，使用可商购获得的ELISA试剂盒(RNDsystems，商品号DEP00)和Hidex Chameleon读板器在细胞上清液中测量HsEpo表达。

PPluc：

转染开始后24小时，在细胞裂解物中测量Ppluc表达。加入100μl的1x被动裂解缓冲液(Promega，商品号E1941)裂解细胞至少15分钟。将裂解的细胞在-80℃下孵育至少1小时。将裂解的细胞解冻，然后将20μl加入白色LIA分析板(Greiner商品号655075)。将板放入具有甲虫汁注射装置的Hidex Chameleon读板器中，其含有萤火虫萤光素酶的底物。每孔加入100μl甲虫汁。通过Hidex Chameleon读板器测量Ppluc发光。

将结果与设置为100％的含有RPL32/ALB7-UTR组合的参考构建体的表达进行比较。RPL32衍生的5′-UTR的序列示于SEQ ID NO：21(DNA)和SEQ ID NO：22(RNA)中。ALB7衍生的3′-UTR的序列示于SEQ ID NO：35(DNA)和SEQ ID NO：36(RNA)。

图4显示了包含可操作地连接至编码EPO的编码区的本发明UTR组合的RNA构建体在不同细胞系中的平均表达谱。

显然，通过使用可操作地连接至编码区的本发明的UTR组合，可以显著提高表达。

有关使用不同的mRNA 3′序列，即A64N5(即具有64A和随后为N5的聚腺苷酸序列)和C30-HSL(即具有30C和随后为组蛋白茎环的聚胞苷酸序列；组蛋白SL或HSL如上所述)作为3′序列的EPO的进一步详细结果显示在下文表4B-I中。表4B-I的左侧显示了A64N5的结果，右侧显示了C30-HSL的结果。如上所述的图4是两个实验的平均值。与所有实施例一样，将UTR组合RPL32/ALB7.1归一化为100％。

表4B-I：携带A64N5或C30-HSL 3′末端序列的EPO的详细结果

表4B-II中示出了在该实施例中使用的序列。

表4B-II：实施例2中使用的序列

实施例3：通过使用特定的UTR组合增加目的蛋白(POI)表达

通过In-Cell-Western印迹来分析HeLa、HDF和HSkM细胞：

将细胞接种在具有黑色边缘和透明光学底部的96孔板上(Nunc微孔板；ThermoFisher)。将HeLa细胞或HDF(10000个细胞，200μl/孔)接种24小时，然后在相容的完全细胞培养基中转染。转染前48小时，将HSkMC(48000个细胞，200μl/孔)接种在含有2％马血清(Gibco)的分化培养基中以诱导分化。将细胞维持在37℃、5％CO₂下。

转染当天，将HeLa或HDF的完全培养基替换为无血清的Opti-MEM培养基(ThermoFisher)。将HSkMC的培养基换成新鲜的完全分化培养基。

在Opti-MEM中，将每种RNA以1/1.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine2000(HeLa和HDF)复合20分钟或以1/2.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine3000(HSkMC)复合20分钟。

然后将脂质复合的mRNA添加到细胞中进行转染，其中总体积为150μl，每孔200ngRNA(HeLa和HDF)或100ng RNA(HSkMC)。

转染开始后90分钟，用100μl/孔的完全培养基替换100μl/孔的HeLa或HDF的转染溶液。在进行In-Cell-Western分析之前，将细胞进一步保持在37℃、5％CO₂下。

转染开始后36小时，使用针对POI的一抗(小鼠单克隆抗POI；Santa Cruz)和随后的IRDye结合的二抗(IRDye 800CW山羊抗兔IgG；LI-COR)通过In-Cell-Western对POI表达进行定量。In-Cell-Western的所有步骤均在室温下进行。

首先，将细胞用PBS洗涤一次，并用3.7％甲醛的PBS溶液固定10分钟。用PBS洗涤一次后，用Perm/Wash缓冲液(BD)透化细胞30分钟。用Odyssey封闭缓冲液(PBS)(LI-COR)和Perm/Wash缓冲液(BD)的混合物(1∶1)封闭细胞30分钟。

接下来，将细胞与一抗(在Perm/Wash缓冲液(BD)中按1∶200稀释)孵育150分钟。然后将细胞洗涤3次(Perm/Wash缓冲液(BD))。

随后，将细胞与二抗和Cell-Tag 700 Stain(LI-COR)的混合物(分别在Perm/Wash缓冲液(BD)中以1∶200和1∶1000稀释)在黑暗中一起孵育1小时。

