CN101880691A - 一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其是采用红曲菌株培养一级种子，培养基配方为：500ml培养液中葡萄糖50g、蛋白胨10～15g、NaNO30.45g、MgSO4·7H2O0.45g、KH2PO40.45g，pH值4.8-5.0；用500ml的三角瓶装100～150ml的培养基，在1kg/cm2的压力下灭菌30min，冷却接种接入斜面菌种，在30℃温度下培养45～50h，得到一级种子；将一级种子接入固体培养基上，进行固态培养制得低桔霉素的酿酒功能红曲。本发明方法，培养基不含桔霉素，所得酿酒功能红曲成品中Monacolin k的含量能达到5～14g/kg，桔霉素含量低。
Description
技术领域
本发明涉及酿酒功能红曲的制备方法，该方法高产Monacolin K，低产桔霉素。
背景技术
红曲在医药方面的功效在我国早有记载：元朝吴瑞的《日用本草》载：“红曲酿酒，破血行势药”，忽思慧的《饮膳正要》载：“红曲，健脾，益气温中”，朱丹溪的《本草衍义补遗》载：“红曲，甘、温，无毒，主治：消食活血，健脾暖胃、治赤白痢，下水谷。酿酒，破血行药势，杀山岚瘴气，治打扑伤损，治女人血气痛及产后恶血不尽。”在国外对红曲的研究者甚多，早在1979年日本学者远藤章教授根据朱丹溪的中医理论进行研究发现，利用红曲发酵其产物对人体有降血压、降血脂的作用，降血压的作用是γ-氨基丁酸(GABA)，降血脂的作用的Monacolin K。红曲的次级代谢产物Monacolin K具有抑制肝脏合成胆固醇的作用，是世界公认的治疗高血脂等心血管疾病的特效药，临床应用广泛。1985年美国科学家发现Monacolin K能通过竞争性抑制还原酶起到抑制胆固醇的合成作用而获诺贝尔奖，美国默克公司制成的降脂产品“美降之”是土霉素发酵后提成的Monacolin K，它在降脂作用的同时也抑制了辅酶Q的生成，而辅酶Q对肝脏有保护作用，而红曲的次级代谢产物中不仅含有Monacolin K同时也有辅酶Q的存在。故当红曲的全部发酵物入药时就不存在药物的副作用，这就保证了红曲的安全性。
红曲的品种极多，功能也大相庭径，在特定条件下有Monacolin K、GABA、桔霉素等次级代谢产物，但其含量不等，尽管Monacolin K及GABA对人体有益，但桔霉素却对人体有害，自1995年法国人Blacc发现红曲霉能产生真菌毒素citrinin后，红曲产品的安全性就受到了严重的挑战，因此寻求不产或低产桔霉素的红曲霉菌种成为当代科学界研究红曲的重要课题。
发明内容
本发明的目的是提供一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，以减少红曲的次级代谢产物中桔霉素的含量。为此，本发明采用以下技术方案：
一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是：
采用红曲菌株培养一级种子，培养基配方为：500ml培养液中葡萄糖50g、蛋白胨10～15g、NaNO30.45g、MgSO4·7H2O0.45g、KH2PO40.45g，PH值4.8-5.0；
用500ml的三角瓶装100～150ml的培养基，在1kg/cm2的压力下灭菌30min，冷却接种接入斜面菌种，在30℃温度下培养45～50h，得到一级种子；
将一级种子接入固体培养基上，进行固态培养制得低桔霉素的酿酒功能红曲。
作为优选，所述固体培养基的原料：500ml三角瓶内加入100～150g早籼米，再加入相对于早籼米质量80～130％的水分，在1kg/cm2的压力下灭菌30min；再向固体培养基接入一级种子，摇匀后在32℃温度下培养3天后再变温至25～27℃培养10～18天；烘干灭菌，得成品。
作为优选，所述的早籼米是当年新早籼米。
向所述的固体培养基接入一级种子的质量为固体培养基的10-20％。
作为优选，所述的红曲菌株为红色红曲霉菌株丹溪-1号。
本发明方法，
经斜面培养得到一级种子，再由早籼米及水经高温灭菌后用一级种子接种进行固态发酵制得低产桔霉素的红曲，培养基不含桔霉素，所得酿酒功能红曲成品中Monacolin k的含量能达到5～14g/kg，桔霉素含量低；MonacolinK可作为食品添加剂和保健食品的配料使用，而且整个生产过程中除了一级种子的培养基使用了少量化学试剂，而这些化学试剂均为分析纯，不产生任何污染，因此安全可靠，完全可以食用。
具体实施方式
以下对本发明做进一步说明。
本发明的低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是：
采用红曲菌株培养一级种子，培养基配方为：500ml培养液中葡萄糖50g、蛋白胨10～15g、NaNO30.45g、MgSO4·7H2O0.45g、KH2PO40.45g，PH值4.8-5.0；
用500ml的三角瓶装100～150ml的培养基(培养基呈液体)，在1kg/cm2的压力下灭菌30min，冷却接种接入斜面菌种(即将红曲菌株的斜面菌种接入三角瓶内的培养基)，在30℃温度下培养45～50h，得到一级种子；
将一级种子接入固体培养基上，进行固态培养制得低桔霉素的酿酒功能红曲。
具体的，所述固体培养基的原料：500ml三角瓶内加入100～150g早籼米，再加入相对于早籼米质量80～130％的水分，在1kg/cm2的压力下灭菌30min；再向固体培养基接入一级种子，摇匀后在32℃温度下培养3天后再变温至25～27℃培养10～18天；烘干灭菌，得成品。
而且，早籼米应当是当年新早籼米。向固体培养基接入一级种子的质量为固体培养基的10-20％。
红曲菌株为红色红曲霉菌株丹溪-1号(参见ZL20051006419.0号专利)：该红色红曲霉菌株丹溪-1号被命名为Monascus ruber红色红曲霉丹溪-1号。
该红色红曲霉菌株丹溪-1号培养特征如下：麦芽汁琼脂上30℃培养25天，菌落质地较紧密，毡状平坦，背面有少量放射状辐射纹，扩展生长，边缘平整，菌丝体初期平绒状，落英粉色，老熟后玫瑰粉色；MEA培养基上30℃培养25天，菌落生长平坦，不规则边缘呈花瓣状，有少量气生菌丝形成，初期金萦黄色，老熟后淡可棕色；CYA培养基上30℃培养25天，菌落生长稀薄，白色，背面无放射状褶皱。
该红色红曲霉菌株丹溪-1号的菌株形态特征：菌丝体不规则分枝，有隔，产生橙黄色油滴，菌丝直径3-6μm，分生孢子存在，多单生，洋梨形或球形，14×8-9μm，被子器浅橙色或无色，近球形25-37μm，壁厚2-3μm，大多数的被子器内的子囊孢子形成浅橙色或无色，近球形25-37μm，壁厚2-3μm，大多数的被子器内的子囊孢子形成欠佳；子囊孢子椭圆形或近球形，光滑，淡黄色，5.0-5.8×4.3-5.2μm，4.6-5.4μm。
该红色红曲霉菌株丹溪-1号的菌株的稳定性特征：分别在麦芽汁琼脂培养基和土豆琼脂培养基上，30℃10天条件下，经数代连续培养，其培养特征及形态特征均无明显变化，该菌的生物性状基本稳定。
通过本方法，所得酿酒功能红曲成品中Monacolin k的含量能达到5～14g/kg，桔霉素含量低。
以下说明本发明的实施例：
实施例1
采用丹溪1号红曲菌斜面培养一级种子，一级种子培养基100ml，葡萄糖5g，蛋白胨3g、NaNO30.15g、MgSO4·7H2O 0.15g、KH2PO40.15g，PH值4.8，高压灭菌1kg/cm230min，冷却到30℃接种，1支斜面接2个三角瓶，30℃培养48h，菌液变稠经镜检无污染；
500ml三角瓶加入早籼米100g加水80ml，高压灭菌1kg/cm230min，冷却到32℃摇匀使颗粒分散，接入一级种子15ml，再摇匀。32℃培养3d，保持湿度70±10％，待大米表面布满菌丝体色呈紫红色，再变温培养，采用25-27℃再行培养，14d所得红曲米经烘干灭菌所得样品为21701，检测monacolin K及桔霉素。
实施例2
采用丹溪1号红曲菌斜面培养一级种子，一级种子培养基100ml，葡萄糖8g、蛋白胨2g、NaNO 30.15g、MgSO4·7H2O0.15g、KH2PO40.15g、PH值5.0，高压灭菌1kg/cm230min，冷却到30℃接种，1支斜面接2个三角瓶，30℃培养45h，菌液变稠经镜检无污染。
500ml三角瓶加入早籼米100g加水100ml，高压灭菌1kg/cm230min，冷却到32℃摇匀使颗粒分散，接入一级种子10ml。32℃培养3d，保持湿度70±10％，待大米表面布满菌丝体色为紫红色，再变温培养，采用25-27℃再行培养14d，所得红曲米经烘干灭菌所得样品为21702，检测Mnacolin K及桔霉素。
实施例3
采用丹溪1号红曲菌斜面培养一级种子，一级种子培养基100ml，葡萄糖8g、蛋白胨2.5g、NaNO30.15g、MgSO4·7H2O0.15g、KH 2PO40.15g、PH值4.9，高压灭菌1kg/cm230min，冷却到30℃接种，1支斜面接2个三角瓶，30℃培养50h，菌液变稠经镜检无污染。
500ml三角瓶加入早籼米100g加水100ml，高压灭菌1kg/cm230min，冷却到32℃摇匀使颗粒分散，接入一级种子10ml。32℃培养3d，保持湿度70±10％，待大米表面布满菌丝体色为紫红色，再变温培养，采用25-27℃再行培养14d，所得红曲米经烘干灭菌所得样品为21703，检测Mnacolin K及桔霉素。
实施例4-10
具体方法与实施例1-3雷同，所得结果也有所差异。
上述各个实施例的检测结果如下表：
| 实施例 | 样品批次 | 发酵天数(d) | Monacolin K含量(mg/kg) | 桔霉素含量(mg/kg) |
| 1 | 21701 | 17 | 8940.21 | 1.61 |
| 2 | 21702 | 17 | 9247.44 | 1.38 |
| 实施例 | 样品批次 | 发酵天数(d) | Monacolin K含量(mg/kg) | 桔霉素含量(mg/kg) |
| 3 | 21703 | 17 | 14041.14 | 1.49 |
| 4 | 21704 | 17 | 14992.62 | 1.53 |
| 5 | 21705 | 18 | 9474.52 | 1.62 |
| 6 | 21706 | 18 | 8627.47 | 2.47 |
| 7 | 21707 | 20 | 7443.24 | 1.96 |
| 8 | 21708 | 20 | 8024.71 | 2.38 |
| 9 | 21709 | 14 | 7421.94 | 2.04 |
| 10 | 21710 | 14 | 7052.46 | 2.34 |
Claims (5)
1.一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是：
采用红曲菌株培养一级种子，培养基配方为：500ml培养液中葡萄糖50g、蛋白胨10～15g、NaNO30.45g、MgSO4·7H2O0.45g、KH2PO40.45 g，PH值4.8-5.0；
用500ml的三角瓶装100～150ml的培养基，在1kg/cm2的压力下灭菌30min，冷却接种接入斜面菌种，在30℃温度下培养45～50h，得到一级种子；
将一级种子接入固体培养基上，进行固态培养制得低桔霉素的酿酒功能红曲。
2.根据权利要求1所述的一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是：
所述固体培养基的原料：500ml三角瓶内加入100～150g早籼米，再加入相对于早籼米质量80～130％的水分，在1kg/cm2的压力下灭菌30min；
再向固体培养基接入一级种子，摇匀后在32℃温度下培养3天后再变温至25～27℃培养10～18天；烘干灭菌，得成品。
3.根据权利要求2所述的一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是所述的早籼米是当年新早籼米。
4.根据权利要求2所述的一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是向所述的固体培养基接入一级种子的质量为固体培养基的10-20％。
5.根据权利要求1所述的一种低产桔霉素的酿酒功能红曲制备方法，其特征是：所述的红曲菌株为红色红曲霉菌株丹溪-1号。
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