CN104288344B - 一种普洱茶提取物在制备调节肠道菌群及通便的药物或食品中的应用 - Google Patents

一种普洱茶提取物在制备调节肠道菌群及通便的药物或食品中的应用 Download PDF

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Abstract

本申请公开了普洱茶提取物具有调节肠道菌群及通便的作用，其主要表现为，普洱茶提取物可以增加肠道有益菌乳杆菌和双歧杆菌的数量，同时抑制肠球菌的生长；通过对肠道菌群的调节从而实现通便的目的。

Description

一种普洱茶提取物在制备调节肠道菌群及通便的药物或食品 中的应用
技术领域
本发明涉及一种普洱茶提取物在制备治疗调节肠道菌群或便秘的药物或保健品中的应用，属于制药和保健食品领域。
背景技术
普洱茶原产地主要在云南的思茅地区和西双版纳。随着大叶种的推广，四川、广东、广西也成为普洱茶生产的省份。随着经济的发展，人们保健意识的增强，普洱茶因其滋味醇厚回甘，陈香独特的优良品质和其对人体的特殊保健功效起全社会的关注和重视，产品深受消费者的青睐。
普洱茶性温和耐贮藏，适于烹用或泡饮。我国古代不少史籍有很多关于普洱茶功效的记载：赵学敏《本草纲目拾遗》记载，普黑如漆，醒酒第一，消食化痰，清胃生津，功力尤大也；《木部》中又云，普洱茶膏能治百病，如肚受寒，用姜汤发散，出汗即可愈，口破喉燥，受热疼痛，用五分嚼口过夜即愈；陈宗海撰《思茅厅采访》记载“普洱帮助消化驱散寒冷，有解毒作用。”清宋士雄《随息居饮食谱》云“普洱产者，味重善吐风痰消肉食，凡暑秽疹气腹痛，霍乱痢疾等症初起，饮之辄愈”。由此可见前人对普洱茶保健经验认为，普洱茶具有消食除毒，理气去胀，清热化痰，驱风醒酒，治痢抑菌等功效。
目前的研究认为普洱茶具有一下几方面的保健功效：
1、降脂减肥：普洱茶与脂肪的代谢关系密切，普洱茶经过独特的发酵过程生成了新的化学物质，其中有的含有脂肪分解酵素的脂肪酶，能对脂肪产生分解作用，因而普洱茶有减肥的效果。
2、降压、抗动脉硬化。
3、防癌、抗癌：科学家通过大量的人群比较，证明饮茶人群的癌症发病率较低。而普洱茶含有多种丰富的抗癌微量元素，普洱茶杀癌细胞的作用强烈。
4、健齿护齿：普洱茶中含有许多生理活性成分，具有杀菌消毒的作用，因此能去除口腔异味，保护牙齿。
5、护胃、养胃：在适宜的浓度下，饮用平和的普洱茶对肠胃不产生刺激作用，粘稠、甘滑、醇厚的普洱茶进入人体肠胃形成的膜附着胃的表层，对胃产生有益的保护层，长期的饮用普洱茶后可以起到护胃、养胃的作用。这是国内外崇尚饮用普洱茶的消费者称谓普洱茶为“美容茶”、“益寿茶”的主要原因。
6、抗衰老：经研究证明，人体中脂质过氧化过程是人体衰老的机制之一。普洱茶中含有的维生素C、维生素E、茶多酚、氨基酸和微量元素等具有抗氧化作用，延缓衰老过程，因此普洱茶被称为“益寿茶”。
7、防辐射：据广东中山大学何国藩等用普洱茶进行的研究结果表明，饮用2%普洱茶可以解除用钴60辐射引起的伤害。
8、醒酒：《本草纲目拾遗》载：“普茶最治油蒙心包，刮肠、醒酒第一。”医学证明：茶叶中的茶多酚能促进乙醇代谢，对肝脏有保护作用。使乙醇代谢能正常顺利进行。喝茶能增加血管收缩功能。茶碱具有利尿作用，能促使酒精快速排出体外，减少酒醉后的危害。饮茶还可以补充酒精水解所需的维生素C，兴奋被酒精麻醉的大脑中枢。因而起到解酒作用。
目前普洱茶的降脂功能已经得到广泛承认。但是普洱茶提取物在治疗调节肠道菌群或便秘的作用一直没有直接的实验数据支持。
发明内容
本发明提供一种普洱茶提取物新的医疗和保健用途。
本发明还提供含有本发明提取物的药物组合物及其制备方法以及其制备治疗调节肠道菌群或便秘的药物或保健品中的应用。
上述应用还包括以下用途：
普洱茶提取物能够增加肠道有益菌并抑制肠道不利菌群的生长；
普洱茶提取物可以增加乳杆菌和双歧杆菌的数量。
普洱茶提取物可以抑制肠球菌的生长。
普洱提取物珍能够增加排便次数和总量。
本发明的普洱茶提取物，是经过提取加工得到的，其提取方法，步骤如下：
步骤1，普洱茶叶加水煎煮，提取液过滤，浓缩到一定比重；
步骤2，浓缩液离心，离心液浓缩，干燥即得。
优选的，本发明的提取方法，步骤如下：
步骤1，普洱茶叶加水煎煮提取2-4次，每次0.5～2小时，6-12倍体积的水；提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2-1：3，
步骤2，浓缩液用离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（45-65℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
更优选的，
本发明的提取方法，步骤如下：
步骤1，普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次，每次0.5～2小时，6-12倍体积的水；优选（1.5h，1.5h，1h；10倍体积，8倍体积，8倍体积）。提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2-1：3，
步骤2，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（45-65℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
其中管式离心条件：离心机转速：15000-19000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：140-190℃，出风温度：75-95℃。
本发明的普洱茶提取物包括但不限于以上提取物，还包括已经上市可以从市场购买得到的普洱茶制品，如普洱茶珍，普洱茶饮料，含有普洱茶提取物的药品和食品等。本发明的普洱茶提取物还包括任何现有技术方法制备的普洱茶提取物，如中国专利申请公开说明书中的普洱茶提取方法及其提取物，这些提取物因都含有从普洱茶中提取的功能性成分而具有相同或相似的作用。
本发明优选的普洱茶提取物为普洱茶珍，是一种已经上市销售的普洱茶提取物制品，可以冲泡后服用，其制备和应用方法均属于现有技术。
经过以上方法得到的本发明提取物可以作为具有治疗胃病功能的活性成分制备成药物组合物或保健食品。本发明所述的保健食品包括但不限于：饮料、乳制品、茶叶、糕点等。
本发明的药物组合物中的药物活性成分，其在组合物中所占重量百分比可以是0.1-99.9%，其余为药物可接受的载体。本发明的药物组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。
本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。
本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体（它们可以包括食用油），例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β－环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片。
本发明还包括本发明的普洱茶提取物在制备治疗调节肠道菌群或便秘的药物或保健品中的应用。
本发明的普洱茶提取物具有良好的保健和治疗功能，特别是在治疗调节肠道菌群或便秘方面。
以下通过实验数据说明本发明的有益效果：
实验一、普洱茶提取物调节肠道菌群功能动物实验报告
1材料和方法
1.1样品：普洱茶提取物（P提取物），由云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公司提供，为褐色粉末（根据实施例1方法制备，简称P提取物）。人体推荐量为：3g/60kgBW，批号：2010F01。密封，置阴凉，干燥处保存，保存期24个月。受试物用无菌水配制，供试验用。
1.2实验动物：本实验选用北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK-（京）2009-0007]繁殖的18～22g，BALB/C健康清洁级雄性小鼠48只。分为四组，每组12只。实验动物饲养于北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心SPF级动物实验室，实验动物使用许可证号：SYXK（京）2007-0020。基础饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK-（京）2009-0008]生产。1.3剂量：P提取物的推荐剂量为成人（按60kg体重计）每日3克，相当于0.50g/日/kg体重。实验分别设人体推荐量的5、10、30倍，即每日0.25g/kgBW、0.50g/kgBW、1.50g/kgBW为低、中、高剂量组。高剂量组：称取受试物15.0g，用无菌水定容至100mL；中剂量组：取高剂量受试物溶液20mL加无菌水至60mL；低剂量组：取高剂量受试物溶液10mL加无菌水至60mL,。经口每日一次给予，连续灌胃14天后测定各项指标。小鼠灌胃体积为0.1mL/10g鼠重。同时设空白对照组（0g/kgBW），用无菌水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。各剂量组均给予基础饲料。
1.4仪器与试剂：
1.4.1仪器：ES1000E电子天平（2003004）、BS223S电子天平（2008007）、ES500HA电子天平（2005007）、洁净工作台、恒温培养箱（99008）、恒温水浴锅、高压灭菌锅、混合器、烘干箱、显微镜、厌氧产气袋、培养皿、三角瓶、移液管、载玻片、接种环、酒精灯、加样器、试管、试管帽、玻璃珠、PH试纸、玻璃棒等。
1.4.2试剂：
伊红美蓝琼脂培养基、结晶紫、草酸铵、碘、碘化钾、蛋白胨、乳糖、溴甲酚紫、蕃红、多价胨、酵母浸膏、氯化钠、磷酸氢二钾、叠氮化钠、七叶苷、0.05%结晶紫水溶液、柠檬酸铁铵、琼脂、蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、吐温80、乙酸钠、柠檬酸铵、硫酸镁、硫酸锰、琼脂、过氧化氢、可溶性淀粉、5%L-半胱氨酸、西红柿浸出液、吐温80、肝提取液、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、无水亚硫酸钠、柠檬酸铁铵、D-环丝氨酸。主要试剂购于北京化工厂、国药集团化学试剂有限公司、北京化学试剂公司、北京奥博星生物科技有限公司。
1.5实验方法：
1.5.1取样和稀释
给予受试样品前，无菌取小鼠粪便数粒，放到无菌的器皿中，用天平称量，记录重量。然后，在洁净工作台中，无菌操作，加入稀释液，稀释10-2，充分震荡混匀，依10倍系列稀释至10-8。每种测定菌，选择合适的稀释度，接种平板。
在最后一次给予受试样品之后，24h，再次检测，方法步骤同上。
1.5.2肠道菌群检验用培养基、培养和鉴定方法
表1
Figure BDA00003513051300091
Figure BDA00003513051300101
1.5.3菌落计数
计算出每克湿便中的菌落数（cfu/g），除产气荚膜梭菌外，均取对数进行统计处理。
1.6数据处理
用SPSS软件对各实验原始数据进行数据处理，采用方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P<0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐性的目的，改用秩和检验进行统计。
1.7结果判定依据
根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）的判定标准。比较实验前后自身及组间双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌的变化情况，实验组实验前后自身比较差异有显著性，或实验后实验组与对照组组间比较差异有显著性、且实验组实验前后自身比较差异有显著性。（1）粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌和/或肠球菌明显增加，但增加幅度低于双歧杆菌/乳杆菌增加的幅度。
2结果
2.1P提取物对小鼠体重的影响
表2实验前后各组小鼠的体重（
Figure BDA00003513051300111
）
Figure BDA00003513051300112
由表2可见，小鼠的初始体重在各剂量组与空白对照组（0g/kgBW）间比较，差异均无显著性（P>0.05）。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。经口给予小鼠不同剂量的P提取物14天，小鼠体重在各剂量组与空白对照组（0g/kgBW）间比较，差异均无显著性（P>0.05）。即对小鼠体重无不良影响。
2.2P提取物对小鼠肠道中肠杆菌的影响
表3小鼠肠道中肠杆菌菌群检测结果（lgcfu/g，
Figure BDA00003513051300113
）
Figure BDA00003513051300114
Figure BDA00003513051300121
由表3可知：给受试物前各剂量组与0g/kgBW组间比较，肠杆菌的数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天后，各剂量组与0g/kgBW组比较，肠杆菌的数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天前后，0g/kgBW组及各剂量组自身比较，肠杆菌的数量均无显著性差异（P>0.05）。
2.3P提取物对小鼠肠道中肠球菌的影响
表4小鼠肠道中肠球菌菌群检测结果（lgcfu/g，
Figure BDA00003513051300122
）
Figure BDA00003513051300123
Figure BDA00003513051300131
#：与空白对照组（0g/kgBW）比较有显著差异
*：给予受试物前后各组自身比较有显著差异
由表4可知：给受试物前各剂量组与0g/kgBW组间比较，肠球菌的数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天后，1.50g/kgBW与0g/kgBW组比较，肠球菌的数量显著减少（P<0.01）。给受试物14天前后，0g/kgBW、0.25g/kgBW组自身比较，肠球菌的数量无显著性差异（P>0.05）；0.50g/kgBW、1.50g/kgBW组自身比较，肠球菌的数量显著减少（P<0.05）。
2.4P提取物对小鼠肠道中乳杆菌的影响
表5小鼠肠道中乳杆菌菌群检测结果（lgcfu/g，
Figure BDA00003513051300132
）
Figure BDA00003513051300133
Figure BDA00003513051300141
#：与空白对照组（0g/kgBW）比较有显著差异
*：给予受试物前后各组自身比较有显著差异
由表5可知：给受试物前各剂量组与0g/kgBW组间比较，乳杆菌的数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天后，0.50g/kgBW、1.50g/kgBW与0g/kgBW组比较，乳杆菌的数量显著增加（P<0.01）。给受试物14天前后，0g/kgBW、0.25g/kgBW组自身比较，乳杆菌的数量无显著性差异（P>0.05）；0.50g/kgBW、1.50g/kgBW组自身比较，乳杆菌的数量显著增加（P<0.01）。
2.5P提取物对小鼠肠道中双歧杆菌的影响
表6小鼠肠道中双歧杆菌菌群检测结果（lgcfu/g，
Figure BDA00003513051300142
）
Figure BDA00003513051300143
Figure BDA00003513051300151
#：与空白对照组（0g/kgBW）比较有显著差异
*：给予受试物前后各组自身比较有显著差异
由表6可知：给受试物前各剂量组与0g/kgBW组间比较，双歧杆菌的数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天后，0.50g/kgBW、1.50g/kgBW与0g/kgBW组比较，双歧杆菌的数量显著增加（P<0.01）。给受试物14天前后，0g/kgBW、0.25g/kgBW组自身比较，双歧杆菌的数量无显著性差异（P>0.05）；0.50g/kgBW、1.50g/kgBW组自身比较，双歧杆菌的数量显著增加（P<0.01）。
2.6P提取物对小鼠肠道中产气荚膜梭菌的影响
表7小鼠肠道中产气荚膜梭菌菌群检测结果（lgcfu/g，
Figure BDA00003513051300152
）
Figure BDA00003513051300153
Figure BDA00003513051300161
由表7可知：给受试物前各剂量组与0g/kgBW组间比较，产气荚膜梭菌的数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天后，各剂量组与0g/kgBW组比较，产气荚膜梭菌数量无显著性差异（P>0.05）。给受试物14天前后，0g/kgBW组及各剂量组自身比较，产气荚膜梭菌的数量无显著性差异（P>0.05）。
结论
经口给予小鼠P提取物14天前后，0.50g/kgBW、1.50g/kgBW组自身比较，肠球菌的数量显著减少（P<0.05），乳杆菌的数量显著增加（P<0.01），双歧杆菌的数量显著增加（P<0.01）。
经口给予小鼠P提取物14天前后，与0g/kgBW组比较，1.50g/kgBW肠球菌数量显著减少（P<0.01），乳杆菌的数量显著增加（P<0.01），双歧杆菌的数量显著增加（P<0.01）；0.50g/kgBW组乳杆菌的数量显著增加（P<0.01），双歧杆菌的数量显著增加（P<0.01）。
给予P提取物14天前后，各组小鼠肠杆菌、产气荚膜梭菌数量均无显著变化。P提取物对小鼠体重无不良影响。
根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版），对调节肠道菌群功能保健食品的判定标准可知，P提取物调节肠道菌群功能动物实验结果阳性。
实验二、普洱茶提取物通便功能动物实验报告
1材料和方法
1.1样品
由云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公司生产并提供普洱茶提取物（根据实施例1方法制备，简称P提取物），为褐色粉末。人体推荐量为：3g/60kgBW，批号：2010F01。置干燥处保存，保存期3年。受试物用无菌水配制，供试验用。
1.2实验动物
选用北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK-（京）2009-0007]繁殖的18～22g，昆明健康清洁级雄性小鼠共120只，其中60只分为5组，每组12只，作为实验一批，进行小肠运动实验；另60只分为5组，每组12只，作为实验二批，进行排便时间、粪便粒数和粪便重量的测定。实验动物饲养于北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心SPF级动物实验室，[许可证号：SYXK（京）2012-0031]。基础饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK-（京）2009-0008]生产。
1.3剂量
P提取物的推荐剂量为成人（按60kg体重计）每日3克，相当于0.50g/日/kg体重。实验分别设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.25g/kgBW、0.50g/kgBW、1.50g/kgBW为低、中、高剂量组。受试物以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃7天后测定各项指标。小鼠灌胃体积为0.1mL/10g鼠重。同时设空白对照组（0g/kgBW）和模型对照（0g/kgBW）组，用无菌水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。
1.4仪器与试剂
BS223S电子天平（2008007）、ES500HA电子天平（2005007）、解剖器械、直尺、灌胃针、活性炭、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯片（复方苯乙哌啶片2.5mg/片，江苏国营武进制药厂，批号04051501）。
1.5实验方法：
1.5.1小肠运动试验
连续给予受试物7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。模型对照组和各剂量组灌胃给予复方地芬诺酯（5g/kgBW），空白对照组给蒸馏水。给复方地芬诺酯0.5小时后，剂量组分别给予含相应受试样品的墨汁（含5%的活性炭、10%阿拉伯树胶），空白对照组和模型组给墨汁灌胃。25分钟后立即脱颈椎处死动物，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按下式计算墨汁推进率：
Figure BDA00003513051300181
得出墨汁推进率再按下式进行数据转换，
Figure BDA00003513051300182
式中P为墨汁推进率，用小数表示。所得数据为计算资料，在小肠便秘模型成立的前提下，受试样品组小鼠的墨汁推进率显著高于模型对照组，即可判定该项指标结果为阳性。
1.5.2小鼠排便时间、排便粒数和粪便重量的测定
连续给予受试物7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。空白对照给蒸馏水，模型对照组和三个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯（10g/kgBW），给复方地芬诺酯0.5小时后，空白对照组和模型组给墨汁灌胃，剂量组分别给予含受试样品的墨汁。动物单笼饲养，正常饮水进食。从灌墨汁开始，记录每只动物首粒排黑便时间以及6h内排黑便粒数及重量。所得数据为计量资料，在小肠便秘模型成立的前提下，受试样品组小鼠的首粒排便时间显著短于模型对照组，即可判定该项指标结果阳性。6小时排便粒数明显高于模型对照组，可判定该项指标结果阳性。6小时排便重量明显高于模型对照组，可判定该项指标结果阳性。
1.6数据处理
用SPSS软件进行数据处理，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐性的目的，改用秩和检验进行统计。
1.7结果判定依据
6小时排便重量和6小时排便粒数任一项结果为阳性，同时小肠运动实验和排便时间任一项结果阳性，可判定该受试样品通便功能动物实验结果阳性。
2结果
2.1P提取物对小鼠体重的影响
表8各组小鼠的初始体重（
Figure BDA00003513051300201
）
Figure BDA00003513051300202
由表8可见，模型对照组与空白对照组比较，小鼠的初始体重无明显差异（P>0.05）,在两批实验动物各剂量与模型对照组（0g/kgBW）组间比较，差异均无显著性（P>0.05）。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
表9P提取物对小鼠体重的影响（
Figure BDA00003513051300203
）
Figure BDA00003513051300204
由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的P提取物7天，模型对照组与空白对照组比较，小鼠的体重无明显差异（P>0.05），在两批实验动物各剂量组与模型对照组（0g/kgBW）间比较，差异均无显著性（P>0.05）。即P提取物对小鼠体重无不良影响。
2.2P提取物对墨汁推进率的影响
表10P提取物对墨汁推进率的影响（
Figure BDA00003513051300211
）
Figure BDA00003513051300212
#：模型对照组与空白对照组比较有显著差异
*：剂量组与模型对照组比较有显著差异
由表10可见，经口给予小鼠不同剂量的P提取物7天，模型对照组与空白对照组比较，墨汁推进率有显著降低（P<0.001），表明模型建立成功。0.50g/kgBW组、1.50g/kgBW组与模型对照组（0g/kgBW）比较，墨汁推进率有显著性差异（P<0.05）。即P提取物在0.50g/kgBW组、1.50g/kgBW组能提高小鼠小肠运动实验墨汁推进率。
2.3P提取物对排便时间的影响
表11P提取物对首粒排黑便时间的影响（
Figure BDA00003513051300221
）
Figure BDA00003513051300222
#：模型对照组与空白对照组比较有显著差异
*：剂量组与模型对照组比较有显著差异
由表11可见，经口给予小鼠不同剂量的P提取物7天，模型对照组与空白对照组比较，首粒排黑便时间显著延长（P<0.001），表明模型建立成功。1.50g/kgBW组与模型对照组（0g/kgBW）比较，排便时间有显著性差异（P<0.05）。即P提取物在1.50g/kgBW组能缩短小鼠排便时间。
2.4P提取物对排便粒数的影响
表12P提取物对排黑便粒数的影响（
Figure BDA00003513051300223
）
Figure BDA00003513051300224
Figure BDA00003513051300231
#：模型对照组与空白对照组比较有显著差异
*：剂量组与模型对照组比较有显著差异
由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的P提取物7天，模型对照组与空白对照组比较，排黑便粒数显著减少（P<0.001），表明模型建立成功。1.50g/kgBW组与模型对照组（0g/kgBW）比较，排便粒数有显著性差异（P<0.05）。即P提取物在1.50g/kgBW组能增加小鼠排黑便粒数。
2.5P提取物对排便重量的影响
表13P提取物对排黑便重量的影响（
Figure BDA00003513051300232
）
Figure BDA00003513051300233
#：模型对照组与空白对照组比较有显著差异
*：剂量组与模型对照组比较有显著差异
由表13可见，经口给予小鼠不同剂量的P提取物7天，模型对照组与空白对照组比较，排黑便重量显著减少（P<0.001），表明模型建立成功。1.50g/kgBW组与模型对照组（0g/kgBW）比较，排黑便重量有显著性差异（P<0.05）。即P提取物在1.50g/kgBW组能增加小鼠排黑便重量。
结论
经口给予小鼠不同剂量P提取物7天，与模型对照组（0g/kgBW）比较，该受试物在0.50g/kgBW组能提高小鼠小肠运动实验墨汁推进率（P<0.05）；在1.50g/kgBW组能提高小鼠小肠实验墨汁推进率（P<0.05）；缩短小鼠排便时间（P<0.05），增加小鼠排便粒数（P<0.05）；增加小鼠排黑便重量（P<0.05）。
受试物对小鼠体重增长无不良影响。
根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版），对通便功能保健食品的判定标准可知，P提取物调节通便功能动物实验结果阳性。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制，普洱茶的水提取物均具有本发明所述的效果。
实施例1
普洱茶提取物生产工艺：
普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次（1.5h，1.5h，1h；10bv，8bv，8bv），提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2-1：3，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（45-65℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
其中管式离心条件：离心机转速：17000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：160℃，出风温度：85℃。
实施例2
步骤1，普洱茶叶加水煎煮提取3次，每次0.5小时，6倍体积的水；提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2，
步骤2，浓缩液用离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1（45℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
实施例3
步骤1，普洱茶叶加水煎煮提取3次，每次2小时，12倍体积的水；提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：3，
步骤2，浓缩液用离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.25（65℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
实施例4
步骤1，普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次，每次0.5小时，6倍体积的水；提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2，
步骤2，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1（45℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
其中管式离心条件：离心机转速：15000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：140℃，出风温度：75℃
实施例5
步骤1，普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次，每次2小时，12倍体积的水。提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：3，
步骤2，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.25（65℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。
其中管式离心条件：离心机转速：19000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：190℃，出风温度：95℃
实施例6
普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次（1h，1h，1h；6bv，6bv，6bv），提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2.5，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（50℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。其中管式离心条件：离心机转速：17000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：160℃，出风温度：85℃
实施例7
普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次（2h，2h，2h；10bv，10bv，10bv），提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2.5，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（50℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。其中管式离心条件：离心机转速：17000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：160℃，出风温度：85℃
实施例8
普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取2次（0.5h，0.5h；12bv，12bv），提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2.5，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（50℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。其中管式离心条件：离心机转速：17000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：160℃，出风温度：85℃
实施例9
普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取4次（2h，2h，2h，2h；10bv，10bv，10bv，10bv），提取液过滤，滤液减压浓缩（≤70℃）至茶叶（重量）：浓缩液（体积）=1：2.5，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至比重1.1—1.25（50℃），浓缩膏喷雾干燥即得（或微波干燥，粉碎即得）。其中管式离心条件：离心机转速：17000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：160℃，出风温度：85℃
实施例10
根据实施例1-9中任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成片剂。
实施例11
根据实施例1-9中任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成胶囊。
实施例12
根据实施例1-9中任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成颗粒剂。
实施例13
根据实施例1-9中任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成散剂。
实施例14
根据实施例1-9中任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成滴丸剂。
实施例15
根据实施例1-9中任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成注射剂。
实施例16
根据实施例1-9中任意一个提取物，以常规工艺按一定比例加入到茶叶制品中，制成具有调节肠道菌群或便秘功能的保健茶。
实施例17
根据实施例1-9中任意一个提取物，以常规工艺按一定比例加入到乳制品中，制成具有调节肠道菌群或便秘功能的保健食品。
实施例18
根据实施例1-9中的任意一个提取物，以常规工艺按一定比例加入到饮料中，制成具有调节肠道菌群或便秘功能的保健饮料。
实施例19
根据实施例1-9中的任意一个提取物，以常规工艺按一定比例加入到糕点中，制成具有调节肠道菌群或便秘功能的保健糕点。

Claims (3)

1.普洱茶提取物在制备治疗调节肠道菌群的药物或保健品中的应用，
其中，所述治疗调节肠道菌群是指：普洱茶提取物能够增加肠道有益菌并抑制肠道不利菌群的生长；普洱茶提取物增加乳杆菌和双歧杆菌的数量；普洱茶提取物抑制肠球菌的生长；
普洱茶提取物的制备方法为：
步骤1，普洱茶叶加水煎煮提取2-4次，每次0.5～2小时，6-12倍体积的水；提取液过滤，滤液在≤70℃条件下减压浓缩至茶叶重量：浓缩液体积＝1：2-1：3，
步骤2，浓缩液用离心机离心，离心液减压浓缩至45-65℃比重1.1—1.25，浓缩膏喷雾干燥或微波干燥，即得。
2.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述普洱茶提取物，提取步骤如下：
步骤1，普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次，每次0.5～2小时，加水量6-12倍体积的水；提取液过滤，滤液在≤70℃条件下减压浓缩至茶叶重量：浓缩液体积＝1：2-1：3，
步骤2，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至45-65℃比重1.1—1.25，浓缩膏喷雾干燥或微波干燥，即得；
其中管式离心条件：离心机转速：15000-19000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：140-190℃，出风温度：75-95℃。
3.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述普洱茶提取物，提取步骤如下：
普洱茶叶加水剧烈沸腾煎煮提取3次，第1次煎煮1.5h，加水10倍体积；第2次煎煮1.5h，加水8倍体积；第3次煎煮1h，加水8倍体积，提取液过滤，滤液在≤70℃条件下减压浓缩至茶叶重量：浓缩液体积＝1：2-1：3，浓缩液用三足离心机离心，三足离心液用管式离心机离心，离心液减压浓缩至45-65℃比重1.1—1.25，浓缩膏喷雾干燥或微波干燥，即得；
其中管式离心条件：离心机转速：15000-19000转/min；喷雾干燥条件：进风温度：140-190℃，出风温度：75-95℃。
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