CN108938949A - 一种天然原料青稞红曲饮片及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种青稞红曲的制备方法，它包括如下步骤：(1)原料处理：取青稞，脱皮，得青稞米和青稞麸皮，将青稞米和青稞麸皮混匀，得到发酵基质；(2)制备曲种：取红曲霉菌，活化，培养，得红曲霉菌液；(3)发酵：在步骤(1)的发酵基质中加入步骤(2)得红曲霉菌液，发酵，干燥，即可。本发明方法可以制备产洛伐他汀含量较高、β‑葡聚糖含量稳定的红曲，应用前景良好。

Description

一种天然原料青稞红曲饮片及制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种天然原料青稞红曲制备方法和应用，属于发酵领域。

背景技术

我国发酵技术应用历史悠久，也是传统中药加工炮制的重要方法之一，一般主要是起到中药复合炮制的作用。即将药材与辅料拌和，一定温度和湿度下通过微生物的发酵达到提高药效、改变药性、降低毒副作用等目的。直到现在，临床仍在应用的发酵中药，如六神曲、淡豆豉、建曲、沉香曲、半夏曲、红曲、豆黄等，均是利用炮制环境中的天然微生物(多为霉菌、酵母、细菌等)进行多菌种固体发酵而成。

青稞红曲以西藏、青海、甘肃、云南等地产的青稞为原料，通过青稞红曲发酵技术把红曲的抗氧化、降血脂等作用与青稞丰富的营养物质(如富含β-葡聚糖、低脂肪、高纤维、高蛋白、高维生素)结合起来，使二者的有效成分得到充分利用，品质得到提升。青稞红曲目前的制备方法复杂，蒸煮时间长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的青稞红曲的制备方法。

本发明一种青稞红曲的制备方法，它包括如下步骤：

(1)原料处理：取青稞，脱皮，得青稞米和青稞麸皮，将青稞米和青稞麸皮混匀，得到发酵基质；

(2)制备曲种：取红曲霉菌，活化，培养，得红曲霉菌液；

(3)发酵：将步骤(2)的红曲霉菌液加入步骤(1)的发酵基质中，发酵，干燥，即可。

步骤(1)中，制备发酵基质的方法如下：

A.取青稞，脱皮，分别收集青稞麸皮和青稞米；

B.将青稞米，置于水中，浸泡5-10小时，捞出青稞米，沥干水分；

C.将葡萄糖、酵母膏蛋白胨等中的一种或多种溶解于水，制得营养液；

D.将B步骤中沥干水分的青稞米与A步骤中青稞麸皮混合，得固体混合物，加入固体混合物5％-10％重量的步骤C的营养液，混合均匀；

E.高温灭菌，摇散物料，冷却。

步骤C中，所述营养液每100mL中含有5g葡萄糖、1g酵母膏、3g蛋白胨。

步骤D中，所述固体混合物中还添加有大豆粉、豌豆粉、玉米粉等中的一种或多种，其添加量为青稞米重量的3～5％；优选为大豆粉、豌豆粉、玉米粉的混合物，三者的重量比例为1:1:1；所述大豆粉、豌豆粉、玉米粉为过100目筛的粉末。

步骤E中，所述高温灭菌是121℃灭菌30min。

步骤(2)中，所述红曲霉菌为产洛伐他汀的红曲霉菌。

步骤(2)的具体步骤为：

a.取红曲霉菌菌种，接种于青稞麦芽汁固体培养基，28-32℃下培养3-5天；

b.取无菌水，步骤a的培养物中，振摇5-15分钟，得到的液体按照5％-20％的比例接种到装有青稞麦芽汁培养基中，在28-32℃水浴或者气浴培养3-5天。

c.将步骤b中的红曲菌培养物按照5％-20％的比例接种至青稞麦芽汁培养基，28-32℃条件下培养3-5天。

步骤(3)中，所述红曲霉菌液的密度为9.0～9.5g/mL，接种量为3～15％，优选为12％。

步骤(3)中，发酵的方法是：

高温发酵：发酵温度28℃-32℃、湿度40％-80％，培养3-5天；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度20℃-25℃、湿度40％-80％，培养5-15天。