洗涤4次(Perm/Wash缓冲液(BD))后，将PBS添加至细胞，并使用

CLx成像系统(LI-COR)对板进行扫描。

使用Image Studio Lite软件对荧光(800nm)进行定量，并将结果与设置为100％的包含RPL32/ALB7-UTR组合的参考构建体的表达进行比较。RPL32衍生的5′-UTR的序列示于SEQ ID NO：21(DNA)和SEQ ID NO：22(RNA)。ALB7衍生的3′-UTR的序列示于SEQ ID NO：35(DNA)和SEQ ID NO：36(RNA)。

通过常规FACS分析来分析Sol8细胞。

将细胞接种在TC板24孔标准F板(Sarstedt)上。将Sol8细胞(40000个细胞，1000μl/孔)接种24小时，然后在相容的完全细胞培养基中转染。将细胞维持在37℃、5％CO₂下。

转染当天，将完全培养基替换为无血清的Opti-MEM培养基(Thermo Fisher)。

在Opti-MEM中，将每种RNA以1/1.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine2000复合20分钟。

然后将脂质复合的mRNA添加到细胞中，以500ng RNA(每孔的总体积为1500μl)进行转染。

转染开始后190分钟；将Sol8细胞的全部转染溶液(1500μl)替换为2000μl/孔的完全培养基。在进行FACS分析之前，将细胞进一步保持在37℃、5％CO₂下。

转染开始后36小时，使用针对POI的一抗(小鼠单克隆抗POI；Santa Cruz)和随后的APC结合的二抗(山羊抗小鼠IgG APC；Biolegend)通过FACS分析定量pri表达。FACS分析的所有步骤均在室温或4℃下进行。

首先，将细胞分离(40mM Tris HCl pH 7.5、150mM NaCl、1mM EDTA的H₂O溶液中；在室温下5分钟)，用PBS洗涤一次。用PBS洗涤后，使用针对POI的抗体进行细胞内染色。因此，首先将细胞与Cytofix/Cytoperm(BD)在4℃孵育30分钟。接下来，将细胞在Perm/Wash缓冲液(0.5％BSA和0.1％皂苷的PBS溶液)中洗涤3分钟。随后，将细胞与一抗(在Perm/Wash缓冲液中以1∶200稀释)在4℃孵育30分钟。

在Perm/Wash缓冲液(BD)中洗涤细胞后，将细胞与二抗(在Perm/Wash缓冲液中以1∶500稀释)在4℃孵育30分钟。

然后洗涤细胞(Perm/Wash缓冲液(BD))、在100μl PFEA缓冲液(PBS+2％FCS+2mMEDTA+0.01％NaN₃)中重悬，并使用BD FACS Canto II进行分析。

用Aqua荧光活性染料(Invitrogen)进行活/死染色。

测量平均荧光强度，并将结果与设置为100％的包含RPL32/ALB7-UTR组合的参考构建体的表达进行比较。RPL32衍生的5′-UTR的序列示于SEQ ID NO：21(DNA)和SEQ ID NO：22(RNA)。ALB7衍生的3′-UTR的序列示于SEQ ID NO：35(DNA)和SEQ ID NO：36(RNA)。

显然，通过使用可操作地连接至编码区的本发明的UTR组合，可以显著提高表达。

实施例4：通过使用特定的UTR组合增加目的单链抗体构建体的表达

将细胞接种在具有黑色边缘和透明光学底部的96孔板上(Nunc微孔板；ThermoFisher)。将HeLa细胞(10000个细胞，200μl/孔)接种24小时，然后在相容的完全细胞培养基中转染。将细胞维持在37℃、5％CO₂下。

转染当天，将HeLa或HDF的完全培养基替换为无血清的Opti-MEM培养基(ThermoFisher)。将HSkMC的培养基换成新鲜的完全分化培养基。

将1μg目的单链抗体构建体mRNA[c＝0.1g/l]与Lipofectamine2000复合。然后将转染复合物的一部分稀释5倍，将另一部分稀释10倍(中等剂量)。然后将500ng目的单链抗体构建体转染到细胞中。转染24小时后，通过显微镜检查细胞。取上清液，并使用包覆抗体山羊抗人IgG(SouthernBiotech)和检测抗体山羊抗人IgG生物素(Dianova)在抗体ELISA/抗Fc-ELISA分析中进行定量。

