CN113801806B - 索诺拉沙漠芽孢杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及黄曲霉毒素降解技术，公开了一种索诺拉沙漠芽孢杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用。本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)的保藏编号为GDMCC No.61269。本发明提供的菌剂含有上述的索诺拉沙漠芽孢杆菌。本发明还提供该索诺拉沙漠芽孢杆菌、该菌剂在白酒生产过程中黄曲霉毒素降解方面的应用。本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌，能够对黄曲霉毒素进行高效、快速的降解，且降解过程不产生有毒代谢物质，菌株来源符合酿酒行业的安全性要求，可以作为辅助菌株直接应用于传统酿造白酒的过程中，有效降低酒曲中黄曲霉毒素的含量，改善白酒的风味。

Description

索诺拉沙漠芽孢杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用

技术领域

本发明涉及黄曲霉毒素降解技术，具体地，涉及一种索诺拉沙漠芽孢杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用。

背景技术

黄曲霉毒素是一类由黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物，具有致癌、致畸和致细胞突变的作用，其对动物的直接毒性表现为肝脏致癌性,间接毒性表现为引起动物的饲料转换率、免疫力、繁殖力等的下降。黄曲霉毒素主要存在于花生、大豆、玉米等粮食作物中，由此加工的食品和饲料流入市场严重威胁人类和畜禽的健康。

酒曲是酿酒所使用的原料之一，以大麦、小麦、豌豆等为原料，经过粉碎、加水混捏、压成曲醅，形似砖块、大小不等，可让各种微生物在上面生长而制成。大曲在经过强烈蒸煮的白米中，移入曲霉的分生孢子，然后保温，米粒上即茂盛地生长出菌丝，此即曲。酒曲中含有微量的黄曲霉毒素B1，有研究显示酒曲中存在的黄曲霉毒素，会对发酵过程中的微生物代谢造成影响，降低风味物质的产生，影响原酒的质量。

目前，黄曲霉毒素的脱毒方法分为物理方法、化学方法和生物方法，其中，物理和化学方法会破坏酒曲的结构和成分，生物降解方法虽然已经用于降解黄曲霉毒素，但是酒曲需要用于酿酒过程，其对菌株的安全性要求较高，且不能影响后续的酿酒发酵过程，尤其是不能破坏白酒的风味，现有的菌株并不能满足酒曲脱毒的要求。因此，对酒曲中黄曲霉毒素进行有效地控制和消除，急需一种安全、高效且环保的脱毒方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种索诺拉沙漠芽孢杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用，该索诺拉沙漠芽孢杆菌对黄曲霉毒素的降解效率高、降解时间快，且符合酿酒的安全性要求。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种索诺拉沙漠芽孢杆菌，该索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)于2020年12月7日送交广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC，地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼)进行保藏，保藏编号为GDMCC No.61269。

本发明第二方面提供一种菌剂，该菌剂含有上述的索诺拉沙漠芽孢杆菌。

优选地，所述菌剂含有所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的活菌体和/或发酵产物。

优选地，所述菌剂为固态菌剂或者液态菌剂。

本发明第三方面提供一种菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将保藏编号为GDMCC No.61269的索诺拉沙漠芽孢杆菌进行活化得到活化菌体；

(2)将步骤(1)得到的活化菌体接种至液体培养基中进行发酵，制得液态菌剂。

优选地，所述活化的条件至少满足：温度为30-40℃、时间为2-4d；所述发酵的条件至少满足：温度为30-40℃、转速为150-200rpm、时间为2-4d；所述液态菌剂中所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的孢子浓度为10⁶-10⁸cfu/ml。

本发明第四方面提供上述的索诺拉沙漠芽孢杆菌、上述的菌剂以及上述的制备方法制得的菌剂在白酒生产过程中黄曲霉毒素降解方面的应用。

优选地，所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1。

本发明第五方面提供一种降解白酒生产过程中黄曲霉毒素的方法，包括以下步骤：

S1、将保藏编号为GDMCC No.61269的索诺拉沙漠芽孢杆菌经培养、固液分离得到菌体沉淀，将所述菌体沉淀与酒曲混合得到酒曲混合料；

S2、将粮食原料与水混合后进行润粮、蒸粮、摊凉，再与所述酒曲混合料混合进行发酵，得到发酵酒料；

S3、将所述发酵酒料与蒸糠混合后进行甑蒸。

优选地，所述菌体沉淀的体积与所述酒曲干重的比值为0.1-0.4：100，所述酒曲混合料、所述蒸糠的干重与所述粮食原料的干重之间的质量比为8-12：10-20：100。

通过上述技术方案，本发明的有益效果为：本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌，能够对黄曲霉毒素进行高效、快速的降解，且降解过程不产生有毒代谢物质，该索诺拉沙漠芽孢杆菌来源于酒曲中，菌株来源符合酿酒行业的安全性要求，可以作为辅助菌株直接应用于传统酿造白酒的过程中，有效降低酒曲中黄曲霉毒素的含量，改善白酒的风味，提高白酒产品的品质，还可一定程度上提高白酒产品的产出率。

本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌，也为黄曲霉毒素的降解研究及其在白酒酿造体系中的应用奠定了一定的基础。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

生物保藏

本发明提供的菌株为索诺拉沙漠芽孢杆菌，并于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心(简称为GDMCC)，保藏编号为GDMCCNo.61269，分类命名为“Bacillussp.”，该保藏中心的地址为：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼，邮政编码：510070。

附图说明

图1是黄曲霉毒素B1标准品的液相色谱图；

图2是实施例5中黄曲霉毒素B1和酒曲混合料加入时黄曲霉毒素B1的液相检测图谱；

图3是实施例5中黄曲霉毒素B1和酒曲混合料加入后发酵28h时黄曲霉毒素B1的液相检测图谱；

图4是实施例6制得的白酒的GC-MS检测图谱。

具体实施方式

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

第一方面，本发明提供了一种索诺拉沙漠芽孢杆菌，该索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)于2020年12月7日送交广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC，地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼)进行保藏，保藏编号为GDMCCNo.61269。

本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌分离自泸州老窖的酒曲，所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的筛选方法的分离筛选可以采用本领域常规的用于新菌株分离筛选的方法，可根据实际需要进行选择，例如，在本发明的一种优选的实施方式中，所述筛选方法包括：

S1、取酒曲样品与生理盐水混合均匀得到样品溶液，吸取液适量的样品溶液接种至富集培养基中(接种量为6-10％)，进行富集培养得到富集液，以相同培养条件连续富集2-5次；

S2、取富集液以接种量为6-10％接种至含有香豆素的初筛液体培养基中，进行震荡培养，再以接种量为6-10％进行下一次转接，并逐步梯度提高初筛液体培养基中香豆素的浓度(1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL)，用无菌PBS对得到的初筛培养液进行梯度稀释至10^-2、10^-3、10^-4、10^-5，吸取稀释液20μL涂布于初筛平板上进行培养，选取生长良好的单菌株，连续2-5次划线于初筛平板进行纯化得到初筛菌株；

S3、将初筛菌株接种于发酵培养基中，震荡培养得到发酵菌液，取黄曲霉毒素B1溶液加入发酵菌液中(黄曲霉毒素B1溶液与发酵菌液的体积比为1：3-5)，混合均匀(黄曲霉毒素B1的终浓度为50-150μg/L)，进行避光孵育后测量黄曲霉毒素B1的残留量，以无菌发酵培养基与黄曲霉毒素B1溶液混合后进行避光孵育，作为对照组；通过对黄曲霉毒素B1降解率的对比，选定目标菌株，得到所述索诺拉沙漠芽孢杆菌。

本发明的发明人将得到的分离菌株进行了形态学鉴定和分子生物学鉴定，结果显示，该菌株为索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)，并于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.61269，分类命名为“Bacillus sp.”。

本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌经过培育能够产生大量的索诺拉沙漠芽孢杆菌活菌体，本发明对培养方法没有特别的限制，只要通过该培养方法可以使所述索诺拉沙漠芽孢杆菌大量增殖即可，例如，可以将索诺拉沙漠芽孢杆菌接种于平板培养基中，于35℃±5℃的条件下活化培养2-4d获得活化菌体；再将活化菌体接种至发酵培养基中，接种后于30℃±5℃、转速为150-200rpm的条件下培养2-4d，得到发酵液。

本发明中，所述平板培养基可以为PDA培养基，PDA培养基的组分可以为：马铃薯180-220g、葡萄糖15-25g、琼脂粉12-18g、蒸馏水1000mL，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌30min，备用；发酵培养基可以为：大豆蛋白胨5-15g、牛肉浸粉2-5g、Nacl 5-10g、KH₂PO₄0.5-2g、葡萄糖0.5-2g、纯水1000ml进行混合，并调节pH为6-7，121℃高压蒸汽灭菌30min，备用。

本发明可以进一步分离上述培养液中的索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌体，对所述分离的方法没有特别的限制，只要能够从培养液中富集菌体即可，例如可以通过离心和/或过滤的方法实现，所述离心和所述过滤的条件可以为本领域的常规条件。

第二方面，本发明提供了一种菌剂，该菌剂含有上述的索诺拉沙漠芽孢杆菌。在本发明中，对所述菌剂中索诺拉沙漠芽孢杆菌的浓度没有特别的限制，可以根据具体的情况进行具体的选择。

根据本发明，所述菌剂含有所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的活菌体和/或发酵产物。本发明所提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌体包括分生孢子和菌丝体，优选为所述菌剂含有所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的分生孢子。在本发明中，术语“发酵产物”指的是索诺拉沙漠芽孢杆菌在发酵或培养过程中产生的代谢产物(包括胞内代谢产物和/或胞外代谢产物)。

根据本发明，对所述菌剂的剂型没有特别的限制，可以根据预定用途的不同，将其制备成不同的剂型，并添加相应的赋形剂等成分，例如所述菌剂可以为液态菌剂(例如可以为发酵液)或者固态菌剂(例如可以为发酵液分离得到的菌体沉淀、冻干后的菌体)。其中，在何种剂型的菌剂中添加何种赋形剂可采用本领域技术人员所熟知的常规技术。

第三方面，本发明提供了一种菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将保藏编号为GDMCC No.61269的索诺拉沙漠芽孢杆菌进行活化得到活化菌体；

(2)将步骤(1)得到的活化菌体接种至液体培养基中进行发酵，制得液态菌剂。

示例性地，本发明中索诺拉沙漠芽孢杆菌的活化可以采用PDA固体培养基进行活化培养；在每100ml液体发酵培养基中，接入1-3环所述活化菌体。

优选地，所述活化的条件至少满足：温度为30-40℃，具体可以为30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃，或者上述两个值之间的任意值；时间为2-4d，具体可以为2d、3d、4d，或者上述两个值之间的任意值；所述发酵的条件至少满足：温度为30-40℃，具体可以为30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃，或者上述两个值之间的任意值；转速为150-200rpm，具体可以为150rpm、160rpm、170rpm、180rpm、190rpm、200rpm，或者上述两个值之间的任意值；时间为2-4d，具体可以为2d、3d、4d，或者上述两个值之间的任意值。

根据本发明，所述液态菌剂中所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的孢子浓度为10⁶-10⁸cfu/ml。如发酵获得的发酵液中分生孢子数的浓度过高，则可以利用无菌水稀释发酵液，形成孢子浓度为10⁶-10⁸cfu/ml的液态菌剂。

第四方面，本发明提供了上述的索诺拉沙漠芽孢杆菌、上述的菌剂以及上述的制备方法制得的菌剂在降解酒曲中黄曲霉毒素方面的应用。

优选地，所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1。

第五方面，本发明提供了一种降解白酒生产过程中黄曲霉毒素的方法，包括以下步骤：

S1、将保藏编号为GDMCC No.61269的索诺拉沙漠芽孢杆菌经培养、固液分离得到菌体沉淀，将所述菌体沉淀与酒曲混合得到酒曲混合料；

S2、将粮食原料与水混合后进行润粮、蒸粮、摊凉，再与所述酒曲混合料混合进行发酵，得到发酵酒料；

S3、将所述发酵酒料与蒸糠混合后进行甑蒸。

优选地，所述菌体沉淀的体积与所述酒曲干重的比值为0.1-0.4：100(ml：g)，所述酒曲混合料、所述蒸糠的干重与所述粮食原料的干重之间的质量比为8-12：10-20：100。

根据本发明，索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌体沉淀的制备过程可以为：取1-2环平板上的索诺拉沙漠芽孢杆菌于NB培养基中，在温度为30-40℃、转速为150-200rpm的条件下摇瓶培养20-30h，OD600检测菌液吸光度为1.8左右时，停止液体培养，取菌液在转速为8000-12000rpm、温度为3-6℃条件下离心10-20min，弃上清液。

根据本发明，白酒的生产过程可以采用常规的制备工艺，索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌体沉淀与酒曲混合，并同时加入白酒的生产过程中，即在白酒的制备工艺中，将索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌体沉淀随酒曲在合适的时间加入即可。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

以下实施例中，PDA培养基的组分为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉15g、1000mL蒸馏水、自然pH，121℃高压蒸汽灭菌30min，备用；

液体培养基：大豆蛋白胨10g、牛肉浸粉3g、Nacl 8.5g、KH₂PO₄ 1g、葡萄糖1g、纯水1000ml进行混合，并调节pH为7，121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。

黄曲霉毒素B1(以下简称AFB1)的提取和含量检测方法参照GB5009.22-2016，样品过AFB1免疫亲和柱，色谱柱为ZOr BAX SB－C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇∶水＝1∶1(V∶V)，流速0.8mL/min，柱温30℃，运行时间30min，检测波长为360nm；

AFB1的降解率通过以下公式进行计算：

AFB1的降解率(％)＝(1－最终的AFB1含量/初始的AFB1含量)×100％。

酒曲样品由泸州老窖股份有限公司提供，解淀粉芽孢杆菌购自美国典型菌种保藏中心，其余原料均为常规的市售品。

实施例1

S1、取5g泸州老窖提供的酒曲样品放入含有45mL生理盐水的均质袋中，利用均质器将酒曲样品与生理盐水混合均匀得到样品溶液，吸取5mL样品溶液加入45mL富集培养基中，在温度为37℃、转速为150rpm的条件下振荡培养24h，得到富集液，以相同培养条件连续富集3次；

S2、取步骤S1中得到的富集液以10％的接种量接种至含有香豆素的初筛液体培养基中，在温度为37℃、转速为160rpm的条件下摇床培养5d，在以10％的接种量进行下一次转接，并逐步梯度提高初筛液体培养基中香豆素的浓度(1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL)，用无菌PBS对得到的初筛培养液进行梯度稀释至10^-2、10^-3、10^-4、10^-5，吸取稀释液20μL涂布于初筛平板上，在温度为37℃的条件下培养5d，选取生长良好的单菌株，连续3次划线于初筛平板上进行纯化得到初筛菌株；

S3、将步骤S2得到的初筛菌株接种于发酵培养基中，在温度为37℃、转速为160rpm的条件下摇床培养24h得到发酵菌液，取200μL浓度为500μg/L的AFB1溶液加入灭菌的EP管(规格为5mL)中，再加入800μL的发酵菌液，混合均匀(AFB1终浓度为100μg/L)，以800μL无菌发酵培养基与200μL浓度为500μg/L的AFB1溶液混合作为对照组，分别在温度为37℃、转速为160rpm的条件下避光孵育72h，测量AFB1的残留量，通过对黄曲霉毒素B1降解率的对比，选定目标菌株，得到复筛菌株B1-2。

S4、将S3得到的复筛菌株B1-2接种于PDA培养基，送至擎科生物公司进行18s测序，将菌株的全基因组与NCBI数据库中进行比对，最终确定菌株为索诺拉沙漠芽孢杆菌，并于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.61269，分类命名为“Bacillus sp.”。

实施例2

(1)取实施例1获得的索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌种接种于PDA平板培养基中在37℃下培养3d，得到活化菌体；

(2)取2环步骤(1)中活化后的活化菌体接种至液体培养基中，置于恒温震荡培养箱内，在温度为37℃、转速为180rpm的条件下发酵培养3d，制得孢子浓度为10⁷cfu/ml的液态菌剂。

实施例3

(1)将实施例1获得的索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌种接种于PDA平板培养基中在30℃下培养4d，得到活化菌体；

(2)取2环步骤(1)中活化后的活化菌体接种至液体培养基中，置于恒温震荡培养箱内，在温度为30℃、转速为150rpm的条件下发酵培养4d，制得孢子浓度为10⁶cfu/ml的液态菌剂。

实施例4

(1)将实施例1获得的索诺拉沙漠芽孢杆菌的菌种接种于PDA平板培养基中在40℃下培养2d，得到活化菌体；

(2)取2环步骤(1)中活化后的活化菌体接种至液体培养基中，置于恒温震荡培养箱内，在温度为40℃、转速为200rpm的条件下发酵培养2d，制得孢子浓度为10⁸cfu/ml的液态菌剂。

实施例5

(1)取1环实施例1获得的索诺拉沙漠芽孢杆菌，接种于NB培养基中，在温度为37℃、转速为180rpm条件下摇瓶培养24h，OD600检测菌液吸光度为1.8左右时，停止液体培养；取菌液在转速为10000rpm、温度为4℃条件下离心15min，弃上清液，得到沉淀菌体，将1.5ml的沉淀菌体与1.5斤酒曲混合得到酒曲混合料；

(2)将16斤碎成4-8瓣的高粱与9.5L温度为85℃以上的水混合，进行润粮24h，上甑蒸粮50-60min，再添加4.8L温度为80-90℃的水，摊凉至25℃，添加步骤(1)得到的酒曲混合料和AFB1，使得总物料中AFB1的含量达到20μg·kg^-1，拌匀后加入发酵桶，保鲜膜封住桶口再封盖发酵28d；完成白酒糟中AFB1的降解，经测定，降解后白酒糟中AFB1含量为3.32μg·kg^-1，AFB1的降解率为83.4％(其中，AFB1的检测图谱见图1-图3)；

(3)将2.4斤糠壳敞开盖子蒸80min，去除糠醛味得到蒸糠，将蒸糠与步骤(2)中发酵28d后的高粱混合，上甑蒸，三段取酒；

(4)为了充分利用原料中的淀粉，将大酒醅蒸馏后的醅，还需继续发酵一次：将步骤(3)中取完酒得到的大酒醅趁热与1.2L水混合，摊凉至25℃，添加步骤(1)得到的酒曲混合料和AFB1，使得总物料中AFB1的含量达到20μg·kg^-1，拌匀后加入发酵桶，保鲜膜封住桶口再封盖发酵28d；完成蒸酒发酵中AFB1的降解，经测定，降解后白酒中AFB1含量为2.32μg·kg^-1，AFB1降解率为88.4％。

实施例6

(1)取1环实施例1获得的索诺拉沙漠芽孢杆菌，接种于NB培养基中，在温度为37℃、转速为180rpm条件下摇瓶培养24h，OD600检测菌液吸光度为1.8左右时，停止液体培养；取菌液在转速为10000rpm、温度为4℃条件下离心15min，弃上清液，得到沉淀菌体，将3ml的沉淀菌体与3斤酒曲混合得到酒曲混合料；

(2)将16斤碎成4-8瓣的高粱与9.5L温度为85℃以上的水混合，进行润粮24h，上甑蒸粮50-60min，再添加4.8L温度为80-90℃的水，摊凉至25℃，添加1.5斤步骤(1)得到的酒曲混合料，拌匀后加入发酵桶，保鲜膜封住桶口再封盖发酵28d；

(3)将2.4斤糠壳敞开盖子蒸80min，去除糠醛味得到蒸糠，将蒸糠与步骤(2)中发酵28d后的高粱混合，上甑蒸，三段取酒；

(4)为了充分利用原料中的淀粉，将大酒醅蒸馏后的醅，还需继续发酵一次：将步骤(3)中取完酒得到的大酒醅趁热与1.2L水混合，摊凉至25℃，添加1.5斤步骤(1)得到的酒曲混合料，拌匀后加入发酵桶，保鲜膜封住桶口再封盖发酵28d，将2.4斤糠壳敞开盖子蒸80min，去除糠醛味得到蒸糠，将蒸糠与发酵28d后的大酒醅混合，上甑蒸，三段取酒。

对比例1

按照实施例5的方法制作白酒，不同的是，将步骤(1)得到的沉淀菌体替换为能够降解AFB1的解淀粉芽孢杆菌的沉淀菌体，解淀粉芽孢杆菌的保藏号为ATCC 13952。

步骤(2)中AFB1的降解率为66.18％，步骤(4)中AFB1的降解率为60.24％。

对比例2

按照实施例6的方法制作白酒，不同的是，将步骤(1)得到的沉淀菌体替换为能够降解AFB1的解淀粉芽孢杆菌的沉淀菌体，解淀粉芽孢杆菌的保藏号为ATCC 13952。

测试例1

分别取实施例6和对比例2中白酒生产过程中的大曲，参照酿酒大曲通用分析方法[QB/T4257-2011]检测大曲的水分、酸度、淀粉量、发酵力以及酯化力，检测数据均为三次平均值，检测结果见表1。

其中，发酵力的检测方法为：将大米粉和水以质量比1:3的比例混合并加热至90℃，加入α-淀粉酶(150U/g)，液化完全(碘液检测)后，升温使α-淀粉酶失活，然后加入糖化酶(150U/g)，60℃保温4h，过滤，将糖度稀释至7Be；在150mL三角瓶中装入50mL米粉培养基，灭菌，然后在无菌条件下接入0.5g酒曲(粉末状)，摇匀后30℃静止培养72h。

表1

测试例2

准确称取200μl实施例6中步骤(2)制得的白酒样品与1ml饱和Nacl溶液、10μl内标(二辛醇)在5mL顶空瓶中混合，置于60℃恒温水浴锅预平衡15min，将固相萃取头插入顶空瓶中60℃恒温萃取45min，取出萃取头插入GC-MS联用仪进样口解析3min，开启程序检测挥发性组分，分析得到的图谱见图4。

GC-MS的条件为：进样口温度250℃，不分流；起始柱温40℃，保持5min，以5℃/min升温到220℃，保持5min；高纯氦气作为载气，流速1mL/min。连接口温度250℃；电离方式为EI；电子能量70eV；离子源温度200℃；扫描范围35-400amu。

图4所示的GC-MS图谱经过检索质谱库等方法，能获得白酒的组分分子结构及相应的名称，发现实施例6制得的白酒中含有200多种物质，且白酒中四大酸(乙酸、丁酸、乳酸和己酸)、四大酯(乙酸乙酯、乳酸乙酯、丁酸乙酯和己酸乙酯)的含量丰富、各物质之间比例协调。

测试例3白酒品质检测

分别取实施例6和对比例2中步骤(2)制得的白酒，参照表2的白酒评价项目和指标进行白酒品质的评价检测，结果见表3。

表2

项目	指标
		色泽和外观	无色或微黄，清亮透明，无悬浮物，无沉淀
香气	具有以浓郁窖香为主的，舒适的复合香气
		口味口感	绵甜醇厚，谐调爽净，余味悠长
风格	具有本品典型的风格

表3

通过上述实施例和测试例的数据可以看出，实施例1获得的索诺拉沙漠芽孢杆菌对黄曲霉毒素B1(AFB1)具有高效、快速的降解作用；本发明提供的索诺拉沙漠芽孢杆菌加入白酒生产过程中，能够保持酿酒大曲的性能，同时符合酿酒行业的安全性要求，对白酒品质不存在破坏作用，甚至能够有效改善白酒的风味，提高白酒的品质，而解淀粉芽孢杆菌ATCC 13952加入白酒生产过程中，则会对酒曲性能和白酒品质均形成不良的影响。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种索诺拉沙漠芽孢杆菌，其特征在于，所述索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillussonorensis)的保藏编号为GDMCC No.61269。

2.一种菌剂，其特征在于，该菌剂含有权利要求1所述的索诺拉沙漠芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂含有所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的发酵产物。

4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为固态菌剂或者液态菌剂。

5.一种菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将保藏编号为GDMCC No.61269的索诺拉沙漠芽孢杆菌进行活化得到活化菌体；

(2)将步骤(1)得到的活化菌体接种至液体培养基中进行发酵，制得液态菌剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述活化的条件至少满足：温度为30-40℃、时间为2-4d；

所述发酵的条件至少满足：温度为30-40℃、转速为150-200rpm、时间为2-4d；

所述液态菌剂中所述索诺拉沙漠芽孢杆菌的孢子浓度为10⁶-10⁸cfu/ml。

7.权利要求1所述的索诺拉沙漠芽孢杆菌、权利要求2至4中任意一项所述的菌剂、权利要求5或6所述的制备方法制得的菌剂在白酒生产过程中黄曲霉毒素降解方面的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1。

9.一种降解白酒生产过程中黄曲霉毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将保藏编号为GDMCC No.61269的索诺拉沙漠芽孢杆菌经培养、固液分离得到菌体沉淀，将所述菌体沉淀与酒曲混合得到酒曲混合料；

S2、将粮食原料与水混合后进行润粮、蒸粮、摊凉，再与所述酒曲混合料混合后进行发酵，得到发酵酒料；

S3、将所述发酵酒料与蒸糠混合后进行甑蒸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述菌体沉淀的体积与所述酒曲干重的比值为0.1-0.4：100，所述酒曲混合料、所述蒸糠的干重与所述粮食原料的干重之间的质量比为8-12：10-20：100。

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