CN112522114B - 蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用 - Google Patents

蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用，属于微生物发酵技术领域。本发明提供的一种蛹虫草菌糠提取液，由蛹虫草菌糠用水提取得到。本发明提供的蛹虫草菌糠提取液可以用于制备灵芝发酵培养基，进一步用于灵芝菌的液体发酵，可以提高灵芝菌发酵产物的抗氧化性，使发酵产物用于化妆品行业，给蛹虫草菌糠的合理利用开拓了新的利用途径，提高了经济收益，避免了浪费和环境污染。

Description

蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草等，是一种名贵的药用真菌，含有虫草素、虫草多糖、虫草酸等多种生物活性物质，其中虫草素具有抗癌抗肿瘤、抗菌消炎、提高免疫力等作用。目前市场上常见的蛹虫草多为通过人工技术培育，利用谷类、麦子为主要营养基质发酵生菌而成，该技术已经比较成熟，很多食用菌生产企业已经开始规模化应用。随着虫草产业的发展，蛹虫草工厂化生产规模也逐渐扩大，收获蛹虫草子实体之后的蛹虫草子座培养剩余基质(即蛹虫草菌糠)的产量也不断增加。蛹虫草菌糠和蛹虫草子实体一样含蛋白质、多糖、氨基酸、虫草酸、虫草素、麦角甾醇、半乳甘露聚糖、尿嘧啶、腺嘌呤等多种营养成分，同时还含有大量未被利用完的大米、小麦淀粉等，具有极高的利用价值，但因缺乏有效可行利用途径和技术，蛹虫草菌糠通常没有得到充分开发和利用。因此，迫切需要提供一种新的开发利用途径使蛹虫草菌糠变废为宝。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种新的开发利用途径使蛹虫草菌糠变废为宝。
为了解决上述问题，本发明提供了一种蛹虫草菌糠提取液，通过用水对蛹虫草菌糠进行提取得到。
上述蛹虫草菌糠提取液的制备方法为：将蛹虫草菌糠打碎成粉末并烘干；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末加水进行提取，得到蛹虫草菌糠提取液。
所述的蛹虫草菌糠选用本领域常规的蛹虫草菌糠，所述蛹虫草菌糠打碎成粉末的粒径优选为60～600目，进一步优选为600目，可使菌糠中的活性成分如虫草多糖、虫草素和生物活性酶等物质更充分的溶解出来，提高蛹虫草菌糠提取液中活性成分的浓度，且不用多次提取，缩短了工艺步骤，提高了提取效率。所述的烘干优选烘至蛹虫草菌糠恒重，可以精确称量，减小批次间差异。所述烘干的方法采用本领域常规的烘干方法，所述烘干的温度优选为50～100℃，进一步优选为55℃；所述温度范围内进行烘干可在最短时间内烘干水分，同时还不影响蛹虫草菌糠中虫草素等物质的活性。
所述的加水进行提取优选为采用热水提取法，所述蛹虫草菌糠粉末的质量和水的体积比优选为1g：(20～100)mL，进一步优选为1g：(20～50)mL，更进一步优选为1g：20mL。所述提取的温度优选为60～100℃，进一步优选为100℃；所述提取的时间优选为1～5h，进一步优选为1h，所述提取温度和时间的控制可在短时间内将菌糠中的有效成分提取出来，提高提取效率。所述水提后的蛹虫草菌糠溶液优选为在常温静置后进行低速离心，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液，所述常温静置的时间优选为2～12h，进一步优选为5h，静置可以使杂质充分沉淀，使离心步骤更加充分的去除杂质；所述低速离心的转速优选为800～4000rpm，进一步优选为4000rpm；所述低速离心的时间优选为10～20min，进一步优选为20min，离心步骤主要是将蛹虫草菌糠沉淀与上清液有效分离。
本发明还提供了一种灵芝发酵培养基，包括以质量份数计的无水葡萄糖20～30份、活性干酵母粉3～4份、磷酸二氢钾1.5～3份、硫酸镁1.5～3份、上述蛹虫草菌糠提取液100～400份和水600～900份。
所述灵芝发酵培养基中的无水葡萄糖优选为30份，无水葡萄糖采用本领域常规产品，无水葡萄糖的质量浓度优选为20～30g/L，进一步优选为30g/L，无水葡萄糖为灵芝菌提供了生长所需的碳源，保障灵芝菌在发酵过程中生长良好。
所述灵芝发酵培养基中的活性干酵母粉优选为3份，活性干酵母粉采用本领域常规产品，活性干酵母粉的质量浓度优选为3～4g/L，进一步优选为3g/L。活性干酵母粉为灵芝菌提供了生长所需的氮源，保障灵芝菌在发酵过程中生长良好。
所述灵芝发酵培养基中的磷酸二氢钾优选为2份，磷酸二氢钾采用本领域常规产品，磷酸二氢钾的质量浓度优选为1.5～3g/L，进一步优选为2g/L。磷酸二氢钾为灵芝菌提供了生长所需的无机盐，保障灵芝菌在发酵过程中生长良好。
所述灵芝发酵培养基中的硫酸镁优选为2份，硫酸镁采用本领域常规产品硫酸镁的质量浓度优选为1.5～3g/L，进一步优选为2g/L。硫酸镁为灵芝菌提供了生长所需的镁离子，保障灵芝菌在发酵过程中生长良好。
所述灵芝发酵培养基中的蛹虫草菌糠提取液优选为400份，蛹虫草菌糠提取液为上述技术方案中制备而得的蛹虫草提取液，蛹虫草菌糠提取液既作为溶剂溶解培养基中的其他营养物质，还可以提供一些小分子类物质，可与灵芝菌双向发酵，刺激灵芝菌分泌更多的抗氧化类物质，提高发酵产物的抗氧化性能。
所述灵芝发酵培养基中的水优选为600份的蒸馏水，蒸馏水采用本领域常规方法制备而得。
本发明提供了上述蛹虫草菌糠提取液或上述的灵芝发酵培养基在提升灵芝发酵产物和/或灵芝发酵提取物抗氧化活性中的应用。本发明提供的蛹虫草菌糠提取液可以用于制备灵芝发酵培养基，进一步可用于液体培养灵芝菌制备灵芝发酵产物或灵芝发酵提取物，可以提高灵芝菌发酵产物和/或灵芝发酵提取物的抗氧化性，使灵芝菌发酵产物和/或灵芝发酵提取物应用于化妆品行业。
本发明提供了一种灵芝发酵产物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：灵芝菌种的活化；
步骤2：灵芝种子液的制备；
步骤3：将上述灵芝种子液接种到上述灵芝发酵培养基中进行发酵。
优选地，所述步骤1中的灵芝菌种的活化的具体方法为：将灵芝菌切成小块接入马铃薯固体培养基中活化培养，所述的灵芝菌种采用普通市售菌种，所述小块的大小优选为(0.3cm×0.3cm×0.3cm)～(0.7cm×0.7cm×0.3cm)，进一步优选为0.5cm×0.5cm×0.3cm，所述固体培养基优选包括以下质量浓度的组分：马铃薯浸取液15～20g/L、葡萄糖15～20g/L和琼脂10～15g/L，进一步优选为马铃薯浸取液20g/L、葡萄糖20g/L和琼脂15g/L。所述活化培养的接种量优选为1～3块灵芝菌小块接种到25mL马铃薯固体培养基上，所述活化培养的温度优选为20～30℃，进一步优选为26℃；所述活化培养的时间优选为5～9d，进一步优选为7d，当菌丝体量铺满平板培养基面积80％以上即可；所述的活化条件是灵芝菌的最适生长条件，可以使灵芝菌充分活化，以便于灵芝种子液的制备。
优选地，所述步骤2中灵芝种子液的制备方法为：将上述活化后的灵芝菌切割成小块接种于液体培养基中进行种子培养，得到灵芝种子液。所述小块的大小优选为(0.3cm×0.3cm×0.3cm)～(0.7cm×0.7cm×0.3cm)，进一步优选为0.5cm×0.5cm×0.3cm，将小块灵芝菌接入液体培养基中，会以接入的菌块为点，围绕接菌块生长起来，接入的菌块大小影响菌丝量的多少，同时也影响灵芝菌与培养基的接触面积，从而影响到菌种的生长速度，切成小块接入液体培养基可以使种子液生长速度更快，节约时间成本。所述种子培养的温度优选为26～32℃，进一步优选为26℃；所述液体培养基的组分优选为包括以质量份计的无水葡萄糖20～30份、活性干酵母粉3～4份、磷酸二氢钾1.5～3份、硫酸镁1.5～3份和水800～1200份，进一步优选为无水葡萄糖30份、活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份和水1000份；所述种子培养的时间优选为5～14d，进一步优选为7d；所述种子培养优选为在搅拌条件下进行，所述搅拌的转速优选为70～150rpm，进一步优选为150rpm。可根据灵芝发酵的规模来确定种子液的转接次数，当灵芝发酵的规模较大时，可继续制备二级种子液、三级种子液、……，依次类推。
所述步骤3中的发酵的接种量优选为7.5～12.5Vol％，进一步优选为8～10Vol％，更进一步优选为10Vol％；所述发酵的温度优选为24～35℃，进一步优选为26～30℃，更进一步优选为26℃，可以提供灵芝菌适宜的生长环境，促进生长；所述发酵的时间优选为4～10d，进一步优选为4～7d，更进一步优选为7d，可提高发酵产物的抗氧化性能；所述发酵的通气量优选为6.5～10L/min，进一步优选为7～9L/min，更进一步优选为8L/min，为灵芝菌提供充足的氧气，利于灵芝菌的生长；所述发酵的过程优选在黑暗条件下进行，避免光照条件下传递热量，导致灵芝菌的发酵温度的改变，影响灵芝菌的生长。
本发明还提供了一种灵芝发酵提取液，其制备方法为：将所述的灵芝发酵产物的制备方法制备的灵芝发酵产物干燥后用水配制成质量浓度为2～100mg/mL的溶液，将该溶液在55～100℃下提取0.5～3h，冷却后离心，得到灵芝发酵提取液。
所述干燥优选为真空冷冻干燥，真空冷冻干燥的时间优选为4～24h，进一步优选为24h，真空冷冻干燥不会影响发酵产物中的活性成分的结构与活力，收得有效活性成分更高的固形物；所述干燥后的发酵产物用水配制成质量浓度为2～100mg/mL的溶液，该浓度范围为抗氧化活性的有效范围，使提取后得到的提取液可直接添加到化妆品中，其浓度进一步优选为20mg/mL的溶液；所述提取优选为在100℃下提取1h，可以使发酵产物的活性物质(如灵芝多糖、小分子类成分和各类生物酶等)充分溶出，提高抗氧化活性。提取处理后，优选将提取处理后的发酵产物静置放凉后进行离心，所述离心的转速优选为6000～10000rpm，进一步优选为8000rpm；所述离心的时间优选为10～20min，进一步优选为20min，可进一步减少杂质，降低对有效物质活性的干扰；优选将得到的灵芝发酵提取液进行分装灭菌，然后作为化妆品原料使用。
