CN113265363B - 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用 - Google Patents

一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113265363B
CN113265363B CN202110711494.4A CN202110711494A CN113265363B CN 113265363 B CN113265363 B CN 113265363B CN 202110711494 A CN202110711494 A CN 202110711494A CN 113265363 B CN113265363 B CN 113265363B
Authority
CN
China
Prior art keywords
saccharopolyspora
polysaccharide
fermentation
cholerae
biogenic amine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110711494.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113265363A (zh
Inventor
毛健
刘双平
孙梦菲
徐岳正
周永祥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Industrial Technology Research Institute Of Jiangnan University Shaoxing
Zhejiang Guyue Longshan Shaoxing Wine Co ltd
Jiangnan University
Original Assignee
Industrial Technology Research Institute Of Jiangnan University Shaoxing
Zhejiang Guyue Longshan Shaoxing Wine Co ltd
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Industrial Technology Research Institute Of Jiangnan University Shaoxing, Zhejiang Guyue Longshan Shaoxing Wine Co ltd, Jiangnan University filed Critical Industrial Technology Research Institute Of Jiangnan University Shaoxing
Priority to CN202110711494.4A priority Critical patent/CN113265363B/zh
Publication of CN113265363A publication Critical patent/CN113265363A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113265363B publication Critical patent/CN113265363B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L5/00Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/20Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
    • A23L5/28Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L11/00Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
    • A23L11/30Removing undesirable substances, e.g. bitter substances
    • A23L11/37Removing undesirable substances, e.g. bitter substances using microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L17/00Food-from-the-sea products; Fish products; Fish meal; Fish-egg substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L17/65Addition of, or treatment with, microorganisms or enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/50Soya sauce
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/60Salad dressings; Mayonnaise; Ketchup
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A24TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
    • A24BMANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
    • A24B15/00Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
    • A24B15/18Treatment of tobacco products or tobacco substitutes
    • A24B15/20Biochemical treatment
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12GWINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12GWINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • C12G3/021Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of botanical family Poaceae, e.g. wheat, millet, sorghum, barley, rye, or corn
    • C12G3/022Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of botanical family Poaceae, e.g. wheat, millet, sorghum, barley, rye, or corn of botanical genus Oryza, e.g. rice
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Soy Sauces And Products Related Thereto (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用,属于食品发酵技术领域。本发明从麦曲中筛选到了一株霍氏糖多孢菌(Saccharopolyspora hordei)F2004,保藏编号为CCTCCNO:M 2021002。本发明提供的霍氏糖多孢菌可用于制备黄酒、卷烟、酱油、发酵鱼露、豆瓣酱、辣椒酱等食品或调味品,在不降低发酵产品品质的情况下,可显著降低发酵环境或发酵产品中的生物胺含量。

Description

一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用,属于食品发酵技术领域。
背景技术
黄酒历史文化悠久,是世界三大发酵酒之一,其风味独特、酒精度低且营养价值高,广受消费者喜爱。黄酒中含有丰富的蛋白质、氨基酸、活性肽、酚类、低聚糖、维生素、矿物质及γ-氨基丁酸,具有抗衰老、降血压、降胆固醇和免疫调节等生理功效。但在黄酒复杂的生产工艺及其开放的发酵体系中含有丰富的微生物,其中一些微生物能够产生氨基酸脱羧酶,氨基酸在氨基酸脱羧酶的作用下脱羧基转化为生物胺,摄入高含量的生物胺会对人体带来不利影响。
生物胺是一种非挥发性的低分子量的含氮有机碱,主要由微生物的氨基酸脱羧酶作用于氨基酸脱羧而生成。生物胺在自然界中可以由微生物、植物和动物代谢产生,其分布广泛,可通过食品摄入体内。适量生物胺可促进人体的正常生理活动,过量生物胺的摄入则会引起动脉、血管和微血管的扩大,导致腹泻、头痛、腹部痉挛、呕吐等不良生理反应,甚至会导致死亡。目前,控制食品中生物胺的方法主要有生产工艺优化和选择合适的储藏条件、减少发酵体系中产生物胺的微生物或控制产胺微生物产胺和添加生物胺降解菌株、生物胺降解酶等。其中添加生物胺降解菌株作为一种生物手段,具有高效、安全、环保的优点,被越来越多黄酒企业和消费者所接受。
现有技术中具有降解生物胺作用的菌株种类较少且效果较差。因此,筛选具有高效降解生物胺菌株对于丰富生物胺降解菌株的微生物菌种库,提升发酵食品的品质具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于解决现有传统发酵食品和烟草制品中生物胺含量较高的问题,提供性能优良的菌株S.hordei F2004应用于黄酒、卷烟、酱油、鱼露、豆瓣酱、辣椒酱等发酵食品的生产过程进行生物强化,以降低传统发酵食品和烟草制品中的生物胺含量,提升传统发酵食品和烟草制品的品质。
本发明的第一个目的是提供一株具有较强生物胺降解能力的霍氏糖多孢菌(Saccharopolyspora hordei)F2004,所述霍氏糖多孢菌已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国,武汉,武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M 2021002。
本发明的霍氏糖多孢菌F2004,具有如下优良的性能:
(1)应用于食品发酵体系,不会影响到食品的正常发酵;
(2)发酵产品中生物胺产生量小于10mg/L,生物胺检出量极少;
(3)对色胺、苯乙胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺均有降解作用;
(4)可以适用于黄酒、白酒、豆瓣酱、酱油发酵和卷烟生产,并且具有降生物胺的能力。
本发明的第二个目的是提供含有所述霍氏糖多孢菌F2004的发酵剂。
在一种实施方式中,所述发酵剂中霍氏糖多孢菌F2004的含量≥1×106CFU/mL。
在一种实施方式中,所述微生物菌剂含有霍氏糖多孢菌F2004菌体的活细胞、冷冻干燥得到的干菌体、固定化的细胞、液体菌剂、固体菌剂,或者以其他任何形式存在的霍氏糖多孢菌F2004菌株。
在一种实施方式中,所述发酵剂还含有其它类型的细菌或真菌。
在一种实施方式中,所述发酵剂还含有酵母或曲霉。
本发明的第三个目的是提供所述霍氏糖多孢菌F2004或其代谢物在发酵领域降低生物胺含量方面的应用。
在一种实施方式中,所述代谢物包括但不限于霍氏糖多孢菌F2004发酵后去除了菌体细胞的上清液。
在一种实施方式中,所述代谢物的制备方法为:将糖多孢菌S.hordei F2004以5×106CFU/mL的初始浓度接种至高氏一号液体培养基中,于35~37℃,150~250r/min条件下发酵48~72h,离心,收集发酵液上清液。
在一种实施方式中,所述发酵领域包括制备发酵食品、饮品或调味品。
在一种实施方式中,所述饮品为酒精饮品,包括但不限于黄酒或白酒。
在一种实施方式中,所述调味品包括但不限于酱油或鱼露。
在一种实施方式中,所述应用是将霍氏糖多孢菌F2004加入至酱醪中,于14~16℃发酵一段时间后,加入酒母继续发酵。
在一种实施方式中,所述应用是将霍氏糖多孢菌F2004以5×106CFU/mL的初始浓度,于37℃,150r/min条件下发酵48~72h,收集发酵将发酵液上清液以按质量计1%的量用喉头喷雾器均匀喷洒至烟丝中,于30~37℃发酵42~72h。
在一种实施方式中,所述应用是将霍氏糖多孢菌F2004加入至种曲中,再用含霍氏糖多孢菌F2004的种曲发酵豆瓣酱。
本发明提供所述霍氏糖多孢菌F2004在降低烟丝中生物胺含量方面的应用。
在一种实施方式中,所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。
本发明还提供所述霍氏糖多孢菌F2004在制备发酵食品、饮品或烟草方面的应用。
本发明的有益效果:
(1)本发明的菌株应用于食品发酵体系,不会阻碍食品的正常发酵;
(2)本发明的菌株应用于卷烟生产中,不会降低卷烟的糖类物质和蛋白质含量;
(3)霍氏糖多孢菌F2004的生物胺产生量小于10mg/L,生物胺检出量极少,基本不产生生物胺。S.hordei F2004对色胺、苯乙胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺的降解率分别为63.47%、80.86%、79.72%、65.1%、70.92%、47.72%、68.28%、78.21%,对总生物胺的降解率达到69.51%。
(4)该糖多孢菌具有降生物胺效果,将其应用于黄酒发酵中,添加S.hordei F2004发酵的黄酒,比对照组降低了16.01%;将其应用于酱油生产中,添加S.hordei F2004发酵的酱油,比对照组降低了24.98%;将其应用于卷烟发酵中,添加S.hordei F2004发酵的卷烟,比对照组降低了30.27%;将其应用于鱼露发酵中,添加S.hordei F2004发酵的鱼露,比对照组降低了26.29%;将其应用于豆瓣酱发酵中,添加S.hordei F2004发酵的豆瓣酱,比对照组降低了27.79%;将其应用于辣椒酱发酵中,添加S.hordei F2004发酵的辣椒酱,比对照组降低了29.29%。
生物材料保藏
霍氏糖多孢菌(Saccharopolyspora hordei)F2004,分类学命名为霍氏糖多孢菌(Saccharopolyspora hordei)F2004,所述霍氏糖多孢菌已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国,武汉,武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M 2021002。
附图说明
图1为糖多孢菌S.hordei F2004的菌落形态图。
图2为糖多孢菌S.hordei F2004的系统发育树。
图3为黄酒发酵过程中理化指标的变化;(A)酒精度;(B)还原糖;(C)可滴定酸;(D)氨基酸态氮。
具体实施方式
黄酒理化指标的检测:酒精度、氨基酸态氮和总酸的测定按照GB/T 13662-2018进行测定。还原糖含量测定采用DNS方法。生物胺含量采用高效液相(HPLC)进行检测。
烟丝理化指标的检测:烟丝中总糖和还原糖用索莫季法,总氮采用改良基耶达法。
生物胺含量测定方法:准确量取1mL待测液于15mL离心管中,加入1mL饱和NaHCO3溶液,混匀,加入2mL丹磺酰氯(5mg/mL丙酮)试剂,混匀后置于65℃恒温水浴锅中黑暗衍生30min,室温静置后,加入0.5mL饱和NaCl溶液,混匀后加入5mL乙醚,涡旋振荡20s,静置分层后,转移上层有机相于15mL离心管中,下层水相再萃取一次,合并两次萃取液,50℃水浴下氮气吹干。加入1mL乙腈振荡混匀,溶解残留物,过0.22μm滤膜,通过高效液相色谱法(HPLC)测定。
实施例1:霍氏糖多孢菌的筛选及鉴定
(1)样品的采集及预处理
麦曲样品采自浙江省绍兴市某黄酒厂,采集的麦曲置于密封的无菌塑料袋中4℃保存。称取5g麦曲于50mL离心管中,添加30mL蒸馏水放入30℃摇床培养箱中培养30min。
(2)菌株的平板筛选
高氏一号固体培养基:硝酸钾1.0g/L、磷酸二氢钾0.5g/L,硫酸镁0.5g/L,硫酸亚铁0.01g/L,氯化钠0.5g/L,可溶性淀粉20.0g/L,琼脂15.0g/L,pH值7.2-7.4(25℃)。
取悬浮液梯度稀释10-1至10-6稀释匀液。分别吸取麦曲、发酵醪各稀释度菌液100μL涂布于高氏一号固体培养基,37℃培养4-7d。在菌落密度适中的平板上挑取单个乳白色、菌落薄、有隆起或凸面的菌落,分别划线接种到高氏一号固体平板上。
(3)菌株鉴定
提取筛选菌株的基因组,并对筛选菌株进行16S rDNA扩增测序。
PCR扩增引物27F(5′-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACGGY-TACCTTGTTACGACTT-3′)。
PCR扩增体系(50μL)为:2×Taq PCR Master Mix 25μL,上下引物各1μL,模板1μL,加无菌水22μL补充至50μL。
PCR扩增程序:94℃预变性3min,95℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸2min,共35个循环,最后72℃延伸8min。
PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测,并送交基因测序公司测序,根据返回的测序结果(SEQ ID NO.1所示)通过NCBI官网进行BLAST序列比对,用所得的16S rDNA序列进行BLAST比对,并进行了系统发育分析,结果如图2所示,菌株F2004的核苷酸序列与数据库中序列同源性最高的糖多孢菌S.hordei(GenBank序列号:NR_104988.1)的同源相似性达在99%以上。菌株F2004菌落形态为圆形,菌落为淡黄色,菌落凸起、难挑起。菌株F2004的生理生化特征如表1所示,菌株F2004可降解腺嘌呤、酪蛋白、七叶苷、淀粉、酪氨酸等物质,在20℃~60℃下可生长,与Saccharopolyspora hordei特征一致,将上述菌株命名为糖多孢菌S.hordei F2004。
同一批次筛选还获得另一株与之特征类似的糖多孢菌S.hordei F2001,在下述实施例中作为对照菌株。
表1 S.hordei F2004生理生化鉴定部分实验结果
Figure BDA0003133971710000051
注:-代表阴性结果,+代表阳性结果
(4)菌株生物胺代谢能力的分析
菌种活化:将保藏的糖多孢菌S.hordei F2004接种到高氏一号液体培养基中,接种量5%,30℃摇床培养48h,得一级种子液。将活化的菌株接种到高氏一号液体培养基中,接种量5%,摇床培养48h,转速150r/min,温度30℃,得二级种子液。
样品预处理:将二级种子液接于添加有氨基酸和生物胺的高氏一号液体培养基中,接种量5%,37℃摇床培养5d,12000r/min离心5min收集上清液。
S.hordei F2004的色胺、苯乙胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺产生量分别为1.32mg/L、1.99mg/L、0.90mg/L、0.00mg/L、0.39mg/L、0.52mg/L、0.91mg/L、0.63mg/L,总生物胺产量小于10mg/L,生物胺检出量极少,基本不产生生物胺。S.hordei F2004对8种生物胺都有较强的降解能力,对色胺、苯乙胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺的降解率分别为63.47%、80.86%、79.72%、65.1%、70.92%、47.72%、68.28%、78.21%,对总生物胺的降解率达到69.51%。按相同方法检测糖多孢菌S.hordei F2001对生物胺的降解能力,结果显示,糖多孢菌S.hordei F2001对色胺、苯乙胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺的降解率分别为1.37%、2.56%、3.29%、0.00%、0.00%、4.59%、7.24%、6.32%。
实施例2:糖多孢菌S.hordei F2004在黄酒发酵中的应用
(1)纯种糖多孢菌麦曲的制备:
破碎小麦为每粒3~5片,使麦粒组织破碎,淀粉外露,加入35~40%的清水,搅拌充分后静置30min,使其充分均匀的吸收水分,后于121℃灭菌30min。灭菌后小麦降温至室温后,接种糖多孢菌菌液,使接种后的菌液浓度为105~106CFU/mL,接种量为5%-15%。曲料进盘后保持适当品温及室温,静置培养六小时左右。六小时后,品温缓慢上升至34-35℃左右,自控模式启动小风量间接通风,每次5~10min,间隔2h,使品温降到32℃,要求均匀吹透。间歇通风3~5次后,菌丝开始生长,品温升至35℃以上,曲料开始结块,此时应连续通风,维持品温35℃左右。接种后12小时,品温上升较快,此时应视第一次结块情况进行翻曲,第一次翻曲后,品温保持在36~37℃之间,保持通风喷雾顺畅,约20小时后,曲料再次结块,眼观曲料发白,温度难以控制在37℃以下,进行第二次翻曲,二次翻曲过后,品温应控制在35℃左右。继续培养72~96h;培养结束后,将麦曲置于4-7℃冰柜中储藏备用。
(2)不同麦曲用于黄酒发酵:
本实施例所选取的传统黄酒发酵的实验组原料配比如表2所示,对照组将表2中的纯种糖多孢菌麦曲替换为工厂用生麦曲(麦子自然发酵,添加量为11.8%)、工厂用熟麦曲(黄曲霉SU-16纯种麦曲,添加量为1.8%)。
表2原料配比表(实验组)
Figure BDA0003133971710000061
按照如下方法进行黄酒发酵:
a)酵母活化培养:将甘油保藏管的酵母菌,在无菌操作台进行转接到YPD培养基中,30℃,150r/min条件下培养24h,使酵母菌的数量达107CFU/mL;然后以5%的接种量转接到制备好的酒母中,将转接好的酵母在30℃,150r/min条件下,进行培养18~24h,备用。
b)酒母的制作:取600g蒸熟的米饭,加入1600mL清水,60g生麦曲,1.1‰的糖化酶(按酶活单位计,终浓度为3×105U/mL)进行糖化,糖化的温度控制在55~65℃,时间3-4小时,糖化结束后外观糖度不低于12°Bx后,115℃灭菌15min,灭菌后冷却至24~31℃,接入成熟的酵母种子培养液5%,培养温度不超过30℃,培养时间24h,培养成熟后即得酒母。
c)按照传统黄酒发酵的原料配比进行落料和发酵。前5d为前酵阶段,温度控制在28-30℃,发酵5d,前5d每天开耙不少于1次,头耙时间8-10h;后酵阶段,温度为13-15℃,每天搅拌开耙1次,持续发酵10-15d。
黄酒发酵过程中理化指标的变化:为了进一步验证糖多孢菌在黄酒发酵中的作用,对比了使用传统麦曲和纯种糖多孢菌麦曲所酿造黄酒发酵过程中理化指标(酒精度,还原糖,可滴定酸和氨基酸态氮)的变化。结果如图3所示,使用纯种糖多孢菌麦曲所酿造的黄酒酒精度、还原糖、总酸和氨基酸态氮的含量均符合黄酒国标的标准,说明糖多孢菌S.hordei F2004对黄酒发酵过程中重要理化指标影响不大,发酵正常。
(3)糖多孢菌S.hordei F2004降生物胺效果分析:所得产品用高效液相法检测黄酒中生物胺含量,结果如表3所示,添加S.hordei F2004的样品组相比较对照组降低了16.01%。
表3糖多孢菌与酿酒酵母共酵酿造黄酒生物胺含量
Figure BDA0003133971710000071
注:ND表示未检测到
实施例3:糖多孢菌S.hordei F2004应用于酱油中降低生物胺含量
(1)豆粕和小麦按1:1比例混匀,蒸熟;
(2)酒母制作:将109~1011CFU/mL的酵母种子液接种到冷却后的豆粕和小麦的混合物中,接种量为5%,使接种后的酵母细胞浓度为107-1010CFU/mL,然后加入2倍体积清水,在28℃、150r/min培养下24h。
(3)酱醅发酵:按照5‰-10‰的比例向步骤(2)的酒母中加入菌液浓度为105~106cfu/mL的S.hordei F2004,然后加入1.5-2倍物料质量的盐水,使酱醪最终含盐量为18±0.5%、含水量为65±1%,然后混匀。起始发酵温度控制在14~16℃,随着发酵进行温度逐渐升高到约35℃,在温度升高到约20±1℃时接入酒母。持续发酵约5个月。
(4)发酵结束后的将酱醪进行板框压榨,去除酱醅。压榨结束后进行硅藻土过滤和膜过滤,去除沉淀。过滤澄清的酱油经过巴氏灭菌后进行灌装。
对照组将糖多孢菌S.hordei F2004替换为S.hordei F2001,其余步骤保持不变。
对糖多孢菌S.hordei F2004降生物胺效果分析,添加S.hordei F2004的发酵产品中的生物胺含量相较于对照组降低了24.98%。S.hordei F2001在培养基环境下具有降解生物胺的能力,但是在发酵食品中的降解作用微小。
实施例4:糖多孢菌S.hordei F2004应用于卷烟中降低生物胺含量
将糖多孢菌S.hordei F2004发酵液上清液加入至卷烟制作中:以添加无菌水为对照,将糖多孢菌S.hordei F2004以5×106CFU/mL的初始浓度,在高氏一号液体培养基中于37℃,150r/min条件下发酵48h,收集发酵上清液。将发酵液上清液以按质量计1%的量用喉头喷雾器均匀喷洒至烟丝中,翻匀,装入干净的塑料袋中,不收紧袋口,放入恒温培养箱中,30℃培养48h,每4h取一次样品测定其中的活菌数。发酵48h时,取少量烟丝测生物胺、总糖、还原糖、总氮的含量,结果如表4所示,实验组的总糖、还原糖和总氮含量与对照组相差不大。
表4烟丝化学成分
Figure BDA0003133971710000081
对糖多孢菌S.hordei F2004降生物胺效果分析:添加S.hordei F2004的样品组相比较对照组降低了30.27%。
实施例5:糖多孢菌S.hordei F2004应用于发酵鱼露中降低生物胺含量
鱼露按照以下工艺流程进行生产,即:原料鱼和盐混合(3:1或2:1)→加10000U/g的蛋白酶在60℃下水解12h→接种105~106cfu/mL S.hordei F2004菌液,于30℃发酵240d→后期发酵(在60℃下保温一周)→过滤收集液体→鱼露。
对照组将糖多孢菌S.hordei F2004替换为S.hordei F2001,其余步骤保持不变。
对糖多孢菌S.hordei F2004降生物胺效果分析,添加S.hordei F2004的发酵产品中的生物胺含量相较于对照组降低了26.29%。
实施例6:糖多孢菌S.hordei F2004应用于豆瓣酱中降低生物胺含量
将S.hordei F2004加入至豆瓣酱发酵中:
(1)种曲的制备:将米曲霉菌和S.hordei F2004接种到麦麸培养基上,使接种后的菌浓分别高于107CFU/mL,置于30℃恒温培养箱中培养48~72h,间隔摇瓶翻曲。
(2)蚕豆曲的制备:脱壳的干蚕豆瓣,加水浸泡1-2h。将浸泡好的湿蚕豆瓣沥干,放入蒸锅中先蒸30min,后焖10mim后出锅。蒸豆瓣出锅后,在无菌条件下,将其晾干表面水分,与一定比例的灭菌后的面粉和种曲(蚕豆:面粉:种曲比例=100:10:2)混合均匀。
(3)蚕豆曲与180g/L的盐水按1:1.2的质量比混合,置于密闭容器中发酵30d,每日翻酱1次。
对照组将糖多孢菌S.hordei F2004替换为S.hordei F2001,其余步骤保持不变。
测定豆瓣酱中生物胺含量,添加S.hordei F2004的豆瓣酱产品中的生物胺含量相较于对照组降低了27.79%。
实施例7:糖多孢菌S.hordei F2004应用于辣椒酱中降低生物胺含量
辣椒酱按照以下工艺流程进行生产,即:选取优质辣椒清洗、打浆→加入食盐、糖、生姜、大蒜等配料(食盐、糖、生姜、大蒜的加入量分别为原料重量的12%、5%、1%、15%)→接种植物乳杆菌、糖多孢菌S.hordei F2004(菌体数量之比为1:1,接种量为5%,接种的菌液浓度分别为106CFU/mL)→20~25℃室温发酵25d→炒制→计量→装瓶→封盖→杀菌→冷却→贮存→出厂。
对照组将糖多孢菌S.hordei F2004替换为S.hordei F2001,其余步骤保持不变。
对糖多孢菌S.hordei F2004降生物胺效果分析,添加S.hordei F2004的辣椒酱产品中的生物胺含量相较于对照组降低了29.29%。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
江南大学(绍兴)产业技术研究院
浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司
<120> 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用
<130> BAA201688A
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1457
<212> DNA
<213> Saccharopolyspora hordei
<400> 1
tgaacggaaa cggctggcgg cgtgcttaac acatgcaagt cgaacgctga agcggtgctt 60
gcaccgtgga tgagtggcga acgggtgagt aacacgtggg taatctgccc tgcactctgg 120
gataagccct ggaaacgggg tctaataccg gatatgacat cgtgccgcat ggtgtggtgt 180
ggaaagctcc ggcggtgcag gatgagcccg cggcctatca gcttgttggt ggggtgatgg 240
cctaccaagg cgacgacggg tagccggcct gagagggtga ccggccacac tgggactgag 300
acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaatc ttgcgcaatg ggcgaaagcc 360
tgacgcagca acgccgcgtg ggggatgacg gccttcgggt tgtaaacctc tttcgacacc 420
gacgaagcca tcttcgggtg gtgacggtag gtgtagaaga agcaccggct aactacgtgc 480
cagcagccgc ggtaatacgt agggtgcgag cgttgtccgg atttattggg cgtaaagagc 540
tcgtaggcgg tttgtcgcgt ctatcgtgaa aaccgggagc ttaactcctg gcttgcggtg 600
gatacgggca gacttgagtt cggtagggga gactggaatt cctggtgtag cggtgaaatg 660
cgcagatatc aggaggaaca ccggtggcga aggcgggtct ctgggccgat actgacgctg 720
aggagcgaaa gcgtggggag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg 780
ttgggcgcta ggtgtgggga tgggttccac tgtttccgtg ccgtagctaa cgcattaagc 840
gccccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca 900
caagcggcgg agcatgtgga ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc tgggtttgac 960
atgcactgga tcgcccctga gagggggttt cccttgtggc tggtgcacag gtggtgcatg 1020
gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg 1080
ccctatgttg ccagcgggtg atgccgggga ctcgtagggg actgccgggg tcaactcgga 1140
ggaaggtggg gatgacgtca agtcatcatg ccccttatgc ccagggcttc acacatgcta 1200
caatggccgg tacagagggc tgcgagatcg tgaggttgag cgaatccctt aaagccggtc 1260
tcagttcgga tcggggtctg caactcgacc ccgtgaagtc ggagtcgcta gtaatcgcag 1320
atcagcattg ctgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacgtcatg 1380
aaagtcggta acacccgaag cccatggccc aaccggtttt ccggggggag tggtcgaagg 1440
tggactggcg atgaacg 1457

Claims (14)

1.一株霍氏糖多孢菌(Saccharopolyspora hordei)F2004,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国,武汉,武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M2021002。
2.含有权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004的发酵剂。
3.根据权利要求2所述的发酵剂,其特征在于,含有权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004的活细胞。
4.根据权利要求2所述的发酵剂,其特征在于,含有权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004冷冻干燥得到的干菌体。
5.根据权利要求2所述的发酵剂,其特征在于,含有权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004固定化的细胞。
6.根据权利要求2所述的发酵剂,其特征在于,含有权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004的菌丝体。
7.应用权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004制备的发酵用曲。
8.权利要求1所述的霍氏糖多孢菌F2004在发酵领域降低生物胺含量方面的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵领域包括制备发酵食品。
10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵领域包括制备发酵饮品。
11.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵领域包括制备发酵调味品。
12.权利要求1所述的霍氏糖多孢菌F2004在降低烟丝中生物胺含量方面的应用。
13.权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004在制备发酵食品或烟草方面的应用。
14.权利要求1所述霍氏糖多孢菌F2004在制备发酵饮品方面的应用。
CN202110711494.4A 2021-06-25 2021-06-25 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用 Active CN113265363B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110711494.4A CN113265363B (zh) 2021-06-25 2021-06-25 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110711494.4A CN113265363B (zh) 2021-06-25 2021-06-25 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113265363A CN113265363A (zh) 2021-08-17
CN113265363B true CN113265363B (zh) 2023-06-06

Family

ID=77235867

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110711494.4A Active CN113265363B (zh) 2021-06-25 2021-06-25 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113265363B (zh)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3326495B2 (ja) * 2000-05-29 2002-09-24 独立行政法人産業技術総合研究所 ポリ乳酸樹脂の分解方法
CN111979146B (zh) * 2020-08-13 2022-05-10 江南大学 糖多孢菌及其在食品中的应用
CN111961615B (zh) * 2020-08-13 2021-07-27 江南大学 一株降低生物胺的糖多孢菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113265363A (zh) 2021-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111961615B (zh) 一株降低生物胺的糖多孢菌及其应用
CN111979146B (zh) 糖多孢菌及其在食品中的应用
CN111979148B (zh) 糖多孢菌组合物及其在食品中的应用
CN114456979B (zh) 一种在发酵食品中促进风味物质产生的类肠膜魏斯氏菌及其应用
CN114540231B (zh) 一种在发酵食品中促进风味物质产生的乳酸片球菌及其应用
CN113969242B (zh) 一种高产γ-氨基丁酸的酿酒酵母菌以及在制备γ-氨基丁酸产品中的应用
CN112795519B (zh) 一种暹罗芽孢杆菌及其在富含乙偶姻食醋中的应用
CN115812936B (zh) 一种乳酸菌直投式发酵豇豆及其制备方法
CN113249268B (zh) 一株降低生物胺的玫瑰糖多孢菌及其应用
CN111925951A (zh) 酿酒酵母和菌剂及其应用、白酒和黄酒以及它们的酿造方法
CN112852646B (zh) 一株高产洛伐他汀的紫色红曲菌h5-3及其应用
CN114606152B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用
CN112442453B (zh) 一株降解生物胺的奥默柯达酵母及其在白酒酿造中的应用
CN113957016A9 (zh) 一种枯草芽孢杆菌及利用枯草芽孢杆菌制备奶香型冬虫夏草发酵液的方法
CN115704001A (zh) 己酸菌菌粉、其制造方法及应用
CN113265363B (zh) 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用
CN113528350B (zh) 根霉菌株、酒曲和米酒以及该酒曲的生产方法
JP7329221B2 (ja) サッカロポリスポラ組成物及びその食品における使用
CN112715890B (zh) 一种固定化泡菜发酵剂及其应用
CN114763517B (zh) 一株耐高温酿酒酵母及其在发酵食品中的高温发酵工艺开发
CN116463235A (zh) 一种提高食醋风味品质的枯草芽苞杆菌及应用
CN116574633A (zh) 一株产酯香芽孢杆菌及应用
CN115322920A (zh) 一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用
CN117701458A (zh) 适用于榨广椒发酵的复合菌剂及应用
CN116445307A (zh) 低产杂醇油的酿酒酵母菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant