CN111579675B - 饲料中脂溶性维生素的检测方法 - Google Patents
饲料中脂溶性维生素的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111579675B CN111579675B CN202010466776.8A CN202010466776A CN111579675B CN 111579675 B CN111579675 B CN 111579675B CN 202010466776 A CN202010466776 A CN 202010466776A CN 111579675 B CN111579675 B CN 111579675B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- vitamin
- feed
- fat
- solution
- soluble vitamins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 title claims abstract description 69
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 title claims abstract description 69
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 title claims abstract description 69
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 32
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 25
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 claims abstract description 21
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 claims abstract description 20
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims abstract description 19
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 14
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims abstract description 9
- YLLIGHVCTUPGEH-UHFFFAOYSA-M potassium;ethanol;hydroxide Chemical compound [OH-].[K+].CCO YLLIGHVCTUPGEH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- WJYHCYBNUJVCEH-UHFFFAOYSA-N cyclohexane;ethoxyethane Chemical compound CCOCC.C1CCCCC1 WJYHCYBNUJVCEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical group CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 claims description 5
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 9
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 7
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 7
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 7
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 7
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 7
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 5
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 229960000342 retinol acetate Drugs 0.000 description 3
- 235000019173 retinyl acetate Nutrition 0.000 description 3
- QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N retinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N 0.000 description 3
- 239000011770 retinyl acetate Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 2
- ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N d-alpha-Tocopheryl acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 229940042585 tocopherol acetate Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N Tert-Butylhydroquinone Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(O)=CC=C1O BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000004250 tert-Butylhydroquinone Substances 0.000 description 1
- 235000019281 tert-butylhydroquinone Nutrition 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种饲料中脂溶性维生素的检测方法，属于维生素检测技术领域。其包括以下步骤：将待测饲料与抗氧剂混合均匀，加入氢氧化钾乙醇溶液中，暗处静置反应，反应结束后，加入正己烷溶液，超声处理，离心取上清液，将所述上清液过滤，过凝胶色谱柱，流出液经减压浓缩挥发正己烷后，甲醇稀释，得到待测液；将上述步骤中的待测饲料替换为脂溶性维生素标准品，重复上述步骤的方法，得到标准溶液；采用高效液相色谱法分别对所述待测液和标准溶液进行检测，根据所得高效液相图谱计算所述待测饲料中脂溶性维生素的含量；所述脂溶性维生素包括维生素A、维生素D3和维生素E。本发明一种饲料中脂溶性维生素的检测方法，回收率高，精确度好。
Description
技术领域
本发明属于维生素检测技术领域，具体涉及饲料中脂溶性维生素的检测方法。
背景技术
脂溶性维生素A、D3、E主要存在于脂溶性溶剂中，分子结构只含有碳、氢、氧三种元素，在饲料中常与脂质共存，在消化道内也随脂肪一同吸收。当维生素吸收不足时，会引起相应的缺乏症状；当吸收过量时，又会对机体产生毒害作用。
现有的饲料检测中对浓缩饲料的维生素A、维生素D3和维生素E的检测方法是将待测样品经过皂化处理后，分别按照下列的国家标准进行检测：标准GBT 17817-2010《饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》、标准GBT 17818-2010《饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法》、GBT 17812-2008《饲料中维生素E的测定高效液相色谱法》。公开(公告)号：CN105891384A涉及一种脂溶性维生素含量的检测方法，该检测方法采用经典的皂化反应的前处理方式，但用超声萃取替代传统的液液萃取，通过前处理得到待测溶液和标准溶液，然后将标准溶液和待测夜利用液相色谱进行检测，得到脂溶性维生素标准品及待测饲料中各组分的保留时间及峰面积，并绘制脂溶性维生素标准品的浓度为峰面积的对应曲线，将待测饲料各组分的保留时间及峰面积与标准曲线进行比较，计算得到待测饲料中脂溶性维生素的含量。与现有技术相比，该发明前处理过程简单，减少了有毒有害的石油醚的使用量，更加环保安全，并且其检测结果的精度高，效果好，实现了在短时间内对维生素A、维生素D3、维生素E的同时分离和检测。
但这些方法主要是将样品皂化后，直接用液相色谱分析，方法复杂、干扰大、且回收率低。
畜牧业使用的配合饲料/原料多具有成分复配、组方复杂的特点，及包括了基础原料中所含有的分散于原料内的维生素成分，又包括了人为主动添加的混合维生素成分。加之复合饲料中各种成分之间的相互作用影响，使得配合饲料中的脂溶性维生素成分的精确检测分析变得十分困难。现有的针对于食品、肉类中所含有的多种脂溶性维生素检测方法难以适用于这类复杂的情况，因而不得不采用一一检测、单独分析的方法对配合饲料进行检测分析，导致配合饲料的检测分析工作十分繁琐复杂，耗时长，工作效率较低，不利于饲料生产企业以及饲料应用企业对于饲料的品质控制。
公开(公告)号：CN106770769A公开了一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，包括以下步骤：（1）根据检测需要，制备多种维生素标准溶液，包括以下维生素中的至少两种以上：维生素A醋酸酯、维生素D3、维生素E乙酸酯；采用HPLC-MS/MS检测标准溶液，得到标准曲线方程；（2）称取样品，到棕色容量瓶中，加入提取溶液超声提取10-30min，冷却定容，离心，用0.22μm有机相滤膜，过滤上机，采用与步骤1相同的色谱参数和质谱检测参数进行分析测试；（3）根据步骤1和步骤2的检测结果计算得出样品中的多种维生素的含量。该发明的同时检测配合饲料中的多种脂溶性维生素的方法，在一次检测分析过程中完成多种不同的维生素的检测分析。
公开(公告)号：CN108088925A涉及一种浓缩饲料脂溶性维生素含量的检测方法，属于化学成分的检测技术领域。该方法包括以下步骤：于溶于溶剂的浓缩饲料样品加入叔丁基对苯二酚，超声，过滤，浓缩，得待测液；用脂溶性维生素标准品代替浓缩饲料样品，经相同处理，得标准溶液。采用高效液相色谱法对待测液和标准溶液分别进行检测，根据所得的高效液相图谱计算浓缩饲料样品中脂溶性维生素的含量。脂溶性维生素包括维生素A、维生素D3和维生素E。该测定方法一方面过程简单易操作，样品制备时间短，有效避免了前处理过程中脂溶性维生素被氧化，取消了有毒有害的乙醚的使用，安全环保，另一方面其检测精度高，效果好，实现了短时间内对上述维生素同时分离和检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种饲料中脂溶性维生素的检测方法，回收率高，精确度好。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：饲料中脂溶性维生素的检测方法，包括以下步骤：
