CN111175405A - 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用 - Google Patents
一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法，先样品前处理，通过萃取对样本中的维生素进行提取，再色谱分离及质谱检测，针对每种维生素分别选择一对定性离子和一对定量离子，以各种维生素的相对保留时间和定性离子对作为定性依据，以标准品制作标准曲线定量。同时，本方法应用三个水平的质控品考察方法的准确性、有效性，避免检测结果失真。本发明首次实现了应用LC‑MS技术对一份血清样本中的六种脂溶性维生素同时检测的目的，减小了干扰物影响，该方法操作简便快速分析时间仅10min，高通量、成本低，有效监测人体内脂溶性维生素水平，对维生素的合理、安全补充具有指导意义，易于临床推广及普及。
Description
技术领域
本发明属于维生素分析检测领域，涉及一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用。
背景技术
维生素，分为脂溶性和水溶性维生素两类，是维持人体生命活动必须的一类有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。维生素缺乏或过量均会导致营养性疾病的发生，维生素A、维生素25(0H)D2、维生素25(0H)D3、维生素E、维生素K1、维生素K2均属于脂溶性维生素，人体六种维生素缺乏或过量时会表现出不同的症状:维生素A缺乏会导致夜盲症、眼部炎症等，过量会恶心、头痛等、易激激动、乏力；维生素D缺乏会导致儿童佝偻病、成人骨质软化病、老人骨质疏松症等，过量会导致骨骼退化和钙化、食欲减退、恶心、呕吐；维生素E缺乏会导致新生儿溶血性贫血、神经系统疾病等，过量会导致恶心呕吐、头疼、血压升高、口角炎；维生素K缺乏会导致凝血功能障碍、血液凝固时间延长和出血等，过量则会损害肝功能、导致血红蛋白尿和溶血性贫血。
现有技术中，常用的维生素检测方法主要包括毛细管电泳法、电化学分析法、高效液相色谱法、高效液相色谱质谱联用法等。其中电泳法、电化学法、高效液相色谱法存在一定的缺点，如：结果差异大、线性差、衍生化操作复杂、通量小等。而液相色谱质谱具有高灵敏度、高精确度、高通量的特点。且，脂溶性维生素分析方法大多只能单独测定维生素，
因此，一种基于液相色谱质谱联用的方法测定血液脂溶性维生素的方法成为急需解决的问题。
发明内容
本发明目的在于提供一种检测血液样品中多种脂溶性维生素的液质联用分析方法。
本发明所采取的技术方案是：
本发明第一方面，提供了一种血液脂溶性维生素的检测方法，采用液质联用方法进行检测，包括以下步骤：
一.溶液的制备
供试品溶液制备：取样品加入到甲醇中，混匀离心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮气吹干，甲醇复溶得供试品溶液；
标准品溶液的制备：将维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2标准品用甲醇溶解配制成标准品母液，将维生素K1用异丙醇溶解为标准品母液，将各标准品母液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的混合标准品溶液；
内标溶液制备：将维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2标准品用甲醇溶解配制成标准品母液，将维生素K1用异丙醇溶解为标准品母液，将各标准品母液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的混内标溶液；
二.测定
将上述制备的供试品溶液、标准品和内标溶液进行LC-MS测定。通过本发明使用超高效液相色谱-质谱法检测血清中六种脂溶性维生素，特异性强，灵敏性高，通量高，结果客观易于分析，尤其适合临床普及应用。
根据本发明的实施例，所述样品为血浆或血清样品。
根据本发明的实施例，其中洗脱采用梯度方式洗脱，流动相A为5mM甲酸铵和0.1％甲酸混合的乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸和5mM乙酸铵混合的甲醇溶液。
根据本发明的实施例，所述供试品溶液制备的操作为：取样品200～300μL，加入甲醇溶液800～900μL，混匀离心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮气吹干，100～150μL甲醇复溶得供试品溶液。
根据本发明的实施例，标准品溶液制备的操作为：用异丙醇配制维生素K1的标准储备液，用甲醇配制维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2的标准储备液，将各标准储备液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的标准品溶液。
根据本发明的实施例，梯度洗脱程序为：0-2min 0％B，2-9min 0-100％B，9-12100％B，12-12.1min 100％-0％B，12.1-15min 0％B。
根据本发明的实施例，MS检测的条件为：电喷雾离子源ESI源；采用正离子扫描模式；雾化气流量：3L/min；加热气流量:10L/min；接口温度：300℃；加热块温度：400℃；DL温度：250℃；干燥气流量：10L/min。
根据本发明的实施例，MS检测过程中化合物测量参数如下表所示，
根据本发明的实施例，色谱柱为WATERS CORTECS UPLC C18 Column色谱柱：2.1mm×100mm，1.6μm；柱温为35～40℃；优选的，柱温为40℃。
本发明第二方面，提供了一种用超高效液相色谱串联质谱法同时检测血液样品中六种脂溶性维生素的试剂盒，包括混合标准品母液，内标工作液，正己烷，甲醇，含有5mM甲酸铵和体积分数0.1％甲酸的乙腈：水(90：10)，含有0.1％甲酸和5mM甲酸铵的甲醇溶液、质控；所述六种脂溶性维生素为维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E、维生素K1和维生素K2。
根据本发明的实施例，将标准品制作标准曲线，以标准溶液浓度为X轴，标准品峰面积为Y轴；进行线性回归分析得回归方程。将相应维生素峰面积代入标准曲线方程，分别计算血清样品中六种脂溶性的浓度。
根据本发明的实施例，包括质控品：含有三个水平的低、中、高浓度质控血清，质控品由人工血清添加混合维生素标准物质制得，并通过检测确定靶值。
根据本发明的实施例，通过岛津8050LC-MS/MS法检测300份儿童，孕妇和成人样本，样本检测范围如下：维生素A：0.113-0.977μg/mL，α-维生素E：0.998-13.795μg/mL，25-羟基维生素D2：0-12.1ng/mL，25-羟基维生素D3：5.5-41.4ng/mL，D2+D3：5.5-100.0ng/mL，维生素K1：0.1-2.2ng/mL，维生素K2：0.1-0.86ng/mL。
本发明的有益效果是：
本发明通过对样本前处理方法和超高效液相色谱-质谱条件的优化，建立了一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法，特别是同时测定血清中维生素A、维生素25(0H)D2、维生素25(OH)D3、维生素E、维生素K1和维生素K2的方法。采用本发明可以同时检测人血清中六种脂溶性维生素A、维生素25(0H)D2、维生素25(OH)D3、维生素E、维生素K1和维生素K2的含量，并进行精确的定性和定量分析，一是降低了检测成本，二是节省时间，三是减少采集被检测人的血量，四是可以对多种维生素的补充提供依据，是一种样本处理简单、通量高、结果可靠的检测方法。
本发明中使用的提取方法，可以去除较多杂质，降低检测时的基质效应，且操作简单快捷，可以灵敏的检测出各种维生素的含量，尤其是人体内含量较低的维生素K。
本发明用超高效液相色谱-质谱法检测血清中六种脂溶性维生素，特异性强，灵敏性高,通量高，结果客观易于分析，尤其适合临床普及应用。基于该方法的试剂盒不仅可以对营养性疾病患者进行病因诊断，还可以对潜在的维生素缺乏者进行用药指导，减少盲目补充维生素的现象发生。
本发明针对六种脂溶性维生素分别选择一对定性离子和一对定量离子，以各种维生素的相对保留时间和定性离子对作为定性依据，以标准品制作标准曲线定量。同时，本方法应用三个水平的质控品考察方法的准确性、有效性,避免检测结果失真。
本发明首次应用LC-MS技术对一份血清样本中的六种脂溶性维生素进行检测，用两对离子分别进行定量和定性保证了检测物的特异性，降低了干扰物影响，该方法操作简便快速分析时间仅15min，通量高、成本低，有效监测人体内脂溶性维生素水平，对维生素的合理、安全补充具有指导意义，易于临床推广及普及。
本发明通过岛津8050LC-MS/MS法检测300份儿童，孕妇和成人样本，样本检测精准度高，能显著提高检测方法的灵敏度，实用性强，有利于维生素的监督检查，提供了维生素技术支持。
附图说明
图1为本发明实施例1的维生素A的色谱图；
图2为本发明实施例1的维生素25(0H)D2的色谱图；
图3为本发明实施例1的维生素25(0H)D3的色谱图；
图4为本发明实施例1的维生素E的色谱图；
图5为本发明实施例1的维生素K1的色谱图；
图6为本发明实施例1的维生素K2的色谱图。
具体实施方式
下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。
(1)样本预处理
取200μL血清至离心管中，加入800μL甲醇(含10μL内标工作液)，震荡混匀5min，4℃放置10min以沉淀蛋白。17000rpm离心10min，取上清800μL并转移至新管中，加入1mL正己烷萃取，静置5min，将上清液收集于新EP管中，重复上述萃取步骤3次。将EP管置于室温下，氮气吹干(2mL/min流量)。再加入100μL甲醇复溶，震荡混匀2min。可作为供试品溶液进行色谱分析。同时配制标准工作液(又名标准品溶液)和内标工作液(又名内标溶液)
萃取对维生素检测范围的影响
取200μL血清至离心管中，加入800μL甲醇(含10μL内标工作液)，震荡混匀5min，4℃放置10min以沉淀蛋白。17000rpm离心10min，取上清800μL并转移至新管中。将新管置于室温下，氮气吹干(2mL/min流量)。再加入100μL甲醇复溶，震荡混匀2min，进行色谱分析。实验结果发现，不进行萃取，维生素D2以及维生素K1不能提取出来，难以进行后面的色谱分析。
萃取剂对维生素检测范围的影响
取200μL血清至离心管中，加入800μL甲醇(含10μL内标工作液)，震荡混匀5min，4℃放置10min以沉淀蛋白。17000rpm离心10min，取上清800μL并转移至新管中，加入1mL其他萃取剂进行萃取，静置5min，将上清液收集于新EP管中，重复上述萃取步骤3次。将EP管置于室温下，氮气吹干(2mL/min流量)。再加入100μL甲醇复溶，震荡混匀2min，进行色谱分析。实验结果发现，其他萃取剂后，不利于得到较好的维生素检测数值，精准度不高。
萃取时间以及萃取次数对维生素检测范围的影响
取200μL血清至离心管中，加入800μL甲醇(含10μL内标工作液)，震荡混匀5min，4℃放置10min以沉淀蛋白。17000rpm离心10min，取上清800μL并转移至新管中，加入1mL正己烷萃取，静置1min，将上清液收集于新EP管中，重复上述萃取步骤。将EP管置于室温下，氮气吹干(2mL/min流量)。再加入100μL甲醇复溶，震荡混匀2min，进行色谱分析。实验结果发现，萃取时间为1分钟后，不利于得到较好的维生素检测数值，精准度不高。
采用上述优化的萃取条件，将处理得到的样本取出，进行液相色谱-质谱检测分析。
(2)超高效液相色谱-质谱检测方法
仪器及条件：
色谱柱：WATERS CORTECS UPLC C18 Column(
1.6μm,2.1mm×100mm,1/pkg)；柱温：40℃；进样体积：10μL；流速：0.5ml/min；流动相A：乙腈:水(90:10，含有0.1％甲酸+5mM甲酸铵)；流动相B：甲醇(含有0.1％甲酸+5mM甲酸铵)。梯度洗脱条件如表1：
表1梯度洗脱条件
质谱参数：
ESI源，MRM正负离子扫描模式；雾化气流量：3L/min；加热气流量:10L/min；接口温度：300℃；加热块温度：400℃；DL温度：250℃；干燥气流量：10L/min。MRM质谱参数如表2：
表2 MRM质谱参数
(3)计算结果
标准工作液的配制：用异丙醇配制维生素K1的标准储备液，用甲醇配制维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2的标准储备液，然后用甲醇稀释不同倍数，按照一定比例混合后，用甲醇溶液制备6个梯度的混合标准溶液分装备用。
