CN105866309A - 一种维生素a和维生素e的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种维生素A和维生素E的测定方法，所述的方法包括以下步骤：(1)样品皂化步骤；(2)样品萃取步骤；(3)浓缩步骤；(4)检测步骤；本发明与现有技术相比，具有操作简单，重复性好的特点。

Description

一种维生素A和维生素E的测定方法
技术领域
本发明属于维生素的检测方法，特别属于一种维生素A和维生素E的快速测定方法。
背景技术
维生素是维持人们正常生理功能的营养物质，目前复合维生素的产品越来越多，而维生素A、E是脂溶性维生素，容易在体内堆积，需要对其进行检测，GB5009.82-2003提供了一种将食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。但上述方法操作步骤多，人为原因对试验结果的检测结果影响较大，重复性差。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简单的维生素A和维生素E的快速测定方法。
本发明解决技术问题的技术方案为：一种维生素A和维生素E的测定方法，包括以下步骤：(1)样品皂化步骤；(2)样品萃取步骤；(3)浓缩步骤；(4)检测步骤；
所述的(3)浓缩步骤：将乙醚提取液经无水硫酸钠(3g)滤入150ml旋转蒸发瓶内，用乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下1-0.5ml时，取下蒸发瓶，加入乙醇溶液，溶解提取物,定容至2ml；将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟；取上清液供色谱分析。
所述的(1)样品皂化步骤：
准确称取样品1-10克于三角瓶中(含维生素A 3ug；维生素E40ug)，加40ml无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。加入3ml10％抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液3ml，混匀；最后加入15ml氢氧化钾边加边振摇；于沸水浴上回流20min使样品皂化完全；皂化后立即放入冰水中冷却；
所述的(2)样品萃取步骤；
将皂化后的样品移入分液漏斗中，用100ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；用100ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中；振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层；然后每次用水将乙醚液洗至中性；
所述的(4)检测步骤；
4.1 标准曲线的制备
将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液(约1mg/ml)，制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升，分别稀释至10.00ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值；用比吸光系数计算该维生素的浓度；
4.2 样品测量
采用内标两点法进行定量：把一定量的维生素A、维生素E及内标苯并〔e〕芘液混合均匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70％，作为高浓度点，高浓度的1/2为低浓度点(内标苯并〔e〕芘的浓度值不变)，用此二种浓度的混合标准进行色谱分析。
现有的浓缩步骤中，利用氮气吹掉剩余的乙醚，操作复杂，并且氮气气流在吹掉剩余的乙醚的时候，经常容易将样品吹出瓶外，造成检测结果偏低，重复性差。
本发明与现有技术相比，具有操作简单，重复性好的特点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细的说明。
1、仪器
(1)高压液相色谱仪(带紫外检测器)
(2)六孔恒温水浴锅
(3)旋转蒸发器
(4)高纯氮气(纯度99.99％)
(5)高速离心机
2、试剂
本发明所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水
2.1 无水乙醇：重蒸，不含有醛类物质。
2.2 20％抗坏血酸溶液(Vc)W/V临用前配制
2.3 40％氢氧化钾溶液(KOH)W/V
2.4 无水乙醚重蒸，不含过氧化物
2.5 pH 1-14试纸
2.6 无水硫酸钠Na2SO4
2.7 甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用
2.8 重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用
2.9 苯并〔e〕芘标准液
称取苯并〔e〕芘(纯度98％)，用脱醛乙醇配制成2ml相当于10μg苯并〔e〕芘的内标溶液。
2.10 维生素A标准液
视黄醇(纯度85％)用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素E标准液α-生育酚(纯度95％Sigma公司)，δ-生育酚(纯度95％Sigma公司)，δ-生育酚(纯度95％Sigma公司)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。
2.11 仪器所需条件
预柱：ODS 10μm，4mm×4.5cm。
分析柱：ODS 5μm，4.6mm×25cm。
流动相：甲醇：水＝98：2。混匀，临用前脱气。
紫外检测器波长：300nm。量程0.02。
进样量：20μL进样定量环。
流速：1.65-1.70mL/min。
实施例1：
本发明需避光操作
(1)样品皂化步骤
准确称取样品1-10克于三角瓶中(含维生素A 3ug；维生素E40ug)，加40ml无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀；加入3ml10％抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液3ml，混匀。最后加入15ml氢氧化钾边加边振摇；于沸水浴上回流20min使样品皂化完全；皂化后立即放入冰水中冷却；
(2)样品萃取步骤
将皂化后的样品移入分液漏斗中，用100ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；用100ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中，轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层，然后每次用50ml水将乙醚液洗至中性，总共4-5次；
(3)浓缩步骤
将乙醚提取液经无水硫酸钠(3g)滤入150ml旋转蒸发瓶内，用20ml乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下2ml时，取下蒸发瓶，立即用高纯氮气将乙醚吹干；加入2ml乙醇溶液，充分混合，溶解提取物。将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟；上清液供色谱分析；
4、样品检测工序
4.1 标准曲线的制备
将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液(约1mg/ml)，制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升，分别稀释至10.00ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算该维生素的浓度。
测定条件如下：
浓度计算：X1＝A/E×1/100×10.00/S×10-3
式中X1：某维生素浓度，mg/ml；
A：维生素的平均紫外吸光值；
S：加入标准的量，μL；
E：某种维生素1％比吸光系数；
10.00/S×10-3：标准液稀释倍数。
4.2 样品测量
采用内标两点法进行定量。把一定量的维生素A、维生素E及内标苯并〔e〕芘液混合均匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70％，作为高浓度点，高浓度的1/2为低浓度点(内标苯并〔e〕芘的浓度值不变)，用此二种浓度的混合标准进行色谱分析。根据微处理机装置，按说明用二点内标法进行定量。
6.计算
X＝C/m×V×100/1000
X：某种维生素的含量，mg/100g；
C：由标准曲线上查到某种维生素含量，μg/mL；
V：样品浓缩定容体积，mL；
m：样品质量，g；
用微处理机二点内标法进行计算时，按计算公式计算或由微机直接给出结果。
重复上述试验6次，进行重复性试验，其重复性RSD为8％
实施例2：
除：所述的(3)浓缩步骤：将乙醚提取液经无水硫酸钠(3g)滤入150ml旋转蒸发瓶内，用乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下1-0.5ml时，取下蒸发瓶，加入乙醇溶液，溶解提取物,定容至2ml；将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟；取上清液供色谱分析。外其余与实施例1相同。
重复上述试验6次，其重复性RSD为4％。

Claims (4)

1.一种维生素A和维生素E的测定方法，包括以下步骤：(1)样品皂化步骤；(2)样品萃取步骤；(3)浓缩步骤；(4)检测步骤；
其特征在于：
所述的(3)浓缩步骤：
将乙醚提取液经无水硫酸钠滤入150ml旋转蒸发瓶内，用乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下1-0.5ml时，取下蒸发瓶，加入乙醇溶液，溶解提取物,定容至2ml；将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟；取上清液供色谱分析。
2.根据权利要求1所述的一种维生素A和维生素E的测定方法，
其特征在于：
所述的(1)样品皂化步骤：
准确称取样品1-10克于三角瓶中(含维生素A 3ug；维生素E40ug)，加40ml无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀，加入3ml10％抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液3ml，混匀；最后加入15ml氢氧化钾边加边振摇；于沸水浴上回流20min使样品皂化完全；皂化后立即放入冰水中冷却。
3.根据权利要求1所述的一种维生素A和维生素E的测定方法，
其特征在于：
所述的(2)样品萃取步骤；
将皂化后的样品移入分液漏斗中，用100ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；用100ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中；振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层；然后每次用水将乙醚液洗至中性。
4.根据权利要求1所述的一种维生素A和维生素E的测定方法，
其特征在于：
所述的(4)检测步骤：
4.1标准曲线的制备
将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液，制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度，标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升，分别稀释至10.00ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值；用比吸光系数计算该维生素的浓度；
4.2样品测量
采用内标两点法进行定量：把一定量的维生素A、维生素E及内标苯并〔e〕芘液混合均匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70％，作为高浓度点，高浓度的1/2为低浓度点(内标苯并〔e〕芘的浓度值不变)，用此二种浓度的混合标准进行色谱分析。
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