显然，通过使用可操作地连接至编码区的本发明的UTR组合，可以显著提高表达。

在该实施例中使用的序列的概况示于下表4D中，其中来自实施例4的未公开的目的抗体构建体的序列由496个氨基酸组成，且CDS由1491个核酸组成，而来自实施例5(表4D)的目的抗原构建体由553个氨基酸组成，CDS由1662个核酸组成。本领域技术人员能够从实施例4的表4D的公开中得出相应的序列。

实施例5：通过使用特定的UTR组合增加目的抗原构建体表达

通过FACS来分析HEK293T细胞。将293T细胞以200000细胞/孔的密度(200000细胞/2ml)接种在6孔板中。在Opti-MEM中，将每种RNA以1/1.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine2000复合20分钟。然后将脂质复合的mRNA添加到细胞中进行转染，其中总体积为500μl，每孔2μg RNA。转染开始后4h，将转染溶液换成2000μl/孔的完全培养基。在进行FACS分析之前，将细胞进一步保持在37℃、5％CO₂下。表4D中示出了在该实施例中使用的序列。

表4D：来自实施例5的用于目的蛋白质的序列

转染24小时后，使用标准程序通过FACS分析定量目的抗原的表达。简而言之，将细胞分离(40mM Tris HCl pH 7.5、150mM NaCl，1mM EDTA的H₂O溶液；RT下5分钟)，用PBS洗涤，并用抗抗原的小鼠抗体在表面染色。将细胞重悬于100μl PFEA缓冲液(PBS+2％FCS+2mMEDTA+0.01％NaN₃)中，并使用BD FACS Canto II进行分析。用Aqua荧光活性染料(Invitrogen)进行活/死染色。

包含可操作地连接至编码各种目的蛋白的编码序列的本发明UTR组合的RNA的蛋白表达结果显示在图1至图11中。

显然，通过使用可操作地连接至编码区的本发明UTR组合，可以显著且协同地增加表达。

实施例6：mRNA转染后通过萤光素酶表达测试UTR组合的协同作用

转染前24小时，将人皮肤成纤维细胞(HDF)接种到相容的96孔板的完全细胞培养基中(10000个细胞，200μl/孔)。转染当天，将完全培养基替换为无血清的Opti-MEM培养基(Thermo Fisher)。

将每种RNA以1/1.5(重量/体积)的比例与Lipofectamine2000复合。然后将脂质复合的mRNA添加到细胞中进行转染，其中每孔25ng，总体积为200μl。转染开始后90分钟，将HDF的150μl/孔转染溶液替换为150μl/孔的完全培养基。将细胞进一步维持在37℃、5％CO₂下。在本实施例中使用的序列对应于实施例2中所示的序列，其具有或不具有5′UTR或3′UTR或同时具有5′UTR和3′UTR。

在第一组实验中，转染开始后6小时后，在细胞裂解物中测量Ppluc表达。开始转染后24小时、48小时或72小时后，进行进一步的实验。

加入100μl的1x被动裂解缓冲液(Promega，商品号E1941)使细胞裂解至少15分钟。将裂解的细胞在-80℃下孵育至少1小时。将裂解的细胞解冻，然后将20μl加入白色LIA分析板(Greiner商品号655075)。

在读板器(Berthold Technologies TriStar2 LB 942)中以相对光单位(RLU)测量萤光素酶活性。将板放入具有甲虫汁注射装置(PJK GmbH)的读板器中，其包含萤火虫萤光素酶的底物。每孔加入50μl甲虫汁。

然后在各个时间点确定各种UTR组合的效果：

● 5′-UTR实现的表达增加；

● 3′-UTR实现的表达增加；

● 一个mRNA分子中5′-UTR和3′-UTR的组合实现的表达增加。

接下来，将5′-UTR和3′-UTR组合的实际增加量除以预测的5′-UTR和3′-UTR叠加作用的增加量，以计算协同作用水平。值＞1表示协同作用，即不只是叠加作用。