S1：将待测饲料与抗氧剂混合均匀，加入氢氧化钾乙醇溶液中，暗处静置反应，反应结束后，加入正己烷溶液，超声处理，离心取上清液，将所述上清液过滤，过凝胶色谱柱，流出液经减压浓缩挥发正己烷后，甲醇稀释，得到待测液；
S2：将步骤S1中的待测饲料替换为脂溶性维生素标准品，重复步骤S1的方法，得到标准溶液；
S3：采用高效液相色谱法分别对所述待测液和标准溶液进行检测，根据所得高效液相图谱计算所述待测饲料中脂溶性维生素的含量；
所述脂溶性维生素包括维生素A、维生素D3和维生素E。
优选地，所述抗氧剂为2,6-二叔丁基对甲酚或焦性没食子酸。
优选地，所述氢氧化钾乙醇溶液由体积分数75%乙醇与50%氢氧化钾溶液以3：1的体积比混合而成。
优选地，所述暗处静置反应的时间为12-18小时，温度为0-2℃。
优选地，所述步骤S1中的过滤是采用0.22μm有机滤膜过滤。
优选地，所述过凝胶色谱柱的条件为：Bio-BeadsS-X3色谱柱，流动相为环己烷-乙醚溶液，流速为4mL/min，进样量为5 mL，洗脱时间为0~20min、收集流出液时间为12~25min，清洗时间为40-60min。
优选地，所述环己烷-乙醚溶液的体积比为1：1。
优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件为：C18色谱柱 5μm 4.6 mm I.D.×250mm，流动相为甲醇：水=98：2（v/v），流速为0.5mL/min，柱温：25-30℃，波长为280 nm，进样体积为10μL。
采用液相色谱法测定含脂溶性微生物样品中各种成分的含量的过程中，样品预处理是样品分析中至关重要的一环，它的好坏，是保证测定结果是否准确的一个重要指标。萃取与净化技术主要用于样品制备过程中， 对样品进行预富集并除去分析物的干扰物质，使得到的样品上机液与所用的HPLC方法相兼容。目前用于维生素分析的净化技术主要有液液萃取、固相萃取技术、超临界流体萃取技术、免疫亲和固相萃取技术。液液萃取应用比较普遍，其不足之处也比较明显：在萃取过程中，乳化现象的形成造成待测物的损失，共萃取物的干扰，限制了检测方法的选择；整个萃取过程繁琐，消耗大量时间，并造成结果不稳定。而固相萃取技术由于较液液萃取技术在上述不足方面具有优势而得到发展，但同时固相萃取技术也存在固有的弊端，例如萃取柱批次间的差异，会导致结果偏差，而且饲料基质成分较为复杂，溶剂的选择也尤为重要。经发明人研究发现，单一采用固相萃取技术进行饲料中脂溶性维生素的提取和净化，综合效果一般，虽然检测效率上具有优势，但是检测回收率并不高。本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
应用高效液相色谱法测定饲料中脂溶性维生素，包括维生素A、维生素D3和维生素E，具有样品用量少、灵敏度高的优点，且用C18色谱柱可在20分钟内将维生素A、维生素D3和维生素E三种脂溶性维生素完成分离。经实验结果证明：本方法分离保留时间稳定，回收率高，精确度好，是快速分离测定饲料等样品中脂溶性维生素的有效方法。三种脂溶性维生素线性相关系数R均大于 0.9995， 相对标准偏差均小于2%。该方法简便、快速，用于实际样品测定，获得了满意的结果。
附图说明
图1：维生素混合标准溶液高效液相色谱图。
具体实施方式
为了更详细地进一步阐明而不是限制本发明，给出下列实施例。
本发明所用材料：
2,6-二叔丁基对甲酚、焦性没食子酸、氢氧化钾、乙醇、正己烷、甲醇、乙醚（购自国药集团化学试剂有限公司）、维生素A标准品、维生素D3标准品、维生素E标准品（购自北京谱析科技有限公司）。
本发明所用仪器设备：
电子天平（精准至0.1mg）、圆底烧瓶、超声波提取器、离心机、0.22μm有机滤膜、色谱柱Bio-BeadsS-X3（填料质量50g）、带紫外检测器的高效液相色谱、旋转蒸发仪。
实施例1
饲料中脂溶性维生素的检测方法，包括以下步骤：
准确称取1g待测饲料，置于250ml圆底烧瓶中，加入0.1g抗氧剂混合均匀，加入50ml氢氧化钾乙醇溶液中，暗处静置反应，反应结束后，加入正己烷溶液30ml，超声处理50分钟，离心取上清液，将上清液过滤，过凝胶色谱柱，流出液经减压浓缩挥发正己烷后，加入甲醇稀释定容至100ml，得到待测液；
采用高效液相色谱法对待测液进行检测，得到待测饲料脂溶性维生素的高效液相色谱图。
其中，抗氧剂为2,6-二叔丁基对甲酚。抗氧剂与待测饲料的重量比为0.1：1。抗氧剂的加入可以保护脂溶性维生素不被氧化。
氢氧化钾乙醇溶液由体积分数75%乙醇与50%氢氧化钾溶液以3：1的体积比混合而成。氢氧化钾乙醇溶液的体积与待测饲料的质量比为50ml：1g。
暗处静置反应的时间为15小时，温度为0℃。本发明采用避光冷处理方式，较之热皂化方式虽然时间较长，但是可以完全避免因较高的温度而引起维生素的损失和异构化。
步骤S1中的过滤是采用0.22μm有机滤膜过滤，以除去杂质，避免对色谱柱产生影响。
减压浓缩采用旋转蒸发仪处理。
过凝胶色谱柱的条件为：Bio-BeadsS-X3色谱柱，流动相为环己烷-乙醚溶液，流速为4mL/min，进样量为5 mL，洗脱时间为0~20min、收集流出液时间为12~25min，清洗时间为40-60min。
环己烷-乙醚溶液中环己烷与乙醚的体积比为1：1。
本发明采用冷皂化与固相萃取配合对待测饲料进行提取净化，较之传统皂化液液萃取或固相萃取方法能够达到更好的提取、净化效果，而且也能够降低有机溶剂的用量。
高效液相色谱法的色谱条件为：C18色谱柱 5μm 4.6 mm I.D.×250mm，流动相为甲醇：水=98：2（v/v），流速为0.5mL/min，柱温：25-30℃，波长为280nm，进样体积为10μL。
维生素A标准储备液：准确称取0.1g维生素A乙酸酯标准品，于250mL圆底烧瓶中，加入0.1g抗氧剂混合均匀，加入50ml氢氧化钾乙醇溶液中，暗处静置反应，反应结束后，加入正己烷溶液30ml，超声处理50分钟，离心取上清液，将上清液过滤，过凝胶色谱柱，流出液经减压浓缩挥发正己烷后，加入甲醇稀释定容至100ml，得到维生素A标准储备液。
维生素D3标准储备液：准确称取0.01g维生素D3标准品按照维生素A标准储备液的制备方法制备，得到维生素D3标准储备液。
维生素E标准储备液：准确称取0.01g维生素E标准品按照维生素A标准储备液的制备方法制备，得到维生素E标准储备液。
维生素A、维生素D3、维生素E混合标准工作液的配置：分别准确吸取5mL的维生素A标准储备液、5mL维生素D3标准储备液和5mL维生素E标准储备液于50mL的棕色容量瓶中用甲醇定容至刻度，得到维生素混合溶液。
将制备好的维生素混合标准溶液在上述的液相条件下进行液相色谱测定，分别进样0.1μL，0.5μL，1μL，5μL，20μL，记录各维生素的保留时间和色谱峰面积，得到的色谱图，参阅图1，并以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线和标准曲线方程。维生素A乙酸酯的标准曲线方程：y=（2.15x+6.20）×104，r=0.9999；维生素D3的标准曲线方程：y =（5.82x-3.96）×104，r=0.9996；维生素E乙酸酯的标准曲线方程：y =(7.89x-4.03)×103，r=0.9998。5次进样三种脂溶性维生素相对标准偏差均小于3%，重复性良好。结果显示，维生素A、维生素D3、维生素E在上述浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数R在0.9995以上。按3倍信噪比计算得到维生素A、维生素D3、维生素E的检出限分别为2.38μg/kg、2.05μg/kg和10.12μg/kg。
实施例2
本实施例与实施例1不同的是：
抗氧剂为焦性没食子酸；抗氧剂与待测饲料的重量比为0.05：1。
超声处理45分钟；
暗处静置反应的时间为12小时，温度为0℃。
实施例3
本实施例与实施例1不同的是：
抗氧剂为焦性没食子酸；抗氧剂与待测饲料的重量比为0.15：1。
超声处理55分钟；
暗处静置反应的时间为18小时，温度为0℃。
实施例4
本实施例与实施例1不同的是：
抗氧剂为2,6-二叔丁基对甲酚；抗氧剂与待测饲料的重量比为0.2：1。
超声处理60分钟；
暗处静置反应的时间为13小时，温度为2℃。
结果与分析：
1）回收率
在不含脂溶性维生素的饲料中添加脂溶性维生素混合标准样品溶液，使饲料中各脂溶性维生素含量为 10.0、30.0、60.0、100.0 μg/kg。按实施例1给出的方法进行处理，表1为各脂溶性维生素回收率结果。结果表明：维生素A的回收率在98.3%~100.6%；维生素D3的回收率在97.1%~101.2%；维生素E的回收率在97.8%~99.6%。
表1各脂溶性维生素回收率结果
2)精密度
在不含脂溶性维生素的饲料中添加脂溶性维生素混合标准样品溶液，使饲料中各脂溶性维生素含量为30.0μg/kg。按实施例1给出的方法进行处理，表2为各脂溶性维生素精密度结果。结果表明：维生素A、维生素D3和维生素E的标准偏差分别为1.05%、1.54%、1.47%。
表2脂溶性维生素精密度测试结果
3）样品测定
应用实施例1的方法对某品牌鸡饲料进行检测，检测结果如表3所示。
表3 样品检测结果
综上所述，本发明饲料中脂溶性维生素的检测方法有效避免了脂溶性维生素的氧化、以及可能存在的损失及异构化，提纯净化效果好，回收率高，精准度高，有效实现了对饲料中维生素的同时分离和检测。
综上所述，本发明饲料中脂溶性维生素的检测方法所述及的各项权利要求及技术支撑已经明确，凡依据本发明的技术支撑实质所作的任何修改与变化仍属于本发明技术支撑的范围内。
Claims (2)
1.饲料中脂溶性维生素的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：将待测饲料与抗氧剂混合均匀，加入氢氧化钾乙醇溶液中，暗处静置反应，反应结束后，加入正己烷溶液，超声处理，离心取上清液，将所述上清液过滤，过凝胶色谱柱，流出液经减压浓缩挥发正己烷后，甲醇稀释，得到待测液；
所述抗氧剂为2,6-二叔丁基对甲酚或焦性没食子酸；所述氢氧化钾乙醇溶液由体积分数75%乙醇与50%氢氧化钾溶液以3：1的体积比混合而成；所述暗处静置反应的时间为12-18小时，温度为0-2℃；
所述过凝胶色谱柱的条件为：Bio-BeadsS-X3色谱柱，流动相为环己烷-乙醚溶液，流速为4mL/min，进样量为5mL，洗脱时间为0~20min、收集流出液时间为12~25min，清洗时间为40-60min；所述环己烷-乙醚溶液的体积比为1：1；
S2：将步骤S1中的待测饲料替换为脂溶性维生素标准品，重复步骤S1的方法，得到标准溶液；
S3：采用高效液相色谱法分别对所述待测液和标准溶液进行检测，根据所得高效液相图谱计算所述待测饲料中脂溶性维生素的含量；
所述高效液相色谱法的色谱条件为：C18色谱柱5μm4.6mm I.D.×250mm，流动相为甲醇：水=98：2（v/v），流速为0.5mL/min，柱温：25-30℃，波长为280nm，进样体积为10μL；
所述脂溶性维生素包括维生素A、维生素D3和维生素E。
2.如权利要求1所述的饲料中脂溶性维生素的检测方法，其特征在于：所述步骤S1中的过滤是采用0.22μm有机滤膜过滤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010466776.8A CN111579675B (zh) | 2020-05-28 | 2020-05-28 | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010466776.8A CN111579675B (zh) | 2020-05-28 | 2020-05-28 | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111579675A CN111579675A (zh) | 2020-08-25 |
| CN111579675B true CN111579675B (zh) | 2024-02-02 |
Family
ID=72125663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010466776.8A Active CN111579675B (zh) | 2020-05-28 | 2020-05-28 | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111579675B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112690368A (zh) * | 2021-01-21 | 2021-04-23 | 陕西金冠牧业有限公司 | 一种用于畜禽复合液体复合维生素的制备方法 |
Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009115352A1 (de) * | 2008-03-19 | 2009-09-24 | Florian Schweigert | Verfahren zur extraktion und zum nachweis von fettlöslichen inhaltsstoffen aus biologischen materialien |
| CN105158394A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-12-16 | 济南英盛生物技术有限公司 | 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法 |
| CN105372374A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-03-02 | 厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 奶粉中三种脂溶性维生素a,e和k1的检测方法 |
| CN105403631A (zh) * | 2015-10-28 | 2016-03-16 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种快速检测保健食品中维生素d3含量的方法 |
| CN105891384A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-08-24 | 漳州傲农牧业科技有限公司 | 一种脂溶性维生素含量的检测方法 |
| CN106198801A (zh) * | 2016-06-28 | 2016-12-07 | 威海百合生物技术股份有限公司 | 一种维生素d3含量的检测方法 |
| CN106383186A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 重庆方通动物药业有限公司 | 同时测定14种维生素含量的高效液相色谱分析方法 |
| CN106770769A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-05-31 | 新希望六和股份有限公司 | 一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法 |
| CN107703239A (zh) * | 2017-11-14 | 2018-02-16 | 纽斯葆广赛（广东）生物科技股份有限公司 | 一种大豆蛋白粉维生素d3的测定方法 |
| CN108088925A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-29 | 金华傲农生物科技有限公司 | 一种浓缩饲料脂溶性维生素含量的检测方法 |
| CN108982715A (zh) * | 2018-06-26 | 2018-12-11 | 辽宁禾丰牧业股份有限公司 | 一种饲料中抗生素类药物的检测方法 |
| CN109030648A (zh) * | 2018-08-01 | 2018-12-18 | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的方法及其样品前处理方法 |
| CN109142564A (zh) * | 2018-07-26 | 2019-01-04 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种同时检测维生素a、d、e的方法 |
| CN110632203A (zh) * | 2019-09-30 | 2019-12-31 | 通标标准技术服务（青岛）有限公司 | 一种同步快速检测维生素a、维生素d3和维生素e的方法 |
