CN109055235A - 一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法 - Google Patents

一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法 Download PDF

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CN109055235A CN201810945189.XA CN201810945189A CN109055235A CN 109055235 A CN109055235 A CN 109055235A CN 201810945189 A CN201810945189 A CN 201810945189A CN 109055235 A CN109055235 A CN 109055235A
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Abstract

本申请公开一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法。通过对普洱茶中优势真菌菌株或其他有效目的真菌菌株的活化，以晒青毛茶为基质进行菌种的纯培养；纯培养得到的菌种按照一定比例接种至灭菌的含一定水分的晒青毛茶中，在适宜的温湿度条件下进行菌种的扩大培养；待菌落成熟后，获得用于普洱茶渥堆的外源接种菌种。菌种中有效菌数量可达到1*108cfu/g以上，按照一定比例接种至云南大叶种晒青毛茶中可实现普洱茶的外源接种渥堆发酵，进而缩短普洱茶渥堆发酵时间，稳定普洱茶品质，提升普洱茶保健功效。

Description

一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法
技术领域
本申请属于茶叶加工技术领域，具体地说，涉及一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法。
背景技术
普洱茶以云南大叶种茶树[Camellia sinensis(Linn)var.assamica(MastersKitamura)]鲜叶加工而成的晒青毛茶为原料，并在地理标志保护范围内采取特定的加工工艺制成，是具有独特品质特征的茶叶。按其加工工艺及品质特征，普洱茶分为普洱生茶和普洱熟茶两种类型。区别于普洱生茶，普洱熟茶色泽褐红，滋味醇和，具有独特的陈香，并具有降血脂、降血糖等保健功效。普洱熟茶加工工艺流程为：云南大叶种鲜叶→杀青→揉捻→日光干燥→毛茶分级归堆→拼配→潮水渥堆→自然干燥→陈化→筛分拣剔→干燥→成品。
渥堆是普洱熟茶的制作过程中的独特工艺，也是决定熟茶品质的关键点。“渥堆”的实质是以微生物代谢为中心，在胞外酶、湿热以及微生物自身代谢作用下的综合活动过程，其间同时进行着厌氧发酵和耗氧发酵。渥堆所需要菌种多是来自于晒青毛茶和发酵环境，也可外源接种特定菌种制备具有特色普洱熟茶。
现有技术通常以大米或其他非茶叶物质为基质，采取纯培养方式进行菌种的制备，在发酵罐中进行普洱茶的外源接种渥堆发酵。外源接种过程中存在着非茶类污染，发酵罐渥堆发酵量小、成本高等缺陷，无法在普洱茶实际渥堆生产中得到广泛应用。
发明内容
针对现有技术的上述缺陷，本申请提供一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法。
本申请公开一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，包括：
步骤一、真菌菌株的分离：从普洱茶或者茯砖茶中分离纯化出外源接种菌种的真菌菌株，并置于-20℃的温度环境储存；所述外源接种菌种可包括：聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉、顶头孢霉、阿姆斯特丹散囊菌，冠突散囊菌和紫色红曲霉；
步骤二、真菌菌株的活化：利用马铃薯葡萄糖琼脂固态培养基对外源接种菌种的真菌菌株进行活化；
步骤三、菌悬液的制备：采用无菌水将活化后的真菌菌株配制成1*108cfu/mL的菌悬液；
步骤四、菌种的纯培养：以晒青毛茶为基质，制备真菌菌株的培养基，制备的养基质的含水量在28％-45％之间，温度在28-45℃之间；然后接种步骤三配置的真菌菌株的菌悬液，置于恒温恒湿试验箱内培养14天后取出，在无菌状态下晾干；
步骤五、菌种的扩大培养：以晒青毛茶为基质，添加水分，使茶叶含水量为35％～40％，然后接种步骤四制得的真菌菌种，进行菌种的扩大培养；
