CN108486188A - 一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法 - Google Patents
一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108486188A CN108486188A CN201810420516.XA CN201810420516A CN108486188A CN 108486188 A CN108486188 A CN 108486188A CN 201810420516 A CN201810420516 A CN 201810420516A CN 108486188 A CN108486188 A CN 108486188A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- water
- culture medium
- liquid
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,属于微生物发酵技术领域。所述方法如下:菌种:菌株为香菇881,杏鲍菇90,茶树菇2号,金针菇991或竹荪D02;将斜面保藏培养基放置在22.5~23.5℃温度下培养4~8 d,将液体种子培养基灭菌;用10mL生理盐水荡洗斜面保藏培养基上的菌丝体,按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4d,转速为170~200r/min,培养温度为23~26℃;将液体发酵培养基在115℃下灭菌,在500mL三角瓶中,装液量100mL,接种量5~8%,接种摇匀静置培养4~8h,在摇床上发酵4~6d,培养温度为23~26℃,搅拌转速为180~220 r/min。本发明优化了真菌多糖的发酵条件,通过添加樟科植物干燥粉末的10~50%水浸提液,促进了发酵液中真菌菌丝增殖,生物量增加68.45%~114.36%,胞外多糖产量提高68.92%~97.91%。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域,具体涉及一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法。
背景技术
真菌多糖是具有高度免疫活性的一类多糖,广泛的存在于真菌的子实体和菌丝体中,高纯度的真菌多糖既可以直接用于口服,也可以加工成注射制剂。真菌多糖可有效提高机体免疫力且毒副作用小。在真菌多糖的提取方面,目前国内外主要采用热水浸提法和溶剂提取法。热水浸提法是一种常规的提取方法,其优点是提取条件温和,操作简单、方便;但存在的缺点是多糖得率不高。本领域目前一般仍采用传统的热水浸提法。
溶剂提取法主要采用低浓度的草酸、草酸铵、盐酸、氢氧化钠等溶剂提取。有资料表明,酸、碱在多糖提取率方面均高于常规热水提取。然而,酸对多糖有水解作用,且操作比较繁杂,故多不采用酸提法。而盐对多糖的提取率提高不大。碱法的多糖得率比水提取及酸提取高,但要注意碱浓度不能太高,以免多糖变性;而且碱法提取条件剧烈,容易引起多糖变性,对多糖也有降解作用,且提取液粘稠,不易过滤。鉴于水浸提法存在多糖提取率低的技术缺陷,本领域迫切需要改进真菌多糖的提取技术,以进一步提高真菌多糖的提取率。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有的真菌多糖成本高且产率低的问题,提供一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案如下:
一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,所述方法步骤如下:
步骤一:采购菌株;
步骤二:配制斜面保藏培养基:取200 g去皮土豆切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸20~30min,纱布过滤后得到滤液,向滤液中加入20g葡萄糖、1g蛋白胨、1g KH2PO4、0.5g MgSO4·7H2O、20g琼脂,加热溶解后补水至总体积为1L,pH自然,在115℃下灭菌20~30 min;
步骤三:活化菌株:将步骤一的菌株接种于步骤二的斜面保藏培养基上,于22.5~25.5℃温度下培养4~8 d,培养后得到菌丝体;
步骤四:液体种子培养基配制及培养:1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3gK2HPO4,1.5g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8~6.0,115℃灭菌25~30min;
在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗步骤三斜面保藏培养基上的菌丝体制成菌悬液,按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4 d,转速为170~200r/min,培养温度为23~26℃;
步骤五:植物浸提液制备:称取过20目筛的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
步骤六:液体发酵培养基的配制:称取麸皮100~200g,加500mL水,煮沸15~20 min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5~7g,葡萄糖10~15 g,可溶性淀粉5~10 g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O2g,植物浸提液100~500mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30 min;
步骤七:按步骤六液体发酵培养基体积的4~8%接入步骤四得到的种子液,接种后摇匀静置培养4~8 h,在摇床上发酵4~6 d,培养温度为23~25℃,搅拌转速为180~220 r/min。
本发明相对于现有技术的有益效果是:
(1)本发明通过在液体发酵培养基中加入绿色安全的植物浸提液,使真菌菌丝在培养基中能够保持良好细胞形态和生长状态,维持高密度的生长繁殖和分泌积累发酵产物,发酵液具有芳香味。本发明有效的缩短了发酵周期、提高了原料的利用率、具有工艺简单、操作方便、高产胞外多糖及容易实现产业化的特点。
(2)本发明通过大量实验,优化了真菌多糖液体发酵培养基和发酵条件,在原发酵培养基中添加10~50%植物干燥粉末的水浸提液,有效地促进发酵液中真菌菌丝增殖,生物量增加68.76%~116.87%,胞外多糖产量提高67.75%~99.81%。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明,但并不局限于此,凡是对本发明技术方案进行修正或等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神范围,均应涵盖在本发明的保护范围之中。
具体实施方式一:本实施方式记载的是一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,所述方法步骤如下:
步骤一:采购菌株,购于福建省古田县兴华真菌研究所;
步骤二:配制斜面保藏培养基:取200 g去皮土豆切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸20~30min,纱布过滤后得到滤液,向滤液中加入20g葡萄糖、1g蛋白胨、1g KH2PO4、0.5g MgSO4·7H2O、20g琼脂,加热溶解后补水至总体积为1L,pH自然,在115℃下灭菌20~30 min;
步骤三:活化菌株:将步骤一的菌株接种于步骤二的斜面保藏培养基上,于22.5~25.5℃温度下培养4~8 d,培养后得到菌丝体;
步骤四:液体种子培养基配制及培养:1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3gK2HPO4,1.5g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8~6.0,115℃灭菌25~30min;
在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗步骤三斜面保藏培养基上的菌丝体制成菌悬液,按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4 d,转速为170~200r/min,培养温度为23~26℃;
步骤五:植物浸提液制备:称取过20目筛的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
步骤六:液体发酵培养基的配制:称取麸皮100~200g,加500mL水,煮沸15~20 min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5~7g,葡萄糖10~15 g,可溶性淀粉5~10 g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O2g,植物浸提液100~500mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30 min;
步骤七:按步骤六液体发酵培养基体积的4~8%接入步骤四得到的种子液,接种后摇匀静置培养4~8 h,在摇床上发酵4~6 d,培养温度为23~25℃,搅拌转速为180~220 r/min。
具体实施方式二:具体实施方式一所述的一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,步骤一中,所述的菌株为香菇881、杏鲍菇90、茶树菇2号、金针菇991或竹荪D02。
具体实施方式三:具体实施方式一所述的一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,步骤五中,所述的植物浸提液所用植物为樟科润楠属植物。
实施例1:
(1)活化茶树菇菌种:将茶树菇母种接种于由以下组成的斜面保藏培养基上。去皮土豆200g切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸30min,纱布过滤后得到滤液,加入葡萄糖20g,蛋白胨1g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,琼脂2g,加热溶解后补水至1L,pH自然,在115℃下灭菌25min。接种后,于24℃温度下培养5d。
(2)液体种子的培养:在1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3 g K2HPO4,1.5 g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8,115℃灭菌30min。在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗下在斜面保藏培养基上活化生长的菌种,制成菌悬液,按液体种子培养基体积的6%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4d,转速为180r/min,培养温度为23~26℃;
(3)植物浸提液制备:称取20目筛筛下物的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,间歇搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
(4)配制液体发酵培养基:称取麸皮100g,加500mL水,煮沸20min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5g,葡萄糖5g,可溶性淀粉15g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O 2g,植物浸提液100mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30min;
(5)按液体发酵培养基体积的5%接入液体种子液,接种后摇匀静置培养6 h,在摇床上发酵5d,培养温度为25℃,转速为200r/min。
(6)在液体发酵培养基中以等量水替代植物浸提液,其余所有操作相同进行发酵培养,作为对照。当发酵结束时,采用血球计数板直接计数方法测定发酵液中菌丝数量。取与对照同体积的发酵液,加入2%的NaCl,溶解后5000rpm离心15min;上清液加三倍体积95%乙醇沉淀多糖,4℃静置16 h后,5000rpm离心20 min,收集沉淀物,用蒸馏水溶解并定容,进行多糖测定,测定方法为苯酚-硫酸法,发酵液茶树菇菌丝数为1.08×103个/mL,比对照提高84.72%,胞外多糖产量提高70.72%。
实施例2:
(1)活化金针菇菌种:将金针菇母种接种于由以下组成的斜面保藏培养基上。去皮土豆200g切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸30min,纱布过滤后得到滤液,加入葡萄糖20g,蛋白胨1g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,琼脂2g,加热溶解后补水至1L,pH自然,在115℃下灭菌25min。接种后,于24℃温度下培养5d。
(2)液体种子的培养:在1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3 g K2HPO4,1.5 g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8,115℃灭菌30min。在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗下在斜面保藏培养基上活化生长的菌种,制成菌悬液,按液体种子培养基体积的6%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4d,转速为180r/min,培养温度为23~26℃;
(3)植物浸提液制备:称取20目筛筛下物的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,间歇搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
(4)配制液体发酵培养基:称取麸皮100g,加500mL水,煮沸20min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5g,葡萄糖5g,可溶性淀粉15g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O 2g,植物浸提液100mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30min;
(5)按液体发酵培养基体积的5%接入液体种子液,接种后摇匀静置培养6 h,在摇床上发酵5d,培养温度为25℃,转速为200r/min。
(6)在液体发酵培养基中以等量水替代植物浸提液,其余所有操作相同进行发酵培养,作为对照。当发酵结束时,采用血球计数板直接计数方法测定发酵液中菌丝数量。取与对照同体积的发酵液,加入2%的NaCl,溶解后5000rpm离心15min;上清液加三倍体积95%乙醇沉淀多糖,4℃静置16 h后,5000rpm离心20 min,收集沉淀物,用蒸馏水溶解并定容,进行多糖测定,测定方法为苯酚-硫酸法,发酵液金针菇菌丝数为1.35×103个/mL,比对照提高85.25%,胞外多糖产量提高75.25%。
实施例3:
(1)活化香菇菌种:将香菇母种接种于由以下组成的斜面保藏培养基上。去皮土豆200g切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸30min,纱布过滤后得到滤液,加入葡萄糖20g,蛋白胨1g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,琼脂2g,加热溶解后补水至1L,pH自然,在115℃下灭菌25min。接种后,于24℃温度下培养5d。
(2)液体种子的培养:在1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3 g K2HPO4,1.5 g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8,115℃灭菌30min。在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗下在斜面保藏培养基上活化生长的菌种,制成菌悬液,按液体种子培养基体积的6%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4d,转速为180r/min,培养温度为23~26℃;
(3)植物浸提液制备:称取20目筛筛下物的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,间歇搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
(4)配制液体发酵培养基:称取麸皮100g,加500mL水,煮沸20min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5g,葡萄糖5g,可溶性淀粉15g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O 2g,植物浸提液100mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30min;
(5)按液体发酵培养基体积的5%接入液体种子液,接种后摇匀静置培养6 h,在摇床上发酵5d,培养温度为25℃,转速为200r/min。
(6)在液体发酵培养基中以等量水替代植物浸提液,其余所有操作相同进行发酵培养,作为对照。当发酵结束时,采用血球计数板直接计数方法测定发酵液中菌丝数量。取与对照同体积的发酵液,加入2%的NaCl,溶解后5000rpm离心15min;上清液加三倍体积95%乙醇沉淀多糖,4℃静置16 h后,5000rpm离心20 min,收集沉淀物,用蒸馏水溶解并定容,进行多糖测定,测定方法为苯酚-硫酸法,发酵液香菇菌丝数为1.44×103个/mL,比对照提高91.14%,胞外多糖产量提高81.14%。
实施例4:
(1)活化杏鲍菇菌种:将杏鲍菇母种接种于由以下组成的斜面保藏培养基上。去皮土豆200g切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸30min,纱布过滤后得到滤液,加入葡萄糖20g,蛋白胨1g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,琼脂2g,加热溶解后补水至1L,pH自然,在115℃下灭菌25min。接种后,于24℃温度下培养5d。
(2)液体种子的培养:在1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3 g K2HPO4,1.5 g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8,115℃灭菌30min。在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗下在斜面保藏培养基上活化生长的菌种,制成菌悬液,按液体种子培养基体积的6%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4d,转速为180r/min,培养温度为23~26℃;
(3)植物浸提液制备:称取20目筛筛下物的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,间歇搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
(4)配制液体发酵培养基:称取麸皮100g,加500mL水,煮沸20min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5g,葡萄糖5g,可溶性淀粉15g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O 2g,植物浸提液100mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30min;
(5)按液体发酵培养基体积的5%接入液体种子液,接种后摇匀静置培养6 h,在摇床上发酵5d,培养温度为25℃,转速为200r/min。
(6)在液体发酵培养基中以等量水替代植物浸提液,其余所有操作相同进行发酵培养,作为对照。当发酵结束时,采用血球计数板直接计数方法测定发酵液中菌丝数量。取与对照同体积的发酵液,加入2%的NaCl,溶解后5000rpm离心15min;上清液加三倍体积95%乙醇沉淀多糖,4℃静置16 h后,5000rpm离心20 min,收集沉淀物,用蒸馏水溶解并定容,进行多糖测定,测定方法为苯酚-硫酸法,发酵液杏鲍菇菌丝数为1.31×103个/mL,比对照提高80.06%,胞外多糖产量提高70.06%。
实施例5:
(1)活化竹荪菌种:将竹荪母种接种于由以下组成的斜面保藏培养基上。去皮土豆200g切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸30min,纱布过滤后得到滤液,加入葡萄糖20g,蛋白胨1g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,琼脂2g,加热溶解后补水至1L,pH自然,在115℃下灭菌25min。接种后,于24℃温度下培养5d。
(2)液体种子的培养:在1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3 g K2HPO4,1.5 g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8,115℃灭菌30min。在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗下在斜面保藏培养基上活化生长的菌种,制成菌悬液,按液体种子培养基体积的6%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4d,转速为180r/min,培养温度为23~26℃;
(3)植物浸提液制备:称取20目筛筛下物的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,间歇搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
(4)配制液体发酵培养基:称取麸皮100g,加500mL水,煮沸20min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5g,葡萄糖5g,可溶性淀粉15g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O 2g,植物浸提液100mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30min;
(5)按液体发酵培养基体积的5%接入液体种子液,接种后摇匀静置培养6 h,在摇床上发酵5d,培养温度为25℃,转速为200r/min。
(6)在液体发酵培养基中以等量水替代植物浸提液,其余所有操作相同进行发酵培养,作为对照。当发酵结束时,采用血球计数板直接计数方法测定发酵液中菌丝数量。取与对照同体积的发酵液,加入2%的NaCl,溶解后5000rpm离心15min;上清液加三倍体积95%乙醇沉淀多糖,4℃静置16 h后,5000rpm离心20 min,收集沉淀物,用蒸馏水溶解并定容,进行多糖测定,测定方法为苯酚-硫酸法,发酵液竹荪菌丝数为1.42×103个/mL,比对照提高91.32%,胞外多糖产量提高71.32%。
实施例6:
(1)斜面保藏培养基配制和菌种活化:去皮土豆200g切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸30min,纱布过滤后得到滤液,加入葡萄糖20g,蛋白胨1g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5 g,琼脂20 g,加热溶解后补水至1L,pH自然,在115℃下灭菌25min。将茶树菇母种接种后,于24℃温度下培养5d。
(2)液体种子的培养:在1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3gK2HPO4,1.5g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8,115℃灭菌30min。在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗活化的菌种,制成菌悬液,按6%接种量接入液体种子培养基中,摇床培养2~4d,转速为180r/min,培养温度为23~26℃;
(3)植物浸提液制备:称取20目筛筛下物的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,间歇搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
(4)配制液体发酵培养基:称取麸皮150g,加600mL水,煮沸20min,过滤得到滤液,加入蛋白胨6g,葡萄糖10g,可溶性淀粉10g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O 2g,植物浸提液150mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30min;
(5)按发酵培养基体积的5%接入液体种子液,接种后摇匀静置培养6 h,在摇床上发酵5d,培养温度为25℃,转速为200r/min。
(6)在液体发酵培养基中以等量水替代植物浸提液,其余所有操作相同进行发酵培养,作为对照。当发酵结束时,采用血球计数板直接计数方法测定发酵液中菌丝数量。取与对照同体积的发酵液,分别加入2%的NaCl,溶解后5000rpm离心15min;上清液加三倍体积95%乙醇沉淀多糖,4℃静置16h后,5000rpm离心20min,收集沉淀物,用蒸馏水溶解并定容,进行多糖测定,测定方法为苯酚-硫酸法,发酵液茶树菇菌丝数为1.38×103个/mL,比对照提高98.14%,胞外多糖产量提高88.64%。
Claims (3)
1.一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,其特征在于:所述方法步骤如下:
步骤一:采购菌株;
步骤二:配制斜面保藏培养基:取200 g去皮土豆切成小块,加蒸馏水800mL,煮沸20~30min,纱布过滤后得到滤液,向滤液中加入20g葡萄糖、1g蛋白胨、1g KH2PO4、0.5g MgSO4·7H2O、20g琼脂,加热溶解后补水至总体积为1L,pH自然,在115℃下灭菌20~30 min;
步骤三:活化菌株:将步骤一的菌株接种于步骤二的斜面保藏培养基上,于22.5~25.5℃温度下培养4~8 d,培养后得到菌丝体;
步骤四:液体种子培养基配制及培养:1L水中加入20g葡萄糖,2g蛋白胨,1g酵母膏,3gK2HPO4,1.5g MgSO4·7H2O,用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8~6.0,115℃灭菌25~30min;
在无菌操作条件下,用10mL无菌生理盐水荡洗步骤三斜面保藏培养基上的菌丝体制成菌悬液,按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液,摇床培养2~4 d,转速为170~200r/min,培养温度为23~26℃;
步骤五:植物浸提液制备:称取过20目筛的植物干燥粉末,按照植物干燥粉末:水=1:10的质量比加水,搅拌均匀,浸提24 h,过滤的滤液即为植物浸提液;
步骤六:液体发酵培养基的配制:称取麸皮100~200g,加500mL水,煮沸15~20 min,过滤得到滤液,加入蛋白胨5~7g,葡萄糖10~15 g,可溶性淀粉5~10 g,KH2PO4 4g,MgSO4·7H2O2g,植物浸提液100~500mL,以水补足1L,溶解后调节pH为5.5~6.0,在115℃下灭菌30 min;
步骤七:按步骤六液体发酵培养基体积的4~8%接入步骤四得到的种子液,接种后摇匀静置培养4~8 h,在摇床上发酵4~6 d,培养温度为23~25℃,搅拌转速为180~220 r/min。
2.根据权利要求1所述的一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,其特征在于:步骤一中,所述的菌株为香菇881、杏鲍菇90、茶树菇2号、金针菇991或竹荪D02。
3.根据权利要求1所述的一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法,其特征在于:步骤五中,所述的植物浸提液所用植物为樟科润楠属植物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810420516.XA CN108486188A (zh) | 2018-05-04 | 2018-05-04 | 一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810420516.XA CN108486188A (zh) | 2018-05-04 | 2018-05-04 | 一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108486188A true CN108486188A (zh) | 2018-09-04 |
Family
ID=63352666
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810420516.XA Pending CN108486188A (zh) | 2018-05-04 | 2018-05-04 | 一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108486188A (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109370920A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-02-22 | 迁安贝丽莱生物科技有限公司 | 一种紫芝菌株的培养方法以及一种紫芝液体发酵方法 |
CN109370917A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-02-22 | 贵州大学 | 一种添加油茶粕蛋白酶解液提高茶薪菇液体发酵菌丝体产量的方法 |
CN109486686A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-03-19 | 迁安贝丽莱生物科技有限公司 | 一种菌丝体的培养方法和一种液体发酵方法 |
CN110283731A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-09-27 | 河北省微生物研究所 | 香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080160583A1 (en) * | 2007-01-03 | 2008-07-03 | I Chuan Bio-Tech Corp. | Process for co-fermentation of phellinus linteus fungus with chinese herbal medicines |
CN102199543A (zh) * | 2011-01-19 | 2011-09-28 | 成都医学院 | 一种新的茯苓菌株及其液体发酵方法 |
CN102533903A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-07-04 | 江南大学 | 一种具有抗氧化活性的茶树菇发酵液多糖的制备方法 |
CN102559800A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-07-11 | 江南大学 | 一种添加中药提取液的茶树菇深层发酵方法 |
-
2018
- 2018-05-04 CN CN201810420516.XA patent/CN108486188A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080160583A1 (en) * | 2007-01-03 | 2008-07-03 | I Chuan Bio-Tech Corp. | Process for co-fermentation of phellinus linteus fungus with chinese herbal medicines |
CN102199543A (zh) * | 2011-01-19 | 2011-09-28 | 成都医学院 | 一种新的茯苓菌株及其液体发酵方法 |
CN102533903A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-07-04 | 江南大学 | 一种具有抗氧化活性的茶树菇发酵液多糖的制备方法 |
CN102559800A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-07-11 | 江南大学 | 一种添加中药提取液的茶树菇深层发酵方法 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
南京中医药大学: "《中药大词典 第2版,上》", 30 June 2014, 上海科学技术出版社 * |
张卫明等: "《中国植物胶资源开发研究与利用》", 31 December 2008, 东南大学出版社 * |
张胜友: "《食用菌菌种生产技术》", 30 June 2017, 中国科学技术出版社 * |
彭彪等: "6种木屑培养基对银耳菌种生长的影响", 《安徽农业科学》 * |
段红福等: "《药物学基础与临床应用》", 30 September 2017, 吉林科学技术出版社 * |
王林等: "五味中药对灵芝菌液体发酵过程的影响", 《食品与发酵工业》 * |
邱奉同等: "《食用菌栽培技术》", 31 July 2014, 山东人民出版社 * |
陈天佑: "《绿色食品》", 30 November 2002, 西北农林科技大学出版社 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109370917A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-02-22 | 贵州大学 | 一种添加油茶粕蛋白酶解液提高茶薪菇液体发酵菌丝体产量的方法 |
CN109370920A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-02-22 | 迁安贝丽莱生物科技有限公司 | 一种紫芝菌株的培养方法以及一种紫芝液体发酵方法 |
CN109486686A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-03-19 | 迁安贝丽莱生物科技有限公司 | 一种菌丝体的培养方法和一种液体发酵方法 |
CN109370920B (zh) * | 2018-12-11 | 2022-01-07 | 北京贝丽莱斯生物科技有限公司 | 一种紫芝菌株的培养方法以及一种紫芝液体发酵方法 |
CN109486686B (zh) * | 2018-12-11 | 2022-01-07 | 北京贝丽莱斯生物科技有限公司 | 一种菌丝体的培养方法和一种液体发酵方法 |
CN110283731A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-09-27 | 河北省微生物研究所 | 香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108486188A (zh) | 一种真菌菌丝发酵高产真菌多糖的方法 | |
CN101702984B (zh) | 一种利用真菌诱导子提高桑黄黄酮产量的桑黄菌丝体液体发酵方法 | |
CN104145719A (zh) | 一种冬虫夏草菌菌丝体发酵生产方法 | |
CN103342593A (zh) | 一种有机硒作物营养剂及其制备方法 | |
CN102687640A (zh) | 一种樟芝真菌的液体深层培养方法及樟芝真菌的多糖提取方法 | |
CN105309750A (zh) | 一种高含量牛樟芝真菌活性多糖和三萜精粉及其副产品的综合利用生产工艺 | |
CN105875198B (zh) | 一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法 | |
CN106801017A (zh) | 一种高产耐热蛋白酶及虫草素的蛹虫草菌株筛选及诱变方法 | |
CN103270887A (zh) | 蚕蛹北冬虫夏草工厂化栽培技术 | |
CN104126415A (zh) | 黄芪秸秆和芪头固体复合培养料及用其生产杏鲍菇的方法 | |
CN109479622A (zh) | 一种茶树菇菌种工厂化生产方法 | |
CN103283493B (zh) | 一种广东虫草子实体规模化栽培方法 | |
CN113455286B (zh) | 高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用 | |
CN108342429A (zh) | 一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法 | |
CN102296032A (zh) | 转葡糖苷酶及其制备和固定化方法 | |
CN102876584B (zh) | 炭角菌菌株及其用途 | |
CN102318544A (zh) | 一种北虫草水培方法 | |
CN102318545B (zh) | 一种猴头菇水培方法 | |
CN105624232B (zh) | 提高猴头菌发酵多糖的方法 | |
CN103250564A (zh) | 一种板栗菌根菌人工培养方法 | |
CN106865804A (zh) | 一种中生菌素母药清洁生产方法 | |
CN103704022A (zh) | 一种以五龄桑蚕为载体培养人工虫草的方法 | |
CN113999778B (zh) | 一种深绿木霉微菌核及其制剂的制备方法和应用 | |
CN107926482A (zh) | 一种利用液体培养基生产蛹虫草子实体的方法 | |
CN107057926B (zh) | 一种混合果汁红曲酒的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180904 |