CN110964806A - 检测sos1基因突变的方法、引物和试剂盒 - Google Patents
检测sos1基因突变的方法、引物和试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110964806A CN110964806A CN201911392159.1A CN201911392159A CN110964806A CN 110964806 A CN110964806 A CN 110964806A CN 201911392159 A CN201911392159 A CN 201911392159A CN 110964806 A CN110964806 A CN 110964806A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sos1
- sos
- sequencing
- amplification
- primers
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101100477990 Homo sapiens SOS1 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims abstract description 66
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 50
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 50
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 26
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 8
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010007577 Exodeoxyribonuclease I Proteins 0.000 claims description 3
- 102100029075 Exonuclease 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims description 2
- 101150117474 Sos gene Proteins 0.000 claims 1
- 206010029748 Noonan syndrome Diseases 0.000 abstract description 11
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 48
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 101100404726 Arabidopsis thaliana NHX7 gene Proteins 0.000 description 10
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 10
- 108700022176 SOS1 Proteins 0.000 description 10
- 101100197320 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) RPL35A gene Proteins 0.000 description 10
- 101150100839 Sos1 gene Proteins 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033479 RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 101150040459 RAS gene Proteins 0.000 description 2
- 101150076031 RAS1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100032929 Son of sevenless homolog 1 Human genes 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 239000012487 rinsing solution Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150000874 11 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000143060 Americamysis bahia Species 0.000 description 1
- 101100421901 Caenorhabditis elegans sos-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 206010061619 Deformity Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102100025477 GTP-binding protein Rit1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 1
- 102000016285 Guanine Nucleotide Exchange Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010067218 Guanine Nucleotide Exchange Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000967216 Homo sapiens Eosinophil cationic protein Proteins 0.000 description 1
- 101000574654 Homo sapiens GTP-binding protein Rit1 Proteins 0.000 description 1
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 1
- 101000712530 Homo sapiens RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101150048674 PTPN11 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000025261 autosomal dominant disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical class O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000008289 pathophysiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒，所述引物、试剂盒均包括针对SOS1基因致病突变对应显子的扩增引物和测序引物。基于PCR扩增和Sanger测序，本发明可快速地检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变位点的突变情况。
Description
技术领域
本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒。
背景技术