步骤六，菌种的干燥与储存：将步骤五制得的真菌菌种置于无菌环境中自然阴干，待菌种干燥至含水量在13％以下时，完成用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备，并置于4℃的温度环境储存。
如上所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，优选地，若所述外源接种菌种为紫色红曲霉，则在对紫色红曲霉纯培养和扩大培养时，添加葡萄糖以维持紫色红曲霉的正常代谢，添加的葡萄糖的质量是基质总质量的10％。
如上所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，优选地，在步骤四菌种的纯培养中，若所述外源接种菌种为聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉，则晒青毛茶基质的含水量为35％；若所述外源接种菌种为顶头孢霉，则晒青毛茶基质的含水量为40％；若所述外源接种菌种为阿姆斯特丹散囊菌，冠突散囊菌，则晒青毛茶基质的含水量为28％-30％；若所述外源接种菌种为紫色红曲霉，则晒青毛茶基质的含水量为40％-45％。
如上所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，优选地，若所述外源接种菌种为阿姆斯特丹散囊菌或者冠突散囊菌，则采用厌氧发酵的方式进行菌种的纯培养与扩大培养。
如上所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其中，经步骤四纯培养后获得的菌种中，有效菌数量在1*109cfu/g以上，杂菌菌落含量不大于5％。
如上所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，优选地，在步骤五菌种扩大培养中，按质量比菌种的接种量为5％，扩大培养所得的菌种中有效菌数量在1*108cfu/g以上，杂菌菌落含量不大于5％。
本申请公开一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的应用方法，包括：
在渥堆发酵基质中添加水分，然后接种制备的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种，混合均匀后堆成高度小于20cm的发酵堆，在发酵堆上覆盖经蒸汽灭菌处理后的麻布，发酵3-5天，待发酵堆表面和内部均产生接种菌种菌丝体后，堆成高度为70-80cm的发酵堆进行渥堆发酵；渥堆发酵过程中进行翻堆、匀堆、加水处理，以维持微生物的代谢，整个渥堆发酵过程持续35天，控制堆温不超过45℃；
渥堆发酵结束后，将制备的普洱熟茶进行自然干燥、仓储陈化、筛分拣剔，完成普洱熟茶的制备。
如上所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的应用方法，其中，所述渥堆发酵基质为云南大叶种晒青毛茶或者普洱熟茶散茶，按质量比外源接种的接种量为0.5％-5％，根据外源接种菌种在渥堆发酵中的生长代谢状况，调整外源菌种的接种量。
本发明提供的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备及其应用方法具有以下优点：
1、缩短普洱茶渥堆发酵时间。
2、稳定普洱茶品质。
3、提升普洱茶保健功效。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1是本申请的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法的流程图。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本申请的实施方式，藉此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
在普洱茶熟茶的渥堆发酵以及成化过程中分离鉴定出多种微生物，其中包括：黑曲霉(Aspergillus niger)、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)、土曲霉(Aspergillusterreus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、微小根毛霉(Rhizomucorpusillus)、肿梗根毛霉(Rhizomucor tauricus)、粉状毕赤酵母(Pichiafarinose)、热带假丝酵母(Candidatropicalis)、聚多曲霉(Aspergillus sydowii)等真菌以及微小根毛霉(Rhizomucorpusilus)、牛根毛霉(Rhizomucor tauricus)、疏棉嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、埃莫森篮状菌(Talaromyces emersonii)等嗜热菌。它们的存在深刻地影响着普洱茶品质的形成、内含成分以及保健功效。例如普洱茶中筛选出的红曲霉菌能产生他汀类物质，对动脉硬化、冠心病等心血管疾病有一定预防与治疗作用。其他微生物，如米曲霉、乳酸菌、酵母菌亦能缩短普洱茶渥堆发酵时间，提高普洱熟茶的品质。
本发明旨在借助现代生物工程技术，通过对普洱茶渥堆与陈化中微生物的分离纯化、菌株的人工驯化、菌种的纯培养、菌种的扩大培养等一系列工序制备外源接种菌种，接种后在自然状态下进行渥堆发酵，建立一套适合普洱茶渥堆发酵的外源接种菌种制备与外源接种渥堆方法，从而真正实现目标菌株在普洱茶渥堆发酵中的应用，提升普洱熟茶的渥堆发酵技术，改善普洱熟茶的品质，提高普洱熟茶的保健价值。
图1是本申请的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法的流程图。参考图1所示，本申请的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法包括以下内容。
步骤一、真菌菌株的分离：从普洱茶或者茯砖茶中分离纯化出外源接种菌种的真菌菌株，并置于-20℃的温度环境储存。
所述外源接种菌种包括：聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉、顶头孢霉、阿姆斯特丹散囊菌，冠突散囊菌和紫色红曲霉。
步骤二、真菌菌株的活化：利用马铃薯葡萄糖琼脂固态培养基对外源接种菌种的真菌菌株进行活化。
步骤三、菌悬液的制备：采用无菌水将活化后的真菌菌株配制成1*108cfu/mL的菌悬液。
步骤四、菌种的纯培养：以晒青毛茶为基质，制备真菌菌株的培养基，制备的养基质的含水量在28％-45％之间，温度在28-45℃之间；然后接种步骤三配置的真菌菌株的菌悬液，置于恒温恒湿试验箱内培养14天后取出，在无菌状态下晾干。
步骤五、菌种的扩大培养：以晒青毛茶为基质，添加水分，使茶叶含水量为35％～40％，然后接种步骤四制得的真菌菌种，进行菌种的扩大培养。
步骤六，菌种的干燥与储存：将步骤五制得的真菌菌种置于无菌环境中自然阴干，待菌种干燥至含水量在13％以下时，完成用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备，并置于4℃的温度环境储存。
下面将给出应用实施例，该实施例中，普洱茶渥堆外源接种菌种的制备及其应用方法包括以下步骤：
S101：真菌菌株的分离与活化：采用普洱茶渥堆与陈化中分离纯化出的聚多曲霉(Aspergillus sydowii)、黑曲霉(Aspergillus niger)、土曲霉(Aspergillus terreus)、顶头孢霉(Cephalosporins acremonium)、阿姆斯特丹散囊菌(Eurotium amstelodami)，茯砖茶中分离纯化出的冠突散囊菌(Eurotium cristatum)以及紫色红曲霉(Monascuspurpure)等安全有效的优势真菌菌株，通过马铃薯葡萄糖琼脂固态培养基(PDA)对-20℃下保存的真菌菌株进行活化。
S102：菌悬液的制备与接种基质配方：在无菌超净工作台采用无菌水将活化后的真菌菌株配制成1*108cfu/mL菌悬液。以晒青毛茶为基质进行菌种的纯培养与扩大培养。聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉等曲霉菌的基质配方：晒青毛茶1000g，含水量为35％左右。顶头孢霉的基质配方：晒青毛茶1000g，含水量为40％左右。阿姆斯特丹散囊菌、冠突散囊菌等金花菌基质配方：晒青毛茶1000g，含水量为28％-30％。紫色红曲霉基质配方：晒青毛茶1000g，葡萄糖100g，含水量为40％-45％。
S103:菌种的纯培养：称取600g云南大叶种晒青毛茶，按照步骤二中基质配方制成不同真菌菌株培养基，平均分装进10个锥形瓶，在121℃灭菌15min后，每瓶接种5mL1*108cfu/mL相应真菌菌株的菌悬液。聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉等曲霉菌置于35-40℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内培养；顶头孢霉置于35-37℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内培养；阿姆斯特丹散囊菌、冠突散囊菌等金花菌置于28-30℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内采取厌氧发酵方式进行菌种纯培养；紫色红曲霉置于40-45℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内培养。培养14天待菌落成熟后，取出，在无菌状态下晾至足干。
