CN110283731A - 香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物发酵，特别是指香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法。它包括将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991接种到灭菌后的发酵培养基中进行深层通气发酵制备深层培养发酵液；将深层发酵培养液接种于产菌丝培养液中进行组培瓶培养制备香菇菌丝体等工艺步骤。本发明解决了现有技术中存在的发酵法生产香菇菌丝体投入高，产率低，技术难度较大且需要较大的设备投入等问题，具有产品质量及工艺稳定，生产成本低等优点。

Description

香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法
技术领域
本发明涉及微生物发酵，特别是指香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法。
背景技术
香菇(Lentinus edodes(Berk.)sing)为大型食用真菌，别名花蕈、香信、椎茸、冬菰、厚菇、花菇，香菇防治癌症的范围广泛，已用于临床治疗。香菇含有多种维生素、矿物质，对促进人体新陈代谢，提高机体适应力有很大作用。香菇还对糖尿病、肺结核、传染性肝炎、神经炎等起治疗作用，又可用于消化不良、便秘、减肥等。中国不少古籍中记载香菇“益气不饥，治风破血和益胃助食”。民间用来助痘疮、麻疹的诱发，治头痛、头晕。现代研究证明，香菇多糖可调节人体内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤180的抑制率为97.5％，对艾氏癌的抑制率为80％。香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力。
目前，人工栽培香菇已成为菌类食品的主要品种，但通过液体发酵制备菌丝体的产品尚不多见，一般仅见于通过液体发酵生产香菇多糖等代谢产物用于食品、保健品或者药品。其主要原因是发酵法生产香菇菌丝体投入高，产率低，技术难度较大且需要较大的设备投入。申请人检索到的资料显示现有方法制备的产品中香菇多糖含量一般在4.0-11.0g/L之间。
通过发酵的方法生产食药用真菌，用发酵液替代子实体提取有效成份，是目前高效利用食药用真菌的研究热点和新型的技术方法，但得到大量纯香菇菌丝体的方法还未见报道，雷色香等“一种香菇菌粉”和赵晶晶等“一种用于提取香菇多糖的香菇菌丝体的生产方法”均使用固体培养基培养，最终产物中菌丝体和培养基混在一起，结合紧密且难于分离，为菌丝体的后续利用及多糖提取带来了较大困难。
发明内容
本发明的目的在于公开了一株香菇菌种以及利用其简易制备香菇菌丝体的方法，采用两步法发酵生产工艺，首先利用发酵罐进行深层发酵，高密度培养香菇菌丝体；然后再采用组培瓶静止发酵工艺，在组培瓶表面形成一层菌丝体，培养液中产生多糖。生产所得菌丝体可用于食品、保健品或药品的工业生产，培养液中的多糖经过醇沉等工艺可以作为香菇多糖的原料。
本发明的整体技术构思是：
一株香菇菌种，分类命名为香菇Lentinus edodes，保藏编号为CGMCC NO.16991。
该菌株于2018年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类名为香菇(Lentinus edodes)，保藏编号为CGMCC No.16991，保藏机构的地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
该菌种的菌落形态及生理生化特性如下：
菌丝洁白，浓密，丝状菌丝，初培养为放射状，菌落生长整齐。最适生长温度25℃，pH值:3-6，可以在PDA培养基上良好生长，一般保藏在0-4℃，长期保存方法为超低温冻结。该培养物不会危及人类健康或动、植物病原或污染环境。
利用香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991简易制备香菇菌丝体的方法，包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为3％-10％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.5-0.7:1、发酵温度为23℃-30℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodesCGMCC NO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml不加琼脂的PDA培养基10mg-30mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为23℃-30℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉5g-15g；麦芽糖1g-8g；葡萄糖20g-30g；蛋白胨0.2g--1.5g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
本发明的具体技术构思还有：
为利于组培瓶内的香菇菌丝体生长，优选的技术方案是，所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为40ml-150ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液3ml-8ml。
更为优选的技术方案是，所述的步骤B中组培瓶容积为650ml。
为避免香菇菌丝体变色，影响产品的外观，优选的技术方案是，所述的步骤B中的培养是在避光状态下进行的暗培养。
为对本发明中的胞外多糖含量进行准确测定，优选的技术方案是，所述的步骤B中胞外多糖的测定采用苯酚—硫酸法。上述测定方法属于现有技术并被记载于《食用菌中粗多糖含量测定方法》(中华人民共和国农业行业标准NY/T 1676-2008)中。
为便于菌丝体的保藏及储运，同时便于其使用，优选的技术方案是：还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。所述的干制包括但不局限于采用烘干或风干。
为便于工业化生产，优选的技术方案是，将香菇Lentinus edodes CGMCCNO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为3％-10％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
更为优选的技术方案是，所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为3％-10％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯150g-500g煮10-30min取汁、葡萄糖10g-40g、琼脂15g-25g、水1000ml，pH值自然。
用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入100ml-300ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种3-5瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养7-10天，得到种子液。
本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：
1、便于有效成分的提取，生产工艺及产品质量稳定，菌丝体可以从中提取多糖、氨基酸等多种成分，本发明获取的菌丝体便于实现工业化生产，成分稳定，固定生产和提取工艺较为容易。采用传统方法从香菇子实体中提取时产品内的成份会因为环境因素改变而变化，对于后期的提取和工艺都不容易固定。
2、生产周期短，采用本发明的方法生产的菌丝体可以在30-40天完成批量化生产，反之，如果采用传统方法从香菇的子实体中提取，首先要栽培生产出子实体，这需要70-150天的时间，生产周期长。
3、采用组培瓶静止培养设备工艺简单，成本较低，可使生产成本下降50％以上。
4、经申请人检测，采用本发明的方法所制备的菌丝体内胞外多糖不低于14.0g/L，相比现有方法制备的产品中香菇多糖含量(一般在4.0-11.0g/L)大为提高。
5、菌丝体通过干制可以方便实现产品的保质及储运，不易虫蛀及受潮，同时便于直接食用或粉碎利用。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不应理解为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据说明书做出的等效技术手段替换，均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
一株香菇菌种，分类命名为香菇Lentinus edodes，保藏编号为CGMCC NO.16991。
利用香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991简易制备香菇菌丝体的方法，包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为3％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.5:1、发酵温度为23℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodes CGMCCNO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml液体PDA培养基10mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为23℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉5g；麦芽糖1g；葡萄糖20g；蛋白胨0.2g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为40ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液3ml。
所述的步骤B中组培瓶容积为650ml。
所述的步骤B中的培养是在避光状态下进行的暗培养。
所述的步骤B中胞外多糖的测定采用苯酚—硫酸法。上述测定方法属于现有技术并被记载于《食用菌中粗多糖含量测定方法》(中华人民共和国农业行业标准NY/T 1676-2008)中。
还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。
将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为3％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为3％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯150g切片后煮10min取汁、葡萄糖10g、琼脂15g、水1000ml，pH值自然。
用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入100ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种3瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养7天，得到种子液。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：
利用香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991简易制备香菇菌丝体的方法，包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为10％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.7:1、发酵温度为30℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodes CGMCCNO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml液体PDA培养基30mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为30℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉15g；麦芽糖8g；葡萄糖30g；蛋白胨1.5g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为150ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液8ml。
还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。
将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为3％-10％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为10％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯500g煮30min取汁、葡萄糖40g、琼脂25g、水1000ml，pH值自然。
用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入300ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种5瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养10天，得到种子液。
其余内容同实施例1。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于：
利用香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991简易制备香菇菌丝体的方法，包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为7％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.6:1、发酵温度为25℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodes CGMCCNO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml不加琼脂的PDA培养基20mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为25℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉10g；麦芽糖4g；葡萄糖25g；蛋白胨0.9g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为90ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液5ml。
还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。
将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为6％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为6％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯320g煮20min取汁、葡萄糖25g、琼脂20g、水1000ml，pH值自然。
用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入200ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种4瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养9天，得到种子液。
其余内容同实施例1。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：
利用香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991简易制备香菇菌丝体的方法，包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为4.5％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.5:1、发酵温度为24℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodes CGMCCNO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml不加琼脂的PDA培养基15mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为24℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉8g；麦芽糖3g；葡萄糖22g；蛋白胨0.5g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为60ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液4ml。
还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。
将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为3％-10％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为5％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯200g煮15min取汁、葡萄糖18g、琼脂18g、水1000ml，pH值自然。
用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入150ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种3瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养8天，得到种子液。
其余内容同实施例1。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于：
利用香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991简易制备香菇菌丝体的方法，包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为8％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.7:1、发酵温度为28℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodes CGMCCNO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml不加琼脂的PDA培养基25mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为28℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉12g；麦芽糖6g；葡萄糖28g；蛋白胨1.2g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为120ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液7ml。
还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。
将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为9％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为9％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯450g煮28min取汁、葡萄糖35g、琼脂22g、水1000ml，pH值自然。
用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入100-300ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种5瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养9天，得到种子液。
其余内容同实施例1。

Claims (10)

1.一株香菇菌种，分类命名为香菇Lentinus edodes，保藏编号为CGMCC NO.16991。
2.利用权利要求1的菌种简易制备香菇菌丝体的方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
A、深层通气发酵：按照接种量为3％-10％的体积比将菌种接种于发酵罐内灭菌后的发酵培养基，在通气率为0.5-0.7:1、发酵温度为23℃-30℃的条件下发酵不低于5天，测定菌丝体湿重不低于18g/L结束发酵得到深层培养发酵液；菌种采用香菇Lentinus edodesCGMCC NO.16991，发酵培养基采用不加琼脂的PDA培养基，按照每1000ml不加琼脂的PDA培养基10mg-30mg的添加量在其中加入维生素B1；
B、组培瓶静止发酵：将产菌丝体培养基置于组培瓶中，灭菌后接种步骤A中的深层培养发酵液，在温度为23℃-30℃的条件下培养20-30天，当检测胞外多糖不低于14.0g/L时结束发酵得到香菇菌丝体，产菌丝培养基由如下原料组成：
马铃薯淀粉5g-15g；麦芽糖1g-8g；葡萄糖20g-30g；蛋白胨0.2g-1.5g；水1000ml；pH值＝5.0-7.0。
3.根据权利要求2所述的简易制备香菇菌丝体的方法，其特征在于所述的步骤B中组培瓶内产菌丝培养基的装量为40ml-150ml，接种量为每个装有产菌丝培养基的组培瓶中接入步骤A的深层培养发酵液3ml-8ml。
4.根据权利要求3所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于所述的步骤B中组培瓶容积为650ml。
5.根据权利要求2所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于所述的步骤B中的培养是在避光状态下进行的暗培养。
6.根据权利要求2所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于所述的步骤B中胞外多糖的测定采用苯酚—硫酸法。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于还包括一步骤C，该步骤的工艺条件如下：
C、将步骤B中培养好的香菇菌丝体取出，洗净菌丝体表面的异物后干制封存。
8.根据权利要求2-6中任一项所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于是将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991经过扩大培养后，按照种子液：培养液的体积比为3％-10％的接种量将种子液接种于灭菌后的发酵培养基。
9.根据权利要求8所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于所述的扩大培养及接种过程包括：
(1)将香菇Lentinus edodes CGMCC NO.16991斜面菌种经扩大培养后制成种子液；
(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为3％-10％的接种量接种于灭菌后的发酵培养基，进行通气发酵；
所述的斜面菌种培养基由如下原料组成：
去皮马铃薯150g-500g煮10-30min取汁、葡萄糖10g-40g、琼脂15g-25g、水1000ml，pH值自然。
10.根据权利要求9所述的快速制备香菇菌丝体的方法，其特征在于用于扩大培养制备种子液的种子培养基选用不加琼脂的PDA培养基，种子液的培养条件是：
按照每瓶接入100ml-300ml的装量将种子培养基置于500ml三角瓶中灭菌，按照每个三角瓶接种3-5瓶的数量将斜面菌种接入灭菌后的种子培养基，在温度为25℃、转速为180转/分钟的条件下振荡培养7-10天，得到种子液。
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