Noonan综合征(NS)是一种先天遗传性疾病，为常染色体显性遗传病，呈完全外显率，但表现度不一，而且大多数的病例属散发类型。该病由Noonan在1968年首次报道，存活的新生儿中发病率约为1/25001～1/1000，男女均可发病。该病的主要特征包括特殊面容、身材矮小、胸部畸形，并且会伴有先天性心脏病等。Noonan综合征的病理生理机制还不明确，但是目前已经确定该病与RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路上的部分基因突变相关，RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路是细胞生长的重要调控因素。其中约50％的患者出现PTPN11基因突变，10％～13％患者出现SOS1突变，另外RAF1、RIT1、RAS、NRAS、BRAF等基因突变也有出现，但患者数量较少。因此检测非PTPN11基因突变的Noonan综合征的患者可以尝试检测SOS1基因的突变。
SOS1基因定位于人的2号染色体q24.1，该基因编码一种蛋白质，该蛋白质是RAS蛋白的鸟嘌呤核苷酸交换因子，RAS蛋白是结合鸟嘌呤核苷酸并参与信号转导途径的膜蛋白。GTP结合激活，GTP水解使RAS蛋白失活。该基因的产物可通过促进GTP与GDP的交换来调节RAS蛋白。该基因的突变与4型Noonan综合征有关。该基因由23个外显子和25个内含子组成，编码的蛋白产物为1333个氨基酸长度的蛋白前体。SOS1基因突变以错义突变为主，已报到的热点突变有R552G、Q477R、P894R和I733F等。
发明内容
本发明采用Sanger测序法检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变，并且设计的引物分别扩增包含基因SOS1全外显子上的DNA片段，通过测序结果的分析，可以很直观地了解Noonan综合征相关的SOS1基因突变位点的突变情况，扩增引物设计时加上了M13接头，并使用M13作为测序引物，简化操作步骤和节约了检测成本。
本发明提供了检测SOS1基因突变的引物，其特征在于，SOS1基因突变选自R552G、Q477R、P894R、I733F突变，所述引物包括至少一对用于扩增SOS1基因的扩增引物和一对测序引物M13F和M13R，所述扩增引物选自自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，其碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
本发明还提供了一种检测检测样品中SOS1基因突变的方法，其包括如下步骤：
(1)提取样品DNA；
(2)利用至少一对扩增引物对步骤(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物，所述扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R；
(3)利用测序引物M13F与M13R对步骤(2)中的扩增产物分别进行正向和反向测序，获得所述扩增产物的基因序列；
(4)将步骤(3)中的基因序列与野生型SOS1基因序列进行比较，确定SOS1基因是否发生突变；
其中所述扩增引物和测序引物的碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
本发明还提供了一种检测样品中SOS1基因突变的试剂盒，所述试剂盒包括扩增体系PCR反应液和测序体系反应液，其中扩增体系PCR反应液包括至少一对扩增引物，测序体系反应液包括一对测序引物M13F和M13R，所述至少一对扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，所述扩增引物和测序引物的碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
进一步地，所述扩增体系PCR反应液还包括2×PCR Buffer、dNTPs和KOD FX DNA聚合酶。
进一步地，所述测序体系反应液还包括测序纯化液、EDTA、无水乙醇、75％乙醇、HIDI和Bigdye Terminator V3.1。
进一步地，所述测序纯化液包括核酸外切酶I和牛小肠碱性磷酸酶。
进一步地，所述试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。
进一步地，所述突变选自R552G、Q477R、P894R和I733F等常见突变。
有益效果：(1)本发明设计了扩增基因SOS1全外显子的正、反向引物，并创新性地在PCR扩增上游引物前端和下游引物前端分别加了一段长18bp的的M13F引物序列和长16bp的M13R引物序列，这样扩增以后的产物两端都会带上所引入的M13F及M13R引物序列，随后进行测序反应的时候，所有的扩增产物可以使用统一的M13F和M13R引物就可以进行正反向测序了，而不用针对每个扩增产物都设计一对测序引物，这样就可以显著地降低检测成本；(2)在设计扩增引物时，通过分析这几种热点突变所在的外显子位置，让扩增第7和8外显子的正反向引物共用一对正反向扩增引物：SOS1-E7_8-F和SOS1-E7_8-R，让扩增第11和12外显子的正反向引物共用一对正反向扩增引物：SOS1-E11_12-F和SOS1-E11_12-R，让扩增第16和17外显子的正反向引物共用一对正反向扩增引物：SOS1-E16_17-F和SOS1-E 16_17-R，让扩增第18和19外显子的正反向引物共用一对正反向扩增引物：SOS1-E 18_19-F和SOS1-E18_19-R，从而降低扩增引物的使用数量，这会进一步降低检测成本；(3)对送检样本进行PCR扩增，过调整正反向引物的浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳，随后采用Sanger测序法，对PCR产物进行正反向测序反应扩增、纯化后变性、直接测序可以全面地检测基因SOS1全外显子突变位点的突变情况；(5)利用本发明所述扩增引物和测序引物，可以扩增基因SOS1全外显子，通过测序结果的分析，可以很直观的了解基因SOS1全外显子突变位点基因突变情况，并不受基因突变多样化的影响，可覆盖待检测的所有突变位点；(6)采用本发明的扩增引物对目的基因进行扩增并利用Sanger测序法检测基因SOS1的热点突变，具有有很高的特异性、准确性和灵敏度，以及操作简单、成本低等优点。
附图说明
图1为外显子1测序截图。
图2为外显子2测序截图。
图3为外显子3测序截图。
图4为外显子4测序截图。
图5为外显子5测序截图。
图6为外显子6测序截图。
图7为外显子7、8测序截图。
图8为外显子9测序截图。
图9为外显子10测序截图。
图10为外显子11测序截图。
图11为外显子12、13测序截图。
图12为外显子14测序截图。
图13为外显子15测序截图。
图14为外显子16、17测序截图。
图15为外显子18、19测序截图。
图16为外显子20测序截图。
图17为外显子21测序截图。
图18为外显子22测序截图。
图19为外显子23测序截图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应当注意的是，实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法：譬如，奥斯柏和金斯顿主编的《精编分子生物学实验指南》第四版，或者按照制造厂商所建议的步骤和条件。
实施例1
检测基因SOS1突变位点的试剂盒，包括：组织DNA抽提试剂盒(例如使用天根生物的DNA提取试剂盒)；无水乙醇；扩增体系PCR反应液、测序体系反应液、阳性对照品、阴性对照品和空白对照品，其中
扩增体系PCR反应液包括：2×PCR Buffer；2mMdNTPs；KOD FX DNAPolymerase(1U/μl)；至少一对扩增引物用于扩增基因SOS1，扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，其碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG。
测序体系包括：测序纯化液、EDTA(125mmol)、无水乙醇、75％乙醇、HIDI(高度去离子甲酰胺)、测序引物：M13F(3.2μm)与M13R(3.2μm)，以及Bigdye Terminator V3.1(购买自美国Applied Biosystems公司)，其中测序纯化液包括虾碱性磷酸酶(SAP)0.6U和核酸外切酶I(EXONI)1.2U，所述测序引物的碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
扩增体系PCR反应液配制如下：
其中，PrimerF/Primer选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R。
阳性对照品：含有SOS1序列的溶液。
阴性对照品：无SOS1序列的溶液。
空白对照品：2μl生理盐水或不加任何物质。
实施例2血液样本DNA检测流程
(1)抽提血液中的基因组DNA：
1)抽取500uL血液加入1000uL红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置5分钟，期间再颠倒混匀几次，接着3000rpm离心5min，吸去上清，留下白细胞沉淀，加200uL缓冲液GA，振荡至彻底混匀；
2)加入20μl蛋白酶K溶液，混匀；
3)加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
4)加入200μl无水乙醇，充分振荡混匀15秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
5)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12，000rpm(13，400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中；
6)向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm(13，400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；
7)向吸附柱CB3中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm(13，400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；
8)向吸附柱CB3中加入500μl漂洗液PW，12，000rpm(13，400×g)离心30秒，倒掉废液；
9)将吸附柱CB3放回收集管中，12，000rpm(13，400×g)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；
10)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl洗脱缓冲液TE，室温放置2～5分钟，12，000rpm(13，400×g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中，从而获得血液样本DNA溶液。
(2)试剂配置：按检测人份数配置扩增体系PCR反应液各Xμl，每人份18μl分装：
X＝18μl反应液×(n份标本+1份阳性对照+1份阴性对照+1份空白对照)n为检测标本数。
(3)加样：将2μl步骤(1)中获得的DNA加入到检测体系PCR反应液中；对阳性对照而言，直接加2μl阳性对照品；对阴性对照实验而言，直接加2μl阴性对照品；对空白对照实验而言，加2μl生理盐水或不加任何物质。
(4)扩增：检测在常规PCR仪上进行，获得扩增产物，可用仪器包括ABI veriti(美国Applied Biosystems公司)等。扩增反应条件如表1所示。
表1.扩增反应条件
(5)Sanger测序：
取9μl(4)中的PCR扩增产物与2μl测序纯化反应液。按照如表2所示的程序进行纯化，获得纯化产物。
表2
将1μl纯化产物分别与测序引物M13F(3.2μm)、M13R(3.2μm)按照如表3、表4所示的体系进行混合。
表3
测序反应程序如表5所示。
表5
沉淀环节：
向完成测序反应的产物中加入2μl 125mmol的EDTA，静置5min；加入15ml无水乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心30min；倒置离心15sec，加入50ml70％乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心15min；倒置离心15sec，置于95℃金属浴上；加入10μl HiDi后进行变性试验。变性程序如表6所示。
表6
变性程序结束后，上测序仪(ABI3500)测序。
(6)结果判断：将测序结果与野生型参考序列进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。
实施例3
取临床全血样本3份，检测每份样本Noonan综合征相关的SOS1基因全外显子突变情况。按实施例2所述方法提取基因组、配制试剂并检测。对每份样品而言，将2μl提取出的基因组DNA，加入到扩增体系PCR反应液中，同时做阳性、阴性、空白对照实验各一次。一台96孔的普通PCR仪可同时检测46份样品，每份样品2次重复，一份阳性对照，一份阴性对照和一份空白对照。检测时间为160分钟。
另外，样本3的测序结果如图1-19所示，均为野生型。样本1和2的测序结果也均为野生型。
从检测结果可以看出，本发明所述引物已经把想要检测的SOS1基因全外显子都包括在内了，能够扩增出SOS1基因的这些外显子，并且测序结果完全准确。本发明所述引物可以准确地扩增出SOS1基因全外显子，无论是野生型还是突变型。
序列表
<110> 武汉艾迪康医学检验所有限公司
<120> 检测SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒
<160> 40
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tagtcatcac ccacccttgc tgtaaaacga cggccagt 38
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atgtcaacac cgagagccag aacagctatg accatg 36
<210> 3
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
agtgctggca ttacaggcat tgtaaaacga cggccagt 38
<210> 4
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gtgctgggat tacaggcttg aacagctatg accatg 36
<210> 5
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aggacaagtg agtgagaact ggattgtaaa acgacggcca gt 42
<210> 6
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tctaaccaac aagaaaggag gagtaacagc tatgaccatg 40
<210> 7
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
aaatgttgtt ggtaagcaca ggtgtaaaac gacggccagt 40
<210> 8
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gcgacagagt gagattccgt aacagctatg accatg 36
<210> 9
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
aataaagtga tgatggcagg gttgtaaaac gacggccagt 40
<210> 10
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gttggcattg atgaagtgta ggtaacagct atgaccatg 39
<210> 11
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ggagtcctga gaccagaaag ttgtaaaacg acggccagt 39
<210> 12
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gtcacacaac taataagcag cagaaacagc tatgaccatg 40
