CN113068610B - 一种诱导离体山药微型块茎的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种诱导离体山药微型块茎的方法，取山药叶子直接接种在微型块茎诱导培养基中进行块茎诱导。采用本发明方法可将叶子一步诱导成微型块茎，操作简便，增加扩繁系数，并可将山药组培苗废弃的叶子回收利用。

Description

一种诱导离体山药微型块茎的方法
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种诱导离体山药微型块茎的 方法。
背景技术
山药属薯蓣科薯蓣属多年生植物，瑞昌山药为江西九江市的传统特色蔬 菜产品，其块茎富含淀粉、糖、蛋白质、维生素、氨基酸等多种营养成分， 具有很强的健脾、益肾、养肺之功效，是一种兼具菜、药两用的上等佳品， 素有“江南人参”之誉。目前，山药多采用块茎切断的方式进行繁殖培养，但长 期使用块茎切断的繁殖方式容易造成品质退化，产量降低，甚至品种变异， 导致部分本地优良品种山药被放弃。因此，合理利用山药资源，因地制宜， 采用植物组织培养技术重新建立优良山药的再生体系，保存品种优良品质， 扩大繁殖系数，不仅可以保护并保存地方山药品种资源，对推动江西瑞昌山 药产业的发展具有十分重要的现实意义。
目前山药组织培养技术主要采用茎段成苗和叶片诱导愈伤成苗，之后再 利用无菌苗诱导微型块茎。山药茎段成苗技术，主要采用带芽茎段作为外植 体，切割下来的叶子正常不用；山药叶片诱导愈伤成苗，一些品种愈伤诱导 时间长且易褐化，不容易分化。据相关文献报道，目前离体的微型块茎主要 通过无菌苗诱导。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在发明一种山药叶子直接诱导离体微型块茎的方法， 缩短组培周期，增加山药组培快繁途径，提高材料利用率。
本发明采取的具体技术方案是：
一种诱导离体山药微型块茎的方法，取山药叶子直接接种在微型块茎诱 导培养基中进行块茎诱导。
进一步地，所述微型块茎诱导培养基由基本培养基加一种或多种植物生 长调节剂而成。
更进一步地，所述植物生长调节剂包括生长素或细胞分裂素中任何一种。
优选地，所述多种植物生长调节剂组合包括但不限于：2,4-D和6-BA的 组合。
更优选地，植物生长调节剂组合为2,4-D和6-BA的组合时，2,4-D的浓 度为2mg/L，6-BA的浓度为0.3mg/L。
更优选地，所述基本培养基含有浓度为0.1％香豆素。
进一步地，所述基本培养基配方为：1/2-3/2MS+蔗糖3％-6％+琼脂粉0-7 g/L+香豆素0.1％。
优选地，其培养条件为温度25～28℃，50～60μmol·m-2·s-1，光周期10h/d。
优选地，所述山药叶子采用山药组培苗的叶子。
本发明的有益效果是：采用本发明方法可将叶子一步诱导成微型块茎， 操作简便，增加扩繁系数，并可将山药组培苗废弃的叶子回收利用。
附图说明
图1显示为A1实验处理山药叶子生长情况；
图2显示为A2实验处理山药叶子生长情况；
图3显示为A3实验处理山药叶子生长情况；
图4显示为A4实验处理山药叶子生长情况；
图5显示为A5实验处理山药叶子生长情况；
图6显示为A6实验处理山药叶子生长情况；
图7显示为A7-12实验处理山药叶子生长情况；
图8显示为A13-18实验处理山药叶子生长情况。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下 结合具体实施例并配合附图详予说明。
实施例1
将山药组培接种中废弃的叶子接种到A1-A6培养基中进行块茎诱导75d， A1-A6培养基具体配方为：
基础培养基：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％
A1：基础培养基+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.3mg/L
A2：基础培养基+6-BA 0.8mg/L+NAA 0.4mg/L
A3：基础培养基+KT 2mg/L+NAA0.1 mg/L
A4：基础培养基+6-BA 2mg/L NAA 0.3mg/L
A5：基础培养基+6-BA 1mg/L NAA 0.4mg/L
A6：基础培养基+6-BA 0.8mg/L NAA 0.1mg/L
实验结果如图1-6及下表所示：
Figure BDA0002990452310000031
本实验可看出，6-BA和NAA的组合比较有利于山药丛生芽和成苗诱导， 2,4-D和6-BA的组合有利于叶子诱导球茎。
实施例2
将山药组培接种中废弃的叶子接种到A7-A12培养基中进行块茎诱导75 d，A7-A12培养基具体配方为：
A7：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖1％
A8：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖2％
A9：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖3％
A10：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖4％
A11：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖5％
A12：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖6％
实验结果如图7及下表所示：
Figure BDA0002990452310000041
实施例3
将山药组培接种中废弃的叶子接种到A13-A18培养基中进行块茎诱导75 d，A13-A18培养基具体配方为：
A13：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉0g/L
A14：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉1.5g/L
A15：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉3g/L
A16：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉4g/L
A17：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉5g/L
A18：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉6g/L
Figure BDA0002990452310000042
Figure BDA0002990452310000051
综合实施例1-3实验结果对比看出，添加适量的香豆素可促进山药叶子直 接诱导成球茎，3％的蔗糖也有利于球茎诱导，随着蔗糖浓度增加，球茎诱导 率下降，但是球茎个体可以变大；6-BA和2,4-D的组合可提高球茎诱导率。
尽管已经对上述各实施例进行了描述，但本领域内的技术人员一旦得知 了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，所以以上所 述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本 发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用 在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。

Claims (3)

1.一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，取山药叶子直接接种在微型块茎诱导培养基中进行块茎诱导；所述微型块茎诱导培养基配方为： 3/2 MS+蔗糖3%+琼脂粉7g/L+ 2,4-D 2 mg/L +6-BA 0.3 mg/L +香豆素0.1%。
2.根据权利要求1所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，其培养条件为温度25~28℃，50~60 μmol•m-2•s-1，光周期10 h/d。
3.根据权利要求1所述种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述山药叶子采用山药组培苗的叶子。
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