内标工作液的配制：用异丙醇配制维生素K1的标准储备液，用甲醇配制维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2的标准储备液，然后用甲醇稀释不同倍数，按照一定比例混合后用于样本提取。
将标准液配置不同浓度梯度，绘制标准曲线，以标准溶液浓度为X轴，标准品峰面积为Y轴，进行线性回归分析得回归方程。将相应维生素峰面积代入标准曲线方程，分别计算血清样品中六种脂溶性维生素的浓度。
样本检测
分别取儿童、孕妇，成人样本各100份按本发明液相色谱-质谱方法进行检测，得到样本检测范围值(表3)如下：
表3样本检测范围值
根据以上样本检测范围值，建立标准曲线，结果发现：
如图1，用本发明方法测定91.83～6428.57ng/mL的维生素A标准品建立标准曲线，在此范围内的线性关系良好。
如图2，用本发明方法测定122.45～8571.43ng/mL的维生素25(0H)D2标准品建立标准曲线，在此范围内的线性关系良好。
如图3，用本发明方法测定61.22～4285.71ng/m L的维生素25(0H)D3标准品建立标准曲线，在此范围内的线性关系良好。
如图4，用本发明方法测定612.24～42857.14ng/mL的维生素E标准品建立标准曲线，在此范围内的线性关系良好。
如图5，用本发明方法测定
的维生素K1标准品建立标准曲线，在此范围内的线性关系良好。
如图6，用本发明方法测定
的维生素K2标准品建立标准曲线，在此范围内的线性关系良好。
实验证明，本发明样本处理简单，通量高，成本低，可以同时检测人体内六种脂溶性维生素，具有非常重要的意义。
在上述优化的条件，本发明用超高效液相色谱-质谱法检测血清中六种脂溶性维生素，特异性强，灵敏性高，通量高，结果客观易于分析，尤其适合临床普及应用。基于该方法的试剂盒不仅可以对营养性疾病患者进行病因诊断，还可以对潜在的维生素缺乏者进行用药指导，减少盲目补充维生素的现象发生。
Claims (9)
1.一种血液脂溶性维生素的检测方法，其特征在于，采用液质联用方法进行检测，包括以下步骤：
一.溶液的制备
供试品溶液制备：取样品加入到甲醇中，混匀离心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮气吹干，甲醇复溶得供试品溶液；
标准品溶液的制备：将维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2标准品用甲醇溶解配制成标准品母液，将维生素K1用异丙醇溶解为标准品母液，将各标准品母液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的混合标准品溶液；
内标溶液制备：将维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2标准品用甲醇溶解配制成标准品母液，将维生素K1用异丙醇溶解为标准品母液，将各标准品母液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的混内标溶液；
二.测定
将上述制备的供试品溶液、标准品和内标溶液进行LC-MS测定。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述血液样品为血浆或血清样品。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中洗脱采用梯度方式洗脱，流动相A为5mM甲酸铵和0.1％甲酸混合的乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸和5mM乙酸铵混合的甲醇溶液。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的操作为：取样品200～300μL，加入甲醇溶液800～900μL，混匀离心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮气吹干，100～150μL甲醇复溶得供试品溶液。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，标准品溶液制备的操作为：用异丙醇配制维生素K1的标准储备液，用甲醇分别配制维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2的标准储备液，将各标准储备液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的标准品溶液。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：梯度洗脱程序为：0-2min 0％B，2-9min 0-100％B，9-12 100％B，12-12.1min 100％-0％B，12.1-15min 0％B。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，MS检测的条件为：
电喷雾离子源ESI源；采用正离子扫描模式；雾化气流量：3L/min；加热气流量:10L/min；接口温度：300℃；加热块温度：400℃；DL温度：250℃；干燥气流量：10L/min。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，MS检测过程中组分测量参数如下所示：
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：色谱柱为WATERS CORTECS UPLC C18Column色谱柱：2.1mm×100mm，1.6μm；柱温为35～40℃；优选的，柱温为40℃。
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|---|---|
| CN (1) | CN111175405A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111579675A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-08-25 | 河南三方元泰检测技术有限公司 | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 |