这些实验的结果显示在表4、表5、表6和表7中，即从转染开始6小时、24小时、48小时或72小时后的Ppluc表达。

表4：开始转染后6小时后，细胞裂解物中的Ppluc表达。第2至5列中的加号和减号表示存在或不存在各个5′-UTR或3′-UTR情况下的结果

表5：开始转染后24小时后，细胞裂解物中的Ppluc表达。第2至5列中的加号和减号表示存在或不存在各个5′-UTR或3′-UTR情况下的结果

表6：开始转染后48小时后，细胞裂解物中的Ppluc表达。第2至5列中的加号和减号表示存在或不存在各个5′-UTR或3′-UTR情况下的结果

表7：开始转染后72小时后，细胞裂解物中的Ppluc表达。第2至5列中的加号和减号表示存在或不存在各个5′-UTR或3′-UTR情况下的结果

显然，通过萤光素酶表达可以证明UTR组合的协同作用。

Claims (54)

1.一种人工核酸分子，其包含

a.至少一个5′非翻译区(5′UTR)元件，其衍生自选自HSD17B4、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B和UBQLN2的基因的5′UTR；

b.至少一个3′非翻译区(3′UTR)元件，其衍生自选自PSMB3、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1和RPS9的基因的3′UTR；和任选地

c.至少一个编码区，其可操作地连接至所述5′UTR和所述3′UTR。

2.根据权利要求1所述的人工核酸分子，其中所述5′UTR和/或所述3′UTR与所述编码区是异源的。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的人工核酸分子，其中每个UTR包括天然存在的DNA序列及其同源物、变体、片段和相应的RNA序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的人工核酸分子，其包含

a-1.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-2.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-3.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-4.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

a-5.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-1.至少一个衍生自UBQLN2基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-2.至少一个衍生自ASAH1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-3.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-4.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

b-5.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-1.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-2.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-3.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-4.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

c-5.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-1.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自PSMB3基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-2.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-3.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-4.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

d-5.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-1.至少一个衍生自TUBB4B基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-2.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-3.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-4.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-5.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

e-6.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-1.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-2.至少一个衍生自ATP5A1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-3.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-4.至少一个衍生自HSD17B4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

f-5.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-1.至少一个衍生自MP68基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-2.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-3.至少一个衍生自NDUFA4基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-4.至少一个衍生自NOSIP基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

g-5.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-1.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-2.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自GNAS基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-3.至少一个衍生自RPL31基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自NDUFA1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-4.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

h-5.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自COX6B1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

i-1.至少一个衍生自SLC7A3基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自RPS9基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件；或

i-2.至少一个衍生自Ndufa4.1基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件，和至少一个衍生自CASP1基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件。

5.根据权利要求4所述的人工核酸分子，其包含根据a-1、a-2、a-3、a-4或a-5的UTR元件，优选根据a-1的UTR元件。

6.根据权利要求4所述的人工核酸分子，其包含根据a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；c-1(NDUFA4/RPS9)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；e-3(MP68/RPS9)；e-4(NOSIP/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；e-5(ATP5A1/RPS9)；d-4(HSD17B4/NUDFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；b-1(UBQLN2/RPS9)；b-2(ASAH1/RPS9)；b-4(HSD17B4/CASP1)；e-6(ATP5A1/COX6B1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；g-5(RPL31/CASP1)；h-1(RPL31/COX6B1)；和/或c-5(ATP5A1/PSMB3)的UTR元件。

7.根据权利要求4所述的人工核酸分子，其包含根据a-1(HSD17B4/PSMB3)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；e-2(RPL31/RPS9)；a-5(MP68/PSMB3)；d-1(RPL31/PSMB3)；a-2(NDUFA4/PSMB3)；h-1(RPL31/COX6B1)；b-1(UBQLN2/RPS9)；a-4(NOSIP/PSMB3)；c-5(ATP5A1/PSMB3)；b-5(NOSIP/COX6B1)；d-4(HSD17B4/NDUFA1)；i-1(SLC7A3/RPS9)；i-2(Ndufa4.1/CASP1)；f-3(HSD17B4/COX6B1)；b-4(HSD17B4/CASP1)；g-5(RPL31/CASP1)；c-2(NOSIP/NDUFA1)；e-4(NOSIP/RPS9)；c-4(NDUFA4/NDUFA1)；和/或d-5(SLC7A3/NDUFA1)的UTR元件。