| CN111175405A (zh) * | 2020-01-22 | 2020-05-19 | 广东南芯医疗科技有限公司 | 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110212534A1 (en) * | 2008-08-11 | 2011-09-01 | Taylor Robert L | Methods for determining levels of 1,25 dihydroxy vitamin d2 and d3 |
-
2020
- 2020-05-28 CN CN202010466776.8A patent/CN111579675B/zh active Active
Patent Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009115352A1 (de) * | 2008-03-19 | 2009-09-24 | Florian Schweigert | Verfahren zur extraktion und zum nachweis von fettlöslichen inhaltsstoffen aus biologischen materialien |
| CN102137677A (zh) * | 2008-03-19 | 2011-07-27 | 弗洛瑞安·施威格特 | 用于从生物材料中提取和检测脂溶性组分的方法 |
| CN105158394A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-12-16 | 济南英盛生物技术有限公司 | 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法 |
| CN105403631A (zh) * | 2015-10-28 | 2016-03-16 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种快速检测保健食品中维生素d3含量的方法 |
| CN105372374A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-03-02 | 厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 奶粉中三种脂溶性维生素a,e和k1的检测方法 |
| CN105891384A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-08-24 | 漳州傲农牧业科技有限公司 | 一种脂溶性维生素含量的检测方法 |
| CN106198801A (zh) * | 2016-06-28 | 2016-12-07 | 威海百合生物技术股份有限公司 | 一种维生素d3含量的检测方法 |
| CN106383186A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 重庆方通动物药业有限公司 | 同时测定14种维生素含量的高效液相色谱分析方法 |
| CN106770769A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-05-31 | 新希望六和股份有限公司 | 一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法 |
| CN107703239A (zh) * | 2017-11-14 | 2018-02-16 | 纽斯葆广赛（广东）生物科技股份有限公司 | 一种大豆蛋白粉维生素d3的测定方法 |
| CN108088925A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-29 | 金华傲农生物科技有限公司 | 一种浓缩饲料脂溶性维生素含量的检测方法 |
| CN108982715A (zh) * | 2018-06-26 | 2018-12-11 | 辽宁禾丰牧业股份有限公司 | 一种饲料中抗生素类药物的检测方法 |
| CN109142564A (zh) * | 2018-07-26 | 2019-01-04 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种同时检测维生素a、d、e的方法 |
| CN109030648A (zh) * | 2018-08-01 | 2018-12-18 | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的方法及其样品前处理方法 |
| CN110632203A (zh) * | 2019-09-30 | 2019-12-31 | 通标标准技术服务（青岛）有限公司 | 一种同步快速检测维生素a、维生素d3和维生素e的方法 |
| CN111175405A (zh) * | 2020-01-22 | 2020-05-19 | 广东南芯医疗科技有限公司 | 一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (11)
| Title |
|---|
| Separation of naphthoquinones and lipophilic vitamins by gel and thin-layer chromatography;BOHUSLAV RITTICH;Journal of Chromatography;第133卷;全文 * |
| 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法.《中华人民共和国国家标准GB/T 17818-2010》.2010,第2-3页. * |
| 二维液相色谱法同时测定饲料中维生素A、维生素D_3、维生素E;赵玉富;咸伟;;饲料博览(第04期);全文 * |