优选地，发酵的方法是：

A.高温发酵：发酵温度30℃、湿度40％-80％，培养5天；

B.低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度23℃、湿度40％-80％，培养11天。

本发明还提供了前述方法制备得到的青稞红曲。

其中，所述洛伐他汀含量大于等于4mg/g，β-葡聚糖含量大于等于1.5％。

本发明还提供了前述青稞红曲在制备降血脂的药品中的用途。

其中，所述药品为中药饮片、中成药。

本发明方法的优势：

1.本发明采用脱皮机对青稞进行预处理，脱皮后降低青稞种皮的硬度，加快了吸水时间，减少蒸煮时间，促进功能红曲霉菌对青稞营养物质的吸收利用；

2.青稞麸皮富含的β葡聚糖利于分离，利用；

3.发酵过程中没有添加化学合成物质。

本发明方法制备的青稞红曲，其产洛伐他汀含量较高，β葡聚糖含量稳定，同时制备方法简单，时间短，成本低廉，应用前景良好。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

本发明实验设备及原料如下：

1、本发明实验设备：

高效液相Agilent-1260，美国安捷伦科技有限公司；

紫外-可见光分光光度计TU-1810，北京普析通用仪器有限责任公司；

电子天平BT-125D，赛多利斯赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；

马弗炉SX-2-10，沈阳市节能电炉厂

恒温恒湿箱HWS-250，上海精宏实验设备有限公司；

电热鼓风干燥箱DHG-9146A，上海精宏实验设备有限公司；

卧式圆形压力蒸汽灭菌器WS-200YDA，江阴滨江以来设备有限公司；

2、本发明原料的选择：

青稞，甘肃家家满电子商务有限公司；

黄豆，辽宁省五常市彩桥米业有限公司；

葡萄糖，成都市科龙化工试剂厂；

酵母膏，成都市科龙化工试剂厂；

蛋白胨，北京奥博星生物技术有限公司；

将产洛伐他汀红曲霉菌菌种母种，保藏编号为3.4702，来自中国普通微生物菌种保藏管理中心

实施例1本发明青稞红曲的制备

1.原料处理

A.取青稞，筛选除去杂质，进去谷物脱皮机进行脱皮，分别收集青稞麸皮和青稞米；

B.将青稞米放入浸泡池，加水淹没物料10cm，放置5-10小时，放尽水，捞出青稞米，沥干水分；

C.将5g葡萄糖、1g酵母膏、3g蛋白胨中溶解于水，制得100mL营养液；

D.将B步骤中沥干水分的青稞米与A步骤中青稞麸皮放入搅拌机，加入C步骤中的营养液5％-10％，混合均匀，装入1L三角瓶中，装量至600ml刻度位置，多层纱布封口，棉线扎紧；

E.将D步骤中装料的三角瓶放置于高压蒸汽灭菌柜中灭菌，121℃，30min。灭菌结束后趁热摇散物料，冷却。

2.菌种制备

A.将产洛伐他汀红曲霉菌菌种母种，接种于青稞麦芽汁固体培养基(茄形瓶)，28-32℃下培养3-5天；

B.取无菌水，加入到茄形瓶中，放置于涡旋振荡器进行振摇5-15分钟。得到的液体按照5％-20％的比例接种到装有青稞麦芽汁培养基的500ml三角瓶，在28-32℃水浴或者气浴培养3-5天。

C.将发酵罐(体积50L-500L)装的青稞麦芽汁培养基，灭菌，降温，将步骤B中的红曲霉菌培养物按照5％-20％的比例接种，28-32℃条件下培养3-5天，得菌液。

3.接种

将步骤2中培养好的红曲霉菌液(密度为9.0～9.5g/mL)，按照3％-15％的比例，接种到步骤1中准备好的发酵瓶中，接种后摇瓶，混合均匀。

4.发酵培养

将步骤3接种好的发酵瓶，分为3组，分别按照以下3种条件进行培养：

条件(1)

高温发酵：将发酵瓶放入高温发酵室进行发酵，发酵温度28℃、湿度40％-80％，培养5天，每天摇瓶；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度20℃、湿度40％-80％，培养15天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

条件(2)

高温发酵：将发酵瓶放入高温发酵室进行发酵，发酵温度30℃、湿度40％-80％，培养4天，每天摇瓶；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度23℃、湿度40％-80％，培养10天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

条件(3)

高温发酵：将发酵瓶放入高温发酵室进行发酵，发酵温度32℃、湿度40％-80％，培养3天，每天摇瓶；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度25℃、湿度40％-80％，培养5天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

5.收集步骤4低温发酵后的青稞红曲，转移至电热鼓风干燥箱中中60-80℃下烘干。

6.包装。

检测结果：3种条件下培养的青稞红曲样品分别检测洛伐他汀，结果为0.50％，0.54％，0.43％，平均值为0.48％；检测β-葡聚糖含量，结果为1.99％，1.73％，1.56％，平均值为1.76％。

洛伐他汀检测方法参考QBT2847-2007功能性红曲米(粉)，照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定

1.洛伐他汀标准贮备液

准确称取洛伐他汀标准品40.00mg，以75％乙醇定容100mL。此溶液浓度为400ug/mL。

2.洛伐他汀标标准工作液

准确量取洛伐他汀标准贮备液1mL，以75％乙醇定容10mL。此溶液浓度为40ug/mL。

3.试样处理

将青稞红曲粉碎(40目，粉状)并充分混合均匀。准确称取400.0mg～600.0mg试样与50mL容量瓶中。加入30mL75％乙醇(体积分数)，摇匀，室温下超声50min。加75％乙醇至接近刻度，再超声10min，之后冷却至室温，用75％乙醇定容至50mL。以3500r/min的旋转速度离心10min。取上清液经0.45um微孔滤膜过滤，滤液待用。

液相色谱条件

色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm；柱温：室温20℃～25℃；紫外检测器：238nm检测波长；流动相：甲醇：水：磷酸＝385：115：0.14(体积分数)；流速：1.0mL/min；进样量：20uL。

6.色谱分析

将处理好的样品提取液20uL进样，与标准溶液保留时间对照定性，用被测组分洛伐他汀峰面积与标准洛伐他汀的峰面积之比进行定量。

β-葡聚糖检测方法参考NY/T2006-2011《谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定》，紫外-可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0401)

原理该法利用地衣聚糖酶和β-葡萄糖苷酶对样品中β-葡聚糖的酶解作用，由地衣聚糖酶专一性地水解β-葡聚糖成寡糖，β-葡萄糖苷酶将寡糖水解成葡萄糖；葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生产葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶作用下，与4-氨基安替比林氧化缩合生成红色醌类化合物。此化合物510nm有吸收，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。

取本实施例制备的青稞红曲，用于制备降血脂的药品(包括中药饮片、中成药等)。

实施例2本发明青稞红曲的制备

1.原料处理

A.取青稞，筛选除去杂质，进去谷物脱皮机进行脱皮，分别收集青稞麸皮和青稞米；

B.将青稞米放入浸泡池，加水淹没物料10cm，放置5-10小时，放尽水，捞出青稞米，沥干水分；

C.将5g葡萄糖、1g酵母膏、3g蛋白胨中溶解于水，制得100mL营养液；

D.取大豆、豌豆、玉米(重量比为1:1:1)，破碎至通过100目筛。

E.将B步骤中沥干水分的青稞米、A步骤中青稞麸皮、D步骤中碎料(加入量为青稞米重量的3～5％)，放入搅拌机，加入C步骤中的营养液5％-10％，混合均匀，装入1L三角瓶中，装量至600ml刻度位置，多层纱布封口，棉线扎紧；