8.根据权利要求4所述的人工核酸分子，其包含根据a-4(NOSIP/PSMB3)；a-1(HSD17B4/PSMB3)；a-5(MP68/PSMB3)；d-3(SLC7A3/GNAS)；a-2(NDUFA4/PSMB3)；a-3(SLC7A3/PSMB3)；d-5(SLC7A3/NDUFA1)；i-1(SLC7A3/RPS9)；d-1(RPL31/PSMB3)；d-4(HSD17B4/NDUFA1)；b-3(HSD17B4/RPS9)；f-3(HSD17B4/COX6B1)；f-4(HSD17B4/GNAS)；h-5(SLC7A3/COX6B1)；g-4(NOSIP/CASP1)；c-3(NDUFA4/COX6B1)；b-1(UBQLN2/RPS9)；c-5(ATP5A1/PSMB3)；h-4(SLC7A3/CASP1)；h-2(RPL31/GNAS)；e-1(TUBB4B/RPS9)；f-2(ATP5A1/NDUFA1)；c-2(NOSIP/NDUFA1)；b-5(NOSIP/COX6B1)；和/或e-4(NOSIP/RPS9.1)的UTR元件。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的人工核酸分子，其中

-衍生自HSD17B4基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：1的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：1的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：2的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：2的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自ASAH1基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：3的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：3的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：4的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：4的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自ATP5A1基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：5的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：5的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：6的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：6的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自MP68基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：7的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：7的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：8的RNA序列，或与根据SEQ ID N0：8的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自NDUFA4基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：9的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：9的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ ID NO：10的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：10的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自NOSIP基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：11的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：11的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：12的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：12的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自RPL31基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：13的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：13的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；根据SEQ ID NO：14的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：14的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自SLC7A3基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：15的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：15的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：16的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：16的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自TUBB4B基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：17的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：17的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：18的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：18的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自UBQLN2基因的5′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：19的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：19的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：20的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：20的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自PSMB3基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：23的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：23的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：24的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：24的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自CASP1基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：25的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：25的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：26的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：26的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自COX6B1基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：27的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：27的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：28的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：28的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自GNAS基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：29的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：29的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：30的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：30的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；

-衍生自NDUFA1基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：31的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：31的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：32的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：32的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体；和/或

-衍生自RPS9基因的3′UTR元件包含或组成为根据SEQ ID NO：33的DNA序列，或与根据SEQ ID NO：33的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的DNA序列或其片段或变体；或根据SEQ IDNO：34的RNA序列，或与根据SEQ ID NO：34的核酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的RNA序列或其片段或变体。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的人工核酸分子，其中所述编码区位于所述5′UTR和所述3′UTR之间，优选地位于所述5′UTR的下游和所述3′UTR的上游。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个编码区编码至少一种目的(多)肽或蛋白质，所述目的(多)肽或蛋白质任选地选自抗原性(多)肽或蛋白质、变应原性(多)肽或蛋白质、治疗性(多)肽或蛋白质、抗体或所述目的(多)肽或蛋白质的片段、变体或衍生物。

12.根据权利要求11所述的人工核酸分子，其中至少一种抗原性(多)肽或蛋白质选自肿瘤抗原、病原性抗原、自身抗原、同种抗原或变应原性抗原。

13.根据权利要求12所述的人工核酸分子，其中至少一种病原性抗原选自细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原或原生动物抗原。

14.根据权利要求11所述的人工核酸分子，其中所述治疗性(多)肽或蛋白质选自

-替代缺失、缺陷或突变的蛋白质的治疗性(多)肽或蛋白质；

-对治疗遗传性疾病或获得性疾病、感染性疾病或肿瘤(例如癌症或肿瘤疾病)有益的治疗性(多)肽或蛋白质；

-辅助性或免疫刺激性治疗性(多)肽或蛋白质；

-治疗性抗体；

-肽激素；

-基因编辑剂；

-免疫检查点抑制剂；

-T细胞受体；

-酶；和/或

-任何所述治疗性(多)肽或蛋白质的变体、片段或衍生物。

15.根据权利要求10至14中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个编码区还编码

(a)至少一种效应域；

(b)至少一种肽标签或蛋白质标签；

(c)至少一种定位信号或定位序列；

(d)至少一种核定位信号(NLS)；

(e)至少一种信号肽；和/或

(f)至少一种肽接头；

(g)分泌信号肽(SSP)，

(h)多聚化元件，其包括二聚化元件、三聚化元件、四聚化元件或寡聚化元件；

(i)病毒样颗粒(VLP)形成元件；

(j)跨膜元件；

(k)树突状细胞靶向元件；

(l)免疫辅助元件；

(m)促进抗原呈递的元件；

(n)2A肽；

(o)延长蛋白质半衰期的元件；和/或

(p)用于翻译后修饰(例如糖基化)的元件，

其中所述人工核酸分子还任选地包含至少一个内部核糖体进入位点(IRES)和/或至少一个miRNA结合位点。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个编码区编码包含或组成为根据SEQ ID NO：41至45的任一项的氨基酸序列、或与根据SEQ ID NO：42至45的任一项的氨基酸序列具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的氨基酸序列、或这些序列中的任何序列的变体或片段的(多)肽或蛋白质。

17.根据权利要求1至15中任一项所述的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子的至少一个编码区包含或组成为根据SEQ ID NO：46至49的任一项的核酸序列，或与所述核酸序列的任一项具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的核酸序列。

18.根据权利要求1至16中任一项所述的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子包含或组成为根据SEQ ID NO：50至368的任一项的核酸序列，或与所述核酸序列的任一项具有按优先级升序排列的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性的核酸序列。

19.根据权利要求1至17中任一项所述的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子是RNA。

20.根据权利要求19所述的RNA，其中所述RNA是单顺反子RNA、双顺反子RNA或多顺反子RNA。

21.根据权利要求19或20所述的RNA，其中所述RNA是mRNA、病毒RNA、自我复制RNA或复制子RNA。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其中所述人工核酸是修饰的核酸，优选稳定化核酸，或其中所述人工核酸包含至少一种修饰的或非天然存在的核苷酸、骨架修饰、糖修饰或碱基修饰。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其中

-人工核酸的至少一个编码区的G/C含量与相应的野生型人工核酸的相应编码序列的G/C含量相比增加，和/或其中

-人工核酸的至少一个编码区的C含量与相应的野生型人工核酸的相应编码序列的C含量相比增加，和/或其中

-人工核酸的至少一个编码区中的密码子适应于人类密码子选用，其中密码子适应指数(CAI)优选在人工核酸的至少一个编码序列中增加或最大化，

-其中由人工核酸编码的氨基酸序列与由相应的野生型人工核酸编码的氨基酸序列相比，优选不改变。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其包含5′-帽结构，优选m7GpppN或帽1。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其包含至少一个组蛋白茎环。

26.根据权利要求25所述的人工核酸，优选RNA，其中所述至少一个组蛋白茎环包含根据下式(I)或(II)的核酸序列：

式(I)(不具有茎邻接元件的茎环序列)：

式(II)(具有茎邻接元件的茎环序列)：

其中：

茎1邻接元件或茎2邻接元件N_1-6是1个至6个，优选2个至6个，更优选2个至5个，甚至更优选3个至5个，最优选4个至5个或5个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；

茎1[N_0-2GN_3-5]与元件茎2反向互补或部分反向互补，并且是5个至7个核苷酸的连续序列；

其中N_0-2是0个至2个，优选0个至1个，更优选1个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；

其中N_3-5是3个至5个，优选4个至5个，更优选4个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物，和

其中G是鸟苷或其类似物，并且可以任选地被胞苷或其类似物替代，条件是其在茎2中的互补核苷酸胞苷被鸟苷替代；

环序列[N_0-4(U/T)N_0-4]位于元件茎1和茎2之间，并且是3个至5个核苷酸，更优选4个核苷酸的连续序列；

其中每个N_0-4彼此独立地为0个至4个，优选1个至3个，更优选1个至2个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；和

其中U/T代表尿苷，或任选的胸苷；

茎2[N_3-5CN_0-2]与元件茎1反向互补或部分反向互补，并且是5个至7个核苷酸的连续序列；

其中N_3-5是3个至5个，优选4个至5个，更优选4个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；

其中N_0-2是0个至2个，优选0个至1个，更优选1个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A、U、T、G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；和

其中C是胞苷或其类似物，并且可以任选地被鸟苷或其类似物替代，条件是其在茎1中的互补核苷酸鸟苷被胞苷替代；

其中

茎1和茎2能够彼此碱基配对，

形成反向互补序列，其中茎1和茎2之间能发生碱基配对，或

形成部分反向互补序列，其中茎1和茎2之间能发生不完全的碱基配对。

27.根据权利要求25或26所述的人工核酸，优选RNA，其中所述至少一个组蛋白茎环包含根据下式(Ia)或(IIa)的核酸序列：

式(Ia)(不具有茎邻接元件的茎环序列)：

式(IIa)(具有茎邻接元素的茎环序列)：

28.根据权利要求1至27中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其任选地包含聚腺苷酸序列，优选地包含10个至200个、10个至100个、40个至80个、或50个至70个腺嘌呤核苷酸。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其任选地包含聚胞苷酸序列，优选地包含10个至200个、10个至100个、20个至70个、20个至60个、或10个至40个胞嘧啶核苷酸。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的人工核酸，优选RNA，其包含，优选地在5′至3′方向包含以下元件：

a)5′-帽结构，优选m7GpppN或帽1；

b)5′-UTR元件，其包含或组成为以下核酸序列，该核酸序列衍生自如权利要求1至9中任一项所限定的5′-UTR，优选包含对应于根据SEQ ID NO：1至20的核酸序列、或其同源物、片段或变体；

c)如权利要求10至18中任一项所限定的至少一个编码序列，

d)3′-UTR元件，其包含或组成为以下核酸序列，该核酸序列衍生自如权利要求1至9中任一项所限定的3′-UTR，优选包含对应于根据SEQ ID NO：23至34的核酸序列、或其同源物、片段或变体；

e)任选的聚腺苷酸尾，其优选由10个至1000个、10个至500个、10个至300个、10个至200个、10个至100个、40个至80个或50个至70个腺嘌呤核苷酸组成，

f)任选的聚胞苷酸尾，其优选由10个至200个、10个至100个、20个至70个、20个至60个或10个至40个胞嘧啶核苷酸组成，和

g)任选的组蛋白茎环。

31.一种组合物，其包含至少一个或多个根据权利要求1至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA，和药学上可接受的载剂和/或赋形剂。

32.根据权利要求31所述的组合物，其中多个人工核酸分子中的至少两个各自(a)包含相同或不同的根据权利要求1至9中任一项的UTR元件的组合，和/或(b)编码不同的肽或蛋白质，其任选地选自根据权利要求11至17中任一项的肽或蛋白质。

33.根据权利要求31或32所述的组合物，其用作药物，任选地用作疫苗。

34.根据权利要求33所述的(药物)组合物，其优选包含至少一种包含根据权利要求6的UTR组合的人工核酸分子，其中所述(药物)组合物和/或所述人工核酸分子适用于靶向肝脏的递送。

35.根据权利要求33所述的(药物)组合物，其优选包含至少一种包含根据权利要求7的UTR组合的人工核酸分子，其中所述(药物)组合物和/或所述人工核酸分子适用于皮下、皮肤内、皮内、皮内、局部或经皮施用。

36.根据权利要求33所述的(药物)组合物，其优选包含至少一种包含根据权利要求8的UTR组合的人工核酸分子，其中所述(药物)组合物和/或所述人工核酸分子适用于肌内施用。

37.根据权利要求31至36中任一项所述的(药物)组合物或疫苗，其中所述人工核酸分子，优选RNA，与一种或多于一种阳离子化合物或聚阳离子化合物复合，优选与阳离子聚合物或聚阳离子聚合物、阳离子肽或蛋白质或聚阳离子肽或蛋白质例如鱼精蛋白、阳离子多糖或聚阳离子多糖和/或阳离子脂质或聚合物载体或聚阳离子脂质或聚合物载体复合。

38.根据权利要求37所述的(药物)组合物或疫苗，其中所述人工核酸分子，优选RNA，与一种或多于一种阳离子肽或蛋白质或聚阳离子肽或蛋白质的N/P比为约0.1至10，包括约0.3至4、约0.5至2、约0.7至2和约0.7至1.5。

39.根据权利要求31至38中任一项所述的(药物)组合物或疫苗，其中所述人工核酸分子，优选RNA，与一种或多于一种脂质复合，从而形成脂质纳米颗粒、脂质复合体和/或优选脂质体。

40.根据权利要求31至39中任一项所述的(药物)组合物或疫苗，其还包含至少一种其他活性剂和/或至少一种佐剂。

41.根据权利要求31至40中任一项所述的(药物)组合物或疫苗，其还包含选自小干扰RNA(siRNA)、反义RNA(asRNA)、环状RNA(circRNA)、核酶、适体、核糖开关、免疫刺激性RNA(isRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)、小核内RNA(snRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、微小RNA(miRNA)和与Piwi相互作用的RNA(piRNA)的非编码RNA。

42.根据权利要求41所述的(药物)组合物或疫苗，其中所述免疫刺激性RNA(isRNA)包含根据式(III)(G_lX_mG_n)、式(IV)(C_lX_mC_n)、式(V)(N_uG_lX_mG_nN_v)_a和/或式(VI)(N_uC_lX_mC_nN_v)_a的至少一种RNA序列。

43.根据权利要求41或42中任一项所述的(药物)组合物或疫苗，其包含由聚合物载体和isRNA形成的聚合物载体货物复合物，所述聚合物载体优选包含二硫键交联的阳离子肽，优选Cys-Arg12和/或Cys-Arg12-Cys。

44.一种试剂盒，优选试剂套装，其包含根据权利要求1至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA，或根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗，和任选的液体载剂和/或任选的有关所述人工核酸分子或(药物)组合物或疫苗的施用和剂量的信息的技术说明。

45.根据权利要求44所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含乳酸林格溶液作为一部分。

46.根据权利要求1至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA、根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗、或根据权利要求44或45所述的试剂盒，其用作药物。

47.根据权利要求1至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA、根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗、或根据权利要求44或45所述的试剂盒，其用于治疗遗传病、癌症、感染性疾病、炎性疾病、(自身)免疫疾病、变态反应，和/或用于基因疗法和/或免疫调节。

48.根据权利要求47之用途的人工核酸分子，优选RNA、(药物)组合物或疫苗或试剂盒，其中所述用途包括(a)向有需要的患者施用所述人工核酸分子，优选RNA、所述(药物)组合物或疫苗、或所述试剂盒。

49.根据权利要求6至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA、根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗、或根据权利要求44或45所述的试剂盒，其用于增加所述人工核酸分子在肝组织、肝细胞或肝细胞系中的表达效率的方法中，所述(药物)组合物或试剂盒包含至少一种根据权利要求6至30中任一项所述的人工核酸分子。

50.根据权利要求7至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA、根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗、或根据权利要求44或45所述的试剂盒，其用于增加所述人工核酸分子在皮肤组织、皮肤细胞或皮肤细胞系中的表达效率的方法中，所述(药物)组合物或试剂盒包含至少一种根据权利要求7至30中任一项所述的人工核酸分子。

51.根据权利要求8至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA、根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗、或根据权利要求44或45所述的试剂盒，其用于增加所述人工核酸分子在肌肉组织、肌肉细胞或肌肉细胞系中的表达效力的方法中，所述(药物)组合物或试剂盒包含至少一种根据权利要求8至30中任一项所述的人工核酸分子。

52.一种治疗或预防任选地选自遗传病、癌症、感染性疾病、炎性疾病、(自身)免疫疾病、变态反应的疾病和/或用于基因治疗和/或免疫调节的方法，其中所述方法包括向有需要的对象施用有效量的根据权利要求1至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA、根据权利要求31至43中任一项所述的(药物)组合物或疫苗、或根据权利要求44或45中任一项所述的试剂盒。

53.一种用于增加人工核酸分子，优选RNA的表达效率的方法，所述人工核酸分子，优选RNA包含编码蛋白质或肽，优选根据权利要求11至16中任一项的蛋白质或肽的至少一个编码区，所述方法包括

(a)使所述编码区与至少一个衍生自选自HSD17B4、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B和UBQLN2的基因的5′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的5′UTR元件结合；

(b)使所述编码区与至少一个衍生自选自PSMB3、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1和RPS9的基因的3′UTR或其相应的RNA序列、同源物、片段或变体的3′UTR元件结合；和

(c)获得根据权利要求1至30中任一项所述的人工核酸分子，优选RNA。

54.一种鉴定能够增加在期望组织或衍生自期望组织的细胞中的表达效率的5′UTR和3′UTR的组合的方法，其包括：

a)生成人工核酸分子(“测试构建体”)的文库，每个包含编码可检测的报告多核苷酸，优选所选的萤光素酶或eGFP的“报告ORF”，所述“报告ORF”可操作地连接至如权利要求3所限定的5′UTR之一和/或3′UTR之一；

b)提供包含可操作地连接至参考5′UTR和3′UTR，优选RPL32和ALB7的“报告ORF”的人工核酸分子作为“参考构建体”；

c)在合适的条件下将所述测试构建体和所述参考构建体引入期望的组织或细胞中以使其表达；

d)由测试构建体和参考构建体的“报告ORF”检测和定量多肽的表达；

e)比较测试构建体和参考构建体的多肽表达；

其中将特征在于与参考构建体相比多肽表达增加的测试构建体鉴定为能够增加在期望组织或细胞中的表达效率。

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