| 冷皂化-HPLC 测定强化食品中的维生素 A、E 的方法研究;赵海燕等;《中国食品卫生杂志》;20100430;第22卷(第4期);全文 * |
| 冷皂化-HPLC法测定乳及乳制品中的维生素;李颂群等;《中国乳品工业》;20131031;第41卷(第10期);全文 * |
| 基于凝胶渗透色谱及液相色谱串联质谱测定油脂性食品中的维生素 A、D、E;李珉等;《现代食品科技》;20180930;第34卷(第9期);全文 * |
| 李珉等.基于凝胶渗透色谱及液相色谱串联质谱测定油脂性食品中的维生素 A、D、E.《现代食品科技》.2018,第34卷(第9期),全文. * |
| 液相色谱法测定乳品中维生素A、D、E含量;吴少明;;广州化工(第08期);全文 * |
| 茶叶中维生素分析方法概述;谭和平;叶善蓉;邹燕;陈丽;;中国测试技术(第03期);全文 * |
| 食品中维生素D与 25－羟基维生素D检测技术及含量分布研究进展;李兵等;《分析测试学报》;20190430;第38卷(第4期);全文 * |
| 高效液相色谱法同时测定保健食品中6种脂溶性维生素;张美金;林海丹;林峰;陆勤;钟钰;官咏仪;;中国卫生检验杂志(第01期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111579675A (zh) | 2020-08-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106770769B (zh) | 一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法 | |
| CN106872617B (zh) | 水产品中苯并咪唑及噻唑类残留药物的快速提取及lc-ms-ms检测方法 | |
| CN114002338A (zh) | 一种食品接触材料中添加剂迁移量的测定方法 | |
| CN111579675B (zh) | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 | |
| CN110988245A (zh) | 一种超高效合相色谱质谱法快速检测植物油脂及其类似物中维生素e含量的方法 | |
| CN112684089A (zh) | 基于超高效合相色谱技术的保健食品中肉碱对映体拆分和测定方法 | |
| CN104820032B (zh) | 一种检测蔬果中赭曲霉毒素a的方法 | |
| CN106918654A (zh) | 一种加参片中大孔树脂残留溶剂的测定方法 | |
| CN108152425B (zh) | 一种高效液相色谱检测芝麻油木脂素的方法 | |
| CN113533548B (zh) | 一种化工产品中1-乙烯基咪唑的检测方法 | |
| CN109580855A (zh) | 高纯度腰果壳油活性物质的提取纯化工艺及其检测方法 | |
| CN111965273A (zh) | 一种坎地沙坦酯中基因毒杂质的hplc法检测方法 | |
| CN101776659A (zh) | 萝卜红色素中花色苷的高效液相色谱检测方法 | |
| CN109100456B (zh) | 一种同时测定多种维生素注射液中3种脂溶性维生素含量的方法 | |
| CN110568110B (zh) | 一种高抗氧化性脂肪乳注射液中抗氧剂含量测定方法 | |
| CN110632197B (zh) | 一种二硫化二苯并噻唑生产工艺中苯并噻唑及其衍生物的分析检测方法 | |
| CN109358140B (zh) | 一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法 | |
| CN114200036B (zh) | 一种化妆品或其原料中添加物的检测方法 | |
| CN113884584A (zh) | 一种氟比洛芬和/或氟比洛芬酯含量的检测方法 | |
| CN110687224A (zh) | 雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法 | |
| CN113624888B (zh) | 一种血清和粪便中吲哚乙酸和吲哚丙酸的检测方法 | |
| CN111044655A (zh) | 橡胶中多种硫化促进剂的检测方法 | |
| CN115060813B (zh) | 一种筛选与纯化柑橘皮抗氧化活性成分的方法 | |
| CN115097046B (zh) | 一种分离雷帕霉素及其杂质的方法 | |
| CN103175906A (zh) | 一种井冈霉素各组分的定性与定量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240108 Address after: 043100 Yuncheng city of Shanxi province Xinjiang Textile Industrial Park Applicant after: Shanxi Hairun muda Feed Co.,Ltd. Address before: 450000 R & D building 2, No.8, Jingnan Third Road, Zhengzhou Economic and Technological Development Zone, Henan Province Applicant before: HENAN SANFANG YUANTAI DETECTION TECHNOLOGY CO.,LTD. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |