CN104435823A - 一种青稞红曲藏药饮片的制备方法 - Google Patents
一种青稞红曲藏药饮片的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明是以青稞为原料，接入红曲霉菌通过固态发酵制成的青稞红曲，再以青稞红曲为原料加工炮制而成青稞红曲藏药饮片。本发明工艺采用两级种子液制备方法、高低温发酵制备红曲霉菌，并结合青稞特点采用混合原料。本发明青稞红曲藏药饮片以青稞红曲为原料，经炮制而成，经检测其富含γ-氨基丁酸、天然他汀类、β-葡聚糖等物质，具有消食健脾，活血祛瘀，降“三高”，延缓脑衰老机能，补充人体抑制性神经递质，促进肾机能改善和保护作用，抑制脂肪肝及肥胖症，活化肝功能等功效。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵技术领域，尤其属于红曲霉发酵制备技术领域，特别涉及一种含青稞红曲藏药饮片的制备方法。
背景技术
青稞红曲，是以青稞为主要原料，以红曲霉菌为功能微生物进行深层固态发酵制得。其中青稞是西藏的特色生物资源，含有丰富的膳食纤维、β-葡聚糖、蛋白质、维生素、及微量元素等，具有很高营养价值和功效，如预防肠道疾病、降脂、降胆固醇以及控制血糖等。藏医典籍《晶珠本草》更把青稞作为一种重要药物，用于治疗多种疾病。红曲霉是重要的药食用真菌，经发酵可合成γ-氨基丁酸、Monacolin K等药用成分，具有降血脂、降血压、抗癌等广泛的生理活性。青稞红曲作为二者结合的发酵产物，不仅积聚了二者所有营养价值，且降压、降脂、镇静、催眠、抗惊厥等功效更为显著，主要应用于医药保健、功能性食饮品、化妆品等行业和领域。
发明内容
本发明利用西藏产青稞与红曲霉菌的优点，提供了一种青稞红曲藏药饮片的制备方法。本发明要解决的问题是提供一种具有丰富营养，又能增强免疫力、降血脂等功效的发酵青稞红曲藏药饮片的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现：
本发明是以青稞为原料，接入红曲霉菌通过固态发酵制成的青稞红曲，再以青稞红曲为原料加工炮制而成青稞红曲藏药饮片。
具体方法如下：
(1)原料处理
原料包含青稞、麸皮、豆粕，各原料组成的重量份数比例是青稞︰麸皮︰豆粕为95︰2︰3份；青稞进行去杂、去渣、去霉变筛选处理后粉碎为粒径约2毫米原料，豆粕粉碎后过40-60目；
(2)青稞发酵基质处理
①将步骤(1)挑选好的原料转入配料池混合均匀；
②配制营养液：营养液由下列各重量份数的成分组成，葡萄糖：4.2份、蛋白胨：10.5份、硝酸钠：0.38份、硫酸镁：0.19份、磷酸二氢钾：0.19份，溶于1000份水中；
③拌料：将配料池中原料按每100重量份加入营养液45重量份配料；配料是先加营养液混合静置吸水半小时后，再放入拌料机中进行拌料；
④装瓶：将上述配料分装到1000mL瓶中；
⑤灭菌：将分装好的配料进行灭菌；
⑥灭菌后立即打撒，冷却，得青稞发酵基质；
(3)接种
将红曲霉菌种液接种到步骤(2)得到的青稞发酵基质上得到青稞红曲发酵物，摇匀，瓶口向上备用；
(4)发酵培养
①高温发酵：将步骤(3)接种好的青稞红曲发酵物放入高温发酵室进行发酵培养5天；发酵温度30℃、湿度60％；
②低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵物转入低温发酵室发酵15-20天后下架出瓶；发酵温度25℃、湿度60％；
(5)烘干
将上述步骤(4)得到的青稞红曲发酵物放入温度40～50℃热风烘干机中烘干，得青稞红曲初品；
(6)炮制
①方法一：将上述步骤(5)所得的青稞红曲初品除去杂质，粉碎成细粉，制成青稞红曲藏药饮片；
或，②方法二：将上述步骤(5)所得的青稞红曲初品微炒，使外部呈黑色，内部呈黄色，喷淋清水，冷却，制成青稞红曲藏药饮片；
(7)灭菌、分装
将上述步骤(6)中所得青稞红曲藏药饮片进行灭菌后分装。
进一步本发明还提供了红曲霉菌种液的两级制备方法：
①一级种子液制备
将红曲霉菌转接到培养基上活化，再将活化后的红曲霉菌斜面孢子悬液转接到摇瓶进行培养，得到一级种子液，一级种子培养基需要添加培养基重量0.1％的青稞粉；
②二级种子液制备
将上述一级种子液按10～15％的接种量接种到摇瓶，进行培养，得到二级种子液，二级种子培养基需要添加培养基重量0.2％的青稞粉。
根据本发明的制备方法所得青稞红曲藏药饮片水分不超过8.0％，照水分测定法(《中国药典》一部附录)测定，总灰分不超过10.0％，酸不溶性灰分不超过3.0％；并按照微生物限度检查法测定微生物。
与现有技术相比本发明具有如下有益效果：
本发明青稞红曲藏药饮片以青稞红曲为原料，经炮制而成，经检测其富含γ-氨基丁酸、天然他汀类、β-葡聚糖等物质，具有消食健脾，活血祛瘀，降“三高”，延缓脑衰老机能，补充人体抑制性神经递质，促进肾机能改善和保护作用，抑制脂肪肝及肥胖症，活化肝功能等功效。
本发明工艺采用两级种子液制备方法、高低温发酵制备红曲霉菌，并结合青稞特点采用混合原料。本发明产品其制备工艺技术先进，提高饮片质量、减少浪费，便于运输保存。分装后的青稞红曲饮片的使用避免了散装饮片吸潮、生虫、生霉与串味等现象，从而保证了药效的稳定性。
附图说明
图1是本发明制备方法流程示意图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，实施例只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据上述本发明的内容作出的一些非本质的改进和调整也属于本发明保护的范围。
实施例1
结合图1，本发明是以青稞为原料，接入红曲霉菌通过固态发酵制成的青稞红曲，再以青稞红曲为原料加工炮制而成的青稞红曲藏药饮片。
1)红曲霉菌种子液制备
①一级种子液制备
将红曲霉菌转接到沙氏改良培养基上活化，再将活化后的红曲霉菌斜面孢子悬液转接500mL摇瓶，培养基装量300mL左右，在30℃，150rpd的摇床上培养2-3d，作为一级种子液，一级种子液培养基需添加0.1％青稞粉；
②二级种子液制备
将上述①中一级种子液按15％左右的接种量接种到摇瓶，在30℃、150rpd的摇床上培养2-3d，作为二级种子液，二级种子液培养基需添加0.2％青稞粉。
2)原料处理：原料主要包含青稞、麸皮、豆粕。青稞原料去杂、去渣、去霉变等筛选处理，将筛选好的青稞粗粉碎，粒度在2毫米左右；豆粕稍微粉碎过40-60目,原料配比表如下：
3)青稞发酵基质处理
①按上述原料配比表称取处理好的青稞5kg，豆粕0.16kg，麸皮0.11kg，混合均匀；
②配制营养液：营养液配方为葡萄糖：4.2、蛋白胨：10.5、硝酸钠：0.38g、硫酸镁：0.19g、磷酸二氢钾：0.19g，溶于1000mL水中；
③拌料：将上述步骤①中混合均匀的物料加入2.4L营养液量进行配料，先在桶里面将物料吸水半小时后，再倒入搅拌机中拌料；
④装瓶：将上述步骤③中拌好的配料分装到1000mL瓶中，装瓶量为1000mL装到500mL的位置进行装瓶；
⑤灭菌：将上述步骤④中分装好的配料进行灭菌，压力为1.04MPa,温度为121℃，灭菌时间为30分钟；
⑥灭菌结束后压力降为0MPa时取出，立即打撒，冷却，得青稞发酵基质。
4)接种
①接种量：将上述步骤3)中的青稞发酵基质接入二级种子液，每瓶青稞发酵基质接种二级种子液50mL，得到青稞红曲发酵物；
②用手摇混匀，并将瓶口向上，转至高温发酵室。
5)发酵培养
①高温发酵
A、将接种好的青稞红曲发酵物放他高温发酵室中发酵，高温发酵室控制温度约30℃、湿度60％左右发酵；
B、发酵时间为5d：发酵到3天后进行翻曲(尽可能打散)，5天后下架翻曲，再转入低温发酵室；
②低温发酵
A、低温发酵室控制温度在25℃、湿度60％左右发酵；
B、发酵2d后，翻曲(尽可能打散)，继续低温发酵；
C、继续发酵2d，翻曲(尽可能打散)；
D、继续发酵3d，翻曲(尽可能打散)；
E、继续发酵3d，翻曲(尽可能打散)；
F、继续低温发酵5-6d，下架出瓶。
6)烘干
将上述步骤5)中发酵好的青稞红曲发酵物放入温度在40-50℃热风烘干机里烘干，得青稞红曲。
7)炮制
将上述步骤6)中所得的青稞红曲除去杂质，再粉碎成细粉，得青稞红曲藏药饮片。
8)灭菌
将上述步骤7)中所得青稞红曲藏药饮片进行灭菌，灭菌方式为巴氏灭菌，灭菌温度为60℃，灭菌时间为30min。
9)分装
将上述步骤8)中灭菌后的青稞红曲藏药饮片进行分装，每袋8g。
实施例2
结合1，本发明是以青稞为原料，接入红曲霉菌通过固态发酵制成的青稞红曲，再以青稞红曲为原料加工炮制而成的青稞红曲藏药饮片。
1)红曲霉菌种子液制备
①一级种子液制备
将红曲霉菌转接到沙氏改良培养基上活化，再将活化后的红曲霉菌斜面孢子悬液转接500mL摇瓶，培养基装量300mL左右，在30℃，150rpd的摇床上培养2-3d，作为一级种子液，一级种子液培养基添加0.1％青稞粉；
②二级种子液制备
将上述①中一级种子液按15％左右的接种量接种到摇瓶，在30℃、150rpd的摇床上培养2-3d，作为二级种子液，二级种子液培养基需添加0.2％青稞粉。
2)原料处理：原料主要包含青稞、麸皮、豆粕。青稞原料去杂、去渣、去霉变等筛选处理，将筛选好的青稞粗粉碎，粒度在2毫米左右；豆粕稍微粉碎过40-60目,原料配比表如下：
3)青稞发酵基质处理
①按上述原料配比表称取处理好的青稞5kg，豆粕0.16kg，麸皮0.11kg，混合均匀；
②配制营养液：营养液配方为葡萄糖：4.2、蛋白胨：10.5、硝酸钠：0.38g、硫酸镁：0.19g、磷酸二氢钾：0.19g，溶于1000mL水中；
③拌料：将上述步骤①中混合均匀的物料加入2.4L营养液量进行配料，先在桶里面将物料吸水半小时后，再倒入搅拌机中拌料；
④装瓶：将上述步骤③中拌好的配料分装到1000mL瓶中，装瓶量为1000mL装到500mL的位置进行装瓶；
⑤灭菌：将上述步骤④中分装好的配料进行灭菌，压力为1.04MPa,温度为121℃，灭菌时间为30分钟；
⑥灭菌结束后压力降为0MPa时取出，立即打撒，冷却，得青稞发酵基质。
4)接种
①接种量：将上述步骤3)中的青稞发酵基质接入二级种子液，每瓶青稞发酵基质接种二级种子液50mL，得到青稞红曲发酵物；
②用手摇混匀，并将瓶口向上，转至高温发酵室。
5)发酵培养
①高温发酵
A、将接种好的青稞红曲发酵物放他高温发酵室中发酵，高温发酵室控制温度约30℃、湿度60％左右发酵；
B、发酵时间为5d：发酵到3天后进行翻曲(尽可能打散)，5天后下架翻曲，再转入低温发酵室；
②低温发酵
A、低温发酵室控制温度在25℃、湿度60％左右发酵；
B、发酵2d后，翻曲(尽可能打散)，继续低温发酵；
C、继续发酵2d，翻曲(尽可能打散)；
D、继续发酵3d，翻曲(尽可能打散)；
E、继续发酵3d，翻曲(尽可能打散)；
F、继续低温发酵5-6d，下架出瓶。
6)烘干
将上述步骤5)中发酵好的青稞红曲发酵物放入温度在40-50℃热风烘干机里烘干，得青稞红曲。
7)炮制
将上述6)中所得的青稞红曲微炒，使外部呈黑色，内部呈黄色为度，喷淋清水，冷却，得青稞红曲藏药饮片。
8)灭菌
将上述步骤7)中所得青稞红曲藏药饮片进行灭菌，灭菌方式为巴氏灭菌，灭菌温度为60℃，灭菌时间为30min。
9)分装
将上述步骤8)中灭菌后的青稞红曲藏药饮片进行分装，每袋8g。
实施例3
本发明烘干步骤中水分、总灰分和酸不溶性灰分的测定
(1)水分的测定
称取实施例1制备青稞红曲藏药饮片5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm；疏松供试品不超过10mm；精密称定M1为50.365g，打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定得M2为50.094g，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重的M3为50.090g。
计算得水分含量：(M1-M3)/5×100％＝5.5％<8％，合格；
(2)总灰分的测定
将适量的青稞红曲藏药饮片粉碎，用二号筛筛分，混合均匀后，取本品5g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量得M1为58.69g，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重，测得M2为54.07g。计算本发明产品的总灰分含量(％)。
计算的总灰分含量：[5-(M1-M2)]/5×100％＝7.6％<10％，合格；
(3)酸不溶性灰分的测定
取上述(2)中所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重M3为53.81g。根据上述(2)中的数据，可计算本发明品中酸不溶性灰分的含量(％)。
计算不溶性灰分的含量：[5-(M1-M3)]/5×100％＝2.4％<3％，合格；
实施例4
本发明炮制步骤方法一中微生物的检测，并按照微生物限度检查法(《中国药典》一部附录)测定。经进行微生物检测，本发明实施例1制备的青稞红曲藏药饮片检测结果如下：
实施例5
本发明产品进行功能动物试验，按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)进行增强免疫力功能动物试验以及辅助降血脂功能动物试验，试验结果与判定如下：
(1)增强免疫力功能动物试验结果与判定
连续灌胃小鼠30天后，对小鼠的体重、脏器/体重比值无明显影响，与阴性对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。
对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阴性。
对小鼠的体液免疫试验结果阴性。
对小鼠的细胞免疫试验，连续灌胃30天后，三个剂量组动物的足跖肿胀度与阴性对照组比较，低、高剂量组差异有显著性(P<0.05、P<0.05)，试验结果阳性。
对小鼠的NK细胞活性试验，连续灌胃30天后，三个剂量组动物的NK细胞活性与阴性对照组比较，中、高剂量组差异有显著性(P<0.05、P<0.05)，试验结果阳性。
依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)可以判定，本发明产品对动物具有增强免疫力的功能。
(2)辅助降血脂功能动物试验
连续30天经口灌胃给予SD大鼠后，可见动物生长良好，体重持续增长。
三个剂量组动物的中期体重和结束时体重与模型对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。
三个剂量组试验后的HDL-C值与试验后的模型对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。
三个剂量组试验后甘油三酯(TC)与试验后的模型对照组比较，中、高剂量组的TC降低，差异有显著性(P<0.05，P<0.05)。
三个剂量组试验后血清总胆固醇(TG)与试验后的模型对照组比较，低、高剂量组的TG降低差异显著性(P<0.05、P<0.05)。
依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)可以判定，本发明产品对动物具有辅助降血脂功能。
综上所述，青稞红曲藏药饮片符合红曲饮片标准规定，因此，本发明产品是可行的。
Claims (2)
1.一种青稞红曲藏药饮片的制备方法，其特征是包括以下步骤：
(1)原料处理
原料包含青稞、麸皮、豆粕，各原料组成的重量份数比例是青稞︰麸皮︰豆粕为95︰2︰3份；青稞进行去杂、去渣、去霉变筛选处理后粉碎为粒径约2毫米原料，豆粕粉碎后过40-60目；
(2)青稞发酵基质处理
①将步骤(1)挑选好的原料转入配料池混合均匀；
②配制营养液：营养液由下列各重量份数的成分组成，葡萄糖：4.2份、蛋白胨：10.5份、硝酸钠：0.38份、硫酸镁：0.19份、磷酸二氢钾：0.19份，溶于1000份水中；
③拌料：将配料池中原料按每100重量份加入营养液45重量份配料；配料是先加营养液混合静置吸水半小时后，再放入拌料机中进行拌料；
④装瓶：将上述配料分装到1000mL瓶中；
⑤灭菌：将分装好的配料进行灭菌；
⑥灭菌后立即打撒，冷却，得青稞发酵基质；
(3)接种
将红曲霉菌种液接种到步骤(2)得到的青稞发酵基质上得到青稞红曲发酵物，摇匀，瓶口向上备用；
(4)发酵培养
①高温发酵：将步骤(3)接种好的青稞红曲发酵物放入高温发酵室进行发酵培养5天；发酵温度30℃、湿度60％；
②低温发酵：将上述高温发酵后的青稞红曲发酵物转入低温发酵室发酵15-20天后下架出瓶；发酵温度25℃、湿度60％；
(5)烘干
将上述步骤(4)得到的青稞红曲发酵物放入温度40～50℃热风烘干机中烘干，得青稞红曲初品；
(6)炮制
①方法一：将上述步骤(5)所得的青稞红曲初品除去杂质，粉碎成细粉，制成青稞红曲藏药饮片；
或，②方法二：将上述步骤(5)所得的青稞红曲初品微炒，使外部呈黑色，内部呈黄色，喷淋清水，冷却，制成青稞红曲藏药饮片；
(7)灭菌、分装
将上述步骤(6)中所得青稞红曲藏药饮片进行灭菌后分装。
2.根据权利要求1所述的青稞红曲藏药饮片的制备方法，其特征是：步骤(3)所述的红曲霉菌种液由以下方法制备；
①一级种子液制备
将红曲霉菌转接到培养基上活化，再将活化后的红曲霉菌斜面孢子悬液转接到摇瓶进行培养，得到一级种子液，一级种子培养基需要添加培养基重量0.1％的青稞粉；
②二级种子液制备
将上述一级种子液按10～15％的接种量接种到摇瓶，进行培养，得到二级种子液，二级种子培养基需要添加培养基重量0.2％的青稞粉。
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