F.将E步骤中装料的三角瓶放置于高压蒸汽灭菌柜中灭菌，121℃，30min。灭菌结束后趁热摇散物料，冷却。

2.菌种制备

A.将产洛伐他汀红曲霉菌菌种母种，接种于青稞麦芽汁固体培养基(茄形瓶)，28-32℃下培养3-5天；

B.取无菌水，加入到茄形瓶中，放置于涡旋振荡器进行振摇5-15分钟。得到的液体按照5％-20％的比例接种到装有青稞麦芽汁培养基的500ml三角瓶，在28-32℃水浴或者气浴培养3-5天。

C.将发酵罐(体积50L-500L)装的青稞麦芽汁培养基，灭菌，降温，将步骤B中的红曲霉菌培养物按照5％-20％的比例接种，28-32℃条件下培养3-5天，得菌液。

3.接种

将步骤2中培养好的红曲霉菌液(密度为9.0～9.5g/mL)，按照3％-15％的比例，接种到步骤1中准备好的发酵瓶中，接种后摇瓶，混合均匀。

4.发酵培养

将步骤3接种好的发酵瓶，分为3组，分别按照以下3种条件进行培养：

条件(1)

高温发酵：将发酵瓶放入高温发酵室进行发酵，发酵温度28℃、湿度40％-80％，培养5天，每天摇瓶；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度20℃、湿度40％-80％，培养15天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

条件(2)

高温发酵：将发酵瓶放入高温发酵室进行发酵，发酵温度30℃、湿度40％-80％，培养4天，每天摇瓶；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度23℃、湿度40％-80％，培养10天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

条件(3)

高温发酵：将发酵瓶放入高温发酵室进行发酵，发酵温度32℃、湿度40％-80％，培养3天，每天摇瓶；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度25℃、湿度40％-80％，培养5天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

5.收集步骤4低温发酵后的青稞红曲，转移至电热鼓风干燥箱中60-80℃下烘干。

6.包装。

检测结果：3种条件下培养的青稞红曲样品分别检测洛伐他汀含量，结果0.52％，0.59％，0.47％，平均值0.52％；检测β-葡聚糖含量，结果2.09％，1.70％，1.64％，平均值1.81％。

取本实施例制备的青稞红曲，用于制备降血脂的药品(包括中药饮片、中成药等)。

依以上实施例1、实施例2，青稞红曲质量标准定为：洛伐他汀含量大于等于0.4％，β-葡聚糖含量大于等于1.5％。

实施例3本发明青稞红曲的制备

1.原料处理

A.取青稞，筛选除去杂质，进入谷物脱皮机进行脱皮，分别收集青稞麸皮和青稞米；

B.将青稞米放入浸泡池，加水淹没物料10cm，放置5-10小时，放尽水，捞出青稞米，沥干水分；

C.将5g葡萄糖、1g酵母膏、3g蛋白胨中溶解于水，制得100mL营养液；

D.将B步骤中沥干水分的青稞米与A步骤中青稞麸皮放入搅拌机，加入C步骤中的营养液5％-10％，混合均匀，装入1L三角瓶中，装量至600ml刻度位置，多层纱布封口，棉线扎紧；

E.将D步骤中装料的三角瓶放置于高压蒸汽灭菌柜中灭菌，121℃，

30min。灭菌结束后趁热摇散物料，冷却。

2.菌种制备

A.将产洛伐他汀红曲霉菌菌种母种，接种于青稞麦芽汁固体培养基(茄形瓶)，28-32℃下培养3-5天；

B.取无菌水，加入到茄形瓶中，放置于涡旋振荡器进行振摇5-15分钟。得到的液体按照5％-20％的比例接种到装有青稞麦芽汁培养基的500ml三角瓶，在28-32℃水浴或者气浴培养3-5天。

C.将发酵罐(体积50L-500L)装的青稞麦芽汁培养基，灭菌，降温，将步骤B中的红曲霉菌培养物按照5％-20％的比例接种，28-32℃条件下培养3-5天；

3.接种

将步骤2中培养好的红曲霉菌液(密度为9.0～9.5g/mL)，按照3％-15％的比例，接种到步骤1中准备好的发酵瓶中，接种后摇瓶，混合均匀。

4.发酵培养

A.高温发酵。将步骤3中的发酵瓶，放入高温发酵室进行发酵，发酵温度30℃、湿度60％-80％，培养5天，每天摇瓶；

B.低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度24℃、湿度40％-80％，培养10天后下架(每2天摇瓶)，倒瓶。

5.收集步骤4低温发酵后的青稞红曲，转移至电热鼓风干燥箱中中60-80℃下烘干。

6.将步骤5中的青稞红曲用中转桶转移至净制车间，捡去杂质，筛净灰屑。装入中转桶，分为三份，取其中一份的运至包装车间进行包装，3g/袋、6g/袋，即得青稞红曲(中药饮片)，规格为净制；

7.将步骤6中余下的青稞红曲饮片，用中转桶转移至炮炙车间。取其中一份青稞红曲饮片，投入热锅内，用文火炒至表面色泽加深，溢出其固有香气时，取出，放凉，装入中转桶，运至包装车间进行包装，3g/袋、6g/袋，即得炒青稞红曲(中药饮片)，规格为炒制；

8.将步骤6中余下的另一份青稞红曲饮片，投入热锅内，用武火炒至表面焦黑色、断面焦褐色，喷淋清水少许，熄灭火星，取出，晾干，装入中转桶，运至包装车间进行包装，3g/袋、6g/袋，即得青稞红曲炭(中药饮片)，规格为炒炭；

根据本发明的制备方法所得中药饮片，参照《中国药典》制定理化检验指标，

青稞红曲

水分不超过12.0％，照水分测定法(《中国药典》2015年版四部通则0832)测定，

总灰分不超过10.0％，酸不溶性灰分不超过3.0％(《中国药典》2015年版四部通则2302)，

本品含洛伐他汀总和不得少于0.40％，照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定，

本品含β-葡聚糖含量不得少于1.5％，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2015年版四部通则0401)测定，

黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1不得过5μg/kg；黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2总量不得过10μg/kg，(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定，

桔青霉素不得过50μg/kg；(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定，

炒青稞红曲水分不超过10.0％，其余同青稞红曲。

青稞红曲炭水分不超过10.0％。

取连续生产的3批次青稞红曲、炒青稞红曲和青稞红曲炭样品进行检测，结果见下表。

表1青稞红曲

表2炒青稞红曲

表3青稞红曲炭

由以上结果可知，本方法生产的青稞红曲、炒青稞红曲和青稞红曲炭中药饮片是合格的。

实施例4本发明青稞红曲(含洛伐他汀)的条件筛选

本实施例采用的红曲霉菌种子液，密度为9.0～9.5g/mL。

一、发酵温度对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

①高温发酵温度对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

将培养好的红曲霉菌种子液，按照15％的比例接种于灭菌好的发酵瓶，摇瓶，与青稞物料混合均匀，分成6组。发酵瓶分别置于温度为26℃、28℃、30℃、32℃、34℃和36℃，相对湿度60％的环境中，高温环境发酵5天，然后转移至低温发酵间(温度25℃、相对湿度60％)培养10天。收获青稞红曲在60℃条件下烘干，检测洛伐他汀含量。平均结果见下表。

温度在30℃时洛伐他汀产量最高，28℃、32℃条件下较30℃条件下洛伐他汀产量明显降低。说明在30℃条件下发酵更加有利于红曲洛伐他汀的产生。温度在28℃至32℃的情况下β-葡聚糖的含量明显下降，此时红曲霉菌生长旺盛，β-葡聚糖可能发生了降解，β-葡聚糖的含量与红曲霉菌生长情况成反比，红曲霉菌生长旺盛对β-葡聚糖分解能力越强。综合考虑，高温发酵温度30℃最适合。

②低温发酵温度对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

将培养好的红曲霉菌种子液，按照15％的比例接种于灭菌好的发酵瓶，摇瓶，与青稞物料混合均匀，分成5组。发酵瓶置于温度30℃、相对湿度60％的环境中，发酵瓶分为1-5组，在高温环境(温度30℃、相对湿度60％)发酵5天，然后分别转移至18℃、20℃、22℃、24℃和26℃(相对湿度60％)培养10天。收获青稞红曲在60℃条件下烘干，检测洛伐他汀和β-葡聚糖含量。平均结果见下表。

温度在23℃时洛伐他汀产量最高，超过23℃时增加不明显，说明23℃环境进行低温发酵有利于洛伐他汀的积累。低温培养环境下β-葡聚糖的含量变化不明显，说明不同低温环境下红曲霉菌对β-葡聚糖的降解能力相当。综合考虑，低温发酵温度23℃最适合。

二、发酵时间对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

①高温发酵时间对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

将培养好的红曲霉菌种子液，按照15％的比例接种于灭菌好的发酵瓶，摇瓶，与青稞物料混合均匀，分成5组。发酵瓶置于温度30℃、相对湿度60％的环境中，发酵瓶1-5组，分别在高温环境发酵2-6天，然后转移至低温发酵间(温度23℃、相对湿度60％)培养10天。收获青稞红曲在60℃条件下烘干，检测洛伐他汀和β-葡聚糖含量。平均结果见下表。

随着高温培养时间延长，洛伐他汀含量越高，β-葡聚糖含量越低，说明高温培养有利于红曲菌的繁殖，充分分解了青稞等物料，能够更多的产生代谢产物。高温培养第5天、第6天，洛伐他汀含量没有明显增加，但是β-葡聚糖含量继续降低。综合考虑，高温发酵时间5天最合适。

②低温发酵时间对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

将培养好的红曲霉菌种子液，按照15％的比例接种于灭菌好的发酵瓶，摇瓶，与青稞物料混合均匀，分成5组。发酵瓶置于温度30℃、相对湿度60％的环境中，发酵瓶1-5组，在高温环境(温度30℃、相对湿度60％)发酵5天，然后低温发酵间(温度23℃、相对湿度60％)培养，第1-5组分别培养5天、8天、11天、14天和17天。收获青稞红曲在60℃条件下烘干，检测洛伐他汀和β-葡聚糖含量。平均平均结果见下表。

随着低温培养时间延长，洛伐他汀含量逐渐增高，至培养11天后增加不明显。而β-葡聚糖含量一直在降低。说明红曲霉在低温培养后期，产洛伐他汀能力趋于稳定，但是β-葡聚糖还是在降解。综合考虑，高温发酵时间11天最合适。

三、不同接种量对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

将红曲霉菌种子液按照3％、6％、9％、12％和15％的接种量分别接种到前处理一致的发酵瓶，发酵瓶分成1-5组，。在高温环境(温度30℃、相对湿度60％)发酵5天，然后低温发酵间(温度23℃、相对湿度60％)培养11d，收获青稞红曲在60℃条件下烘干，检测洛伐他汀和β-葡聚糖含量。平均结果见下表。

接种量较少时，红曲菌初始菌种数量少，需要较多的时间进行繁殖，影响的发酵速度，高温阶段物料分解不透彻，菌丝生长不够旺盛，导致后期次级代谢产物产量低。接种量达到12％时基本上已经满足要求，再继续增加接种量对洛伐他汀产量影响不明显。β-葡聚糖含量与红曲霉菌生长旺盛程度成反比，接种量增加β-葡聚糖葡聚糖降解也增加，增加到12％及以上降解不再明显增加。综合考虑，12％接种量最适合。

四、不同装量对洛伐他汀和β-葡聚糖含量的影响

将前处理一致的青稞米按照50g/L、100g/L、150g/L、200g/L和250g/L的装量分别装料，发酵瓶分成1-5组。在高温环境(温度30℃、相对湿度60％)发酵5天，然后低温发酵间(温度23℃、相对湿度60％)培养11d，收获青稞红曲在60℃条件下烘干，检测洛伐他汀和β-葡聚糖含量。平均结果见下表。

装量过少，如第1、2组，物料太薄，不利于保温保水，洛伐他汀产量偏低；物料过多，如第4、5组，物料厚度太高，同时容易结团，透气性不好导致红曲菌生长不良，严重影响洛伐他汀的产生。β-葡聚糖含量与红曲霉菌生长旺盛程度成反比。综合考虑效益，150g/L的装量是比较适宜的装量。

综上，本发明方法制备的青稞红曲，其产洛伐他汀含量较高、β-葡聚糖含量稳定，同时制备方法简单，时间短，成本低廉，应用前景良好。

Claims (14)

1.一种青稞红曲的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)原料处理：取青稞，脱皮，得青稞米和青稞麸皮，将青稞米和青稞麸皮混匀，得到发酵基质；

(2)制备曲种：取红曲霉菌，活化，培养，得红曲霉菌液；

(3)发酵：将步骤(2)的红曲霉菌液加入步骤(1)的发酵基质中，发酵，干燥，即可。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，制备发酵基质的方法如下：

A.取青稞，脱皮，分别收集青稞麸皮和青稞米；

B.将青稞米，置于水中，浸泡5-10小时，捞出青稞米，沥干水分；

C.将葡萄糖、酵母膏、蛋白胨等中的一种或多种溶解于水，制得营养液；

D.将B步骤中沥干水分的青稞米与A步骤中青稞麸皮混合，得固体混合物，加入固体混合物5％-10％重量的步骤C的营养液，混合均匀；

E.高温灭菌，摇散物料，冷却。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤C中，所述营养液每100mL中含有5g葡萄糖、1g酵母膏、3g蛋白胨。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤D中，所述固体混合物中还添加有大豆粉、豌豆粉、玉米粉等中的一种或多种，其添加量为青稞米重量的3～5％；优选为大豆粉、豌豆粉、玉米粉的混合物，三者的重量比例为1:1:1；所述大豆粉、豌豆粉、玉米粉为过100目筛的粉末。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤E中，所述高温灭菌是121℃灭菌30min。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述红曲霉菌为产洛伐他汀的红曲霉菌。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)的具体步骤为：

a.取红曲霉菌菌种，接种于青稞麦芽汁固体培养基，28-32℃下培养3-5天；

b.取无菌水，加入步骤a的培养物中，振摇5-15分钟，得到的液体按照5％-20％的比例接种到装有青稞麦芽汁培养基中，在28-32℃水浴或者气浴培养3-5天。

c.将步骤b中的红曲霉菌培养物按照5％-20％的比例接种至青稞麦芽汁培养基，28-32℃条件下培养3-5天。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述红曲菌液的密度为9.0～9.5g/mL，接种量为3～15％，优选为12％。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，发酵的方法是：

高温发酵：发酵温度28℃-32℃、湿度40％-80％，培养3-5天；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度20℃-25℃、湿度40％-80％，培养5-15天。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于：发酵的方法是：

高温发酵：发酵温度30℃、湿度40％-80％，培养5天；

低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵瓶转入低温发酵室发酵，发酵温度23℃、湿度40％-80％，培养11天。

11.权利要求1～10任意一项所述方法制备的青稞红曲。

12.根据权利要求11所述的青稞红曲，其特征在于：所述红曲的洛伐他汀含量大于等于4mg/g、β-葡聚糖含量大于等于1.5％。

13.权利要求10所述的青稞红曲在制备降血脂的药品的用途。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于：所述药品为中药饮片、中成药。