JP3302853B2 - 薬用ニンジンカルスの培養方法 - Google Patents
薬用ニンジンカルスの培養方法Info
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は薬用ニンジンを起源植物
とするカルスの培養方法に関し、薬用ニンジンの薬効主
成分であるサポニンを高収率で生産する方法に関するも
のである。
とするカルスの培養方法に関し、薬用ニンジンの薬効主
成分であるサポニンを高収率で生産する方法に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】薬用ニンジンは、広東ニンジン、竹節ニ
ンジン、三七ニンジンなど様々な種類が知られている
が、一般に汎用されているものは、“朝鮮ニンジン”と
言われる別称オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅ
ｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）である。薬用ニンジンは、
中枢抑制、抗疲労作用の他、強壮、強精、造血および沈
静作用などの薬効を有する優れた漢薬である。
ンジン、三七ニンジンなど様々な種類が知られている
が、一般に汎用されているものは、“朝鮮ニンジン”と
言われる別称オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅ
ｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）である。薬用ニンジンは、
中枢抑制、抗疲労作用の他、強壮、強精、造血および沈
静作用などの薬効を有する優れた漢薬である。
【０００３】その薬効成分の主体は、ジンセノサイド
（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）と呼ばれるトリテルペノイ
ドのサポニンとサポゲニンである。薬用ニンジンから抽
出されるサポニンは多数の成分群Ｒｏ，Ｒａ，Ｒｂ，Ｒ
ｃ，Ｒｄ，Ｒｅ，Ｒｆ，ＲｇおよびＲｈを含むが、薬効
の中心をなすものはＲｂとＲｇである。中枢神経系に対
しＲｂ群は抑制的に、Ｒｇ群は興奮的に作用する。
（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）と呼ばれるトリテルペノイ
ドのサポニンとサポゲニンである。薬用ニンジンから抽
出されるサポニンは多数の成分群Ｒｏ，Ｒａ，Ｒｂ，Ｒ
ｃ，Ｒｄ，Ｒｅ，Ｒｆ，ＲｇおよびＲｈを含むが、薬効
の中心をなすものはＲｂとＲｇである。中枢神経系に対
しＲｂ群は抑制的に、Ｒｇ群は興奮的に作用する。
【０００４】現在、朝鮮ニンジンは野性のものはほとん
ど存在せず、その供給は主として栽培によりなされてい
る。朝鮮ニンジンは収穫には数年かかり、病虫害にも弱
く、しかも連作を極度にきらい一度栽培すると２０年以
上も連作不能であり、生産性が著しく低い。また、その
栽培には暑い夏場でも涼しい高地の排水のよい土地を選
ぶ。さらにまた、栽培品には産地、採取時期、栽培年数
などによってサポニン含量、成分比などが一定しないと
いう問題もある。
ど存在せず、その供給は主として栽培によりなされてい
る。朝鮮ニンジンは収穫には数年かかり、病虫害にも弱
く、しかも連作を極度にきらい一度栽培すると２０年以
上も連作不能であり、生産性が著しく低い。また、その
栽培には暑い夏場でも涼しい高地の排水のよい土地を選
ぶ。さらにまた、栽培品には産地、採取時期、栽培年数
などによってサポニン含量、成分比などが一定しないと
いう問題もある。
【０００５】そこで、薬用ニンジンを組織培養法により
天候その他の自然条件に影響を受けることなく供給する
ための研究が早くから行われており、薬用ニンジンの生
組織を培養して得られるカルスより抽出されたサポニン
は、栽培によって得られた天然薬用ニンジンと抽出成分
および薬効が同一であることが明らかにされている（特
公昭４８−３１９１７号、特公昭６３−２１４７０号、
特公昭６３−２１４７１号など）。
天候その他の自然条件に影響を受けることなく供給する
ための研究が早くから行われており、薬用ニンジンの生
組織を培養して得られるカルスより抽出されたサポニン
は、栽培によって得られた天然薬用ニンジンと抽出成分
および薬効が同一であることが明らかにされている（特
公昭４８−３１９１７号、特公昭６３−２１４７０号、
特公昭６３−２１４７１号など）。
【０００６】薬用ニンジン組織培養物の収量を増加させ
るために、植物組織培養用培地にカゼイン分解物などの
栄養源を単に量的に添加する方法が行われてるが、これ
は培地の組成を複雑化させるだけでなく、植物組織の培
養においては生長障害を引き起こしかねない。しかも、
ニンジンカルスの収量が増加しても細胞当たりのサポニ
ン含有量が低下する可能性がある。
るために、植物組織培養用培地にカゼイン分解物などの
栄養源を単に量的に添加する方法が行われてるが、これ
は培地の組成を複雑化させるだけでなく、植物組織の培
養においては生長障害を引き起こしかねない。しかも、
ニンジンカルスの収量が増加しても細胞当たりのサポニ
ン含有量が低下する可能性がある。
【０００７】また、細胞当たりのサポニンの収量を増加
させるために、細胞培養用培地にメバロン酸などのサポ
ニン生合成の中間体を添加する方法も行われているが、
生合成中間体の種類や濃度および添加する時期によって
その効果が異なるので、培地組成だけでなく培養方法ま
で複雑化してしまう。
させるために、細胞培養用培地にメバロン酸などのサポ
ニン生合成の中間体を添加する方法も行われているが、
生合成中間体の種類や濃度および添加する時期によって
その効果が異なるので、培地組成だけでなく培養方法ま
で複雑化してしまう。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】上記のような状況下に
あって、本発明は、簡単かつ効果的にサポニンの生産が
可能な薬用ニンジンカルスの培養方法の提供を目的とし
ている。本発明は、培地の組成を複雑化させることな
く、サポニンの生産量を増加させる薬用ニンジンカルス
の培養方法の提供を目的としている。
あって、本発明は、簡単かつ効果的にサポニンの生産が
可能な薬用ニンジンカルスの培養方法の提供を目的とし
ている。本発明は、培地の組成を複雑化させることな
く、サポニンの生産量を増加させる薬用ニンジンカルス
の培養方法の提供を目的としている。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、一般に漢方薬
の原料などに利用されている薬用ニンジン（Ｐａｎａｘ
ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）の一部を切り
とり適当な条件下で培養し分裂増殖させてできる無定形
の細胞塊であるカルスを培養するに際し、特定の培養条
件下で行い、薬用ニンジンの薬効主成分であるサポニン
を高収率で生産する方法である。
の原料などに利用されている薬用ニンジン（Ｐａｎａｘ
ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）の一部を切り
とり適当な条件下で培養し分裂増殖させてできる無定形
の細胞塊であるカルスを培養するに際し、特定の培養条
件下で行い、薬用ニンジンの薬効主成分であるサポニン
を高収率で生産する方法である。
【００１０】薬用ニンジンの培養細胞を用いたサポニン
の製造は、培地としてカルスを増殖しかつ二次代謝産物
であるサポニンの生産を促進するものが望ましい。本発
明者は、まず、カルスの増殖および二次代謝産物である
サポニンの生産に適した植物生長調整物質の種類とその
組合せの検索を行ない、カルス増殖にはナフタレン酢酸
（以下、「ＮＡＡ」と略称することもある。）を含む培
地がＮＡＡ単独添加した時に効果が高いこと、サポニン
生成にはジベレリン（以下、「ＧＡ」と略称することも
ある。）を含む培地がＧＡ単独添加した時に効果が高い
ことを見いだし、その発見を基に鋭意研究して本発明を
完成させた。
の製造は、培地としてカルスを増殖しかつ二次代謝産物
であるサポニンの生産を促進するものが望ましい。本発
明者は、まず、カルスの増殖および二次代謝産物である
サポニンの生産に適した植物生長調整物質の種類とその
組合せの検索を行ない、カルス増殖にはナフタレン酢酸
（以下、「ＮＡＡ」と略称することもある。）を含む培
地がＮＡＡ単独添加した時に効果が高いこと、サポニン
生成にはジベレリン（以下、「ＧＡ」と略称することも
ある。）を含む培地がＧＡ単独添加した時に効果が高い
ことを見いだし、その発見を基に鋭意研究して本発明を
完成させた。
【００１１】本発明は薬用ニンジンを起源植物とするカ
ルスを異なる条件の培地に継代することを特徴とする薬
用ニンジンカルスの培養方法である。
ルスを異なる条件の培地に継代することを特徴とする薬
用ニンジンカルスの培養方法である。
【００１２】上記異なる条件の培地とは、好ましくはカ
ルスの増殖に適した培地およびサポニンの生産を促進す
る培地の組合せからなる。したがって、本発明はカルス
の増殖に適した培地およびサポニンの生産を促進する培
地の組合せを使用する薬用ニンジンカルスの継代培養法
である。
ルスの増殖に適した培地およびサポニンの生産を促進す
る培地の組合せからなる。したがって、本発明はカルス
の増殖に適した培地およびサポニンの生産を促進する培
地の組合せを使用する薬用ニンジンカルスの継代培養法
である。
【００１３】これらの培地は従来から使用されている植
物組織培養用基本培地である、例えばＭＳ液体培地（Ｍ
ｕｒａｓｉｇｅ ａｎｄ Ｓｋｏｏｇ氏培地）を基本培
地とし、その基本培地に、カルスの増殖に適した培地
は、植物生長調節物質としてナフタレン酢酸を添加した
培地であり、サポニンの生産を促進する培地は、植物生
長調節物質としてジベレリンを添加した培地である。
物組織培養用基本培地である、例えばＭＳ液体培地（Ｍ
ｕｒａｓｉｇｅ ａｎｄ Ｓｋｏｏｇ氏培地）を基本培
地とし、その基本培地に、カルスの増殖に適した培地
は、植物生長調節物質としてナフタレン酢酸を添加した
培地であり、サポニンの生産を促進する培地は、植物生
長調節物質としてジベレリンを添加した培地である。
【００１４】本発明においては、異なる条件の２種類の
培地は、一方の培地を一次培地として、他方の培地を二
次培地として用いる。すなわち、一次培地としてカルス
の増殖に適した培地を用いる場合、二次培地としてサポ
ニンの生産を促進する培地を用いる。一次培地としてサ
ポニンの生産を促進する培地を用いる場合、二次培地と
してカルスの増殖に適した培地を用いる。
培地は、一方の培地を一次培地として、他方の培地を二
次培地として用いる。すなわち、一次培地としてカルス
の増殖に適した培地を用いる場合、二次培地としてサポ
ニンの生産を促進する培地を用いる。一次培地としてサ
ポニンの生産を促進する培地を用いる場合、二次培地と
してカルスの増殖に適した培地を用いる。
【００１５】上記のとおり本発明は異なる条件の培地を
組合わせて継代培養する二段階培養法を行うものである
が、各段階で何代培養するかはサポニンの生産が良好で
ある限り特に制限がない。一次培地で１代、二次培地で
２代の合計３代培養する態様が好ましい態様として例示
される。
組合わせて継代培養する二段階培養法を行うものである
が、各段階で何代培養するかはサポニンの生産が良好で
ある限り特に制限がない。一次培地で１代、二次培地で
２代の合計３代培養する態様が好ましい態様として例示
される。
【００１６】以下、一次培地としてＮＡＡ培地を、二次
培地としてＧＡ培地を用いる態様について説明する。薬
用ニンジンを起源植物とするカルスを、ＮＡＡ培地で培
養したあと、ＧＡ培地に継代する。サポニンの生産量を
より上げるために効果的な態様として、ＮＡＡ培地で培
養し、ＧＡ培地に継代した後、さらにＧＡ培地に継代す
る。ＮＡＡ培地またはＧＡ培地で何代培養するかはサポ
ニンの生産が良好である限り特に制限がないが、サポニ
ンの生産性および培養期間の合理性からみて、ＮＡＡ培
地で１代、ＧＡ培地で２代の合計３代培養する態様が好
ましい。
培地としてＧＡ培地を用いる態様について説明する。薬
用ニンジンを起源植物とするカルスを、ＮＡＡ培地で培
養したあと、ＧＡ培地に継代する。サポニンの生産量を
より上げるために効果的な態様として、ＮＡＡ培地で培
養し、ＧＡ培地に継代した後、さらにＧＡ培地に継代す
る。ＮＡＡ培地またはＧＡ培地で何代培養するかはサポ
ニンの生産が良好である限り特に制限がないが、サポニ
ンの生産性および培養期間の合理性からみて、ＮＡＡ培
地で１代、ＧＡ培地で２代の合計３代培養する態様が好
ましい。
【００１７】一次培地から二次培地への移植に際し、一
次培地中のＮＡＡが二次培地に悪影響を与えるどころか
好影響を与えている。各培地でカルスを培養した場合、
ＮＡＡ培地の方がＧＡ培地よりも増殖率がよいのだか
ら、カルスをＮＡＡ培地からＧＡ培地に継代すると増殖
率は低下するはずである。しかし、実際には、ＮＡＡ培
地からＧＡ培地に継代しても増殖率が低下することはな
い。その理由として、ＧＡにはその生理作用（細胞の伸
長、分裂の促進など）はオーキシン（例えばＮＡＡ，
２，４−Ｄ，ＩＢＡなど）の存在下で特に効果的である
という性質が挙げられる。それゆえ、サポニンの生産増
に相乗効果をもたらしていると思われる。
次培地中のＮＡＡが二次培地に悪影響を与えるどころか
好影響を与えている。各培地でカルスを培養した場合、
ＮＡＡ培地の方がＧＡ培地よりも増殖率がよいのだか
ら、カルスをＮＡＡ培地からＧＡ培地に継代すると増殖
率は低下するはずである。しかし、実際には、ＮＡＡ培
地からＧＡ培地に継代しても増殖率が低下することはな
い。その理由として、ＧＡにはその生理作用（細胞の伸
長、分裂の促進など）はオーキシン（例えばＮＡＡ，
２，４−Ｄ，ＩＢＡなど）の存在下で特に効果的である
という性質が挙げられる。それゆえ、サポニンの生産増
に相乗効果をもたらしていると思われる。
【００１８】
【作用】上記のように二段階培養を行うことにより、サ
ポニンの生産量を高めることができる。すなわち、薬用
ニンジンカルスを従来のように同じ条件の培地で培養す
るよりも条件の異なる培地に継代して培養する方法、す
なわち二段階培養を行うことにより、天然薬用ニンジン
と同様の薬効成分であるサポニンを高収率で生産するこ
とができる。また二段階培養法において二次培地でさら
にもう一代培養して合計３代培養するとサポニンの生産
量を著しく高めることができる。
ポニンの生産量を高めることができる。すなわち、薬用
ニンジンカルスを従来のように同じ条件の培地で培養す
るよりも条件の異なる培地に継代して培養する方法、す
なわち二段階培養を行うことにより、天然薬用ニンジン
と同様の薬効成分であるサポニンを高収率で生産するこ
とができる。また二段階培養法において二次培地でさら
にもう一代培養して合計３代培養するとサポニンの生産
量を著しく高めることができる。
【００１９】
【実施例】本願発明の詳細を実施例で説明する。本願発
明はこれら実施例によって何ら限定されるものではな
い。以下実施例に用いた薬用ニンジンカルスは、４年生
朝鮮ニンジンを水洗、表面殺菌後、無菌的に切断した組
織片を生長調整物質として２，４−ジクロロフェノキシ
酢酸（２，４−Ｄ） １ｐｐｍ、カイネチン（Ｋｉｎｅ
ｔｉｎ） ０．１ｐｐｍを添加した寒天ＭＳ培地に置床
し、暗所下２５℃でカルス誘導した。誘導されたカルス
はインドール酪酸（ＩＢＡ） １．０ｐｐｍ、カイネチ
ン ０．１ｐｐｍを添加した寒天ＭＳ培地で継代し、
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸を除去した。実験に供
するカルスは、継代培地の生長調整物質の影響をなくす
ため、予め一次培地と同一の培地で前培養したものを用
いた。
明はこれら実施例によって何ら限定されるものではな
い。以下実施例に用いた薬用ニンジンカルスは、４年生
朝鮮ニンジンを水洗、表面殺菌後、無菌的に切断した組
織片を生長調整物質として２，４−ジクロロフェノキシ
酢酸（２，４−Ｄ） １ｐｐｍ、カイネチン（Ｋｉｎｅ
ｔｉｎ） ０．１ｐｐｍを添加した寒天ＭＳ培地に置床
し、暗所下２５℃でカルス誘導した。誘導されたカルス
はインドール酪酸（ＩＢＡ） １．０ｐｐｍ、カイネチ
ン ０．１ｐｐｍを添加した寒天ＭＳ培地で継代し、
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸を除去した。実験に供
するカルスは、継代培地の生長調整物質の影響をなくす
ため、予め一次培地と同一の培地で前培養したものを用
いた。
【００２０】実施例１ ＭＳ液体培地を基本培地とし、植物生長調整物質として
ＮＡＡ２ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＧＡ２ｐｐｍ
添加したものを二次培地とした。上記培地は１００ｍｌ
のエルレンマイヤーフラスコに３０ｍｌ入れ、高圧滅菌
した。これに２ｇの薬用ニンジンカルスを移植し、８０
ｒ．ｐ．ｍの回転振盪機にて２５℃で３週間暗所培養を
行った。培養後、カルスは脱塩水で洗浄した後凍結乾燥
し、その重量を乾燥重量とした。
ＮＡＡ２ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＧＡ２ｐｐｍ
添加したものを二次培地とした。上記培地は１００ｍｌ
のエルレンマイヤーフラスコに３０ｍｌ入れ、高圧滅菌
した。これに２ｇの薬用ニンジンカルスを移植し、８０
ｒ．ｐ．ｍの回転振盪機にて２５℃で３週間暗所培養を
行った。培養後、カルスは脱塩水で洗浄した後凍結乾燥
し、その重量を乾燥重量とした。
【００２１】サポニンの抽出方法は以下のとおりであ
る。凍結乾燥したカルスは乳鉢で粉砕し、メタノール５
０ｍｌを加え、４０〜５０℃で３時間温浸した。これを
２回繰り返し、メタノール抽出物を得た。これを５０ｍ
ｌの脱塩水に溶解して分液ロートに入れ、エーテル５０
ｍｌで２回洗浄した。水層（下層）を水飽和ｎ−ブタノ
ール５０ｍｌで２回、さらにｎ−ブタノール飽和水で２
回抽出し、水飽和ｎ−ブタノール層（上層）を得た。こ
れを溶媒溜去、減圧乾燥することにより、粗サポニンを
得た。
る。凍結乾燥したカルスは乳鉢で粉砕し、メタノール５
０ｍｌを加え、４０〜５０℃で３時間温浸した。これを
２回繰り返し、メタノール抽出物を得た。これを５０ｍ
ｌの脱塩水に溶解して分液ロートに入れ、エーテル５０
ｍｌで２回洗浄した。水層（下層）を水飽和ｎ−ブタノ
ール５０ｍｌで２回、さらにｎ−ブタノール飽和水で２
回抽出し、水飽和ｎ−ブタノール層（上層）を得た。こ
れを溶媒溜去、減圧乾燥することにより、粗サポニンを
得た。
【００２２】この粗サポニンと天然のサポニンおよびＧ
ｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ−Ｒｂ１，Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄ
ｅ−Ｒｇ１の標品を薄層クロマトグラフィーで展開した
（展開溶媒：ｎ−ブタノール：酢酸エチル：水＝４：
５：１）ところ、この粗サポニンはＲｆ値、パターン共
に天然品と全く一致した。
ｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ−Ｒｂ１，Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄ
ｅ−Ｒｇ１の標品を薄層クロマトグラフィーで展開した
（展開溶媒：ｎ−ブタノール：酢酸エチル：水＝４：
５：１）ところ、この粗サポニンはＲｆ値、パターン共
に天然品と全く一致した。
【００２３】さらに、高速薄層クロマトスキャナーによ
り検量曲線を作成し、Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ−Ｒｂグ
ループとＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ−Ｒｇグループの含量
を求めた。そして各グループの合計を総サポニン量とし
た。また、この値より乾燥重量当たりのサポニン量を求
めた。
り検量曲線を作成し、Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ−Ｒｂグ
ループとＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ−Ｒｇグループの含量
を求めた。そして各グループの合計を総サポニン量とし
た。また、この値より乾燥重量当たりのサポニン量を求
めた。
【００２４】一次培地で２代培養したものと、一次培地
で１代、二次培地で１代の合計２代培養したものを比較
した。培養の結果を図１に示した。一次培地から二次培
地に移植することにより総サポニン量が１．３倍、乾燥
重量当たりのサポニン量が１．５倍に増収した。
で１代、二次培地で１代の合計２代培養したものを比較
した。培養の結果を図１に示した。一次培地から二次培
地に移植することにより総サポニン量が１．３倍、乾燥
重量当たりのサポニン量が１．５倍に増収した。
【００２５】実施例２ 培地、植物生長調整物質の種類とその濃度およびその他
の培養条件を実施例１と同一にした。そして、一次培地
で３代培養したものと、一次培地で１代、二次培地で２
代の合計３代培養したものを比較した。その結果を図２
に示した。一次培地で１代、二次培地で２代培養するこ
とにより、総サポニン量が１．５倍、乾燥重量当たりの
サポニン量が１．７倍に増収した。
の培養条件を実施例１と同一にした。そして、一次培地
で３代培養したものと、一次培地で１代、二次培地で２
代の合計３代培養したものを比較した。その結果を図２
に示した。一次培地で１代、二次培地で２代培養するこ
とにより、総サポニン量が１．５倍、乾燥重量当たりの
サポニン量が１．７倍に増収した。
【００２６】実施例１と実施例２を対比した結果を図３
に示した。一次培地で培養後、二次培地で１代培養する
よりも２代培養する方法が、よりサポニンの増収効果が
みられた。
に示した。一次培地で培養後、二次培地で１代培養する
よりも２代培養する方法が、よりサポニンの増収効果が
みられた。
【００２７】実施例３ ＭＳ液体培地を基本培地とし、植物生長調節物質として
ＮＡＡ５ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＧＡ０．００
１ｐｐｍ添加したものを二次培地とし、一次培地で３代
培養したものと、一次培地で１代、二次培地で２代の合
計３代培養したものを比較した。結果を図４に示した。
一次培地で１代、二次培地で２代培養することにより、
総サポニン量が３．７倍、乾燥重量当たりのサポニンが
２．３倍に増収した。
ＮＡＡ５ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＧＡ０．００
１ｐｐｍ添加したものを二次培地とし、一次培地で３代
培養したものと、一次培地で１代、二次培地で２代の合
計３代培養したものを比較した。結果を図４に示した。
一次培地で１代、二次培地で２代培養することにより、
総サポニン量が３．７倍、乾燥重量当たりのサポニンが
２．３倍に増収した。
【００２８】実施例４ ＭＳ液体培地を基本培地とし、植物生長調節物質として
ＧＡ２ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＮＡＡ２ｐｐｍ
添加したものを二次培地とし、一次培地で２代培養した
ものと、一次培地で１代、二次培地で１代の合計２代培
養したものを比較した。結果を図５に示す。一次培地か
ら、二次培地に移植することにより総サポニン量が１．
６倍、乾燥重量当たりのサポニン量が１．９倍に増収し
た。
ＧＡ２ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＮＡＡ２ｐｐｍ
添加したものを二次培地とし、一次培地で２代培養した
ものと、一次培地で１代、二次培地で１代の合計２代培
養したものを比較した。結果を図５に示す。一次培地か
ら、二次培地に移植することにより総サポニン量が１．
６倍、乾燥重量当たりのサポニン量が１．９倍に増収し
た。
【００２９】実施例５ ＭＳ液体培地を基本培地とし、植物生長調節物質として
ＧＡを２ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＮＡＡを５ｐ
ｐｍ添加したものを二次培地とし、一次培地で３代培養
したものと、一次培地で１代、二次培地で２代の合計３
代培養したものを比較した。結果を図６に示す。一次培
地で１代、二次培地で２代培養することにより、総サポ
ニン量が３．０倍、乾燥重量当たりのサポニン量が２．
７倍に増収した。
ＧＡを２ｐｐｍ添加したものを一次培地、ＮＡＡを５ｐ
ｐｍ添加したものを二次培地とし、一次培地で３代培養
したものと、一次培地で１代、二次培地で２代の合計３
代培養したものを比較した。結果を図６に示す。一次培
地で１代、二次培地で２代培養することにより、総サポ
ニン量が３．０倍、乾燥重量当たりのサポニン量が２．
７倍に増収した。
【００３０】
【発明の効果】簡単かつ効果的にサポニンの生産が可能
な薬用ニンジンカルスの培養方法を提供することができ
る。培地の組成を複雑化させることなく、サポニンの生
産量を増加させる薬用ニンジンカルスの培養方法を提供
することができる。
な薬用ニンジンカルスの培養方法を提供することができ
る。培地の組成を複雑化させることなく、サポニンの生
産量を増加させる薬用ニンジンカルスの培養方法を提供
することができる。
【図１】実施例１に示す培養方法で薬用ニンジンのカル
スを２代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
スを２代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
【図２】実施例２に示す培養方法で薬用ニンジンのカル
スを３代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
スを３代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
【図３】薬用ニンジンのカルスを培養するにあたり、培
養方法と継代数を変えた時のサポニンの生産量を示すグ
ラフである。
養方法と継代数を変えた時のサポニンの生産量を示すグ
ラフである。
【図４】実施例３に示す培養方法で薬用ニンジンのカル
スを３代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
スを３代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
【図５】実施例４に示す培養方法で薬用ニンジンのカル
スを２代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
スを２代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
【図６】実施例５に示す培養方法で薬用ニンジンのカル
スを３代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
スを３代培養した時のサポニンの生産量を示すグラフで
ある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平５−244838（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−235518（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−16582（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−38164（ＪＰ，Ａ) 山田康之外編「現代化学 増刊５ 植 物バイオテクノロジー」（1986年４月25 日），株式会社東京化学同人，ｐ．97− 104 食品と容器，33（２），73−78 （1992) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 5/00 - 5/28 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (4)
- 【請求項１】 薬用ニンジンを起源植物とするカルスを
カルスの増殖に適した植物生長調整物質を含有する培地
およびサポニンの生産を促進する植物生長調整物質を含
有する培地からなる群より選ばれる異なる条件の培地に
継代することを特徴とする薬用ニンジンカルスの培養方
法。 - 【請求項２】 カルスの増殖に適した植物生長調整物質
を含有する培地が、基本培地に植物生長調節物質として
ナフタレン酢酸を添加した培地であり、サポニンの生産
を促進する植物生長調整物質を含有する培地が、基本培
地に植物生長調節物質としてジベレリンを添加した培地
である請求項１の薬用ニンジンカルスの培養方法。 - 【請求項３】 一方の培地を一次培地として、他方の培
地を二次培地として用いる請求項１または２の薬用ニン
ジンカルスの培養方法。 - 【請求項４】 一次培地および／または二次培地でもう
一代以上培養して合計３代以上継代する請求項３の薬用
ニンジンカルスの培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04608995A JP3302853B2 (ja) | 1995-01-27 | 1995-01-27 | 薬用ニンジンカルスの培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04608995A JP3302853B2 (ja) | 1995-01-27 | 1995-01-27 | 薬用ニンジンカルスの培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08196269A JPH08196269A (ja) | 1996-08-06 |
| JP3302853B2 true JP3302853B2 (ja) | 2002-07-15 |
Family
ID=12737270
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04608995A Expired - Fee Related JP3302853B2 (ja) | 1995-01-27 | 1995-01-27 | 薬用ニンジンカルスの培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3302853B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100398749B1 (ko) * | 2000-09-15 | 2003-09-19 | (주)파낙시아 | 생물공학적인 기술에 의한 산삼 묘목의 대량생산방법 |
| KR100479803B1 (ko) * | 2002-04-08 | 2005-03-30 | 홍림통산(주) | 약효가 증가된 특수가공처리 인삼 추출물을 함유하는뇌졸증의 예방 및 치료를 위한 조성물 |
| KR100950865B1 (ko) * | 2007-11-21 | 2010-04-05 | 주식회사 운화 | 뿌리 비대를 통한 산삼 조직배양 묘목의 토양 순화율 증대방법 |
-
1995
- 1995-01-27 JP JP04608995A patent/JP3302853B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 山田康之外編「現代化学 増刊５ 植物バイオテクノロジー」（１９８６年４月２５日），株式会社東京化学同人，ｐ．９７−１０４ |
| 食品と容器，３３（２），７３−７８（１９９２） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08196269A (ja) | 1996-08-06 |
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