本发明还提供了上述灵芝发酵提取液在抗氧化化妆品中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1.本发明提供的蛹虫草菌糠提取液，其制备工艺简单，可以用于制备灵芝发酵培养基，进一步可用于灵芝菌的液体发酵，发酵过程中无需喷施农药，安全无隐患，得到的灵芝发酵产物具有良好的抗氧化效果，可用于化妆品行业。
2.本发明为蛹虫草菌糠的合理利用开拓了新的途径，提高了经济收益，避免了浪费和环境污染，对蛹虫草菌糠废料的回收利用以及对发酵型化妆品的开发提供了参考依据。
附图说明
图1为灵芝发酵提取液的制备流程示意图。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，作详细说明如下。
以下各实施例和对比例中，采用的灵芝菌株为G0119，又称“沪农灵芝一号”，购自上海市农业科学院，该菌种发酵稳定性强，胞外产多糖量高，生物活性物质较高，已被以下文献使用公开：沪农灵芝一号生长过程中子实体各部位糖醇和海藻糖积累及其代谢酶的表达变化[J].，菌物学报，2018,37(8)：1090-1099，采用的FM801号活性干酵母粉购自安琪酵母公司。
实施例1
一种蛹虫草菌糠提取液，制备方法如下：
将蛹虫草菌糠打碎成粉末，过600目筛，收集粉末；将蛹虫草菌糠粉末放置在55℃烘干，烘至恒重；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末与水按质量体积比为1g：20mL混合，在100℃下提取1h，常温放置5h，在离心机转速为4000rpm、温度为4℃条件下离心20min，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液。
实施例2
一种蛹虫草菌糠提取液，制备方法如下：
将蛹虫草菌糠打碎成粉末，过600目筛，收集粉末；将蛹虫草菌糠粉末放置在55℃烘干，烘至恒重；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末与水按质量体积比为1g：40mL混合，在100℃下提取1h，常温放置5h，在离心机转速为4000rpm、温度为4℃条件下离心20min，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液。
实施例3
一种蛹虫草菌糠提取液，制备方法如下：
将蛹虫草菌糠打碎成粉末，过600目筛，收集粉末；将蛹虫草菌糠粉末放置在100℃烘干，烘至恒重；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末与水按质量体积比为1g：20mL混合，在100℃下提取1h，常温放置5h，在离心机转速为4000rpm、温度为4℃条件下离心20min，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液。
实施例4
一种蛹虫草菌糠提取液，制备方法如下：
将蛹虫草菌糠打碎成粉末，过60目筛，收集粉末；将蛹虫草菌糠粉末放置在55℃烘干，烘至恒重；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末与水按质量体积比为1g：20mL混合，在100℃下提取1h，常温放置5h，在离心机转速为4000rpm、温度为4℃条件下离心20min，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液。
实施例5
一种蛹虫草菌糠提取液，制备方法如下：
将蛹虫草菌糠打碎成粉末，过600目筛，收集粉末；将蛹虫草菌糠粉末放置在55℃烘干，烘至恒重；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末与水按质量体积比为1g：40mL混合，在60℃下提取1h，常温放置5h，在离心机转速为4000rpm、温度为4℃条件下离心20min，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液。
实施例6
一种蛹虫草菌糠提取液，制备方法如下：
将蛹虫草菌糠打碎成粉末，过600目筛，收集粉末；将蛹虫草菌糠粉末放置在55℃烘干，烘至恒重；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末与水按质量体积比为1g：40mL混合，在100℃下提取5h，常温放置5h，在离心机转速为4000rpm、温度为4℃条件下离心20min，收集上清液，得到蛹虫草菌糠提取液。
实施例7
一种灵芝发酵培养基，按照以下质量份的组分构成进行配制：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2、硫酸镁2份、实施例1的蛹虫草菌糠提取液100份和水900份。
具体的，取无水葡萄糖30g、FM801号活性干酵母粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁2g、实施例1的蛹虫草菌糠提取液100g和水900g，制备得到灵芝发酵培养基。
实施例8
一种灵芝发酵培养基，由以下质量份的组分构成：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、实施例2的蛹虫草菌糠提取液400份和水600份。
具体的，取无水葡萄糖30g、FM801号活性干酵母粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁2g、实施例2的蛹虫草菌糠提取液400g和水600g，制备得到灵芝发酵培养基。
实施例9
一种灵芝发酵培养基，由以下质量份的组分构成：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、实施例3的蛹虫草菌糠提取液100份和水900份。
具体的，取无水葡萄糖30g、FM801号活性干酵母粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁2g、实施例3的蛹虫草菌糠提取液100g和水900g，制备得到灵芝发酵培养基。
实施例10
一种灵芝发酵培养基，由以下质量份的组分构成：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、实施例4的蛹虫草菌糠提取液100份和水900份。
具体的，取无水葡萄糖30g、FM801号活性干酵母粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁2g、实施例4的蛹虫草菌糠提取液100g和水900g，制备得到灵芝发酵培养基。
实施例11
一种灵芝发酵培养基，由以下质量份的组分构成：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、实施例5的蛹虫草菌糠提取液400份和水600份。
具体的，取无水葡萄糖30g、FM801号活性干酵母粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁2g、实施例5的蛹虫草菌糠提取液400g和水600g，制备得到灵芝发酵培养基。
实施例12
一种灵芝发酵培养基，由以下质量份的组分构成：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、实施例6的蛹虫草菌糠提取液400份和水600份。
具体的，取无水葡萄糖30g、FM801号活性干酵母粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁2g、实施例6的蛹虫草菌糠提取液400g和水600g，制备得到灵芝发酵培养基。
实施例13
一种灵芝发酵产物的制备方法，具体步骤如下：
1)菌种活化，取G0119号灵芝菌株于无菌操作台，使用无菌接种铲将菌斜面切成0.5cm×0.5cm×0.3cm的小块，取3块接种于直径为90mm的圆形培养皿中进行活化培养，培养皿中装有25mL马铃薯固体培养基，固体培养基的组分为：马铃薯浸取液20g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L和水，PH值为自然PH值；活化培养的温度为26℃，时间为7d。
2)灵芝种子液培养，将活化后的灵芝菌切割成0.5cm×0.5cm×0.3cm的小块，然后将切割的小块接种于对比例1的液体培养基中，在温度为26℃、搅拌转速为150rpm的搅拌条件下培养7d，得到灵芝种子液。
3)灵芝种子液发酵，将灵芝种子液接种到实施例7中的灵芝发酵培养基在黑暗条件下进行发酵，边发酵边搅拌，发酵温度为26℃，搅拌转速为150rpm，通气量为8L/min，接种量为10Vol％，发酵时间为7d，得到灵芝发酵产物；在接种时取均匀且粘稠状态下的种子液，其菌球应大小均匀，分布均一；在发酵过程中每24h取一次样。
一种灵芝发酵提取液的制备方法：
将上述灵芝发酵产物收集至容器中，在-80℃超低温冰箱冷冻24h进行冷冻干燥处理；将冷冻干燥后的灵芝发酵产物用水配制成质量浓度为20mg/ml的溶液，将该溶液在100℃下提取1h，然后静置放凉后在离心机转速为8000rpm的条件下离心20min，得到黄色澄清透明的灵芝发酵提取物，灭菌后用无菌封装袋封口，-20℃条件下保存。
实施例14
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述灵芝发酵培养基为实施例8的灵芝发酵培养基。
实施例15
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述灵芝发酵培养基为实施例9的灵芝发酵培养基。
实施例16
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述灵芝发酵培养基为实施例10的灵芝发酵培养基。
实施例17
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述灵芝发酵培养基为实施例11的灵芝发酵培养基。
实施例18
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述灵芝发酵培养基为实施例12的灵芝发酵培养基。
实施例19
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述发酵的条件为：发酵温度35℃，搅拌转速100rpm，通气量1L/min。
实施例20
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述提取的条件为：将冷冻干燥后的灵芝发酵产物用水配制成质量浓度为2mg/ml的溶液，将该溶液在55℃下提取30min。
实施例21
一种灵芝发酵产物和灵芝发酵提取液的制备方法：
制备方法同实施例13，不同之处在于，所述冷冻干燥处理改为在100℃下烘干。
对比例1
一种灵芝发酵产物的制备方法，具体步骤如下：
1)菌种活化，取G0119号灵芝菌株于无菌操作台，使用无菌接种铲将菌斜面切成0.5cm×0.5cm×0.3cm的小块，取3块接种于直径为90mm的圆形培养皿中进行活化培养，培养皿中装有25mL马铃薯固体培养基，固体培养基的组分为：马铃薯浸取液20g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L和水，PH值为自然PH值；活化培养的温度为26℃，时间为7d。
2)灵芝种子液培养，将活化后的灵芝菌切割成0.5cm×0.5cm×0.3cm的小块，然后将切割的小块接种于液体培养基中，在搅拌条件下进行种子培养，液体培养基由以下质量份的组分构成：无水葡萄糖30份、FM801号活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份和水1000份，种子培养的条件为：搅拌转速150rpm、温度26℃、培养时间7d，得到灵芝种子液。
3)灵芝种子液发酵，将灵芝种子液接种到上述液体培养基中在黑暗条件下进行发酵，边发酵边搅拌，发酵温度为26℃，搅拌转速为150rpm，通气量为8L/min，接种量为10Vol％；在接种时取均匀且粘稠状态下的种子液，其菌球应大小均匀，分布均一。
一种灵芝发酵提取液的制备方法：
将上述灵芝发酵产物收集至容器中，在-80℃超低温冰箱冷冻24h进行冷冻干燥处理；将冷冻干燥后的灵芝发酵产物用水配制成质量浓度为20mg/ml的溶液，将该溶液在100℃下提取1h，然后静置放凉后在离心机转速为8000rpm的条件下离心20min，得到黄色澄清透明的灵芝发酵提取物，灭菌后用无菌封装袋封口，-20℃条件下保存。
抗氧化性能检测
1)将实施例13在发酵过程中不同时间的取样作为样品，检测各样品的抗氧化活性，考察不同发酵时间对灵芝发酵产物抗氧化性的影响，检测结果见表1和表2。
2)将实施例13～21和对比例1得到的灵芝发酵提取液分别检测抗氧化活性，考察本发明的灵芝发酵提取液的抗氧化性，检测结果见表3。
检测方法如下：
检测过氧化氢清除率：将待测样品梯度稀释，参考过氧化氢-鲁米诺体系，在96孔板中依次注入10μL质量分数为6％的过氧化氢溶液、150μL 1mmol/L的碳酸盐-鲁米诺溶液和不同浓度梯度的待测样品，采用化学发光法检测过氧化氢自由基浓度，通过SPSS软件拟合，得出IC50值，IC50为半数清除率(即清除率达50％)对应的样品浓度，IC50值越低，表示该样品清除自由基的能力越强。
检测超氧阴离子清除率：将待测样品梯度稀释，参考邻苯三酚-鲁米诺体系，在96孔板中依次注入10μL6.25×10-4mol/L的邻苯三酚溶液、150μL1mmol/L碳酸盐-鲁米诺溶液和不同浓度梯度的待测样品，采用化学发光法检测邻苯三酚超氧阴离子的浓度，如上述方法拟合得出清除超氧阴离子的IC50值。
表1实施例13的灵芝发酵过程中发酵不同时长灵芝发酵产物液清除过氧化氢自由基的IC50值
由表1可知，不同的发酵时间中，灵芝发酵产物清除过氧化氢的能力不同，直至发酵后期(第5天时)达到平稳。通过数据比较可知，其IC50值趋势是不断减小的，可以反映出发酵过程中，灵芝发酵产物的过氧化氢清除率不断升高，这可能是由于灵芝在生长过程中在胞内和胞外都在不断积累抗氧化类活性物质的结果。
表2实施例13的灵芝发酵过程中发酵不同时长灵芝发酵产物清除超氧阴离子的IC50值
由表2可知，不同的发酵时间中，灵芝发酵产物清除超氧阴离子的能力不同，通过数据比较可知，其IC50值呈不断减小的趋势，可以反映在发酵过程中，灵芝发酵产物的超氧阴离子清除能力不断增强。在发酵前期(0～3天时)IC50值下降趋势明显，这可能是由于灵芝在生长过程中在胞内和胞外快速积累了抗氧化类活性物质的结果，直至发酵中后期(4～7天时)活性物质积累达到饱和，IC50值趋于平稳，超氧阴离子清除能力保持稳定。
表3实施例13～21和对比例1得到的灵芝发酵提取液清除过氧化氢自由基和超氧阴离子IC50值
由表3的结果可知，本发明实施例13～21的灵芝发酵提取液的抗氧化活性显著高于对比例1的灵芝发酵提取液，说明添加蛹虫草菌糠提取液的培养基和优选处理条件下的灵芝发酵提取液自由基清除IC50更低，抗氧化活性更好；另外，不同的培养基、发酵条件、提取条件和干燥条件都会影响产物的抗氧化活性，在本发明的培养基、发酵条件、提取条件和干燥条件下，灵芝发酵提取液的抗氧化活性较高，条件适宜。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种灵芝发酵培养基，其特征在于，包括以质量份数计的无水葡萄糖20~30份、活性干酵母粉3~4份、磷酸二氢钾1.5~3份、硫酸镁1.5~3份、蛹虫草菌糠提取液100~400份和水600~900份；
所述蛹虫草菌糠提取液是通过用水对蛹虫草菌糠进行提取得到，具体为：将蛹虫草菌糠打碎成粉末并烘干；将烘干后的蛹虫草菌糠粉末加水进行提取，得到蛹虫草菌糠提取液；
所述蛹虫草菌糠打碎成粉末的粒径为60~600目，所述烘干的温度为50~100℃；
所述蛹虫草菌糠粉末加水后的浓度为0.01~0.05g/mL，所述提取的温度为60~100℃，时间为1~5h。
2.一种灵芝发酵产物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：灵芝菌种的活化；
步骤2：灵芝种子液的培养；
步骤3：将上述灵芝种子液接种到权利要求1所述的灵芝发酵培养基中进行发酵。
3.如权利要求2所述的灵芝发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中灵芝菌种的活化的具体方法为：取灵芝菌株切成大小为0.3cm×0.3cm×0.3cm~0.7cm×0.7cm×0.3cm的小块接种于马铃薯固体培养基中活化培养；所述马铃薯固体培养基的组分包括马铃薯浸取液20g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L和水，其PH值为自然PH值；所述活化培养的温度为26℃，时间为7d。
4.如权利要求2所述的灵芝发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤2中灵芝种子液的培养的具体方法为：将活化的灵芝菌种切成大小为0.3cm×0.3cm×0.3cm~0.7cm×0.7cm×0.3cm的小块接种于液体培养基中，在搅拌条件下进行种子培养，所述液体培养基的组分包括以质量份数计的无水葡萄糖30份、活性干酵母粉3份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份和水1000份，所述种子培养的条件为：搅拌转速150rpm、温度26℃、培养时间7d。
5.如权利要求2所述的灵芝发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤3中发酵的工艺条件为：接种量7.5~12.5Vol％，发酵温度24~35℃，发酵时间4~10d，通气量6.5~10L/min。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114028279B (zh) * 2021-10-26 2023-10-27 杭州慧农生物科技有限公司 一种灵芝自乳化油脂发酵液、发酵方法和应用

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1554443A (zh) * 2003-12-26 2004-12-15 潘文光 在癌症放化疗中提高血象增强免疫抑制肿瘤的口服液
WO2009074004A1 (fr) * 2007-12-05 2009-06-18 Starway Food-Technology Co., Ltd (Dong Guan) Procédé destiné à la préparation d'un vin de santé à base de cordyceps
WO2014055035A1 (en) * 2012-10-04 2014-04-10 Phyto Pharma Pte Ltd New cordyceps militaris strain cbs 132098 and biologically active fruiting bodies, mycelial biomass and extracts therefrom
CN103923795A (zh) * 2014-04-29 2014-07-16 董铸华 一种银杏灵芝虫草酒及其制备方法
CN104286102A (zh) * 2014-09-24 2015-01-21 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所 一种蛹虫草菌糠饼干的制作方法
CN104774703A (zh) * 2014-01-13 2015-07-15 于汇 虫草、灵芝葡萄酒
JP2017042125A (ja) * 2015-08-28 2017-03-02 株式会社ウエルネス四万十研究所 多種多様な効能を有する蛹虫草及びその生産方法
CN108546306A (zh) * 2018-04-27 2018-09-18 华南师范大学 一种蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和用途
CN109846049A (zh) * 2019-01-31 2019-06-07 沈阳中肽生物科技有限公司 一种调节免疫力的复方小分子肽功能食品及其制备方法
CN110172492A (zh) * 2019-06-13 2019-08-27 上海市农业科学院 一种液态深层发酵生产灵芝三萜的方法
CN110964616A (zh) * 2018-09-27 2020-04-07 王吉湘 一种虫草灰树花菌类调配酒及其制备方法
CN110982868A (zh) * 2019-11-29 2020-04-10 贵州中医药大学 一种提高灵芝三萜含量的共培养方法及应用

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1554443A (zh) * 2003-12-26 2004-12-15 潘文光 在癌症放化疗中提高血象增强免疫抑制肿瘤的口服液
WO2009074004A1 (fr) * 2007-12-05 2009-06-18 Starway Food-Technology Co., Ltd (Dong Guan) Procédé destiné à la préparation d'un vin de santé à base de cordyceps
WO2014055035A1 (en) * 2012-10-04 2014-04-10 Phyto Pharma Pte Ltd New cordyceps militaris strain cbs 132098 and biologically active fruiting bodies, mycelial biomass and extracts therefrom
CN104774703A (zh) * 2014-01-13 2015-07-15 于汇 虫草、灵芝葡萄酒
CN103923795A (zh) * 2014-04-29 2014-07-16 董铸华 一种银杏灵芝虫草酒及其制备方法
CN104286102A (zh) * 2014-09-24 2015-01-21 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所 一种蛹虫草菌糠饼干的制作方法
JP2017042125A (ja) * 2015-08-28 2017-03-02 株式会社ウエルネス四万十研究所 多種多様な効能を有する蛹虫草及びその生産方法
CN108546306A (zh) * 2018-04-27 2018-09-18 华南师范大学 一种蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和用途
CN110964616A (zh) * 2018-09-27 2020-04-07 王吉湘 一种虫草灰树花菌类调配酒及其制备方法
CN109846049A (zh) * 2019-01-31 2019-06-07 沈阳中肽生物科技有限公司 一种调节免疫力的复方小分子肽功能食品及其制备方法
CN110172492A (zh) * 2019-06-13 2019-08-27 上海市农业科学院 一种液态深层发酵生产灵芝三萜的方法
CN110982868A (zh) * 2019-11-29 2020-04-10 贵州中医药大学 一种提高灵芝三萜含量的共培养方法及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
灵芝液态发酵有效产物体外抗氧化活性的研究;崔月花;食品与发酵工艺;第32卷(第8期);32-34 *

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