CN113068610A - 一种诱导离体山药微型块茎的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种诱导离体山药微型块茎的方法，取山药叶子直接接种在微型块茎诱导培养基中进行块茎诱导。采用本发明方法可将叶子一步诱导成微型块茎，操作简便，增加扩繁系数，并可将山药组培苗废弃的叶子回收利用。

Description

一种诱导离体山药微型块茎的方法
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种诱导离体山药微型块茎的 方法。
背景技术
山药属薯蓣科薯蓣属多年生植物，瑞昌山药为江西九江市的传统特色蔬 菜产品，其块茎富含淀粉、糖、蛋白质、维生素、氨基酸等多种营养成分， 具有很强的健脾、益肾、养肺之功效，是一种兼具菜、药两用的上等佳品， 素有“江南人参”之誉。目前，山药多采用块茎切断的方式进行繁殖培养，但长 期使用块茎切断的繁殖方式容易造成品质退化，产量降低，甚至品种变异， 导致部分本地优良品种山药被放弃。因此，合理利用山药资源，因地制宜， 采用植物组织培养技术重新建立优良山药的再生体系，保存品种优良品质， 扩大繁殖系数，不仅可以保护并保存地方山药品种资源，对推动江西瑞昌山 药产业的发展具有十分重要的现实意义。
目前山药组织培养技术主要采用茎段成苗和叶片诱导愈伤成苗，之后再 利用无菌苗诱导微型块茎。山药茎段成苗技术，主要采用带芽茎段作为外植 体，切割下来的叶子正常不用；山药叶片诱导愈伤成苗，一些品种愈伤诱导 时间长且易褐化，不容易分化。据相关文献报道，目前离体的微型块茎主要 通过无菌苗诱导。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在发明一种山药叶子直接诱导离体微型块茎的方法， 缩短组培周期，增加山药组培快繁途径，提高材料利用率。
本发明采取的具体技术方案是：
一种诱导离体山药微型块茎的方法，取山药叶子直接接种在微型块茎诱 导培养基中进行块茎诱导。
进一步地，所述微型块茎诱导培养基由基本培养基加一种或多种植物生 长调节剂而成。
更进一步地，所述植物生长调节剂包括生长素或细胞分裂素中任何一种。
优选地，所述多种植物生长调节剂组合包括但不限于：2,4-D和6-BA的 组合。
更优选地，植物生长调节剂组合为2,4-D和6-BA的组合时，2,4-D的浓 度为2mg/L，6-BA的浓度为0.3mg/L。
更优选地，所述基本培养基含有浓度为0.1％香豆素。
进一步地，所述基本培养基配方为：1/2-3/2MS+蔗糖3％-6％+琼脂粉0-7 g/L+香豆素0.1％。
优选地，其培养条件为温度25～28℃，50～60μmol·m-2·s-1，光周期10h/d。
优选地，所述山药叶子采用山药组培苗的叶子。
本发明的有益效果是：采用本发明方法可将叶子一步诱导成微型块茎， 操作简便，增加扩繁系数，并可将山药组培苗废弃的叶子回收利用。
附图说明
图1显示为A1实验处理山药叶子生长情况；
图2显示为A2实验处理山药叶子生长情况；
图3显示为A3实验处理山药叶子生长情况；
图4显示为A4实验处理山药叶子生长情况；
图5显示为A5实验处理山药叶子生长情况；
图6显示为A6实验处理山药叶子生长情况；
图7显示为A7-12实验处理山药叶子生长情况；
图8显示为A13-18实验处理山药叶子生长情况。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下 结合具体实施例并配合附图详予说明。
实施例1
将山药组培接种中废弃的叶子接种到A1-A6培养基中进行块茎诱导75d， A1-A6培养基具体配方为：
基础培养基：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％
A1：基础培养基+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.3mg/L
A2：基础培养基+6-BA 0.8mg/L+NAA 0.4mg/L
A3：基础培养基+KT 2mg/L+NAA0.1 mg/L
A4：基础培养基+6-BA 2mg/L NAA 0.3mg/L
A5：基础培养基+6-BA 1mg/L NAA 0.4mg/L
A6：基础培养基+6-BA 0.8mg/L NAA 0.1mg/L
实验结果如图1-6及下表所示：
Figure BDA0002990452310000031
本实验可看出，6-BA和NAA的组合比较有利于山药丛生芽和成苗诱导， 2,4-D和6-BA的组合有利于叶子诱导球茎。
实施例2
将山药组培接种中废弃的叶子接种到A7-A12培养基中进行块茎诱导75 d，A7-A12培养基具体配方为：
A7：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖1％
A8：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖2％
A9：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖3％
A10：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖4％
A11：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖5％
A12：3/2MS+琼脂粉7g/L+香豆素0.1％+蔗糖6％
实验结果如图7及下表所示：
Figure BDA0002990452310000041
实施例3
将山药组培接种中废弃的叶子接种到A13-A18培养基中进行块茎诱导75 d，A13-A18培养基具体配方为：
A13：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉0g/L
A14：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉1.5g/L
A15：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉3g/L
A16：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉4g/L
A17：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉5g/L
A18：3/2MS+蔗糖3％+琼脂粉6g/L
Figure BDA0002990452310000042
Figure BDA0002990452310000051
综合实施例1-3实验结果对比看出，添加适量的香豆素可促进山药叶子直 接诱导成球茎，3％的蔗糖也有利于球茎诱导，随着蔗糖浓度增加，球茎诱导 率下降，但是球茎个体可以变大；6-BA和2,4-D的组合可提高球茎诱导率。
尽管已经对上述各实施例进行了描述，但本领域内的技术人员一旦得知 了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，所以以上所 述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本 发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用 在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。

Claims (9)

1.一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，取山药叶子直接接种在微型块茎诱导培养基中进行块茎诱导。
2.根据权利要求1所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述微型块茎诱导培养基由基本培养基加一种或多种植物生长调节剂而成。
3.根据权利要求2所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述植物生长调节剂包括生长素或细胞分裂素中任何一种。
4.根据权利要求2所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述多种植物生长调节剂组合包括但不限于：2,4-D和6-BA的组合。
5.根据权利要求4所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，植物生长调节剂组合为2,4-D和6-BA时，2,4-D的浓度为2mg/L，6-BA的浓度为0.3mg/L。
6.根据权利要求2-5任一项所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述基本培养基含有浓度为0.1％香豆素。
7.根据权利要求2任一项所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述基本培养基配方为：1/2-3/2MS+蔗糖3％-6％+琼脂粉0-7g/L+香豆素0.1％。
8.根据权利要求1-5任一项所述一种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，其培养条件为温度25～28℃，50～60μmol·m-2·s-1，光周期10h/d。
9.根据权利要求1-5任一项所述种诱导离体山药微型块茎的方法，其特征在于，所述山药叶子采用山药组培苗的叶子。
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