CN112957409A - 一种葡萄籽红花籽油组合物及其应用 - Google Patents
一种葡萄籽红花籽油组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种葡萄籽红花籽油组合物及其应用。前述组合物包括葡萄籽提取物、红花籽油；组合物中，所述组合物中，葡萄籽提取物的重量百分比含量为10～50％。本发明的组合物具有抑制铁死亡、辅助降血脂及抗氧化的作用。组合物中，葡萄籽红花籽油组合物能够显著降低MDA水平，减少脂质过氧化物的产生；同时显著降低p53蛋白水平，提高GPX4活性，细胞抗氧化能力增强，抑制铁死亡。在辅助降血脂功能试验中，血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平明显降低，高密度脂蛋白升高，具有显著辅助降血脂功能。在抗氧化功能试验中，SOD水平较对照组有显著性提高。
Description
技术领域
本发明属于药品、保健食品技术领域，具体涉及一种葡萄籽红花籽油组合物及其应用。
背景技术
铁死亡是由Dixon等在Cell杂志上首次提出，是一种铁依赖性的、脂质过氧化物生成所致的新型细胞死亡方式。铁死亡在形态学上表现出细胞萎缩，线粒体变小，线粒体膜密度增加。在分子机制上，主要表现在细胞内脂质过氧化物代谢障碍。近些年研究发现，铁死亡与众多疾病的发生有关，包括阿尔兹海默症，脑卒中，帕金森综合征，脏器纤维化，多种癌症。目前铁死亡的研究发现：Xc-系统、谷胱甘肽及谷胱甘肽过氧化物酶在调节铁死亡中起着重要作用。
现有公开的具有抑制铁死亡功效的活性成分相关的专利文献主要有：公开号为CN111870613A的专利文献中公开了一种桃叶珊瑚苷或其苷元在制备抑制铁死亡药物中的应用，但机制尚不清楚；公开号为CN111888350A的专利文献中公开了桑辛素N或其盐可以有效拮抗铁死亡或谷氨酸引起的谷胱甘肽水平的降低，可以很好地改善铁死亡；公开号为CN111658655A的专利文献中公开了葫芦素B可诱导铁死亡的发生，以一种新型的促进细胞死亡的方式调控鼻咽癌细胞的死亡；公开号为CN110747250A的专利文献中公开了厚朴酚可以抑制Erastin和RSL3诱导的脂质过氧化物丙二醛的积累，从而抑制铁死亡；公开号为CN109908137A的专利文献中公开了青蒿素与四氧化三铁纳米颗粒联用，对乳腺癌干细胞的杀伤效果显著提高，这种效果来源于青蒿素具有诱导乳腺癌干细胞铁死亡的作用；花椒中的异丁基酰胺化合物对Erastin诱导的小鼠海马神经元细胞系HT22细胞铁死亡具有明显的抑制作用；丹参酮ⅡA对脑缺血模型中的铁死亡具有抑制作用等。
p53基因是重要的抑癌基因，其介导的细胞周期抑制、衰老、凋亡在肿瘤的发生发展过程中有重要作用。胱氨酸谷氨酸转运受体(systemXC-)是由SLC7A11和SLC3A2组成的异二聚体，能够抑制铁死亡。
研究表明在铁死亡过程中，p53基因可通过下调SLC7A11的表达从而抑制systemXC-吸收胱氨酸，致使胱氨酸依赖的谷胱甘肽过氧化物酶活性降低，细胞抗氧化能力降低，脂质活性氧升高，引起细胞铁死亡。
葡萄籽提取物原花青素是目前已知的抗氧化作用最强的天然食品之一，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂之一，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多种药理活性；红花籽油中含有大量亚油酸及维生素E，具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎、抗衰老和抗肿瘤等多种药理作用。但是目前没有红花籽油、葡萄籽提取物组合物与铁死亡有关的报道，而以p53基因深入研究铁死亡，在上述专利文献中尚未见报道。
发明内容
为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供一种性能稳定、服用安全、吸收有效的具有抑制铁死亡、辅助降血脂及抗氧化功能的葡萄籽红花籽油组合物。
本发明同时公开了一种包含有上述葡萄籽红花籽油组合物的软胶囊、滴丸、硬胶囊、片剂或颗粒剂制剂。
本发明的首要目的在于提供上述葡萄籽红花籽油组合物在制备抑制铁死亡药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供上述葡萄籽红花籽油组合物在制备辅助降血脂或/和预防动脉粥样硬化药物中的应用。
本发明的又一目的在于提供上述葡萄籽红花籽油组合物在制备抗氧化药物中的应用。
本发明的又一目的在于提供上述葡萄籽红花籽油组合物在制备保健食品中的应用。
一种葡萄籽红花籽油组合物，包括葡萄籽提取物、红花籽油；葡萄籽提取物的中百分比含量为10～50％。进一步优选为12％～24％。
作为优选，所述组合物中还可以同时包括蜂蜡。
作为优选，按照重量百分比计，所述组合物中，所述原花青素的含量≥10％，所述亚油酸的含量≥40％。
本发明中，所述葡萄籽提取物中，原花青素的含量≥93％。所述红花籽油中亚油酸含量为60％～85％。
上述组合物具有抑制铁死亡，以及协同降血脂抗氧化的功能，并具有明显优势。葡萄籽提取物中原花青素是目前已知的抗氧化作用最强的天然食品之一，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂之一，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多种药理活性；红花籽油中含有大量亚油酸及维生素E，具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎、抗衰老和抗肿瘤等多种药理作用。
本发明的组合物通过调整葡萄籽提取物及红花籽油的配伍比例，得到能够同时具有抑制铁死亡、辅助降血脂和抗氧化的功能。
作为优选，上述葡萄籽红花籽油组合物，以组合物以500份总量计，包括以下重量份的组分：葡萄籽提取物60～240份，红花籽油240～420份，蜂蜡0～30份。
作为进一步优选，上述葡萄籽红花籽油组合物，以组合物以500份总量计，包括以下重量份的组分：葡萄籽提取物60～120份，红花籽油360～420份，蜂蜡0～30份。作为一种优选方案，上述葡萄籽红花籽油组合物，包括以下重量份的组分：葡萄籽提取物80～110份，红花籽油380～400份，蜂蜡10～20份。
更进一步优选为，上述葡萄籽红花籽油组合物，包括葡萄籽提取物90份，红花籽油390份，蜂蜡20份。
一种上述任一项中所述的葡萄籽红花籽油组合物的制备方法，包括：
可选择的将蜂蜡放入部分红花籽油中，加热熔化；随后加入葡萄籽提取物和剩余红花籽油，搅拌至混合均匀，得所述葡萄籽红花籽油组合物。
作为优选，上述制备方法中，将红花籽油、蜂蜡和葡萄籽提取物混合搅拌后，再经胶体磨混合。
一种葡萄籽红花籽油制剂，所述制剂为由上述任一项所述的葡萄籽红花籽油组合物制成的软胶囊、滴丸、硬胶囊、片剂或颗粒剂。
作为优选，所述制剂为软胶囊，所述软胶囊包括内容物和胶皮，所述内容物为所述葡萄籽红花籽油组合物。
作为优选，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物60～240g，红花籽油240～420g，蜂蜡0～20g。作为进一步优选，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物60～120g，红花籽油360～420g，蜂蜡15～20g。
作为一种优选方案，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物80～100g，红花籽油380～400g，蜂蜡15～20g。
作为优选，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物90±10g，红花籽油390±10g，蜂蜡20±5g。
作为进一步优选，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物90g，红花籽油390g，蜂蜡20g。
作为优选，所述胶皮由明胶与增塑剂制备得到。所述增塑剂为甘油、山梨醇或两者的混合物。
本发明中的胶皮可以采用现有材料，按照现有的工艺加工所述的软胶囊。软胶囊壳较硬胶囊壳厚，且弹性大，可塑性强。软胶囊的弹性大小取决于囊壳中干明胶、干增塑剂及水三者之间的重量比。而明胶与增塑剂的干品重量决定胶壳的硬度。通常较适宜的重量比为干增塑剂：干明胶＝0.3～0.6：1.0，比如，所述胶皮主要包括明胶、甘油等。
实际加工时，制作所述胶皮包括的组分及各组分的重量比为：明胶：甘油：饮用水＝1：(0.3～0.6)：1；作为具体的优选方案，明胶：甘油：饮用水＝1：0.35：1。
作为优选，所述胶皮还包括避光剂和着色剂。所述避光剂优选为二氧化钛；所述着色剂优选为牛奶巧克力棕。所述避光剂的含量为总胶皮质量的0.05～0.1％。所述着色剂的含量为总胶皮质量的0.1～0.25％。
一种葡萄籽红花籽油软胶囊的制备方法，包括：制备葡萄籽红花籽油组合物、化胶、压丸、干燥、造丸等。
本发明的葡萄籽红花籽油组合物在添加其他相应填充剂后，可以制成滴丸、硬胶囊、片剂、颗粒剂等。
一种如上述任一项所述的葡萄籽红花籽油组合物在制备抑制铁死亡药物中的应用。
在动物实验中表明，本发明得到的葡萄籽红花籽油组合物具有使SLC7A11蛋白的水平显著升高，p53蛋白显著降低(P<0.05)的功能，从而通过上调SLC7A11的表达，促进systemXC-吸收胱氨酸，致使胱氨酸依赖的谷胱甘肽过氧化物酶活性升高，细胞抗氧化能力增强，抑制铁死亡。
铁死亡是铁依赖性的，脂质过氧化物积累所致的一种新型细胞死亡方式。由脂质过氧化反应产生的丙二醛(MDA)，与多种疾病的病理进展有关，包括癌症、糖尿病、神经退行性疾病、心血管疾病和肝脏疾病等。红花籽油中维生素E和葡萄籽中的原花青素具有强抗氧化作用，可以减少脂质过氧化，使MDA含量显著降低。
铁死亡的生化过程中，细胞内谷胱甘肽(GSH)耗竭，谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4，GPX4)活性降低，脂质过氧化物不能被GPX4催化的还原反应所代谢，Fe2+以Fenton反应的方式氧化脂质，产生了大量活性氧(ROS)，进一步促进了铁死亡过程。在本文抗细胞铁死亡功能评价中葡萄籽红花籽油组合物能使GSH水平增高，GPX4活性显著提高。
一种如上述任一项所述的葡萄籽红花籽油组合物在制备抗氧化药物中的应用。
在抗氧化功能人体试验中，红花籽油中维生素E和葡萄籽中的原花青素具有强抗氧化作用，本发明得到的组合物显著提高了超氧化物歧化酶(SOD)(配对与成组t检验，P＜0.05)活性，具有很强的抗氧化和清除自由基效果。
一种如上述任一项所述的葡萄籽红花籽油组合物在制备辅助降血脂药物中的应用。
在辅助降血脂功能人体试食试验中，试食组连续服用3个月本发明得到的软胶囊，血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平明显降低(P＜0.05)，高密度脂蛋白升高，具有显著辅助降血脂功能。其中人体试验甘油三酯下降百分比17.17±13.40，总胆固醇下降百分比10.78±10.76，降低甘油三酯效果要优于胆固醇。
红花籽油富含多不饱和脂肪酸Omega-6(亚油酸含量约80％)，对维持细胞膜的正常功能有重要作用，胆固醇与LA形成亚油酸胆固醇酯，被转运和代谢，从而降低血中胆固醇；同时亚油酸是甘油三酯合成酶的竞争底物，亚油酸能够减少肝脏中甘油三酸酯的合成，抑制脂肪酸的酯化，从而降低甘油三酯；在高脂血症中血浆卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性下降会导致脂质过氧化物明显增加，亚油酸和原花青素能够显著提高LCAT的活性，增加胆汁酸的排泄，从而降低血脂。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的葡萄籽红花籽油组合物具有抑制铁死亡、辅助降血脂及抗氧化的作用。其中，葡萄籽红花籽油组合物能够显著降低MDA水平，减少脂质过氧化物的产生；同时显著降低p53蛋白水平，上调SLC7A11的表达，促进system XC-摄取胱氨酸，致使GPX4活性升高，细胞抗氧化能力增强，抑制铁死亡。此外在辅助降血脂功能人体试食试验中，血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平明显降低，高密度脂蛋白升高，具有显著辅助降血脂功能。在抗氧化功能人体试验中，试食组连续服用4个月本发明的葡萄籽红花籽油软胶囊SOD水平较对照组有显著性提高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
本实施例所用原料均为市购产品，其中：
红花籽油购于新疆红花缘科技有限公司(其中亚油酸含量为78％)，是以红花籽(Carthamus tinctorius L.)为原料经压榨等工艺加工制成的油。
葡萄籽提取物购于浙江绍兴东灵保健食品有限公司(其中原花青素的含量为94％)，是葡萄科植物葡萄(Vitis vinifera L.)的种子，经过提取、回收乙醇、离心、浓缩、干燥得到的。
蜂蜡购于江山福赐德蜂业科技开发有限公司，该品为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂Apiscerana Fabricius或意大利蜂Apis mellifera Linnaeus分泌的蜡。
明胶、甘油分别购于浙江吉达生物科技有限公司和浙江遂昌惠康药业有限公司，在产品中作为胶皮的原料，各项技术要求和试验方法符合食品添加剂中明胶、甘油规定。
二氧化钛购于上海江沪钛白化工制品有限公司奉贤分公司：在本产品中作为避光剂使用。符合《GB 25577-2010食品添加剂二氧化钛》的要求。
牛奶巧克力棕(日落黄、胭脂红、亮蓝、食用盐)购于天津多福源实业有限公司，作为胶皮的着色剂使用。符合《GB 2760食品添加剂使用卫生标准》和《GB 26687-2011食品安全国家标准复配食品添加剂通则》的规定。
实施例1：不同配比葡萄籽红花籽油组合物的制备
不同配比葡萄籽红花籽油组合物的原料配比如表1：
表1为不同配比葡萄籽红花籽油组合物的原料配比
| 原料 | 组合物1 | 组合物2 | 组合物3 | 组合物4 | 组合物5 | 组合物6 |
| 葡萄籽提取物 | 0g | 30g | 60g | 120g | 240g | 480g |
| 红花籽油 | 480g | 450g | 420g | 360g | 240g | 0g |
| 蜂蜡 | 20g | 20g | 20g | 20g | 20g | 20g |
配料：按表1中的组成配比，精确称取处方量的葡萄籽提取物、红花籽油(留下少许)倒入具有搅拌功能的不锈钢桶中；随后，将处方量的蜂蜡用剩余的红花籽油加热熔化一起加入不锈钢桶，搅拌15分钟，料液经过胶体磨混合，使料液充分混合均匀。
实施例2：葡萄籽红花籽油软胶囊的制备
本具体实施方式采用如下技术方案：葡萄籽红花籽油软胶囊的配方包括原料和辅料，原料和辅料的配比如表2(表2为制作10万粒软胶囊的物料量)。
表2葡萄籽红花籽油软胶囊的配比
配料：按表2中原料的配比精确称取处方量的葡萄籽提取物、红花籽油(留下少许)倒入具有搅拌功能的不锈钢桶中；随后，将处方量的蜂蜡用剩余的红花籽油加热熔化一起加入不锈钢桶，搅拌15分钟，料液经过胶体磨混合，使料液充分混合均匀，转移料液至配料罐中；
化胶：按表2中辅料的配比称量明胶、甘油、纯化水(饮用水)、二氧化钛、牛奶巧克力棕，开启化胶罐搅拌，先将纯化水加入化胶罐中，然后加入甘油，待温度为65℃～72℃时，加入明胶粉，当明胶粉在化胶罐内完全融化后，混合均匀，控制温度为65℃～75℃，开启真空泵，进行抽真空脱气泡。
压丸、干燥：将压丸机调至良好状态；根据质量部检测的原料料液含量，计算出装量，并调节好填充量；把保温胶桶推到压丸机指定位置，连接好输胶管，接通电源，将温胶桶温度设为50℃～60℃。启动主机和冷风机，制备胶带，胶带厚度为0.6～0.9mm，将胶带送入两模具中间，降下喷体，同时设定喷体温度40℃～50℃，给两模具加压，推进喷体供料液开关，开始压丸。随机打开转笼开关和送风开关，打开输送带，使胶丸进入到定形转笼内进行定形。胶丸在定形转笼内定形3～4小时左右，即可出笼，转入干燥室，在干燥转笼内干燥10～14小时，然后将吸油布放入转笼内转动2小时将胶丸表面的油质擦除干净。
选丸：将胶丸转入选丸室，剔除漏料液丸、畸形丸等不合格胶丸。选好的胶丸，按5000粒/袋装入洁净的塑料袋内封好，并贴上标签，标明批次、重量、日期，转入中间站。
内包装：根据批包装指令单，领取该批次用量的内包材。脱外包装后，经传递窗进入洁净区内包暂存室。先用75％乙醇擦拭包装袋外壁，之后打开包装袋，将塑料瓶放入已消毒的周转框内，数粒机加料斗用75％乙醇消毒。把胶丸从中间站领至内包装室，放至包装操作台，用已消毒的数粒机进行包装。
外包装：根据批包装指令单，领取该批次用量的外包装材料，在标签、包装盒上印好批号、生产日期和有效期，叠好说明书，将包装盒整理成型，然后将内包装室传送来的瓶子经感应封口贴标签，再装盒、装箱、捆扎、送检。检验合格后，填写合格证、入库单，交成品库，送留样。
效果试验：
实验一、抗铁死亡功能评价一(葡萄籽红花籽油组合物性能体外试验)
分别以实施例1中制得的组合物1～6进行如下细胞实验。
将体外培养的肝细胞随机分为8组：正常对照组：加入正常培养液培养；Erastin(铁死亡诱导剂)(20μmol/L)模型组：向含有肝细胞的培养液中加入20μmol/L Erastin进行培养；Erastin+组合物处理组(其中，组合物为实施例1中制得的组合物1～6，并分别记为组合物1～6组，共六组)：向六份含有肝细胞的培养液中分别加入组合物1～6培养4小时后，再分别加入20μmol/L Erastin进行培养。
6小时后分别测定上述各组细胞培养液中MDA、ROS、GSH含量，结果如表3所示；24h后利用荧光定量PCR法检测肝细胞中的GPX4、SLC7A11、p53相对表达量，结果如表4所示。
表3各组细胞MDA、ROS、GSH含量比较
注：与正常组比较，配对t检验，aP<0.05，aaP＜0.01；与模型组比较，t检验，bP<0.05，bbP＜0.01。
表4各组细胞GPX4、SLC7A11、p53表达水平比较
注：与正常组比较，配对t检验，aP<0.05，aaP＜0.01；与模型组比较，bP<0.05，bbP＜0.01。
结果表明：与正常组相比，模型组出现细胞凋亡且相关蛋白的含量及mRNA的表达均具有显著差异性(P<0.01)，证明造模成功。与模型组相比，不同比例的葡萄籽&红花籽油组(组合物1～6组)组合物组细胞凋亡程度均减轻，ROS水平显著降低；GPX4、SLC7A11蛋白及mRNA的相对表达量水平显著升高，p53蛋白及mRNA的相对表达量显著降低。葡萄籽&红花籽油组合物对Erastin诱导的肝细胞铁死亡具有抑制作用可能与其调控铁死亡相关基因与蛋白的相对表达有关。
结论：葡萄籽&红花籽油组合物可通过减少细胞凋亡，调控肝细胞铁死亡相关基因和蛋白质的表达，降低细胞脂质过氧化的发生，从而达到提高细胞存活率和保护细胞的作用，因此葡萄籽&红花籽油组合物具有抗细胞铁死亡功能。其中由表3和表4可知，组合物3～4效果较为显著，单葡萄籽(组合物1组)或者红花籽油的组合物(组合物6组)效果较差，显示，是葡萄籽&红花籽油组合物的效果有明显改善，其中组合物3、4的铁死亡抑制效果最佳。
实验二、抗铁死亡功能评价二(葡萄籽红花籽油配比优选体内试验)
以实验一结果作为参考，并结合制剂合理性和经济性，取组合物3、组合物4以及组合物M(葡萄籽提取物90mg，红花籽油390mg，蜂蜡20mg)，进行如下动物实验。
将50只(20±2)g雄性小鼠随机分为正常组，模型组，试验组(三组)，每组10只。
正常组：每日给予基础饲料饲养，饲养8周后开始灌胃生理盐水10ml/kg/d，期间正常饲养持续四周；
模型组：每日给予小鼠高脂饲料(含0.15％胆固醇和21％脂肪)喂饲8周后，开始灌胃生理盐水10ml/kg/d持续四周；
试验组：每日给予小鼠高脂饲料(含0.15％胆固醇和21％脂肪)喂饲8周后，取组合物3、组合物M、组合物4分别给上述造模后的小鼠按10ml/kg/d灌胃4周；
分别取上述各组小鼠的肝脏组织进行分析，分析结果见表5和表6。
表5各组小鼠肝脏MDA、ROS、GSH含量比较
注：与正常组比较，配对t检验，aP<0.05，aaP＜0.01；与模型组比较，t检验，bP<0.05，bbP＜0.01。
表6各组小鼠肝脏GPX4、SLC7A11、p53表达水平比较
注：与正常组比较，配对t检验，aP<0.05，aaP＜0.01；与模型组比较，t检验，bP<0.05，bbP＜0.01。
结果表明：实验结果呈现出与实验一相似的趋势，与正常组比较，模型组均有显著差异表明此造模成功。与模型组相比，葡萄籽&红花籽油组小鼠肝组织脂滴变小且脂肪变性程度明显减轻(MDA降低P＜0.01)；GSH水平增高但无显著差异，ROS水平显著降低(P＜0.01)；GPX4、SLC7A11蛋白及mRNA的水平显著升高(P＜0.01)，p53蛋白及mRNA的表达显著降低(P＜0.01)，葡萄籽&红花籽油组(组合物M)小鼠肝脏脂质沉积和脂质过氧化损伤具有治疗作用。
结论：葡萄籽&红花籽油组合物可通过拮抗肝细胞铁死亡相关因子进而实现肝脏的保护作用，也可降低肝细胞脂质过氧化的发生，减少细胞铁死亡可能与干预肝细胞铁死亡相关蛋白作用有关，因此葡萄籽&红花籽油组合物具有抗细胞铁死亡功能。
实验三、辅助降血脂功能评价
以实施例2中制得的葡萄籽红花籽油软胶囊进行人体效果试验。
采用双盲对照法，选择110例高脂血症患者，按年龄、性别、饮食、血脂水平等随机分为安慰剂对照组和试食组，试验结束时共获取有效例数105例，其中对照组50例，试食组55例。试食组食用葡萄籽红花籽油软胶囊，每日2次，每次2粒(0.5g/粒)，对照组服用安慰剂，服用方法同试食组，连续服用和观察3个月。观察期间保持平日的生活和饮食习惯，结果见表7-表11。
表7两组试验前后血清总胆固醇变化(nmol/L，
)
注：与对照组比较，成组t检验，aP<0.05，与试食前比较，配对t检验，bP<0.05。
表8两组试验前后血清甘油三酯的变化(nmol/L，
)
注：与对照组比较，成组t检验，aP<0.05，与试食前比较，配对t检验，bP<0.05。
表9两组试验前后高密度脂蛋白胆固醇的变化(nmol/L，
)
注：与试食前比较，配对t检验，bP<0.05。
表10两组试验前后低密度脂蛋白胆固醇的变化(nmol/L，
)
注：与对照组比较，成组t检验，aP<0.05，与试食前比较，配对t检验，bP<0.05。
表11临床观察功效比较
注：与对照组比较，X2检验，aP<0.054。
结果表明：试食组服用葡萄籽红花籽油软胶囊后血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低，自身比较及两组间比较差异均有显著性意义(P<0.05)，试食组试食后血清高密度脂蛋白胆固醇水平不显著低于对照组，差异无显著性(P>0.05)，试食组临床观察总有效率(85.5％)显著高于对照组(36.0％)，差异有显著性意义(P<0.05)。试食前后心率、血压、大小便、血象、血糖及肝肾功能等各项安全性检测指标均值均在正常范围内，试食期间也未见过敏及不良反应，未见主观感觉和进食状况异常改变，说明葡萄籽红花籽油软胶囊对受试者健康无明显损害。
结论：依据国家食品药品监督管理局《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》(国食药监保化[2012]107号)中辅助降血脂功能评价方法有关规则评判，可判定葡萄籽红花籽油软胶囊具有辅助降血脂功能。
实验四、抗氧化功能评价
以实施例2中制得的葡萄籽红花籽油软胶囊进行人体效果试验。
采用双盲对照法，选择符合纳入标准受试者110例，按年龄、性别及MDA、SOD水平等随机分为对照组和试食组，试验结束时共获取有效例数102例，其中对照组52例，试食组50例。试食组食用葡萄籽红花籽油软胶囊，每日2次，每次2粒(0.5g/粒)，对照组服用安慰剂，服用方法同试食组。观察期间保持平日的生活和饮食习惯，服食四个月。结果见表12-表13。
表12两组试食前后MDA水平变化(U/gHb，
)
注：与试食前比较，配对t检验，aP<0.05；与对照组比较，t检验，bP<0.05。
表13两组试食前后SOD水平变化(U/gHb，
)
注：与试食前比较，配对t检验，aP<0.05；与对照组比较，t检验，bP<0.05。
结果表明：葡萄籽红花籽油软胶囊试食组试食后MDA水平与试食前以及对照组比较，差异均有显著性意义(配对和成组t检验，P<0.05)，试食组试食后SOD(超氧化物歧化酶)水平与试食前和对照组比较，差异均有显著性意义(配对和成组t检验，P<0.05)，可判定MDA和SOD为阳性指标。
试食前后两组心率、血压、血象、血糖、血脂和肝肾功能以及大小便各项检测指标均在正常范围内，胸透、心电图及腹部B超检查均无异常改变，试食期间也未见过敏及不良反应，未见主观感觉和进食状况异常改变，说明葡萄籽红花籽油软胶囊对受试者健康无明显影响。
结论：据国家食品药品监督管理局《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》(国食药监保化[2012]107号)中抗氧化功能人体试食试验有关规则评判，葡萄籽红花籽油软胶囊具有抗氧化功能的作用。
Claims (10)
1.一种葡萄籽红花籽油组合物，其特征在于，包括葡萄籽提取物、红花籽油；所述组合物中，葡萄籽提取物的重量百分比含量为10％～50％。
2.根据权利要求1所述的葡萄籽红花籽油组合物，其特征在于，以重量百分比计，所述组合物中，原花青素的含量≥10％，亚油酸的含量≥40％。
3.根据权利要求1所述的葡萄籽红花籽油组合物，其特征在于，以总量为500份计，包括以下重量份的组分：葡萄籽提取物60～240份，红花籽油240～420份，蜂蜡0～30份。
4.根据权利要求3所述的葡萄籽红花籽油组合物，其特征在于，以总量为500份计，包括以下重量份的组分：葡萄籽提取物60～120份，红花籽油360～420份，蜂蜡10～20份。
5.一种葡萄籽红花籽油制剂，其特征在于，所述制剂为由权利要求1～4中任一项所述的葡萄籽红花籽油组合物制成的软胶囊、滴丸、硬胶囊、片剂或颗粒剂。
6.根据权利要求5所述的葡萄籽红花籽油制剂，其特征在于，所述制剂为软胶囊，所述软胶囊包括内容物和胶皮，所述内容物为所述葡萄籽红花籽油组合物。
7.根据权利要求6所述的葡萄籽红花籽油制剂，其特征在于，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物60～240g，红花籽油240～420g，蜂蜡0～20g。
8.根据权利要求7所述的葡萄籽红花籽油制剂，其特征在于，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物60～120g，红花籽油360～420g，蜂蜡15～20g。
9.根据权利要求8所述的葡萄籽红花籽油制剂，其特征在于，1000粒软胶囊的内容物包括葡萄籽提取物80～100g，红花籽油380～400g，蜂蜡15～20g。
10.一种如权利要求1～4中任一项所述的葡萄籽红花籽油组合物在制备抑制铁死亡药物或/和抗氧化药物或/和辅助降血脂药物或/和预防动脉粥样硬化药物或保健食品中的应用。
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