CN105372374A - 奶粉中三种脂溶性维生素a,e和k1的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了奶粉中三种脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法。称取样品加水溶解定容，取部分定容后的样品溶液于离心管中，加入无水乙醇、正己烷、饱和氯化钠溶液，混匀后离心分层，取正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容，将其和标准工作溶液在液相色谱-串联质谱仪检测，分别进样，获得以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁的浓度为横坐标，6种维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线；用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种维生素的浓度；经过换算即得到维生素A，维生素E和维生素K₁的含量。本发明的方法简便、快速、准确、灵敏度高。

Description

奶粉中三种脂溶性维生素A,E和K1的检测方法

技术领域

本发明涉及脂溶性维生素的检测方法，尤其涉及奶粉中三种脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法。

背景技术

脂溶性维生素A,E,K₁通常作为营养强化剂添加到配方奶粉中。维生素A又称视黄醇，主要生理功能是维持视觉和骨骼健康、参与细胞分裂和细胞识别、参与生长、生殖及维持免疫系统的完整性等。维生素E又称生育酚，自然界中共有8种：α-，β-，γ-，δ-生育酚和α-，β-，γ-，δ-三烯生育酚，其中以α-生育酚的生物学活性最强。维生素K₁别名植物甲萘醌，控制血液凝结，是凝血蛋白在肝内合成必不可少的物质。这几种脂溶性维生素在外界环境中不稳定，很容易受光、氧等影响而被氧化破坏。目前配方奶粉中脂溶性维生素的测定方法通常是：样品经过酶解和皂化处理后，用非极性有机溶剂(常用的有石油醚、正己烷、乙醚等)液液萃取，然后用反相色谱法进行分离检测，前处理过程溶剂消耗量大、操作繁琐且测定结果不稳定。

配方奶粉中通常不直接添加维生素A和维生素E，而是添加维生素A酯和维生素E酯，因此需先将样品通过皂化处理后，将待测维生素游离出来后再进行检测，方法复杂繁琐。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、快速、高灵敏的奶粉中脂溶性维生素A、E和K₁的检测方法。

为实现上述目的，本发明提供一种奶粉中脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法，其特征在于，步骤为，

样品制备：称取样品于比色管中，加入温水溶解定容至刻度后，取部分定容后的样品溶液于离心管中，加入无水乙醇沉淀蛋白，再加入正己烷提取，加入饱和氯化钠溶液抑制乳化，混匀后高速离心分层，取最上面的正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容，经0.22μm滤膜过滤后即可；

样品检测：将待测样品和标准工作溶液在液相色谱-串联质谱仪检测，分别进样，获得以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁这6种脂溶性维生素的浓度为横坐标，再以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁这6种脂溶性维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线；用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种脂溶性维生素的浓度；维生素A以维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯换算成维生素A的总量计算，维生素E以维生素E、维生素E醋酸酯换算成维生素E的总量计算；具体换算方法如下：

C_维生素K1＝C_维生素K1；

其中C_维生素A表示维生素A的浓度，C_{维生素A醋酸酯}表示维生素A醋酸酯的浓度，以此类推；

即得到待测样品的维生素A、维生素E、维生素K₁的浓度。

进一步，所述样品制备为称取0.5～2.0g左右样品于5～20mL比色管中，加入40～60℃温水溶解定容至刻度，优选45℃温水；，分取1～2mL于20mL离心管中，加入2～10mL无水乙醇沉淀蛋白，然后加入1～5mL正己烷提取，并加入2～10mL饱和氯化钠溶液抑制乳化，混匀后5000rpm高速离心，取正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容至1mL或2mL，经0.22μm滤膜过滤后即可。

进一步，所述标准工作溶液为10.0μg/mL的维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯和维生素K₁的乙醇溶剂的标准工作溶液。

进一步，所述液相色谱-串联质谱仪的检测为，选用水-乙腈为流动相，反相液相色谱柱分离，采用大气压化学电离串联质谱进行检测，正离子扫描模式，多反应监测MRM扫描检测，外标法定量；

色谱条件：PhenomenexKinetexC₁₈色谱柱(100×4.6mmi.d.，粒径2.6μm)；柱温35℃；流速1.0mL/min；进样量5μL；流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序：0-4.0min，90％B；4.1-18.0min，100％B；18.1-22.0min，90％B；

质谱条件：离子源为大气压化学电离源(APCI)；扫描方式为正离子扫描；检测方式为多反应监测(MRM)；喷雾气65psi，气帘气30psi，碰撞气medium，离子源温度350℃，电流3.0入口电压和出口电压均为10V，驻留时间50ms；监测离子对:维生素A为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素A醋酸酯为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素A棕榈酸酯为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素E为431.4/137.1和431.4/165.1、维生素E醋酸酯为473.4/165.1和473.4/207.1,维生素K₁为451.4/171.1和451.4/187.1；化合物保留时间:维生素A为2.33min、维生素A醋酸酯为3.48min、维生素A棕榈酸酯为16.50min、维生素E为8.01min、维生素E醋酸酯为8.77min,维生素K₁为9.70min；去簇电压：维生素A为98V、维生素A醋酸酯为62V、维生素A棕榈酸酯为82V、维生素E为168V、维生素E醋酸酯为201V,维生素K₁为227V；碰撞能量:维生素A为26V和17V、维生素A醋酸酯为26V和17V、维生素A棕榈酸酯为26V和17V、维生素E为61V和27V、维生素E醋酸酯为50V和24V,维生素K₁为41V和32V。

标准储备液的配制：

维生素A(视黄醇，纯度95.5％)、维生素A醋酸酯(视黄醇醋酸酯，纯度98.8％)、维生素A棕榈酸酯(视黄醇棕榈酸酯，纯度92.5％)、维生素E(DL-α-生育酚，纯度95.8％)、维生素E醋酸酯(DL-α-生育酚醋酸酯，纯度97.4％)和维生素K₁(叶绿醌，纯度99.3％)标准品均购自美国ChromaDex公司。

取维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁六种脂溶性维生素标准品各10mg，分别用无水乙醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中制备得到各维生素标准储备液。各维生素标准储备液配制后需要通过紫外吸光值进行浓度校正，具体操作如下：

分别取各维生素标准储备液若干微升，分别注入至含有3.00mL乙醇的比色皿中，根据给定波长测定各维生素的吸光值，按表1给定的条件进行测定(参考文献：TheVitamins-FundamentalAspectsinNutritionandHealth,FourthEdition.GeraldF.Combs,Jr.,ElsevierInc.2012.)，通过下列公式计算出该维生素的实际浓度。

表1各维生素吸光值的测定条件表

$C=\frac{A}{E}\×\frac{1}{100}\×\frac{3.00}{V\×{10}^{-3}}$

式中：C为各维生素的浓度，单位为g/mL；A为各维生素的紫外吸光值；V为加入标准储备液的量，单位为μL；E为各维生素的1％比吸光系数。

标准工作液的配制：移取各标准储备溶液，用乙醇稀释成浓度为10.0μg/mL的混合标准中间溶液，-18℃下避光保存。根据需要用乙醇逐级稀释配成适当浓度的混合标准工作液，现配现用。

色谱条件：色谱柱：PhenomenexKinetexC₁₈色谱柱(100×4.6mmi.d.，粒径2.6μm)；柱温35℃；流速1.0mL/min；进样量5μL；流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序：0-4.0min，90％B；4.1-18.0min，100％B；18.1-22.0min，90％B。

质谱条件：离子源为大气压化学电离源(APCI)；扫描方式为正离子扫描；检测方式为多反应监测(MRM)；喷雾气(GS1)65psi，气帘气(CUR)30psi，碰撞气(CAD)medium，离子源温度：350℃，电流(NC)3.0入口电压(EP)和出口电压(CXP)均为10V，驻留时间(dwelltime)50ms；MRM监测离子对、化合物保留时间、去簇电压(DP)和碰撞能量(CE)等参数见表2。

表2的数据通过质谱优化得到：采用针泵连续进样，在ESI正离子模式下，分别对0.1μg/mL各种维生素的标准溶液进行一级质谱图扫描，确定较强的峰为其母离子，其中维生素A的[M-H₂O+H]⁺峰较强，维生素A醋酸酯的[M-CH₂CO-H₂O+H]⁺峰较强，维生素A棕榈酸酯的[M-C₁₅H₃₀CO-H₂O+H]⁺峰较强，维生素E、维生素E醋酸酯和维生素K₁的[M+H]⁺峰较强，根据确定后的母离子优化各母离子的去簇电压(DP)。然后分别以上述离子为母离子，对其子离子进行全扫描，选择丰度较高、干扰较小的两对子离子为定性离子，峰度最高的作为定量离子，然后优化其碰撞能量(CE)。优化后的质谱参数见表2。

表2MRM扫描模式下标准溶液中各脂溶性维生素的质谱参数表

维生素A、维生素A醋酸酯和维生素A棕榈酸酯的离子对相同，根据保留时间确定相应的化合物即确定是维生素A、维生素A醋酸酯和维生素A棕榈酸酯等。

样品检测：将待测样品和标准工作溶液在液相色谱-串联质谱仪上分别进样，获得以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁等6种脂溶性维生素的浓度为横坐标，再以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁等6种脂溶性维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线。用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种脂溶性维生素的浓度。维生素A(以视黄醇计)以维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯换算成维生素A的总量计算，维生素E(以α-生育酚计)以维生素E、维生素E醋酸酯换算成维生素E的总量计算。

待测样品测定两次取平均值，两次独立测定结果的绝对差值小于算术平均值的10％。具体换算方法如下：

其中C_维生素A表示维生素A的浓度，C_{维生素A醋酸酯}表示维生素A醋酸酯的浓度，以此类推。

本发明的方法前处理不经皂化，直接使用乙醇沉淀蛋白质，正己烷提取，采用高效液相色谱-大气压化学电离串联质谱(HPLC-APCI-MS/MS)进行检测，建立了同时测定婴幼儿配方奶粉中脂溶性维生素A,E,K₁的方法。该方法具有快速、高效、灵敏度高、重复性好的特点。

与现有的分析方法相比，本发明的检测方法主要有以下特点：

(1)脂溶性维生素具有光敏感、稳定性差的特点，本发明样品前处理操作快速、简便，检测时间短，避免了复杂繁琐的奶粉皂化提取过程，可大大提高样品检测的重复性和准确性；

(2)仅使用少量有机试剂提取，分析成本大大降低，且安全环保，有利于奶粉中脂溶性维生素快速检测的推广应用。

(3)可同时检测三种脂溶性维生素A,E和K₁。

附图说明

图1A是本发明具体实施例中维生素A、维生素A醋酸酯和维生素A棕榈酸酯标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为269.2/92.9)。

图1B是本发明具体实施例中维生素A、维生素A醋酸酯和维生素A棕榈酸酯标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为269.2/213.1)。

图2A是本发明具体实施例中维生素E标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为431.4/165.1)。

图2B是本发明具体实施例中维生素E标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为431.4/137.1)。

图3A是本发明具体实施例中维生素E醋酸酯标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为473.4/207.1)。

图3B是本发明具体实施例中维生素E醋酸酯标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为473.4/165.1)。

图4A是本发明具体实施例中维生素K₁标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为451.4/187.1)。

图4B是本发明具体实施例中维生素K₁标准溶液的MRM色谱图(监测离子对为451.4/171.1)。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：奶粉中脂溶性维生素A,E,K₁的检测

1、样品制备

称取1g左右样品(市售某品牌婴儿配方奶粉)于10mL比色管中，加入45℃温水溶解定容至10mL，分取1mL于20mL离心管中，加入5mL无水乙醇沉淀蛋白，加入3mL正己烷提取，并加入5mL饱和氯化钠溶液抑制乳化，混匀后5000rpm高速离心，取正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容至1mL，经0.22μm滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

2、标准溶液的制备

维生素A(视黄醇，纯度95.5％)、维生素A醋酸酯(视黄醇醋酸酯，纯度98.8％)、维生素A棕榈酸酯(视黄醇棕榈酸酯，纯度92.5％)、维生素E(DL-α-生育酚，纯度95.8％)、维生素E醋酸酯(DL-α-生育酚醋酸酯，纯度97.4％)和维生素K₁(叶绿醌，纯度99.3％)标准品均购自美国ChromaDex公司。

称取维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁六种脂溶性维生素标准品各10mg，分别用无水乙醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中。各维生素标准储备液配制后需要通过紫外吸光值进行浓度校正(表1)。(参考文献为：TheVitamins-FundamentalAspectsinNutritionandHealth,FourthEdition.GeraldF.Combs,Jr.,ElsevierInc.2012.)

分别取各维生素标准储备液若干微升，分别注入至含有3.00mL乙醇的比色皿中，根据给定波长测定各维生素的吸光值，按表2给定的条件进行测定，通过下列公式计算出该维生素的浓度。

$C=\frac{A}{E}\×\frac{1}{100}\×\frac{3.00}{V\×{10}^{-3}}$

式中：C为各维生素的浓度，单位为g/mL；A为各维生素的紫外吸光值；V为加入标准储备液的量，单位为μL；E为各维生素的1％比吸光系数。

移取各标准储备溶液，用乙醇稀释成浓度为10.0μg/mL的混合标准中间溶液，-18℃下避光保存。根据需要用乙醇逐级稀释配成适当浓度的混合标准工作液，现配现用。

3、样品检测

选用水-乙腈为流动相，反相液相色谱柱分离，采用大气压化学电离串联质谱进行检测，正离子扫描模式，多反应监测(MRM)扫描检测，外标法定量。标准溶液中各维生素的MRM见图1A,图1B，图2A,图2B，图3A,图3B，图4A,图4B。其中图1A是本发明具体实施例中维生素A、维生素A醋酸酯和维生素A棕榈酸酯标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为269.2/92.9。图1B是本发明具体实施例中维生素A、维生素A醋酸酯和维生素A棕榈酸酯标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为269.2/213.1。图2A是本发明具体实施例中维生素E标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为431.4/165.1。图2B是本发明具体实施例中维生素E标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为431.4/137.1。图3A是本发明具体实施例中维生素E醋酸酯标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为473.4/207.1。图3B是本发明具体实施例中维生素E醋酸酯标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为473.4/165.1。图4A是本发明具体实施例中维生素K₁标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为451.4/187.1。图4B是本发明具体实施例中维生素K₁标准溶液的MRM色谱图，监测离子对为451.4/171.1。从图可以看出各维生素在优化的条件下可获得满意的灵敏度和分离效果。

色谱条件：(1)色谱柱：PhenomenexKinetexC18色谱柱(100×4.6mmi.d.，粒径2.6μm)；(2)柱温：35℃；(3)流速：1.0mL/min；(4)进样量：5μL；(5)流动相：水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序：0-4.0min，90％B；4.1-18.0min，100％B；18.1-22.0min，90％B。

质谱条件：(1)离子源：大气压化学电离源(APCI)；(2)扫描方式：正离子扫描；(3)检测方式：多反应监测(MRM)；(4)喷雾气(GS1)65psi，气帘气(CUR)30psi，碰撞气(CAD)medium，离子源温度：350℃，电流(NC)3.0入口电压(EP)和出口电压(CXP)均为10V，驻留时间(dwelltime)50ms；(5)MRM监测离子对、化合物保留时间、去簇电压(DP)和碰撞能量(CE)等参数列于表2。

将待测样品和标准工作溶液在液相色谱-串联质谱仪上分别进样，获得以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁等6种脂溶性维生素的浓度为横坐标，再以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁等6种脂溶性维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线。用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种脂溶性维生素的浓度。维生素A(以视黄醇计)以维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯换算成维生素A的总量计算，维生素E(以α-生育酚计)以维生素E、维生素E醋酸酯换算成维生素E的总量计算。待测样品测定两次取平均值，两次独立测定结果的绝对差值小于算术平均值的10％。具体换算方法如下：

其中C_维生素A表示维生素A的浓度，C_{维生素A醋酸酯}表示维生素A醋酸酯的浓度，以此类推。

其中286.45为维生素A的分子量，328.49为维生素A醋酸酯的分子量，524.87为维生素A棕榈酸酯的分子量，430.71为维生素E的分子量，472.75为维生素E醋酸酯的分子量。

4、方法线性范围和定量限

分别取各维生素标准系列溶液进行测定(按步骤3进行测定)，以各维生素定量离子对的质量色谱图峰面积和对应的质量浓度绘制标准曲线，以色谱峰面积信噪比大于10计算其定量限，线性关系和定量限见表3。其中线性范围、线性方程和相关系数是标准曲线得到的，以色谱峰面积大于10倍信噪比来确定本方法的定量限。表3说明各脂溶性维生素分别在较宽的线性范围内具有很好的线性关系，线性相关系数均大于0.999。

表3各脂溶性维生素的线性范围和定量限表

5、回收率实验

称取某品牌婴幼儿配方奶粉进行加标回收试验，分别加入适量的维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁等6种脂溶性维生素标准品(见下表)，按照上述步骤1-3的方法处理样品，测定并计算各种维生素的含量，每个样品重复3次试验，回收率和精密度结果见表4。可以看出，各维生素的平均回收率为81.3％-95.6％，相对标准偏差(RSD)为3.8％-7.9％，说明本发明方法具有较满意的回收率和精密度。

表4婴幼儿配方奶粉中各脂溶性维生素的加标回收率和精密度表(n＝3)

6、奶粉样品的测定

取三个不同品牌婴幼儿配方奶粉样品，按照上述步骤1-3方法处理样品，测定并换算维生素A,E,K₁的含量，结果见表5。其中标识值为奶粉罐上的值，测定值是按照本方法检测得到的值。

表5奶粉样品检测结果表

从表5可以看出，各维生素的标识值与本发明方法的检测值有稍微差别，但是数值比较接近，在误差允许范围内。说明本发明的检测方法准确性高。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (4)

1.一种奶粉中脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法，其特征在于，步骤为，

样品制备：称取样品于比色管中，加入温水溶解定容至刻度后，取部分定容后的样品溶液于离心管中，加入无水乙醇沉淀蛋白，再加入正己烷提取，加入饱和氯化钠溶液抑制乳化，混匀后高速离心分层，取最上面的正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容，经0.22μm滤膜过滤后即可；

样品检测：将待测样品和标准工作溶液在液相色谱-串联质谱仪检测，分别进样，获得以标准工作溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁这6种脂溶性维生素的浓度为横坐标，再以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁这6种脂溶性维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线；用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种脂溶性维生素的浓度；维生素A以维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯换算成维生素A的总量计算，维生素E以维生素E、维生素E醋酸酯换算成维生素E的总量计算；具体换算方法如下：

C_维生素K1＝C_维生素K1；

其中C_维生素A表示维生素A的浓度，C_{维生素A醋酸酯}表示维生素A醋酸酯的浓度，以此类推；

即得到待测样品的维生素A、维生素E、维生素K₁的浓度。

2.权利要求1所述奶粉中脂溶性维生素A,E,K₁的检测方法，其特征在于，所述样品制备为称取0.5～2.0g左右样品于5～20mL比色管中，加入40～60℃温水溶解定容至刻度，优选45℃温水；分取1～2mL于20mL离心管中，加入2～10mL无水乙醇沉淀蛋白，然后加入1～5mL正己烷提取，并加入2～10mL饱和氯化钠溶液抑制乳化，混匀后5000rpm高速离心，取正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容至1mL或2mL，经0.22μm滤膜过滤后即可。

3.权利要求1所述奶粉中脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法，其特征在于，所述标准工作溶液为10.0μg/mL的维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯和维生素K₁的乙醇溶剂的标准工作溶液。

4.权利要求1所述奶粉中脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱仪的检测为，选用水-乙腈为流动相，反相液相色谱柱分离，采用大气压化学电离串联质谱进行检测，正离子扫描模式，多反应监测MRM检测，外标法定量；

色谱条件：PhenomenexKinetexC₁₈色谱柱,100×4.6mmi.d.，粒径2.6μm；柱温35℃；流速1.0mL/min；进样量5μL；流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序：0-4.0min，90％B；4.1-18.0min，100％B；18.1-22.0min，90％B；

质谱条件：离子源为大气压化学电离源；扫描方式为正离子扫描；检测方式为多反应监测；喷雾气65psi，气帘气30psi，碰撞气medium，离子源温度350℃，电流入口电压和出口电压均为10V，驻留时间50ms；监测离子对:维生素A为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素A醋酸酯为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素A棕榈酸酯为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素E为431.4/137.1和431.4/165.1、维生素E醋酸酯为473.4/165.1和473.4/207.1、维生素K₁为451.4/171.1和451.4/187.1；化合物保留时间:维生素A为2.33min、维生素A醋酸酯为3.48min、维生素A棕榈酸酯为16.50min、维生素E为8.01min、维生素E醋酸酯为8.77min,维生素K₁为9.70min；去簇电压：维生素A为98V、维生素A醋酸酯为62V、维生素A棕榈酸酯为82V、维生素E为168V、维生素E醋酸酯为201V,维生素K₁为227V；碰撞能量:维生素A为26V和17V、维生素A醋酸酯为26V和17V、维生素A棕榈酸酯为26V和17V、维生素E为61V和27V、维生素E醋酸酯为50V和24V、维生素K₁为41V和32V。