<210> 13
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
attgtgctcg catagtcgtg tgtaaaacga cggccagt 38
<210> 14
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tgagtccctg agtctgctga aacagctatg accatg 36
<210> 15
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cccaaggtca cacagaagta gagtgtaaaa cgacggccag t 41
<210> 16
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
gacagaataa cgatgccaac ataacagcta tgaccatg 38
<210> 17
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
ttacatgagc tctaggtttt ctgtctgtaa aacgacggcc agt 43
<210> 18
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
caataaaccc atgcaggaaa gaacagctat gaccatg 37
<210> 19
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
tggcaaaaca ttttggaact gtaaaacgac ggccagt 37
<210> 20
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gtcacccctc tccttgtttg aacagctatg accatg 36
<210> 21
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
aatttggtaa gagttactgc attttctgta aaacgacggc cagt 44
<210> 22
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
ttactgagcc ccaatgacat caacagctat gaccatg 37
<210> 23
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
accgggaaat ggaaaaggtg taaaacgacg gccagt 36
<210> 24
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
agaacaggaa ctgcctgcca acagctatga ccatg 35
<210> 25
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
agaggctcag gcaggagaat tgtaaaacga cggccagt 38
<210> 26
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
tgggaggtgg aggtttcagt aacagctatg accatg 36
<210> 27
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
ctgccttcct tctatcagtc actgtaaaac gacggccagt 40
<210> 28
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
tctaatggct gcctaagatg aaacagctat gaccatg 37
<210> 29
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
tcaaataaca atggcttgga ggtgtaaaac gacggccagt 40
<210> 30
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
atcttgggag aggcttaggg taacagctat gaccatg 37
<210> 31
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
accagggctt tagcaaaata gtgtaaaacg acggccagt 39
<210> 32
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
gaaatttcaa gttggtggag tttagaacag ctatgaccat g 41
<210> 33
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ttttgcttga attgggtttc tgtaaaacga cggccagt 38
<210> 34
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
aggtaccaat gctgccagac aacagctatg accatg 36
<210> 35
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
tggtttattg aacagctttt ggtgtaaaac gacggccagt 40
<210> 36
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ctgcatgcta aatctatatg taatccaaca gctatgacca tg 42
<210> 37
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
tttgaaaacc ccaacttaat tctgtaaaac gacggccagt 40
<210> 38
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
attgccagca atggatttga acagctatga ccatg 35
<210> 39
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
tgtaaaacga cggccagt 18
<210> 40
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
aacagctatg accatg 16
Claims (8)
1.检测SOS1基因突变的引物，其特征在于，SOS1基因突变选自R552G、Q477R、P894R、I733F突变；所述引物包括至少一对用于扩增SOS1基因的扩增引物和一对测序引物M13F和M13R，所述扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，其碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
2.一种检测SOS1基因突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取样品DNA；
(2)利用至少一对扩增引物对步骤(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物，其中，所述扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R；
(3)利用测序引物M13F与M13R对步骤(2)中的扩增产物分别进行正向和反向测序，获得扩增产物的基因序列；
(4)将步骤(3)中的基因序列与野生型SOS1基因序列进行比较，确定SOS1基因是否发生突变；
所述扩增引物和测序引物的碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
3.一种检测SOS1基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增体系PCR反应液和测序体系反应液，其中扩增体系PCR反应液包括至少一对扩增引物，测序体系反应液包括一对测序引物M13F和M13R，扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，所述扩增引物和测序引物的碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
4.如权利要求3所述的试剂盒，所述扩增体系PCR反应液还包括2×PCR Buffer、dNTPs和KOD FX DNA聚合酶。
5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述测序体系反应液还包括测序纯化液、EDTA、无水乙醇、75％乙醇、HIDI和Bigdye Terminator V3.1。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述测序纯化液包括核酸外切酶I和牛小肠碱性磷酸酶。
7.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。
8.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述突变选自R552G、Q477R、P894R、I733F突变。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911392159.1A CN110964806A (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 检测sos1基因突变的方法、引物和试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911392159.1A CN110964806A (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 检测sos1基因突变的方法、引物和试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110964806A true CN110964806A (zh) | 2020-04-07 |
Family
ID=70037269
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911392159.1A Pending CN110964806A (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 检测sos1基因突变的方法、引物和试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110964806A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108048553A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-05-18 | 上海艾迪康医学检验所有限公司 | 检测slc25a13基因突变的方法、引物和试剂盒 |
| CN110358820A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-10-22 | 南昌艾迪康医学检验实验室有限公司 | 检测ldlr基因突变的方法、引物和试剂盒 |
-
2019
- 2019-12-30 CN CN201911392159.1A patent/CN110964806A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108048553A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-05-18 | 上海艾迪康医学检验所有限公司 | 检测slc25a13基因突变的方法、引物和试剂盒 |
| CN110358820A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-10-22 | 南昌艾迪康医学检验实验室有限公司 | 检测ldlr基因突变的方法、引物和试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| AMY E ROBERTS ET AL: "Germline gain-of-function mutations in SOS1 cause Noonan syndrome" * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110951862A (zh) | 检测cyp21a2基因突变的方法、引物和试剂盒 | |
| CN109576367B (zh) | 检测bcor基因突变的引物、试剂盒和方法 | |
| CN106987642A (zh) | 检测mpl基因全外显子的试剂盒和方法 | |
| CN110804658A (zh) | 检测ptpn11基因突变的方法、引物和试剂盒 | |
| CN111004849B (zh) | 检测cdh1基因的多个位点突变的引物、方法和试剂盒 | |
| CN110564826A (zh) | 检测先天性肾性尿崩症avpr2基因突变的引物、方法和试剂盒 | |
| CN111733232A (zh) | 检测hbb基因突变的引物、方法和试剂盒 | |
| CN110964806A (zh) | 检测sos1基因突变的方法、引物和试剂盒 | |
| CN114032303A (zh) | 检测基因abcb11新突变的寡核苷酸和方法 | |
| CN109628563A (zh) | 检测piga基因启动子区域4972a>g突变位点的引物、试剂盒和方法 | |
| CN106868184B (zh) | 检测pklr基因突变的方法、试剂盒、寡核苷酸及其应用 | |
| TW202214874A (zh) | 用於人類個體中基因分型sting變體之快速方法 | |
| CN110564827A (zh) | 检测dnmt3a基因突变的引物、试剂盒和方法 | |
| CN112626203A (zh) | 检测ATP8B1基因的c.55C>G、c.238C>T位点突变的引物和方法 | |
| CN110904216A (zh) | 检测CHD7基因c.1670-98和c.2375+49位点突变的引物和方法 | |
| TWI535851B (zh) | Autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) integrated gene detection method and its detection kit, primer group | |
| CN114381513B (zh) | 一种与x连锁淋巴增生症相关的生物标志物及其应用 | |
| CN111979309B (zh) | 用于三体综合征检测的组合套装 | |
| CN112501279A (zh) | 检测piezo1基因突变的引物、试剂盒和方法 | |
| CN116287200A (zh) | 一种影响21-羟化酶活性的dna分子、寡核苷酸和试剂盒 | |
| CN116083558A (zh) | 检测cecr1基因的多位点碱基突变的引物及其应用 | |
| CN117867097A (zh) | 检测THRβ基因突变情况的引物及其试剂盒 | |
| CN110846387A (zh) | 检测新生儿糖尿病相关基因ABCC8 c.1686C>CT位点突变的引物和方法 | |
| CN110564828A (zh) | 检测npm1基因突变的引物、试剂盒和方法 | |
| CN111057758A (zh) | 检测psen1基因突变的引物、方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200407 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |