CN110684707B - 一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，由以下组分制成：马铃薯、番石榴汁、葡萄糖、硫酸铵、硫酸镁、海藻酸钾、维生素、琼脂、5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑α‑D‑半乳糖苷、玉米须浸出液、链霉素，其中培养基的pH为6.5‑6.8。本发明提供的一种分离大花杓兰菌根真菌的培养基，通过大量的试验研究，对培养基配方的精心配制，旨在进一步提高对大花杓兰菌根真菌分离纯化的有效性；配方中还特别添加了5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑α‑D‑半乳糖苷和玉米须浸出液两种核心成分，能够具有促进大花杓兰菌根真菌菌丝生长的作用。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基。
背景技术
大花杓兰植株高25-50cm，具粗短的根状茎。茎直立，稍被短柔毛或变无毛，基部具数枚鞘，鞘上方具3-4枚叶。叶片椭圆形或椭圆状卵形，长10-15cm，宽6-8cm，先端渐尖或近急尖，两面脉上略被短柔毛或变无毛，边缘有细缘毛。花序顶生，具1花，极罕2花；花序柄被短柔毛或变无毛；花苞片叶状，通常椭圆形，较少椭圆状披针形，长7-9cm，宽4-6cm，先端短渐尖，两面脉上通常被微柔毛；花梗和子房长3-3.5cm，无毛；花大，紫色、红色或粉红色，通常有暗色脉纹，极罕白色。
大花杓兰具有极好的观赏性和药用性，然而，自然条件下，大花杓兰的繁殖率极低，而组培的大花杓兰由于缺少与相应的菌根真菌共生，不仅移栽成活率低，生长发育缓慢，而且开花晚，甚至不开花，因此大花杓兰菌根真菌的筛选具有极其重要的意义。
发明内容
本发明是通过以下技术方案实现的。
一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，按重量份计由以下组分制成：马铃薯45-55、番石榴汁200-250、葡萄糖18-22、硫酸铵15-19、硫酸镁0.2-0.4、海藻酸钾0.15-0.19、维生素0.15-0.19、琼脂20-25、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷0.01-0.02、玉米须浸出液35-40，其中还包括浓度为100μg/g的链霉素，培养基的pH为6.5-6.8。
所述玉米须浸出液制备方法包括：
将玉米须采用氢氧化钠溶液在38℃下浸泡处理15min，然后进行过滤，洗涤至中性，再向玉米须中添加其质量10倍的清水，加热至沸腾，保温30min，然后再调节温度至30℃，静置24h，超声波处理10min然后进行过滤，再将进行蒸汽灭菌15min，即得，所述超声波频率为40kHz，功率为500W，所述蒸汽灭菌采用121℃高压蒸汽进行灭菌。
作为进一步的技术方案，所述番石榴汁制备方法为：
将番石榴进行去皮处理，然后添加到破壁机中，再添加番石榴5倍的清水，进行破壁处理20min，然后进行过滤，去除大颗粒滤渣，得滤液，对滤液进行灭菌处理，即得番石榴汁，所述灭菌采用132℃高压蒸汽灭菌处理，其中，蒸汽压力为205.8kPa。
作为进一步的技术方案，所述海藻酸钾钾与维生素混合重量份比为1:1。
作为进一步的技术方案，所述维生素为维生素B1。
大花杓兰菌根真菌菌株的筛选培养方法为：
将大花杓兰菌根真菌菌株接种到在盛有培养基的容器中培养3～7天，培养温度为25℃，即可。
由以上的技术方案可知，本发明的有益效果是：
本发明提供的一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，通过大量的试验研究，对培养基配方的精心配制，旨在进一步提高对大花杓兰菌根真菌筛选纯化的广谱性；配方中还特别添加了5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷和玉米须浸出液两种核心成分，能够具有促进大花杓兰菌根真菌菌丝生长的作用，同时，能够提高大花杓兰菌根真菌的耐受性和新陈代谢活力作用，二者的协同作用，能够有效的提高大花杓兰菌根真菌的代谢活性，在一定程度上防止和缓解弱势大花杓兰菌根真菌菌株的死亡率，进而提高大花杓兰菌根真菌的纯化率。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，按重量份计包括以下组分制成：马铃薯45、番石榴汁200、葡萄糖18、硫酸铵15、硫酸镁0.2、海藻酸钾0.15、维生素0.15、琼脂20、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷0.01、玉米须浸出液35，其中还包括浓度为100μg/g的链霉素，培养基的pH为6.5；
其中，番石榴汁制备方法为：
将番石榴进行去皮处理，然后添加到破壁机中，再添加番石榴5倍的清水，进行破壁处理20min，然后进行过滤，去除大颗粒滤渣，得滤液，对滤液进行灭菌处理，即得番石榴汁，所述灭菌采用132℃高压蒸汽灭菌处理。
其中，海藻酸钾与维生素混合重量份比为1:1。
其中，维生素为维生素B1。
其中，玉米须浸出液制备方法包括：
将玉米须采用氢氧化钠溶液在38℃下浸泡处理15min，然后进行过滤，洗涤至中性，再向玉米须中添加其质量10倍的清水，加热至沸腾，保温30min，然后再调节温度至30℃，静置24h，超声波处理10min然后进行过滤，再将置于于121℃高压蒸汽灭菌15min，即得，所述超声波频率为40kHz，功率为500W。
将大花杓兰菌根真菌菌株接种到在盛有培养基的容器中培养3天，培养温度为25℃，即可。
实施例2
一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，按重量份计包括以下组分制成：马铃薯50、番石榴汁250、葡萄糖22、硫酸铵19、硫酸镁0.4、海藻酸钾0.19、维生素0.19、琼脂25、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷0.02、玉米须浸出液40，其中还包括浓度为100μg/g的链霉素，培养基的pH为6.6；
其中，番石榴汁制备方法为：
将番石榴进行去皮处理，然后添加到破壁机中，再添加番石榴5倍的清水，进行破壁处理20min，然后进行过滤，去除大颗粒滤渣，得滤液，对滤液进行灭菌处理，即得番石榴汁，所述灭菌采用132℃高压蒸汽灭菌处理。
其中，海藻酸钾与维生素混合重量份比为1:1。
其中，维生素为维生素B1。
其中，玉米须浸出液制备方法包括：
将玉米须采用氢氧化钠溶液在38℃下浸泡处理15min，然后进行过滤，洗涤至中性，再向玉米须中添加其质量10倍的清水，加热至沸腾，保温30min，然后再调节温度至30℃，静置24h，超声波处理10min然后进行过滤，再将置于于121℃高压蒸汽灭菌15min，即得，所述超声波频率为40kHz，功率为500W。
将大花杓兰菌根真菌菌株接种到在盛有培养基的容器中培养5天，培养温度为25℃，即可。
实施例3
一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，按重量份计包括以下组分制成：马铃薯55、番石榴汁220、葡萄糖19、硫酸铵18、硫酸镁0.3、海藻酸钾0.17、维生素0.17、琼脂22、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷0.015、玉米须浸出液38，其中还包括浓度为100μg/g的链霉素，培养基的pH为6.8；
其中，番石榴汁制备方法为：
将番石榴进行去皮处理，然后添加到破壁机中，再添加番石榴5倍的清水，进行破壁处理20min，然后进行过滤，去除大颗粒滤渣，得滤液，对滤液进行灭菌处理，即得番石榴汁，所述灭菌采用121℃高压蒸汽灭菌处理。
其中，海藻酸钾与维生素混合重量份比为1:1。
其中，维生素为维生素B1。
所述玉米须浸出液制备方法包括：
将玉米须采用氢氧化钠溶液在38℃下浸泡处理15min，然后进行过滤，洗涤至中性，再向玉米须中添加其质量10倍的清水，加热至沸腾，保温30min，然后再调节温度至30℃，静置24h，超声波处理10min然后进行过滤，再将置于于121℃高压蒸汽灭菌15min，即得，所述超声波频率为40kHz，功率为500W。
将大花杓兰菌根真菌菌株接种到在盛有培养基的容器中培养7天，培养温度为25℃，即可。
对比例1：与实施例1区别在于不添加玉米须浸出液。
对比例2：与实施例1区别仅在于不添加5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷。
分别使用实施例和对比例进行实验，培养基用量相同，分别接种等量的大花杓兰菌根真菌，培养7天，对比：
表1
由表1可知，本发明培养基对大花杓兰菌根真菌具有较高的纯化率。
当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的普通技术人员，在本发明的实质范围内，作出的变化、改变、添加或替换，都应属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，其特征在于，按重量份计由以下组分制成：马铃薯45-55、番石榴汁200-250、葡萄糖18-22、硫酸铵15-19、硫酸镁0.2-0.4、海藻酸钾0.15-0.19、维生素0.15-0.19、琼脂20-25、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷0.01-0.02、玉米须浸出液35-40；其中还包括浓度为100μg/g的链霉素，培养基的pH为6.5-6.8，
所述玉米须浸出液制备方法包括：
将玉米须采用氢氧化钠溶液在38℃下浸泡处理15min，然后进行过滤，洗涤至中性，再向玉米须中添加其质量10倍的清水，加热至沸腾，保温30min，然后再调节温度至30℃，静置24h，超声波处理10min然后进行过滤，再进行蒸汽灭菌15min，即得；
所述番石榴汁制备方法为：
将番石榴进行去皮处理，然后添加到破壁机中，再添加番石榴5倍的清水，进行破壁处理20min，然后进行过滤，去除大颗粒滤渣，得滤液，对滤液进行灭菌处理，即得番石榴汁。
2.根据权利要求1所述的一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，其特征在于，所述超声波频率为40kHz，功率为500W。
3.如权利要求1所述的一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，其特征在于，所述蒸汽灭菌采用121℃高压蒸汽进行灭菌。
4.根据权利要求1所述的一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，其特征在于，所述灭菌采用132℃高压蒸汽灭菌处理。
5.根据权利要求1所述的一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，其特征在于，所述海藻酸钾与维生素混合重量份比为1:1。
6.根据权利要求1或5所述的一种筛选大花杓兰内生真菌的培养基，其特征在于，所述维生素为维生素B1。
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