CN108008047A - 一种食用油中生育酚含量的检测方法 - Google Patents

一种食用油中生育酚含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

一种食用油中生育酚含量的检测方法是采用食用油用乙醇，将乙醇提取液再用1‑辛基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐或1‑己基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐萃取，在COSMOSIL π‑NAP，流动相为甲醇和水的混合液条件下样品测定，经X=4C0×V0/1.5 M×10‑3计算出食用油中生育酚的含量。本发明对国标法中的皂化过程改为液液萃取，同时将国标法中分液、洗涤、干燥、旋蒸四步减少为萃取、离心两个主要步骤，提取时间由4 h缩短至20 min左右，有机溶剂用量从200 mL(乙醚)减少到4 mL乙醇。该方法操作简单、高效、有机溶剂消耗少、成本低，在食品微量元素的分析中有着广阔的前景。

Description

一种食用油中生育酚含量的检测方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，更具体涉及一种食用油中四种生育酚含量的检测方法。
背景技术
维生素E(Vitamin E)又称生育酚(tocopherol)，具有抗氧化、降低胆固醇、改善血液循环和延缓衰老等功效(Theriault et al.1999)。自然界中共有8种：α-T,β-T,γ-T,δ-T四种生育酚和α-TT,β-TT,γ-TT,δ-TT四种生育三烯酚。
在人们日常饮食中，食用油是人们摄取生育酚的重要来源。因此，检测食用油中生育酚的含量对人们的健康饮食有重要意义。传统的提取食品中生育酚的方法主要为液液萃取和皂化-液液萃取。这些方法往往需要提取、洗涤、干燥、旋蒸等步骤，操作繁琐耗时，消耗大量有机溶剂。
近年来，有学者尝试采用CO2超临界萃取(SFE-CO2)(Ge et al.2002)，加速溶剂萃取(ASE)(Bustamante-Rangel et al.2007)等样品前处理方法来提取食用油中的生育酚。与传统的提取方法相比，这些方法高效且减少了有机溶剂用量，然而仪器装置较为昂贵，测试成本较高，不便于常规分析。
分散液液微萃取(DLLME)(Rezaee et al.2006)自2006年被提出后，就因操作简单、有机溶剂用量少和富集倍数高等显著优点而被广泛应用。我们曾成功建立了皂化法结合DLLME提取谷物中α-生育酚的分析方法(Liu et al.2013),该方法极大减少了萃取剂的用量，但萃取剂仍为高毒性的四氯化碳。
发明内容
针对现有技术的缺陷或不足，本发明的目的在于提供一种操作简单，无毒，检测时间短，测试成本低的食用油中四种生育酚含量的检测方法。
为此，本发明提供的食用油中生育酚的检测方法，包括如下步骤：
(1)标准品的制备
准确称取10.0mgα-,β-，γ-,δ-生育酚标准品，用色谱乙醇溶解并定容至10mL配制成1mg mL-1储备液，4℃±0.5℃下保存；
(2)液液萃取-分散液液微萃取
液液萃取：准确称量0.1-0.5g食用油于10mL离心管中，加入4.0mL乙醇，超声提取3min，5000rpm离心5min；
离子液体分散液液微萃取：取1.5mL乙醇提取液转移至含80μL 1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[C8MIM][PF6]或100μL 1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[C6MIM][PF6]的10mL带旋帽的锥形离心管中，添加8.5mL去离子水，手摇1min，5000rpm离心3min；
(3)色谱条件
色谱柱：COSMOSILπ-NAP为250mm×4.6mm,5μm；流动相：甲醇：水体积比＝90:10的混合液；流速：1.0mL min-1；进样量：20μL；柱温：30℃。
(4)样品测定
选取5个不同浓度的分析物标准品溶液所对应的色谱峰面积建立工作曲线，用于样品含量测定，范围为1-40μg mL-1；用100μL微量注射器吸取步骤(2)中离心管底部沉积相等体积甲醇稀释后，在与工作曲线相同色谱条件进行HPLC分析，计算样品中三种生育酚的含量，所有实验均重复三次，取平均值；
(5)计算公式
根据下列公式计算样品中分析物含量
X＝4C0×V0/1.5M×10-3
X--食用油中分析物的含量，μg g-1
M--食用油称取质量，g
C0--DLLME萃取后萃取相等体积甲醇稀释后分析物的浓度，μg mL-1
V0--DLLME萃取后萃取相等体积甲醇稀释后的体积，μL。
相对于现有技术，本发明具有以下显著优点:
本发明对国标法中的皂化过程改为液液萃取，同时将国标法中分液、洗涤、干燥、旋蒸四步减少为萃取、离心两个主要步骤，提取时间由4h缩短至20min左右，有机溶剂用量从200mL(乙醚)减少到4mL乙醇。该方法操作简单、高效、有机溶剂消耗少、成本低，在食品微量元素的分析中有着广阔的前景。
用离子液体来替代传统分散液液微萃取中高毒的氯代烃作为萃取剂，进一步减少了毒性试剂的用量，具有绿色环保的特点。
附图说明
图1标准品及一调和油样品经IL-DLLME萃取后色谱图
表1本发明实施例1-6实施条件参数
表2不同方法提取生育酚含量
表3不同食用油样品中生育酚平均含量
表4不同样品生育酚加标回收率
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
(1)标准品的制备
准确称取10.0mgα-,β-,γ-,δ-生育酚标准品，用色谱乙醇溶解并定容至10mL配制成1mg mL-1储备液，4℃下保存。
(2)液液萃取-分散液液微萃取
液液萃取：准确称量0.1g花生油于10mL离心管中，加入4.0mL乙醇，超声提取3min，5000rpm离心5min。
离子液体分散液液微萃取：取1.5mL乙醇提取液转移至含80μL[C8MIM][PF6]的10mL带旋帽的锥形离心管中，添加8.5mL去离子水，手摇1min，5000rpm离心3min。
(3)色谱条件
色谱柱：COSMOSILπ-NAP(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇-水(90:10,V/V)；流速：1.0mL min-1；进样量：20μL；柱温：30℃。
(4)样品测定
选取5个不同浓度的分析物标准品溶液所对应的色谱峰面积建立工作曲线，用于样品含量测定，范围为1-40μg mL-1；用100μL微量注射器吸取步骤(2)中离心管底部沉积相等体积甲醇稀释后，在与工作曲线相同色谱条件进行HPLC分析，计算样品中三种生育酚的含量。所有实验均重复三次，取平均值。
(5)计算公式
根据下列公式计算样品中分析物含量
X＝4C0×V0/1.5M×10-3
X--食用油中分析物的含量，μg g-1
M--食用油称取质量，g
C0--DLLME萃取后萃取相等体积甲醇稀释后分析物的浓度，μg mL-1
V0--DLLME萃取后萃取相等体积甲醇稀释后的体积，μL
实施例2
准确称量0.1g玉米油于10mL离心管中，加入4.0mL乙醇，超声提取3min，5000rpm离心5min；取1.5mL乙醇提取液转移至含100μL[C6MIM][PF6]的10mL带旋帽的锥形离心管中，添加8.5mL去离子水，手摇1min，5000rpm离心3min。用100μL微量注射器吸取离心管底部沉积相等体积甲醇稀释后，进行HPLC分析，计算样品中生育酚的含量。所有实验均重复三次，取平均值。
实施例3-6的操作步骤同实施例1，实施条件参数见表1所示。
发明人评估了本发明方法的线性范围、重现性、检测限(LOD)和定量限(LOQ)。方法在1-40μg mL-1范围内线性良好(r>0.999)，日内和日间重现性用相对标准偏差表示分别小于3.9％和7.1％。方法LOD(S/N＝3)和LOQ(S/N＝10)分别为1.0-2.0ng mL-1和3.5-6.7ngmL-1。
为了进一步考察方法的准确性，发明人选取了一种食用油样品用国标法和IL-DLLME提取做了对照试验，结果见表2。结果表明两种方法提取测定的生育酚含量经统计分析比较，没有显著性差异(P<0.05)。但国标法繁琐耗时，处理一个样品大约需要4h，而IL-DLLME则将国标法中分液、洗涤、干燥、旋蒸四步减少为萃取、离心两个主要步骤，提取时间缩短至约20min，有机溶剂用量从200mL乙醚减少到4mL乙醇。该方法操作简单，准确可靠，有机溶剂消耗少，可用于替代国标法用于食用油中生育酚含量的测定。
为了考察方法的实用性，发明人对6种食用油样品的生育酚含量进行测定，结果见表3,相应谱图见图1。进行不同浓度的加标回收率实验，结果见表4，回收率介于87.3-106.2％，RSD小于7.5％。
表1实施例1-6实施条件参数
表2不同方法提取生育酚含量(μg g-1,n＝3)
同一列数字后的不同小写字母表示0.05的差异显著水平，两种方法提取测定的生育酚含量经统计分析比较，没有显著性差异,用同一字母表示。
表3不同食用油样品中生育酚平均含量
表4不同样品生育酚加标回收率

Claims (1)

1.一种食用油中生育酚含量的检测方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）标准品的制备
分别准确称取10.0 mg α-,β-，γ-, δ-生育酚标准品，用色谱乙醇溶解并定容至10 mL配制成1 mg mL-1储备液，4℃± 0.5℃下保存；
（2）液液萃取-分散液液微萃取
液液萃取：准确称量0.1-0.5 g食用油于10 mL离心管中，加入4.0 mL乙醇，超声提取3min，5000 rpm 离心5 min；
离子液体分散液液微萃取：取1.5 mL乙醇提取液转移至含80 μL 1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐或100 μL 1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐的10 mL带旋帽的锥形离心管中，添加8.5 mL 去离子水，手摇1 min，5000 rpm 离心3 min；
(3) 色谱条件
色谱柱：COSMOSIL π-NAP 为250 mm×4.6 mm, 5 μm；流动相：甲醇：水体积比=90 : 10的混合液；流速：1.0 mL min-1；进样量：20 μL；柱温：30℃；
(4) 样品测定
选取5个不同浓度的分析物标准品溶液所对应的色谱峰面积建立工作曲线，用于样品含量测定，范围为1-40 μg mL-1；用100 μL微量注射器吸取步骤（2）中离心管底部沉积相等体积甲醇稀释后，在与工作曲线相同色谱条件进行HPLC分析，计算样品中三种生育酚的含量，所有实验均重复三次，取平均值；
(5) 计算公式
根据下列公式计算样品中分析物含量
X= 4C0×V0/1.5 M×10-3
X--食用油中分析物的含量，μg g-1
M--食用油称取质量，g
C0-- DLLME萃取后萃取相等体积甲醇稀释后分析物的浓度，μg mL-1
V0-- DLLME萃取后萃取相等体积甲醇稀释后的体积，μL。
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