S104：菌种的扩大培养：称取12000g云南大叶种晒青毛茶，添加水分使茶叶含水量为35％-40％。在紫色红曲霉扩大培养的晒青毛茶中按质量比添加10％的葡萄糖。在高压高温灭菌后，冷却至室温，与步骤三所得真菌菌种按照一定质量比例混合均匀，在适宜温度条件下进行菌种扩大培养。
S105：菌种的干燥与储存：待菌种达到要求后，在无菌环境中自然阴干，待菌种干燥至含水量水分在13％以下时，完成干燥，在4℃环境下储存。
S106：普洱茶的外源接种渥堆发酵：称取1000-2000kg云南大叶种晒青毛茶，依次添加水分，并按照一定比例外源接种步骤五所得菌种，混合均匀后堆成20cm高度，上覆盖蒸汽灭菌处理后的麻布，3-5天待发酵堆表面内部均产生接种菌种菌丝体后堆成70-80cm的高度进行渥堆发酵；整个渥堆发酵持续35天，每隔一段时间进行翻堆、匀堆，并适时添加适量水分，以维持微生物的代谢。
S107：渥堆发酵的后续处理：渥堆发酵结束后进行自然干燥--仓储陈化--筛分拣剔；完成普洱熟茶的制备。
本申请所述的外源接种所应用的菌种均来自于普洱茶、茯砖茶等黑茶或为安全有效的具有特定功效的药源微生物。
本申请所述的菌种纯培养、扩大培养均以晒青毛茶为主要基质。根据菌株特性，选择适宜的含水量、温度与培养方式。纯培养得到的菌种有效菌数量在1*109cfu/g，纯度不低于95％。
本申请所述的菌种扩大培养菌种的接种量为基质干重的5％左右，扩大培养所得的菌种有效菌数量在1.0*108cfu/g以上，杂菌菌落不超过5％。
本申请所述的外源菌种接种渥堆发酵，外源接种的基质可以为云南大叶种晒青毛茶、亦可为普洱熟茶散茶进行二次发酵。外源菌种的接种量为茶叶干重的0.5％-5％，渥堆发酵堆的茶叶初始潮水量(含水量)为37％-48％，外源接种后进行预处理，促进接种菌种的生长与代谢。渥堆中堆高在70-80cm，渥堆堆芯温度在35℃-60℃。
下面结合实施例对本申请做进一步的说明。本申请下述实施例中所采用的材料，其它所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
1.材料
符合GB/T 22111-2008普洱茶国家地理标志产品要求的云南大叶晒青毛茶为原料。真菌菌株：聚多曲霉(Aspergillus sydowii)、黑曲霉(Aspergillusniger)、土曲霉(Aspergillus terreus)、顶头孢霉(Cephalosporins acremonium)、阿姆斯特丹散囊菌(Eurotium amstelodami)分离纯化于普洱茶渥堆与陈化茶样中；冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)分离纯化于茯砖茶样中；紫色红曲霉菌(Monascuspurpure)购自于云南微生物研究所。应用真菌菌株在-20℃下保存。
2.试验仪器
JR-1003型电子天平(上海新诺仪器厂)；HH-S28s型数显恒温水浴锅(金坛市环保仪器厂)；DFZ-O1型电热真空干燥箱(黄石市恒丰医疗器械有限公司)；单人垂直无菌超净工作台(苏州佳宝净化工程设备有限公司)；低温冰箱(日本SANYO公司)；FZ-102型微型植物试样粉碎机(北京市光明医疗仪器厂)；Labonce-150TH恒温恒湿试验箱(北京兰贝石恒温技术有限公司)；SFG型固态发酵罐(镇江江工生物工程设备公司)。
下面结合附图及具体实施例对本申请的应用原理作进一步描述。
本申请实施例提供的普洱茶外源接种菌种的制备方法，包括：
步骤(1)真菌菌株的活化：
利用接种环挑取少量聚多曲霉(Aspergillussydowii)、黑曲霉(Aspergillusniger)、土曲霉(Aspergillus terreus)、顶头孢霉(Cephalosporins acremonium)、阿姆斯特丹散囊菌(Eurotium amstelodami)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、紫色红曲霉菌(Monascuspurpure)等真菌菌株菌悬液在马铃薯葡萄糖琼脂固态培养基(PDA)划线，置于30℃恒温恒湿培养箱内倒置培养，5天后，观察菌落生长状况，选择生长状况良好的菌落用于菌种的纯培养。
步骤(2)菌悬液的制备与接种基质配方：
真菌菌株经PDA培养基活化后，用无菌水进行洗脱，转移至锥形瓶，充分振荡摇匀，并调节孢子浓度约为1.0*108cfu/mL，于4℃保存备用。以晒青毛茶为基质对应用真菌菌株进行菌种的纯培养与扩大培养。根据不同真菌菌株特性，采用以下配方对真菌菌株进行菌种的纯培养。聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉等曲霉菌的基质配方：晒青毛茶1000g，含水量为35％左右。顶头孢霉的基质配方：晒青毛茶1000g，含水量为40％左右。阿姆斯特丹散囊菌、冠突散囊菌等金花菌的基质配方：晒青毛茶1000g，含水量为28％-30％。紫色红曲霉的基质配方：晒青毛茶1000g，葡萄糖100g，含水量为40％-45％。
步骤(3)菌种的纯培养：
称取600克云南大叶种晒青毛茶，按照步骤二中基质配方制成不同真菌菌株培养基，平均分装进10个锥形瓶，在121℃灭菌15min后，每瓶接种5mL1*108cfu/mL相应真菌菌株的菌悬液。聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉等曲霉菌置于35-40℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内培养；顶头孢霉置于35-37℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内培养；阿姆斯特丹散囊菌、冠突散囊菌等金花菌置于28-30℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内采取厌氧发酵方式进行菌种纯培养；紫色红曲霉置于40-45℃，85％湿度的恒温恒湿试验箱内培养。培养14天待菌落成熟后，取出，在无菌状态下晾至足干。待干燥完成后，收集在无菌密闭容器内，用于菌种的扩大培养。按照GB 4789.15—2010食品安全国家标准《食品微生物学检验霉菌和酵母计数中的测定方法》对纯培养得到的菌种中有效菌数量进行测定。结果如下表1(表1为不同真菌菌株纯培养方式与有效菌数量表)所示，不同真菌菌株纯培养得到的菌种有效菌数量在5.0*109-3.55*1010cfu/g，杂菌比率在1.13％-3.46％之间，纯度在96％以上。
表1不同真菌菌株纯培养方式与有效菌数量表
步骤(4)菌种的扩大培养
准确称取12000g晒青毛茶，添加适量水分，使茶叶含水量在35％-40％之间。121℃灭菌15min，冷却至室温后，与步骤(1)得到的菌种，按照5％(w/w)进行混合，置于已灭菌的固态发酵罐内在特定温度下进行扩大培养。按照GB 4789.15—2010食品安全国家标准《食品微生物学检验霉菌和酵母计数中的测定方法》对扩大培养得到的菌种中有效菌数量进行测定。不同真菌菌株培养温度、时间以及有效菌数量变化见表2。不同真菌菌株扩大培养得到的菌种有效菌数量在1.5*108-8.3*108，有效菌数量均在1.0*108以上，杂菌比率在2.35％-4.15％之间，均不超过5％。
表2不同真菌菌株扩大培养方式与有效菌数量表
步骤(5)菌种的干燥与储存
待菌种达到要求后，在无菌环境中自然阴干，待菌种干燥至含水量水分在13％以下时，完成干燥，在4℃环境下储存。扩大培养得到的菌种通过外源接种至云南大叶种晒青毛茶中进行普洱茶渥堆发酵。
步骤(6)普洱茶的外源接种渥堆发酵：
称取1000-2000kg云南大叶种晒青毛茶，依次添加水分，使茶叶的初始潮水量(含水量)维持在37％-48％之间。并按照0.5％-5％接种量(w/w)外源接种步骤五所得菌种，混合均匀后堆成20cm高度，上覆盖蒸汽灭菌处理后的麻布，3-5天待发酵堆表面内部均产生接种菌种菌丝体后堆成70-80cm的高度进行渥堆发酵；整个渥堆发酵持续35天，每隔一段时间进行翻堆、匀堆，使整个阶段堆芯温度维持在35℃-60℃。并在渥堆前期、中期适时添加适量水分，以维持微生物的代谢。
步骤(7)渥堆发酵的后续处理：
渥堆发酵结束后进行自然干燥--仓储陈化--筛分拣剔；完成普洱熟茶的制备。根据真菌菌株特性，聚多曲霉的外源接种可用于去咖啡碱或高茶碱普洱熟茶的制备，具有清肺止喘，改善肺功能的功效；阿姆斯特丹散囊菌、冠突散囊菌的外源接种可用于金花普洱熟茶的制备，具有一定降糖减肥功效；土曲霉、紫色红曲霉的外源接种可促进普洱茶渥堆过程中产生辛伐他汀、洛伐他汀等他汀类物质，具备一定降血脂，降胆固醇，改善心血管循环等功效。其他真菌菌株的外源接种可缩短普洱茶渥堆时间10天左右，稳定普洱茶品质，提升普洱茶品饮价值。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改，并能够在本申请构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.一种用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其特征在于，包括：
步骤一、真菌菌株的分离：从普洱茶或者茯砖茶中分离纯化出外源接种菌种的真菌菌株，并置于-20℃的温度环境储存；所述外源接种菌种包括：聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉、顶头孢霉、阿姆斯特丹散囊菌，冠突散囊菌和紫色红曲霉；
步骤二、真菌菌株的活化：利用马铃薯葡萄糖琼脂固态培养基对外源接种菌种的真菌菌株进行活化；
步骤三、菌悬液的制备：采用无菌水将活化后的真菌菌株配制成1*108cfu/mL的菌悬液；
步骤四、菌种的纯培养：以晒青毛茶为基质，制备真菌菌株的培养基，制备的养基质的含水量在28％-45％之间，温度在28-45℃之间；然后接种步骤三配置的真菌菌株的菌悬液，置于恒温恒湿试验箱内培养14天后取出，在无菌状态下晾干；
步骤五、菌种的扩大培养：以晒青毛茶为基质，添加水分，使茶叶含水量为35％～40％，然后接种步骤四制得的真菌菌种，进行菌种的扩大培养；
步骤六，菌种的干燥与储存：将步骤五制得的真菌菌种置于无菌环境中自然阴干，待菌种干燥至含水量在13％以下时，完成用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备，并置于4℃的温度环境储存。
2.如权利要求1所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其特征在于，若所述外源接种菌种为紫色红曲霉，则在对紫色红曲霉纯培养和扩大培养时，添加葡萄糖以维持紫色红曲霉的正常代谢，添加的葡萄糖的质量是基质总质量的10％。
3.如权利要求2所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其特征在于，在步骤四菌种的纯培养中，若所述外源接种菌种为聚多曲霉、黑曲霉、土曲霉，则晒青毛茶基质的含水量为35％；若所述外源接种菌种为顶头孢霉，则晒青毛茶基质的含水量为40％；若所述外源接种菌种为阿姆斯特丹散囊菌，冠突散囊菌，则晒青毛茶基质的含水量为28％-30％；若所述外源接种菌种为紫色红曲霉，则晒青毛茶基质的含水量为40％-45％。
4.如权利要求3所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其特征在于，若所述外源接种菌种为阿姆斯特丹散囊菌或者冠突散囊菌，则采用厌氧发酵的方式进行菌种的纯培养与扩大培养。
5.如权利要求4所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其特征在于，经步骤四纯培养后获得的菌种中，有效菌数量在1*109cfu/g以上，杂菌菌落含量不大于5％。
6.如权利要求5所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的制备方法，其特征在于，在步骤五菌种扩大培养中，按质量比菌种的接种量为5％，扩大培养所得的菌种中有效菌数量在1*108cfu/g以上，杂菌菌落含量不大于5％。
7.如权利要求1-6所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的应用方法，其特征在于，包括：
在渥堆发酵基质中添加水分，然后接种制备的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种，混合均匀后堆成高度小于20cm的发酵堆，在发酵堆上覆盖经蒸汽灭菌处理后的麻布，发酵3-5天，待发酵堆表面和内部均产生接种菌种菌丝体后，堆成高度为70-80cm的发酵堆进行渥堆发酵；渥堆发酵过程中进行翻堆、匀堆、加水处理，以维持微生物的代谢，整个渥堆发酵过程持续35天，控制堆温不超过45℃；
渥堆发酵结束后，将制备的普洱熟茶进行自然干燥、仓储陈化、筛分拣剔，完成普洱熟茶的制备。
8.如权利要求7所述的用于普洱茶渥堆的外源接种菌种的应用方法，其特征在于，所述渥堆发酵基质为云南大叶种晒青毛茶或者普洱熟茶散茶，按质量比外源接种的接种量为0.5％-5％，根据外源接种菌种在渥堆发酵中的生长代谢状况，调整外源菌种的接种量。
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