CN111593089A - 一种β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种基于比率荧光法的β‑半乳糖苷酶活力检测试剂盒，包括二‑β‑D‑吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于反应缓冲液中所得的反应试剂，其中FDG的浓度为5‑15ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为15‑25nmol/mL。该检测试剂盒还可包括标准色卡和/或β‑半乳糖苷酶标准品。本申请还提供了采用该β‑半乳糖苷酶活力检测试剂盒检测样品中的β‑半乳糖苷酶活力的方法。本发明的β‑半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法提供了基于荧光比率的变化的β‑半乳糖苷酶活力可视化检测平台，能便捷地对待测样品中的β‑半乳糖苷酶活力进行定性或定量检测。

Description

一种β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒，以及采用该检测试剂盒检测β-半乳糖苷酶的检测方法。

背景技术

lacZ基因编码的β-半乳糖苷酶(β-Gal)是一种糖苷水解酶，可以催化β-半乳糖苷的水解，去除鞘脂、糖蛋白、神经节苷脂和硫酸角蛋白中的半乳糖残基。β-半乳糖苷酶在食品工业中的乳制品加工已得到广泛的应用，能将乳制品中的乳糖水解成半乳糖，降低乳制品的乳糖含磷，提高乳制品的可消化性，可用于生产低乳糖牛奶，还可用于生产低聚半乳糖。同时，在生物医学领域，已发现β-半乳糖苷酶在细胞衰老和原发性卵巢癌等癌症中过量表达。癌症是目前全世界人口死亡的重要原因，准确的诊断对于癌症治疗至关重要，过量表达的酶通常是癌症诊断中必不可少的标志物之一。因此，在食品工业领域、医疗诊断行业及生物科研领域，都需要检测β-半乳糖苷酶的活力。

近年来，已经开发了几种用于β-半乳糖苷酶活力检测的方法，例如比色法、磁共振成像法、表面增强拉曼散射法和荧光法。荧光方法由于其简单、灵敏、选择性高和非侵入性，引起了人们的极大兴趣。然而，已开发的荧光方法仍存在一些局限性，例如单波长发射、量子产率低、光稳定性差等缺点，尤其是可视化不佳，使用不方便。因此，本发明仍需要便捷的β-半乳糖苷酶活力检测的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的β-半乳糖苷酶荧光检测方法可视化不佳的问题，而提供一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和采用该检测试剂盒检测β-半乳糖苷酶的方法。

因此，在第一方面，本发明提供一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒包括二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于反应缓冲液中所得的反应试剂，FDG的浓度为5-15ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为15-25nmol/mL。

在本发明的实施方案中，在反应试剂中，FDG的浓度可为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度可为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25nmol/mL。在本发明的一个优选实施方案中，在反应试剂中，FDG的浓度为10ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为20nmol/mL。

进一步地，该反应缓冲液为Tris缓冲液或PBS缓冲液。优选地，该反应缓冲液为Tris缓冲液。该反应缓冲液的pH为7.5-8.5，例如7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4或8.5，优选地为8.0。

进一步地，该检测试剂盒还可包括标准色卡，该标准色卡通过以下方法制作：

(A)配制二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于Tris缓冲液的反应试剂，其中FDG的浓度为10ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为20nmol/mL，反应缓冲液的pH为8.0；

(B)取该反应试剂的等分试样，向其中加入或不加入β-半乳糖苷酶标准品，使β-半乳糖苷酶浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L，得到系列反应混合物；

(C)将该系列反应混合物在32℃下温育60分钟以进行酶促反应，得到系列酶促反应物；

(D)用480nm激发波长激发该系列酶促反应物以显示系列发射荧光颜色，并获取该系列酶促反应物的该系列发射荧光颜色的图像；

(E)用该系列发射荧光颜色的图像按β-半乳糖苷酶浓度顺序制作该标准色卡。

进一步地，该检测试剂盒还可包括β-半乳糖苷酶标准品。

在第二方面，本发明提供基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测方法。

在本发明第二方面的一个实施方案中，该检测方法包括以下步骤：

(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；

(2)使该样品与第一方面的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；

(3)用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；

(4)根据该发射荧光颜色判断该样品中β-半乳糖苷酶活力的大小，其中该发射荧光颜色越偏红色，表明β-半乳糖苷酶活力越小，该发射荧光颜色越偏绿色，表明β-半乳糖苷酶活力越大。

在本发明第二方面的另一个实施方案中，该检测方法包括以下步骤：

(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；

(2)使该样品与第一方面的包括标准色卡的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；

(3)用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；

(4)将该发射荧光颜色与该β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的标准色卡的颜色进行比对，判断该样品中β-半乳糖苷酶活力的数值。

在本发明第二方面的又一个实施方案中，该检测方法包括以下步骤：

(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；

(2)用第一方面的包括β-半乳糖苷酶标准品的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的β-半乳糖苷酶标准品配制包含浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L的β-半乳糖苷酶的系列标准溶液；

(3)使该样品和该系列标准溶液分别与该β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；

(4)用480nm激发波长分别激发各个酶促反应物，测量512nm发射波长发射的荧光的强度与632nm发射波长发射的荧光的强度的比率，即F512/F632比率；

(5)用该一系列标准溶液所得的F512/F632比率对相应的β-半乳糖苷酶浓度作图，得到β-半乳糖苷酶活力标准曲线；

(6)根据该样品所得的F512/F632比率，由该β-半乳糖苷酶活力标准曲线求出该样品中β-半乳糖苷酶活力的数值。

在上述检测方法中，酶促反应的温度为30-40℃，时间为50-70分钟。优选地，酶促反应的温度为32℃，时间为60分钟。

上述基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法可以在食品工业领域、医疗诊断行业及生物科研领域检测β-半乳糖苷酶的活力。尤其是，上述检测方法可以在β-半乳糖苷酶活力的非诊断性检测中应用。

本发明的有益效果：

本发明的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法采用二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)作为β-半乳糖苷酶的底物，采用CdZnTeS量子点作为内置的荧光校正物。在β-半乳糖苷酶的存在时，FDG的酶解产物荧光素产生绿色荧光，不同的β-半乳糖苷酶浓度产生的绿色荧光强度不同，而CdZnTeS量子点产生固定强度的红色荧光，因此酶促反应体系所产生的荧光颜色将为绿色荧光和红色荧光的荧光混合色。β-半乳糖苷酶浓度较低时，混合色偏向红色；随着β-半乳糖苷酶浓度提高，荧光混合色逐渐变成橙色、黄色、浅黄色；β-半乳糖苷酶浓度较高时，混合色偏向绿色。在包含β-半乳糖苷酶的待测样品的检测中，酶促反应后，根据样品荧光混合色，可以判断待测样品中的β-半乳糖苷酶活力的大小；根据样品荧光混合色并结合β-半乳糖苷酶活力标准色卡，可以判断待测样品中的β-半乳糖苷酶活力的数值；根据样品荧光混合色并结合β-半乳糖苷酶活力标准曲线，可以得出待测样品中的β-半乳糖苷酶活力的数值。由此，本发明开发了基于荧光比率的变化的β-半乳糖苷酶活力可视化检测平台，能便捷地对待测样品中的β-半乳糖苷酶活力进行定性或定量检测。

附图说明

图1示意性地显示无荧光的二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)在β-半乳糖苷酶(β-Gal)酶促反应作用下，产生发绿色荧光的荧光素；

图2示意性地显示CdZnTeS量子点的制备；

图3显示CdZnTeS量子点的形貌，其中(A)显示CdZnTeS量子点的TEM图像，(B)显示CdZnTeS量子点的尺寸分布；

图4是FDG和CdZnTeS量子点的混合溶液在添加或不添加β-半乳糖苷酶时的荧光光谱和照片，显示了与不添加β-半乳糖苷酶时((-)β-Gal)相比，在添加β-半乳糖苷酶时((+)β-Gal)，酶促反应后512nm处的绿色荧光显著增加，而632nm处的红色荧光稳定；

图5显示β-半乳糖苷酶活力检测中，(A)反应温度对FDG的酶促反应产物荧光素分子与CdZnTeS量子点的最高荧光强度比率(F512/F632)的影响，(B)反应时间对F512/F632比率的影响；

图6显示β-半乳糖苷酶浓度对β-半乳糖苷酶活力检测的影响，其中(A)显示FDG和CdZnTeS量子点的混合溶液在加入不同浓度的β-半乳糖苷酶时的荧光光谱，(B)显示β-半乳糖苷酶浓度对F512/F632比率的标准曲线，表明在一定的β-半乳糖苷酶浓度范围内，β-半乳糖苷酶浓度与F512/F632比率呈线性关系，误差条基于三次重复实验获得，激发波长480nm；

图7显示本发明的β-半乳糖苷酶荧光比率检测方法对β-半乳糖苷酶活力检测的选择性，其中实验设置如下：不加任何酶的空白对照(1)，β-半乳糖苷酶(2)，及作为β-半乳糖苷酶类似物的胰蛋白酶(3)、胃蛋白酶(4)、溶菌酶(5)、酪氨酸酶(6)、碱性磷酸酶(7)、葡萄糖氧化酶(8)、乙酰胆碱酯酶(9)，进行对比实验；

图8显示根据本发明实施例1，本发明的β-半乳糖苷酶比率荧光检测方法(A)和纯荧光检测方法(B)检测β-半乳糖苷酶的比较实验结果，其中β-半乳糖苷酶浓度从左到右分别为0、25、100、250、750、1000、2000和2500U/L。

具体实施方式

以下结合附图对本发明进行进一步的详细描述。应当理解，这些描述仅出于说明本发明的目的，并不意在以任何方式限制本发明。

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语与本公开所属领域技术人员通常理解的含义相同。如果有冲突，以本说明书的定义为准。除另有说明的外，本文所用的化学物质和仪器可市售获得。本文中使用的材料、方法和示例仅作说明用途，无意作为限制，除非特别指明。

本文所用的术语“包含β-半乳糖苷酶的样品”指任何需要测量其中的β-半乳糖苷酶活力的样品，例如食品样品如乳制品等，或者生物样品如组织液、细胞液等。一般地，食品样品可直接取样，而生物样品可通过将生物组织、细胞进行破碎获得组织液或细胞液，这是本领域公知的。

本文所用的术语“β-半乳糖苷酶浓度”以每升(L)样品中β-半乳糖苷酶活力单位(U)表示，因此，β-半乳糖苷酶浓度的单位为U/L。β-半乳糖苷酶活力单位如下定义：以邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物，在32℃下保温酶解，每分钟释放lμmol/L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活力单位。

本发明的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒包括二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点，其检测β-半乳糖苷酶的原理部分地如图1所示。二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)是一种非荧光底物，可以被β-半乳糖苷酶特异性酶解。在没有β-半乳糖苷酶存在时，FDG不发出荧光；当存在β-半乳糖苷酶时，酶解产物荧光素在480nm激发波长下发射512nm波长的绿色荧光，荧光的强度随酶浓度的增加而增加。CdZnTeS量子点在480nm激发波长下发射632nm波长的红色荧光，荧光强度不受酶浓度的影响。在实际检测β-半乳糖苷酶时，本发明的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)在β-半乳糖苷酶的存在下，酶解产生绿色荧光，不同的β-半乳糖苷酶浓度产生的绿色荧光强度不同，而CdZnTeS量子点产生固定强度的红色荧光，因此酶促反应体系所产生的荧光颜色将为绿色荧光和红色荧光的混合色。β-半乳糖苷酶浓度较低时，混合色偏向红色；随着β-半乳糖苷酶浓度提高，混合色逐渐变成橙色、黄色、浅黄色；β-半乳糖苷酶浓度较高时，混合色偏向绿色。由此，本发明开发了基于荧光比率的变化的β-半乳糖苷酶活力可视化检测的平台。

I.实验部分

1.材料和仪器

在实验中用到如下的材料和仪器：

Na₂TeO₃、CdCl₂·2.5H₂O和ZnCl₂购自上海化学试剂有限公司。

N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、二巯基丁二酸(DMSA)、二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和β-半乳糖苷酶购自美国Sigma-Aldrich。

所有化学试剂均为分析试剂级，无需进一步纯化即可使用。

所有溶液均用超纯水制备，超纯水通过Millipore水净化系统获得(18.25MΩ·cm,25℃)。

用RF-6000PC分光光度计(日本岛津)获取荧光光谱。

在JEOL(JEM 2100)电子显微镜(日本)上获取透射电子显微(TEM)图像。2.CdZnTeS量子点的制备和表征

通过一锅法制备CdZnTeS量子点，如图2所示。简单地讲，将CdCl₂·2.5H₂O(6.25mM)、ZnCl₂(6.25mM)和NAC(25mM)溶解在超纯水中，然后加入NaOH溶液(1.0M)，室温下加以搅拌将pH调节至9.0，制备Zn²⁺-Cd²⁺-NAC前体的溶液。然后，在剧烈搅拌下将DMSA(1.25mM)的0.1M NaOH溶液和Na₂TeO₃(1.25mM)加入该前体溶液中，并将pH值调节至11.0。将所得溶液转移到Teflon衬里的不锈钢高压釜中，在200℃下加热约17分钟。在冷却至室温后，以8000rpm离心10分钟，得到纯化的CdZnTeS量子点溶液，CdZnTeS量子点在溶液中的溶解性良好。

通过透射电子显微术(TEM)表征CdZnTeS量子点的形貌。如图3所示，TEM图像显示CdZnTeS量子点具有均匀的球形形态，平均尺寸为约5.5nm。对CdZnTeS量子点的光学性质的研究显示，在480nm的激发波长下，CdZnTeS量子点在632nm处显示出最大发射。

3.β-半乳糖苷酶的检测

为了进行β-半乳糖苷酶的检测，可将FDG(10ng/mL)、CdZnTeS量子点水溶液(20nm)和β-半乳糖苷酶溶液加入到20mM Tris缓冲溶液(pH＝8.0)中。反应试剂的总体积为300μL。将反应试剂在32℃下温育60分钟。然后，在480nm的激发波长下获取荧光光谱。

图4显示了FDG和CdZnTeS量子点的混合溶液在添加或不添加β-半乳糖苷酶情况下的荧光光谱和照片。由图可见，相对于不添加β-半乳糖苷酶时，在添加β-半乳糖苷酶时，在酶促反应期间，512nm波长的绿色荧光显著增加，而632nm波长的红色荧光稳定。因此，具有两个独立发射峰的CdZnTeS量子点和荧光素分子的混合物可以提供用于β-半乳糖苷酶可视化检测的比率荧光信号。

4.反应温度和反应时间对β-半乳糖苷酶活力检测的影响

为了优化β-半乳糖苷酶的检测，研究了β-半乳糖苷酶与FDG发生酶促反应产生荧光素分子的反应温度和反应时间对荧光素分子的产生量的影响。如图5A所示，在β-半乳糖苷酶酶促反应过程中，随着反应温度的提高，荧光素分子的荧光强度增强，而CdZnTeS量子点的荧光强度不变，荧光素分子和CdZnTeS量子点的最高荧光强度比率在32℃下获得。如图5B所示，在β-半乳糖苷酶酶促反应过程中，随着反应时间的延长，荧光素分子与CdZnTeS量子点的荧光比率增加，在60分钟时达到最高值(图5B)。因此选择32℃作为最佳反应温度，选择60分钟作为最佳反应时间。

5.β-半乳糖苷酶浓度对β-半乳糖苷酶活力检测的影响

在32℃反应温度和60分钟反应时间的最佳实验条件下，获得了荧光素分子(10ng/mL)和CdZnTeS量子点(20nmol/mL)与不同浓度的β-半乳糖苷酶的荧光光谱，以研究β-半乳糖苷酶浓度对β-半乳糖苷酶活力检测的影响。如图6A所示，随着β-半乳糖苷酶浓度的增加，荧光素分子在512nm处的荧光强度逐渐增强。如图6B所示，在12.5-500U/L之间的β-半乳糖苷酶浓度范围内，荧光素分子与CdZnTeS量子点的荧光比率与β-半乳糖苷酶浓度呈线性关系，根据3σ方程确定检测限为2.8U/L。

6.β-半乳糖苷酶活力检测的选择性

为了证明本发明的基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法对β-半乳糖苷酶活力检测的选择性，用胰蛋白酶、胃蛋白酶、溶菌酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、乙酰胆碱酯酶作为β-半乳糖苷酶类似物，以10ng/mL荧光素分子、20nmol/mL CdZnTeS量子点和100U/L的酶，在32℃反应温度和60分钟反应时间的最佳实验条件下进行了对比实验，并设置了不加任何酶的空白对照组。实验结果如图7所示，在β-半乳糖苷酶存在下的荧光素分子与CdZnTeS量子点的荧光比率远远高于在各种β-半乳糖苷酶类似物存在下的荧光素分子与CdZnTeS量子点的荧光比率，且各种β-半乳糖苷酶类似物存在下的荧光素分子与CdZnTeS量子点的荧光比率，与空白对照组的荧光素分子与CdZnTeS量子点的荧光比率相近。结果表明，本发明的基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法对β-半乳糖苷酶活力的检测具有高度的选择性。

II.实施例

实施例1

本实施例提供一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒。将1ng二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和2nmol CdZnTeS量子点溶于100mL Tris缓冲液(pH 8.0)中，制备成反应试剂，装入100mL试剂瓶中，并附上使用说明书，制备成检测试剂盒。

该包含FDG和CdZnTeS量子点的反应试剂在365nm UV灯下显示出极强的红色荧光(β-半乳糖苷酶为0U/L)。取该反应试剂的1mL等分试样，向其中分别加入β-半乳糖苷酶，使β-半乳糖苷酶活力分别为25、100、250、750、1000、2000和2500U/L，在32℃下酶促反应60分钟。然后，用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色。由图8A可见，60分钟后，酶促反应物的混合荧光颜色随着β-半乳糖苷酶浓度的增加从红色到黄色、黄绿色显示一系列颜色。按同样的条件进行了反应试剂中不添加CdZnTeS量子点的对比实验，如图8B所示，可见60分钟后，酶促反应物的绿色荧光颜色随着β-半乳糖苷酶浓度的增加到从淡绿色到深绿色显示一系列不同深度的绿色颜色。

结果表明，以其荧光强度不随β-半乳糖苷酶浓度的增加而变化的CdZnTeS量子点作为内置的荧光校正物，酶促反应物的红色到黄色、黄绿色的一系列颜色变化，相比于从淡绿色到深绿色的一系列绿色深度变化，更容易被肉眼所识别。因此，以CdZnTeS量子点构建的比率荧光法，可以实现β-半乳糖苷酶活力的简单可视化检测。在实际检测中，根据发射荧光颜色可以判断样品中β-半乳糖苷酶活力的大小，发射荧光颜色越偏红色，表明β-半乳糖苷酶活力越小，发射荧光颜色越偏绿色，表明β-半乳糖苷酶活力越大。

实施例2

本实施例以与实施例1类似的方式制备β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒，不同的是该检测试剂盒还包括预先制作好的标准色卡。

该标准色卡通过以下方法制作：按实施例1配制反应试剂。取该反应试剂的1mL等分试样，向其中加入或不加入β-半乳糖苷酶标准品，使β-半乳糖苷酶浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L，得到系列反应混合物。将该系列反应混合物在32℃下温育60分钟以进行酶促反应，得到系列酶促反应物。用480nm激发波长激发该系列酶促反应物以显示系列发射荧光颜色，并获取该系列酶促反应物的该系列发射荧光颜色的图像。用该系列发射荧光颜色的图像按β-半乳糖苷酶浓度顺序制作标准色卡。

在实际检测中，如下进行检测：按常规的生化样品制备方法制备包含β-半乳糖苷酶的样品；使该样品与检测试剂盒的反应试剂在32℃下温育60分钟以进行酶促反应；用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；将该发射荧光颜色与标准色卡的颜色进行比对，即可判断该样品中的β-半乳糖苷酶活力的数值。

实施例3

本实施例以与实施例1类似的方式制备β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒，不同的是该检测试剂盒还提供1mL的浓度为3μg/mL的β-半乳糖苷酶标准品。该检测试剂盒的反应试剂装在一个试剂瓶中，该β-半乳糖苷酶标准品装在另一个试剂瓶中。

在实际检测中，如下进行检测：按常规的生化样品制备方法制备包含β-半乳糖苷酶的样品；用β-半乳糖苷酶标准品配制包含浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L的β-半乳糖苷酶的系列标准溶液；使该样品和该系列标准溶液分别与检测试剂盒中的反应试剂在32℃下温育60分钟以进行酶促反应；用480nm激发波长分别激发各个酶促反应物，测量512nm发射波长发射的荧光的强度与632nm发射波长发射的荧光的强度的比率，即F512/F632比率；用该一系列标准溶液所得的F512/F632比率对相应的β-半乳糖苷酶浓度作图，得到β-半乳糖苷酶活力标准曲线；根据该样品所得的F512/F632比率，由该β-半乳糖苷酶活力标准曲线求出该样品中β-半乳糖苷酶活力的数值。

以上应用了具体实例对本发明进行了阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。本发明所属技术领域的技术人员依据本发明的构思，还可以做出若干简单推演、变形或替换。这些推演、变形或替换方案也落入本发明的权利要求范围内。

Claims (10)

1.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于反应缓冲液中所得的反应试剂，其中FDG的浓度为5-15ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为15-25nmol/mL。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述反应试剂中，所述FDG的浓度为10ng/mL，所述CdZnTeS量子点的浓度为20nmol/mL。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液为Tris缓冲液或PBS缓冲液，pH为7.5-8.5。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括标准色卡，所述标准色卡通过以下方法制作：

(A)配制二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于Tris缓冲液的反应试剂，其中FDG的浓度为10ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为20nmol/mL，反应缓冲液的pH为8.0；

(B)取所述反应试剂的等分试样，向其中加入或不加入β-半乳糖苷酶标准品，使β-半乳糖苷酶浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L，得到系列反应混合物；

(C)将所述系列反应混合物在32℃下温育60分钟以进行酶促反应，得到系列酶促反应物；

(D)用480nm激发波长激发所述系列酶促反应物以显示系列发射荧光颜色，并获取所述系列酶促反应物的所述系列发射荧光颜色的图像；

(E)用所述系列发射荧光颜色的图像按β-半乳糖苷酶浓度顺序制作所述标准色卡。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括β-半乳糖苷酶标准品。

6.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力非诊断性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；

(2)使所述样品与根据权利要求1-3中任一项所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；

(3)用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；

(4)根据所述发射荧光颜色判断所述样品中β-半乳糖苷酶活力的大小，其中所述发射荧光颜色越偏红色，表明β-半乳糖苷酶活力越小，所述发射荧光颜色越偏绿色，表明β-半乳糖苷酶活力越大。

7.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力非诊断性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；

(2)使所述样品与根据权利要求4所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；

(3)用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；

(4)将所述发射荧光颜色与根据权利要求4所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的标准色卡的颜色进行比对，判断所述样品中β-半乳糖苷酶活力的数值。

8.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力非诊断性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；

(2)用根据权利要求5所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的β-半乳糖苷酶标准品配制包含浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L的β-半乳糖苷酶的系列标准溶液；

(3)使所述样品和所述一系列标准溶液分别与根据权利要求5所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；

(4)用480nm激发波长分别激发各个酶促反应物，测量512nm发射波长发射的荧光的强度与632nm发射波长发射的荧光的强度的比率，即F512/F632比率；

(5)用所述一系列标准溶液所得的F512/F632比率对相应的β-半乳糖苷酶浓度作图，得到β-半乳糖苷酶活力标准曲线；

(6)根据所述样品所得的F512/F632比率，由所述β-半乳糖苷酶活力标准曲线求出所述样品中β-半乳糖苷酶活力的数值。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述酶促反应的温度为30-40℃，时间为50-70分钟。

10.根据权利要求10所述的检测方法，其特征在于，所述酶促反应的温度为32℃，时间为60分钟。

Images