KR100459256B1 - 배양삼 발효주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 발효주 - Google Patents

Abstract

본 발명은 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스 및 모상근 또는 부정근과 같은 배양삼을 직접 알코올발효시켜 배양삼 발효주를 제조하는 배양삼 발효주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 발효주에 관한 것으로서, 배양된 배양삼을 분말, 즙 및 열수추출액 등으로 가공하고, 보당한 후, 효모를 사용하여 1단 발효 및 2단발효를 통해 배양산삼주를 제조하는 방법 및 그로부터 수득되는 배양산삼주를 제공하며, 본 발명에 따르면 기존의 재배 식물체인 재배인삼과 비교하여 충분한 사포닌 함량 등을 나타내면서도 오히려 에탄올 함량 등이 더 높게 나타나는 배양산삼주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 배양산삼주를 제공하는 효과가 있다.

Description

배양삼 발효주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 발효주{Manufacturing method of fermented alcoholic drink from cultivated ginseng and fermented alcoholic drink obtained therefrom}

본 발명은 배양삼 발효주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 발효주에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스 및 모상근 또는 부정근과 같은 배양삼을 직접 알코올발효시켜 배양삼 발효주를 제조하는 배양삼 발효주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 발효주에 관한 것이다.

지금까지 고려인삼, 미국인삼, 전칠삼 등을 재료로 하여 다양한 목적으로 조직배양기술은 일반화되어 있다. 특히, 인삼의 각 조직을 배양하여 획득한 캘러스 증식, 기관분화를 통한 식물체의 증식, 캘러스와 조직으로부터 유기한 부정근 및 아그로박테리아(A. rhizogenes)로 형질전환시킨 모상근의 유도 및 증식체계를 확립했으며, 물리, 화학적인 처리효과에 관해서는 전문학회지에 많은 보고가 이루어져 왔다. 이들 실험의 대부분은 캘러스 및 세포 증식에 미치는 물리, 화학적 요인분석에 관한 것이 대부분이있고, 인삼의 부정근 배양에 관한 실험결과는 최근 생물반응기의 활용으로 생산성을 얻게 되었으며, 국내의 연구결과가 가장 앞서고 있는 것으로 알려지고 있다.

인삼은 한국과 중국을 중심으로 재배되어 왔으나, 최근 생약에 대한 인식의 증가와 소비의 확대로 사포닌추출물 등 수요가 급격히 증가되어 미국 및 캐나다로 재배면적이 크게 증가하고 있는 추세이다. 그러나, 재배기간이 4 내지 6년으로 길고, 노동력이 많이 소요되기 때문에 가격이 비싸다는 단점이 있다(국제인삼회의, Persons, p78-83, 캐나다, 1995). 게다가 농약성분의 잔류에 대한 염려로 병충해의 방제가 어려운 단점이 있으며, 더욱이 인삼은 동일한 경작지에서 연작장애가 발생되므로 한국과 같이 경작지가 제한적인 국가에서는 재배에 또 다른 문제가 되고 있다(국제인삼회의, Li; Yu and Ohh, p201-204; p120-130, 캐나다, 1995). 따라서, 이러한 문제들을 해결하지 않는 한, 전통적인 재배방식으로는 최근에 증가하는 시장의 수요를 충족시킬 수 없다. 특히, 진세노사이드(ginsenosides)와 같은 인삼추출물을 이용한 가공식품, 식품첨가물, 의약품 및 건강보조식품으로서의 소비시장은 앞으로 더욱 확대될 것으로 전망됨에 따라 인삼추출물의 수요를 충족시킬 수 있는 보다 안전하고, 안정적인 생산방법의 개발이 절실히 요구되고 있다.

또한, 식물의 기관이나 세포배양을 확립하여 상업화하기 위해서는 우선 기관이나 세포의 증식율이 높아야 한다. 이러한 증식율은 다양한 요인에 의해서 지배를 받는다. 증식율에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 생장조절물질로서 종류나 농도에 따라 생장에 큰 영향을 미친다. 지금까지 플라스크를 이용한 세포나 캘러스 배양을 통해서는 통상적으로 4주 배양한 후, 10배 이상의 증가는 매우 어렵다고 알려져 있다. 그러나, 부정근을 생물반응기나 탱크를 이용하여 배양했을 경우, 증식에 미치는 최대의 요인을 갖추어 주었을 경우, 30배 이상의 생장을 기대할 수 있는데 이에 대한 기술개발이 필요하다.

이에 본 발명자들은 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스 및 모상근 또는 부정근과 같은 배양삼을 직접 알코올발효시켜 배양삼 발효주를 제조하는 방법을 개발하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스 및 모상근 또는 부정근과 같은 배양삼을 직접 알코올발효시켜 배양삼 발효주를 제조하는 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스 및 모상근 또는 부정근과 같은 배양삼을 직접 알코올발효시켜서 수득되는 배양삼 발효주를 제공하는 데 있다.

도 1은 배양산삼의 농도를 0.5 내지 10.0%(w/v)로 각각 달리하면서 발효기간에 따른 배양산삼주의 탄소원 소모도와 에탄올 함량변화를 측정한 결과를 도시한 그래프이다.

도 2는 배양산삼을 분말, 즙 및 열수추출물로 각각 달리 가공하여 발효시켰으며, 발효기간에 따른 배양산삼주의 탄소원 소모도와 에탄올 함량변화를 측정한 결과를 도시한 그래프이다.

도 3은 발효기간에 따른 배양산삼주의 수소이온농도(pH)의 함량변화를 나타낸 그래프이다.

도 4는 발효기간에 따른 배양산삼주의 산도변화(%)를 나타낸 그래프이다.

도 5는 발효기간에 따른 배양산삼주의 사포닌 함량변화를 나타낸 그래프이다.

도 6은 발효기간에 따른 배양산삼주의 사포닌 용출량을 나타낸 그래프이다.

본 발명에 따른 배양삼 발효주의 제조방법은, 탄소원을 포함하는 발효원료를 발효시켜 발효주를 제조함에 있어서, (1) 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스, 모상근, 부정근 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 배양삼원료를 준비하는 배양삼원료준비단계; (2) 상기 배양삼원료준비단계에서 수득되는 배양삼원료에 탄소원으로서 탄수화물이나 당을 상기 배양삼원료의 10 내지 40%(v/w)에 해당하는 양으로 보당하는 보당단계; (3) 상기 보당단계에서 보당된 배양삼원료에 발효균주로서 효모를 YPD 고형배지(이스트 추출물 2 내지 20g/ℓ, Difco 펩톤 4 내지 40g/ℓ, 덱트로스 4 내지 40g/ℓ, 우무 15-25g/ℓ)에서 20 내지 35℃에서 24 내지 72시간 동안 1차 계대배양한 후, YPD 액체배지에서 배양하여 수득한 발효배양액을 상기 보당된 배양삼원료의 0.1 내지 10%(w/v)에 해당하는 양으로 접종시키고 1 내지 10일간 배양시키는 1단발효단계; (4) 상기 보당단계에서 보당된 배양삼원료에 상기 1단발효단계에서 수득되는 발효액을 0.5 내지 50중량%의 양으로 접종시키고, 25℃에서 5 내지 30일간 알코올발효시키는 2단발효단계; 및 (5) 상기 2단발효 후 수득되는 발효액을 압착여과 및 살균하여 상징액을 포장하는 후처리단계;들을 포함하여 이루어진다.

상기 배양삼원료준비단계와 상기 보당단계 사이에 상기 배양삼원료준비단계에서 수득되는 배양삼원료를 분말, 즙 또는 열수추출액으로 가공하는 원료가공단계가 더 포함될 수 있다.

상기 2단발효단계와 상기 후처리단계 사이에 상기 2단발효단계에서 수득된 발효액을 15℃ 이하의 저온에서 정치시키는 저온정치단계가 더 포함될 수 있다.

상기 배양삼원료준비단계에서 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배로는 자연산 또는 재배된 인삼, 장뇌삼 또는 산삼들의 조직 또는 종자의 배가 사용될 수 있다.

상기 보당단계에서 사용되는 탄소원으로서 바람직하게는 당, 특히 바람직하게는 슈크로스가 사용될 수 있다.

이하, 본 발명의 구체적인 실시예를 첨부한 도면을 참조하여 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 배양삼 발효주의 제조방법은, 탄소원을 포함하는 발효원료를 발효시켜 발효주를 제조함에 있어서, 배양삼원료준비단계, 보당단계, 1단발효단계, 2단발효단계 및 후처리단계들을 포함하여 이루어짐을 특징으로 한다.

상기 (1)의 배양삼원료준비단계는 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스, 모상근, 부정근 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 배양삼원료를 준비하는 단계이며, 삼류의 조직 또는 종자의 배를 배양시키는 것에 의해 발효주 생산의 원료를 토양, 환경 및 농약오염과는 무관한 무공해 배양삼을 대량으로 양산할 수 있도록 한다.

상기 배양삼원료준비단계에서 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배로는 자연산 또는 재배된 인삼, 장뇌삼 또는 산삼들의 조직 또는 종자의 배가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 4 내지 6년근 인삼, 20년생 이상의 장뇌삼 및 100년 이상된 산삼 등으로부터 수득되는 조직 또는 종자의 배가 사용될 수 있다.

상기 (2)의 보당단계는 상기 배양삼원료준비단계에서 수득되는 배양삼원료에 탄소원으로서 탄수화물이나 당을 상기 배양삼원료의 10 내지 40%(w/v)에 해당하는 양으로 보당하는 단계이다. 이는 발효에 요구되는 탄소원을 보충하여 충분한 발효를 가능하게 하여 알코올 함량을 높이도록 기능한다. 상기에서 보당량이 상기 배양삼원료의 10중량% 미만으로 포함되는 경우, 탄소원이 부족하여 충분한 알코올발효가 이루어지지 않아 최종산물로서의 발효주에서의 알코올함량이 낮아지는 문제점이 있을 수 있으며, 반대로 보당량이 상기 배양삼원료의 40%(w/v)를 초과하는 경우, 탄소원의 과다로 삼투압이 높아져 효모의 생장 및 활성이 억제되어 이상발효가 일어날 것이다.

상기 보당단계에서 사용되는 탄소원으로서 바람직하게는 당, 특히 바람직하게는 슈크로스가 사용될 수 있으며, 당은 특히 알코올발효를 촉진시키는 기능을 한다.

상기 (3)의 1단발효단계는 상기 보당단계에서 보당된 배양삼원료에 발효균주로서 효모를 YPD 고형배지에서 20 내지 35℃에서 24 내지 72시간 동안 1차 계대배양한 후, YPD 액체배지에서 배양하여 수득한 발효균주를 상기 보당된 배양삼원료의 0.1 내지 10중량%에 해당하는 양으로 접종시키고 1 내지 10일간 배양시키는 단계로서, 발효배양액 중에서 효모의 수가 증대되도록 확대배양하는 단계이다. 이때 효모로는 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)가 사용될 수 있으며, 이 효모는 알코올발효를 취급하는 당업자에게는 극히 용이하게 구입하여 사용할 수 있을 정도로 공지된 것으로 이해될 수 있음은 자명한 것이다. 상기 보당된 배양삼원료에 효모를 접종시키기 전에 상기 보당된 배양삼원료를 100 내지 130℃의 온도범위에서 10 내지 30분간 살균하는 살균공정을 더 포함할 수 있다. 이러한 살균공정은 당업자에게는 극히 용이하게 이해될 수 있는 것임은 자명한 것이다. 상기에서 1차 계대배양시의 온도가 20℃ 미만이거나 또는 35℃를 초과하는 경우, 효모의 활성이 저하되어 배양이 충분히 이루어지지 않는 문제점이 있을 수 있으며, 또한 1차 계대배양시의 배양시간이 24시간 미만인 경우, 배양시간이 너무 짧아 효모의 확대배양이 충분치 못하게 되는 문제점이 있을 수 있으며, 반대로 72시간을 초과하면 효모의 활성이 저하되어 알코올 발효효율이 저하될 것이다. 또한, 확대배양에 있어서 1일 미만의 시간만으로 확대배양하는 경우, 역시 효모의 확대배양이 충분치 못하며, 10일 초과하는 경우, 생산성의 저하 등의 문제점이 있을 수 있으며, 또한 초산발효와 같은 불필요한 발효로 이행되는 문제점이 있을 수 있다.

상기 (4)의 2단발효단계는 상기 보당단계에서 보당된 배양삼원료에 상기 1단발효단계에서 수득되는 발효액을 2 내지 50%(v/v)의 양으로 접종시키고, 5 내지 30일간 알코올발효시키는 단계로서 이미 확대배양된 효모를 포함하는 1단발효단계의발효액에 배양삼원료를 더 투입하여 본 발효를 진행시켜 대량의 발효주를 생산할 수 있도록 하는 단계이다. 상기에서 발효액의 접종량이 2% 미만인 경우 알코올발효 기간이 길어져 경제성이 떨어지는 문제점이 있을 수 있으며, 반대로 50%(v/v)를 초과하는 경우, 2단발효 즉 본발효가 불필요하게 되어 역시 비경제적이다.

상기 2단발효단계에 이어서 상기 (5)의 후처리단계가 수행되며, 상기 후처리단계는 상기 2단발효 후 수득되는 발효액을 압착여과 및 살균하여 상징액을 포장하는 단계이며, 이들 후처리단계의 압착여과공정, 살균공정 및 포장공정들은 모두 당업자에게는 용이하게 이해될 수 있는 것이다.

또한, 상기 배양삼원료준비단계와 상기 보당단계 사이에 상기 배양삼원료준비단계에서 수득되는 배양삼원료를 분말, 즙 또는 열수추출액으로 가공하는 원료가공단계가 더 포함될 수 있다. 이 원료가공단계에서는 배양삼원료준비단계에서 수득되는 착즙하여 액화시키거나, 배양삼원료를 건조하여 분말화시키거나 또는 분말을 열수추출에 의해 추출액화시켜 사포닌(ginsenosides) 등의 유효성분들이 보다 효과적으로 발효주 내로 용출되도록 한다.

또한, 상기 2단발효단계와 상기 후처리단계 사이에 상기 2단발효단계에서 수득된 발효액을 15℃ 이하의 저온에서 정치시키는 저온정치단계가 더 포함될 수 있다. 상기 저온정치단계에 의해 수득되는 발효주의 탁도가 낮아져서 상품성을 더욱 증대시킬 수 있다. 상기 저온정치단계에서의 정치온도가 15℃를 초과하는 경우, 탁도의 개선이 충분치 못하게 되는 문제점이 있을 수 있다. 그러나, 탁도개선이 요구되지 않는 경우, 이 저온정치단계는 생략될 수 있다.

이하에서 본 발명의 바람직한 실시예 및 비교예들이 기술되어질 것이다.

이하의 실시예들은 본 발명을 예증하기 위한 것으로서 본 발명의 범위를 국한시키는 것으로 이해되어져서는 안될 것이다.

실험예 1

캘러스의 유도

채취한 산삼 뿌리절편(2 내지 3㎟)을 2,4-D(2,4-dichlorophenoxy acetic acid ; 2,4-디클로로페녹시아세트산), NAA(naphthalene acetic acid 1 내지 10㎎/ℓ를 첨가한 무라시게-스쿠그(Murashige-Skoog)배지에 접종시키고, 암상태에서 배양하면서 캘러스를 유도시켰으며, 이중 적정농도는 2㎎/ℓ가 오옥신 종류에 관계없이 가장 효과적임을 확인하였다.

실험예 2

캘러스의 증식

MS배지, SH(Schenk and Hildebrandt)배지, B5(Gamborg)배지, LP(Quoirin and lepoivre)배지 및 화이트(White)배지 등을 이용해서 배양하였을 때 효과는 거의 비슷하였으며, 배양기간에 따라 차이가 있었다. 이들 배지들 중 암모늄 나이트레이트를 10mM 첨가한 MS배지와 3/4SH배지에서 양호한 결과가 나옴을 확인하였다. 캘러스 생장에 미치는 생장조절제로는 2,4-D 2㎎/ℓ 또는 NAA나 BSAA 2 내지 7.0㎎/ℓ 첨가배지에서 가장 양호함을 확인하였다.

실험예 3

모상근의 유도

MS배지, SH배지, B5배지, LP배지 및 화이트배지 등을 이용해서 산삼의 절편(2 내지 8㎟)에 아그로박테리아(A. rhizogenes)를 1 내지 3일간 감염시킨 후, 클라포란(claforan) 등의 항생제를 이용하여 균을 없앤 후, 동일한 고형배지에 계대하며 유도하여 모상근을 수득하였다.

실험예 4

부정근의 유도

최적조건의 캘러스 배양용 배지에서 2 내지 4주 간격으로 계대배양하면서 MS배지, SH배지, B5배지에 발근촉진제인 아이비에이(IBA)나 NAA를 1 내지 7㎎/ℓ 첨가한 배지에 옮겨 주었을 때, 배양 3 내지 4주 후 배양산삼의 부정근이 형성되었다. 배지의 수소이온농도(pH)는 5.5 내지 6.0 범위에서 부정근의 생장이 양호함을 확인하였다. 고체 배지로 만들기 위해서는 젤라이트(gelite) 0.2%(w/v)나 우무(agar)를 첨가하여, 당농도는 3%(w/v)에서 부정근 발생과 생장이 양호함을 확인하였다.

실시예 1 내지 5

우선, 주모로 사용하기 위한 1단발효에 사용하기 위한 효모로 사카로마이세스 세레비지에를 고형배지에서 30℃에서 2일간 1차 계대배양 후, YPD 액체배지에서 배양하였다. 계속해서, 주모배양을 위해 상기 실험예 4에서 수득된 배양산삼 부정근의 분말 12g을 물에 분산시킨 분산액 600㎖을 만들고, 여기에 탄소원으로서 슈크로스 25%(w/v)를 보당한 후, 이를 1ℓ 플라스크에 넣고, 121℃에서 20분간 살균한 후, 상기 계대배양된 효모 6㎖, 1%(v/v)를 접종하고, 3일간 배양하여 주모로 사용하였다(1단발효단계).상기 1단발효단계에서 수득된 주모를 보당된 배양삼원료를 기준으로 하여 3%(v/v)의 양으로 접종하고, 25℃에서 15일간 발효(2단발효)시킨 후, 발효가 완료된 발효액을 여과하고, 70℃ 10분간 살균하여 침전시킨 후, 병입하여 본 발명에 따른 배양삼의 발효주를 수득하였다.이와 같은 방법으로 배양산삼 부정근 분말의 농도가 각각 0.5%(실시예 1, 도 1의 B), 1.0%(실시예 2, 도 1의 C), 2.0%(실시예 3, 도 1의 D), 5.0%(실시예 4, 도 1의 E) 및 10.0%(v/v)(실시예 5, 도 1의 F)인 배양삼원료를 준비하고, 이에 대하여 상기와 같은 조건하에서 1단발효와 2단발효를 실시하여 각각 본 발명에 따른 배양삼 발효주를 수득하였다.이와 같이 수득된 각각의 배양삼 발효주에 대하여 발효기간에 따른 탄소원 소모도와 에탄올 함량변화를 측정하고 그 결과를 도 1에 나타내었다.여기에서 에탄올 함량분석은 시료 50㎖에 물 50㎖를 가하여 증류시켜 50㎖를 받아 알코올 비중계로 주도를 측정하였으며, 희석배수와 온도를 보정하였다. 또한 대조군으로서는 4년근 재배인삼(금산, 도 1의 A)을 사용하였다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 배양산삼 첨가량에 따라 알코올 생성량이 증가되었으며, 재배인삼 첨가량이 5%(w/v)에서 알코올함량은 배양산삼 1.0%(w/v) 와 비슷하였다. 배양산삼 첨가량이 2.0%(w/v)이상에서는 오히려 더 높은 에탄올 함량을 보이고 있음을 확인할 수 있었다. 도 2의 원료 처리별 탄소원의 소모도와 알코올 함량변화를 나타낸 바와 같이, 배양산삼이 재배인삼(A)보다 발효특성이 우수하였으며, 특히 분말, 즙 및 열수추출물(B, C, D)처리구가 소모도와 알코올 함량이 높았으며, 특히 분말, 즙 및 열수추출물(B, C, D)처리구에서 당분의 소모도와 알코올 생성량이 높았다.

실시예 6 내지 8

배양산삼을 분말(실시예 6), 즙(실시예 7) 및 열수추출물(실시예 8)로 가공하여 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일하게 수행하였으며, 발효기간에 따른 배양산삼주의 탄소원 소모도와 에탄올 함량변화를 측정하여 그 결과를 도2에 나타내었다. 또한, 발효기간에 따른 배양산삼주의 수소이온농도(pH)의 함량변화를 도 3에 나타내었으며, 발효기간에 따른 배양산삼주의 산도변화(%)를 도 4에 나타내었다. 여기에서 pH의 측정은 시료 5㎖를 취하여 와트만여과지 2번에서 여과하고, pH측정기(inoLab pH Level 1, 독일소재)를 사용하여 측정하였다.

한편, 발효기간에 따른 배양산삼주의 사포닌 함량과 사포닌 용출량을 각각 측정하여 도 5(사포닌 함량) 및 도 6(사포닌 용출량)에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, 대조군으로서의 4년근 재배인삼에 비하여 배양산삼을 분말, 즙 및 열수추출물로 가공하여 발효시킨 결과들에서 에탄올 함량이 더 높게 나타남을 확인할 수 있었다. 또한, 도 3에 나타난 바와 같이, pH의 함량변화는 대조군으로서의 4년근 재배인삼과 비교하여 큰 차이가 없이 거의 유사하게 나타나, 전통주인 인삼주에 비해 맛이 달라지지 않음을 확인할 수 있었다. 또한, 도 4에 나타난 바와 같이, 산도변화는 배양산삼을 즙으로 가공한 후, 발효시킨 실시예에서만 약간 더 높게 나타났으며, 분말과 열수추출액으로 가공한 실시예들은 대조군으로서의 4년근 재배인삼과 거의 동일하게 나타남을 확인할 수 있었다.

도 5 및 도 6에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 배양산삼주의 사포닌 함량과 사포닌 용출량은 대조군으로서의 4년근 재배인삼과 비교하였을 때, 대조군으로서의 4년근 재배인삼과 마찬가지로 발효기간이 길어질수록 사포닌의 함량 및 용출량이 증가함을 확인할 수 있었다.

상기한 실시예들을 종합한 결과, 본 발명에 따른 배양삼 발효주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 발효주는 기존의 재배 식물체인 재배인삼과 비교하여 충분한사포닌 함량 등을 나타내면서도 오히려 에탄올 함량 등이 더 높게 나타나는 배양산삼주를 수득할 수 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명에 의하면 기존의 재배 식물체인 재배인삼과 비교하여 충분한 사포닌 함량 등을 나타내면서도 오히려 에탄올 함량 등이 더 높게 나타나는 배양산삼주의 제조방법 및 그로부터 수득되는 배양산삼주를 제공하는 효과가 있다.

이상에서 본 발명은 기재된 구체예에 대해서만 상세히 설명되었지만 본 발명의 기술사상 범위 내에서 다양한 변형 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속함은 당연한 것이다.

Claims (6)

1. 탄소원을 포함하는 발효원료를 발효시켜 발효주를 제조함에 있어서,

   (1) 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배를 배양시켜 증식된 캘러스, 모상근, 부정근 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 배양삼원료를 준비하는 배양삼원료준비단계;

   (2) 상기 배양삼원료준비단계에서 수득되는 배양삼원료에 탄소원으로서 탄수화물이나 당을 상기 배양삼원료의 10 내지 40%(w/v)에 해당하는 양으로 보당하는 보당단계;

   (3) 상기 보당단계에서 보당된 배양삼원료에 발효균주로서 효모를 YPD 고형배지(이스트 추출물 2 내지 20g/ℓ, Difco 펩톤 4 내지 40g/ℓ, 덱트로스 4 내지 40g/ℓ, 우무 15-25g/ℓ)에서 20 내지 35℃에서 24 내지 72시간 동안 1차 계대배양한 후, YPD 액체배지에서 배양하여 수득한 발효배양액을 상기 보당된 배양삼원료의 0.1 내지 10중량%에 해당하는 양으로 접종시키고 1 내지 10일간 배양시키는 1단발효단계;

   (4) 상기 보당단계에서 보당된 배양삼원료에 상기 1단발효단계에서 수득되는 발효액을 2 내지 50%(v/v)의 양으로 접종시키고, 25℃에서 5 내지 30일간 알코올발효시키는 2단발효단계; 및

   (5) 상기 2단발효 후 수득되는 발효액을 압착여과 및 살균하여 상징액을 포장하는 후처리단계;

   들을 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 배양삼 발효주의 제조방법.
2. 제 1 항에 있어서,

   상기 배양삼원료준비단계와 상기 보당단계 사이에 상기 배양삼원료준비단계에서 수득되는 배양삼원료를 분말, 즙 또는 열수추출액으로 가공하는 원료가공단계가 더 포함되어 이루어짐을 특징으로 하는 상기 배양삼 발효주의 제조방법.
3. 제 1 항에 있어서,

   상기 2단발효단계와 상기 후처리단계 사이에 상기 2단발효단계에서 수득된 발효액을 15℃ 이하의 저온에서 정치시키는 저온정치단계가 더 포함되어 이루어짐을 특징으로 하는 상기 배양삼 발효주의 제조방법.
4. 제 1 항에 있어서,

   상기 배양삼원료준비단계에서 삼(蔘)류의 조직 또는 종자의 배로는 자연산 또는 재배된 인삼, 장뇌삼 또는 산삼들의 조직 또는 종자의 배가 사용됨을 특징으로 하는 상기 배양삼 발효주의 제조방법.
5. 제 1 항에 있어서,

   상기 보당단계에서 사용되는 탄소원으로서 바람직하게는 당, 특히 바람직하게는 슈크로스가 사용됨을 특징으로 하는 상기 배양삼 발효주의 제조방법.
6. 상기 청구항 1 내지 5항들 중 어느 한 항에 따라 수득되는 배양산삼주.