| CN111999397A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-11-27 | 大连和合医学检验实验室有限公司 | 一种同时检测多种脂溶性维生素的方法 |
| CN112067388A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-12-11 | 苏州英芮诚生化科技有限公司 | 一种血浆中脂溶性维生素高通量检测前处理方法、试剂盒 |
| CN113917015A (zh) * | 2021-09-30 | 2022-01-11 | 上海中科新生命生物科技有限公司 | 一种同时检测人血清中多种维生素的检测方法 |
| CN114755321A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-07-15 | 瑞莱谱(杭州)医疗科技有限公司 | 血清中脂溶性维生素的检测方法 |
| JP2023501837A (ja) * | 2020-09-29 | 2023-01-20 | 北京和合医学診断技術股▲フン▼有限公司 | 微量の血液中のビタミンｋ１およびビタミンｋ２を同時に検出する方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104155386A (zh) * | 2014-09-01 | 2014-11-19 | 上海迪安医学检验所有限公司 | 超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法 |
| CN105158394A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-12-16 | 济南英盛生物技术有限公司 | 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法 |
| CN109856309A (zh) * | 2019-02-01 | 2019-06-07 | 广州富诺健康科技股份有限公司 | 反相高效液相色谱检测制剂中维生素k2（mk-7）的含量 |
| CN110208438A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-09-06 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种同时检测血液中多种脂溶性维生素含量的方法 |
| CN110487943A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-11-22 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法 |
-
2020
- 2020-01-22 CN CN202010074340.4A patent/CN111175405A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104155386A (zh) * | 2014-09-01 | 2014-11-19 | 上海迪安医学检验所有限公司 | 超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法 |
| CN105158394A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-12-16 | 济南英盛生物技术有限公司 | 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法 |
| CN109856309A (zh) * | 2019-02-01 | 2019-06-07 | 广州富诺健康科技股份有限公司 | 反相高效液相色谱检测制剂中维生素k2（mk-7）的含量 |
| CN110208438A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-09-06 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种同时检测血液中多种脂溶性维生素含量的方法 |
| CN110487943A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-11-22 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| EDWINA SAU MAN PO 等: "Simultaneous chromatographic analysis of eight fat-soluble vitamins in plasma", 《J. BIOCHEM. BIOPHYS. METHODS》 * |
| 徐军 等: "高效液相色谱法测定人血中脂溶性维生素的含量", 《中国药学杂志》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111579675A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-08-25 | 河南三方元泰检测技术有限公司 | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 |
| CN111579675B (zh) * | 2020-05-28 | 2024-02-02 | 山西海润牧大饲料有限公司 | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 |
| CN111999397A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-11-27 | 大连和合医学检验实验室有限公司 | 一种同时检测多种脂溶性维生素的方法 |
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| JP2023501837A (ja) * | 2020-09-29 | 2023-01-20 | 北京和合医学診断技術股▲フン▼有限公司 | 微量の血液中のビタミンｋ１およびビタミンｋ２を同時に検出する方法 |
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