CN104893984B - 一种冠突散囊菌株 - Google Patents
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Abstract
一种冠突散囊菌株,其保藏号为CGMCC No.10610。本发明还提供了冠突散囊菌株CGMCC10610在制备黑茶中的应用。相比现有的冠突散囊菌株,冠突散囊菌株CGMCC10610具有以下优点:(1)发酵启动快,将冠突散囊菌株CGMCC10610接种于PDA平板上活化,三天即可长出明显黄色菌丝,五天可用于一级种子液制备;(2)适应性强,在不加入任何外源能源的情况下,冠突散囊菌株CGMCC10610仅仅依靠茶提取液就能够快速生长繁殖,发酵菌丝干重高达0.6404g/100mL,而现有冠突散囊菌株的发酵菌丝干重仅0.3743g/100mL;(3)发酵茶产品茶香突出,感官评价显示,冠突散囊菌株CGMCC10610发酵出的茶产品香气浓郁、稳定、不含杂气,而且茶产品滋味醇厚、不苦不涩。
Description
技术领域
本发明属于微生物的应用领域,具体地说涉及一种冠突散囊菌株。
背景技术
黑茶是在加工过程中进行微生物发酵而制得的一种特种茶,具有显著的减肥降脂降糖的功能,因此越来越受到民众的喜爱。
在茯砖黑茶的生产过程中,常用的发酵优势菌为冠突散囊菌,而冠突散囊菌的性能与黑茶产品的质量密切相关,现有的冠突散囊菌株适应性弱、发酵启动慢,所得黑茶产品的质量参差不齐,品质难以得到保证,尤其是在茶香气方面一直有香气浓淡不稳定、存在杂气等缺点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种发酵菌丝体含量高,发酵茶产品滋味醇厚、香气浓郁、稳定、不含杂气的冠突散囊菌株。
为解决上述技术问题,本发明提供一种从优质的黑茶样品中经过反复的筛选及性能优化试验研究而获得的冠突散囊菌株,其保藏号为CGMCC No.10610,保藏日期为2015年3月11日,分类命名(拉丁文学名)为冠突散囊菌(Eurotium cristatum),保藏菌株名为冠突散囊菌G39,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
冠突散囊菌株CGMCC10610具有以下性质:
冠突散囊菌株CGMCC10610在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上生长较快,培养3天菌落直径达6—10mm,呈淡黄色;28℃,7天达20—25mm,周边黄色近似橄榄浅黄色,中心部位颜色较深,近似橄榄褐色,呈现大量黄色具饰菌丝,有大量闭囊壳处于具饰菌丝网中;14天,菌落整体呈褐色,边缘有少量黄色菌丝,菌落中央有零星黑褐色液体渗出,菌落反面黑褐色,色素扩散到基质中。
本发明还提供了冠突散囊菌株CGMCC10610在制备黑茶中的应用。
本发明还提供了冠突散囊菌株CGMCC10610的培养方法,包括以下步骤:培养基的配制:称取去皮马铃薯200g,加水煮烂,用纱布过滤,然后在加热的条件下加入15—20g琼脂粉,继续加热并搅拌,待琼脂粉溶解完后,加入20g葡萄糖,搅拌均匀,冷却后再补足水分至1000mL,包扎,121℃灭菌20min,冷却后,倒入平板;培养步骤:在无菌条件下,将保藏号为CGMCC No.10610的冠突散囊菌株接种于平板,然后在28℃条件下恒温培养5—7天。
本发明还提供一种制备黑茶用冠突散囊菌种子液的制备方法,包括以下步骤:取浓度为4—6%的茶原料提取液,除菌处理后作为液体培养基,将保藏号为CGMCC No.10610的冠突散囊菌株在PDA平板上培养,用水洗脱后制成孢子悬浊液,在无菌条件下,向所述液体培养基中接种孢子悬浊液,孢子悬浊液浓度为4.0×106—6.0×106个/mL,接种量为3—12(v/v)%,在溶氧60—100%、压力0.02—0.05MPa、温度28—30℃、搅拌转速50—200rpm的发酵条件下,发酵培养4—7天后获得1级种子液,最后逐级接种培养,获得的2级以上的种子液即为所述冠突散囊菌种子液。
相比现有的冠突散囊菌株,冠突散囊菌株CGMCC10610具有以下优点:
(1)发酵启动快,将冠突散囊菌株CGMCC10610接种于PDA平板上活化,三天即可长出明显黄色菌丝,五天可用于一级种子液制备;
(2)适应性强,在不加入任何外源能源的情况下,冠突散囊菌株CGMCC10610仅仅依靠茶提取液就能够快速生长繁殖,发酵菌丝干重高达0.6404g/100mL,而现有冠突散囊菌株的发酵菌丝干重仅0.3743g/100mL;
(3)发酵茶产品茶香突出,感官评价显示,冠突散囊菌株CGMCC10610发酵出的茶产品香气浓郁、稳定、不含杂气,而且茶产品滋味醇厚、不苦不涩。
另外,冠突散囊菌株CGMCC10610还可以用于以下方面:
(1)冠突散囊菌株CGMCC10610能在多种植物原料及其提取液中生长,可用于花草茶的发酵生产;
(2)冠突散囊菌株CGMCC10610在绿茶提取液中发酵能够使得茶的汤中的黄酮类和咖啡碱类含量上升,可以用于发酵生产黄酮及咖啡碱;
(3)冠突散囊菌株CGMCC10610发酵提取物及其发酵产品具有减肥降脂,降血糖,促进肠道吸收等多种功效,并且在发酵过程中能产生多种酵素成分。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述:
实施例1
冠突散囊菌株CGMCC10610的培养方法,包括以下步骤:
培养基的配制:称取去皮马铃薯200g,切块,加水煮烂,用纱布过滤,然后在加热的条件下加入20琼脂粉,继续加热并搅拌,待琼脂粉溶解完后,加入葡萄糖,搅拌均匀,冷却后再补足水分至1000mL,包扎,121℃灭菌20min,冷却后,倒入平板;培养步骤:在无菌条件下,将冠突散囊菌株CGMCC10610于平板上划线,划线结束后将平板倒置于28℃的恒温培养箱中培养5天。
实施例2
冠突散囊菌株CGMCC10610的培养方法,包括以下步骤:
培养基的配制:称取去皮马铃薯200g,切块,加水煮烂,用纱布过滤,然后在加热的条件下加入15g琼脂粉,继续加热并搅拌,待琼脂粉溶解完后,加入葡萄糖,搅拌均匀,冷却后再补足水分至1000mL,包扎,121℃灭菌20min,冷却后,倒入平板;培养步骤:在无菌条件下,将冠突散囊菌株CGMCC10610于平板上划线,划线结束后将平板倒置于28℃的恒温培养箱中培养7天。
实施例3
制备黑茶用冠突散囊菌种子液的制备方法,包括以下步骤:
(1)将冠突散囊菌株CGMCC10610接种于PDA平板,置于28℃的恒温培养箱中培养至菌落长满平板,在无菌条件下,向长满菌落的平板中加入10mL无菌蒸馏水,刮取平板上的黄色菌丝于无菌蒸馏水,用注射器吸取平板中的浑浊液放入50mL离心管中,加入无菌小玻璃珠,于离心机中离心5min(转数:3000r/min),经脱脂棉过滤后即得孢子悬浊液,最后将孢子悬浊液浓度调整到5.0×106个/mL;
(2)取浓度为4%的茶原料提取液,除菌处理后作为液体培养基,在无菌条件下,向所述液体培养基中接种孢子悬浊液,接种量为8(v/v)%,在溶氧80%、压力0.02MPa、温度29℃、搅拌转速200rpm的发酵条件下,发酵培养5天后获得1级种子液,最后逐级接种培养,获得的2级种子液即为所述冠突散囊菌种子液。
实施例4
制备黑茶用冠突散囊菌种子液的制备方法,包括以下步骤:
(1)将冠突散囊菌株CGMCC10610接种于PDA平板,置于28℃的恒温培养箱中培养至菌落长满平板,在无菌条件下,向长满菌落的平板中加入10mL无菌蒸馏水,刮取平板上的黄色菌丝于无菌蒸馏水,用注射器吸取平板中的浑浊液放入50mL离心管中,加入无菌小玻璃珠,于离心机中离心5min(转数:3000r/min),经脱脂棉过滤后即得孢子悬浊液,最后将孢子悬浊液浓度调整到4.0×106个/mL;
(2)取浓度为5%的茶原料提取液,除菌处理后作为液体培养基,在无菌条件下,向所述液体培养基中接种孢子悬浊液,接种量为12(v/v)%,在溶氧60%、压力0.04MPa、温度30℃、搅拌转速125rpm的发酵条件下,发酵培养7天后获得1级种子液,最后逐级接种培养,获得的3级种子液即为所述冠突散囊菌种子液。
实施例5
制备黑茶用冠突散囊菌种子液的制备方法,包括以下步骤:
(1)将冠突散囊菌株CGMCC10610接种于PDA平板,置于28℃的恒温培养箱中培养至菌落长满平板,在无菌条件下,向长满菌落的平板中加入10mL无菌蒸馏水,刮取平板上的黄色菌丝于无菌蒸馏水,用注射器吸取平板中的浑浊液放入50mL离心管中,加入无菌小玻璃珠,于离心机中离心5min(转数:3000r/min),经脱脂棉过滤后即得孢子悬浊液,最后将孢子悬浊液浓度调整到6.0×106个/mL;
(2)取浓度为6%的茶原料提取液,除菌处理后作为液体培养基,在无菌条件下,向所述液体培养基中接种孢子悬浊液,接种量为3(v/v)%,在溶氧100%、压力0.05MPa、温度28℃、搅拌转速50rpm的发酵条件下,发酵培养4天后获得1级种子液,最后逐级接种培养,获得的4级种子液即为所述冠突散囊菌种子液。
实施例6
冠突散囊菌株CGMCC10610和现有冠突散囊菌株(湖南益阳牌茯砖茶中分离所得的冠突散囊菌株、湘茶集团销售的茯砖茶中分离所得的冠突散囊菌株)在相同条件下的发酵对照试验,发酵步骤如下:
1.孢子悬浊液的制备
1)菌种活化:取冠突散囊菌株接种于PDA平板,置于28℃的恒温培养箱中培养至菌落长满平板;
2)制备孢子悬浊液:在无菌条件下,向长满菌落的平板中加入10mL无菌蒸馏水,刮取平板上的黄色菌丝于无菌蒸馏水,用注射器吸取平板中的浑浊液放入50mL离心管中,加入无菌小玻璃珠,于离心机中离心5min(转数:3000r/min),经脱脂棉过滤后即得孢子悬浊液,最后将孢子悬浊液浓度调整到5.0×106个/mL;
2.接种发酵
1)取浓度为4%的绿茶提取液,除菌处理后作为液体培养基,在无菌条件下,向所述液体培养基中接种孢子悬浊液,接种量为7(v/v)%,发酵培养5天后获得一级种子液;
2)在无菌条件下,向100mL固形物含量为5%的绿茶提取液中接入8mL一级种子液;
3)将接种后的绿茶提取液置于温度28℃,转数150r/min的恒温摇床中培养7天得到茶发酵液;
4)对茶发酵液进行均质、干燥处理后获得黑茶粉。
比较冠突散囊菌株CGMCC10610和现有冠突散囊菌株在发酵过程中的差异发现,冠突散囊菌株CGMCC10610在菌种活化阶段表现出明显的优势,五天便已长满整个平板,而湖南益阳牌茯砖茶中分离所得的冠突散囊菌株则需要七天、湘茶集团销售的茯砖茶中分离所得的冠突散囊菌株需要七天半;一级种子液接入绿茶提取液后,冠突散囊菌株CGMCC10610三天出现肉眼可见小颗粒,七天颗粒生长饱满,均匀分布于茶提取液中,而现有冠突散囊菌株在绿茶提取液中生长缓慢,五天才出现肉眼可见小颗粒,而且颗粒不均易结团,有明显的粘壁现象;发酵七天后,冠突散囊菌株CGMCC10610的发酵菌丝干重达0.6404g/100mL,且无自融现象,而湖南益阳牌茯砖茶中分离所得的冠突散囊菌株的发酵菌丝干重仅0.3743g/100mL,湘茶集团销售的茯砖茶中分离所得的冠突散囊菌株的发酵菌丝干重仅0.3012g/100mL,菌丝均有自融现象出现。可以看出,冠突散囊菌株CGMCC10610表现出了对茶基质的强适应性,而且发酵启动快。分别冲泡三株冠突散囊菌株发酵出的黑茶粉,并进行感官评价,结果如下表1所示:
表1
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种冠突散囊菌株,其保藏号为CGMCC No.10610。
2.如权利要求1所述的冠突散囊菌株在制备黑茶中的应用。
3.如权利要求1所述的冠突散囊菌株的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:培养基的配制:称取去皮马铃薯200g,加水煮烂,用纱布过滤,然后在加热的条件下加入15—20g琼脂粉,继续加热并搅拌,待琼脂粉溶解完后,加入20g葡萄糖,搅拌均匀,冷却后再补足水分至1000mL,包扎,121℃灭菌20min,冷却后,倒入平板;培养步骤:在无菌条件下,将保藏号为CGMCC No.10610的冠突散囊菌株接种于平板,然后在28℃条件下恒温培养5—7天。
4.一种制备黑茶用冠突散囊菌种子液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:取浓度为4—6%的茶原料提取液,除菌处理后作为液体培养基,将保藏号为CGMCC No.10610的冠突散囊菌株在PDA平板上培养,用水洗脱后制成孢子悬浊液,在无菌条件下,向所述液体培养基中接种孢子悬浊液,孢子悬浊液浓度为4.0×106—6.0×106个/mL,接种量为3—12(v/v)%,在溶氧60—100%、压力0.02—0.05MPa、温度28—30℃、搅拌转速50—200rpm的发酵条件下,发酵培养4—7天后获得1级种子液,最后逐级接种培养,获得的2级及以上的种子液即为所述冠突散囊菌种子液。
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