CN113455286B - 高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用，属于农副产品深加工领域。本发明以玉米浆为原料，采用微生物高浓度液体发酵技术制备高浓度玉米浆发酵产物，可以适度降解玉米浆中的大分子蛋白质，使其具有合理的分子量分布，并具有速效、中长效氮源供应营养特征；高浓度玉米浆发酵产物中的营养物质可激活食用菌类自身酶系的合成与分泌，加速对菌包基质中纤维素、木质素等的分解，使食用菌菌丝在营养生长初期就能较快吸收平常状态下不能利用的营养物质，加快各种诱导酶的产生，使菌丝健壮，快速进入培养基料分解、吸收、再合成阶段，表现出发菌快、出菇整齐、子实体产量质量提高等有益效果。

Description

高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用

技术领域

本发明涉及农副产品深加工技术领域，尤其涉及高底物浓度发酵玉米浆技术方法及其产物在食用菌栽培生产中的应用。

背景技术

玉米浆是湿法生产玉米淀粉的副产物，具有产量高、价格低、营养丰富的特点，是品质良好的营养氮源。但未经处理的玉米浆浓度高、杂质多、抗营养因子含量高、酸度大、黏度大并且体系具有不均一性，导致未能对其合理利用，造成优质资源的浪费。因此，玉米浆深加工利用迫在眉睫。

采用微生物高浓度液体发酵技术对玉米浆进行原位发酵，能够适度降解玉米浆中的大分子蛋白质，使其具有合理的分子量分布，提高玉米浆的营养价值。

食用菌是一类有机、营养、保健的绿色食品，食用菌产业是一项集经济效益、生态效益和社会效益于一体的短平快经济发展项目，发展食用菌产业符合人们消费增长和农业可持续发展的需要，食用菌产业已成为中国种植业中的一项重要产业，国内市场潜力巨大。

黑木耳是食用菌的一个主要品种，其产量约占我国食用菌产量的18％。黑木耳的色泽偏黑，口感柔软，十分鲜美，含有充足的营养成分，富含钙、磷、铁等人体所需的矿物质元素，还含有卵磷脂、脑磷脂和人体所必需的氨基酸。黑木耳有一定的医用价值，黑木耳的抗肿瘤、抗血栓、降血压和降血脂等生物活性已经获得了世界各国的认可。因此，黑木耳的食药兼性越来越受到人们的重视。近年来黑木耳栽培面积逐年扩大。在黑木耳的栽培培养基中，需要大量的氮源营养素，目前菌包氮源营养素常用豆粕和麸皮。

平菇别名侧耳，是食用菌中的一个大家族。我国平菇产量约占总食用菌产量的17％。平菇的营养很丰富，含有18种氨基酸，包括8种人体必需氨基酸。每100克干平菇含粗蛋白质27克，是鸡蛋的2.6倍，猪肉的1.5倍；而含脂肪较少，仅为1.5克；纤维素含量较高，为8.3克。此外，还含有丰富的维生素、钙、磷和铁等。平菇种植属于国家大力扶持和支持的高效农业项目，门槛低、回本快、效益高且市场端供不应求，有着广大的发展前景。

时观当下食用菌种植行业现状，存在的重要问题是，产量低，菌包污染率偏高，效益偏少。黑木耳栽培培养基辅料氮源原料与养殖业争用豆粕和麸皮，价格持续上涨。在食用菌菌袋原料成本居高不下的大环境下，迫切需要有替代传统食用菌基质配方中氮源的廉价原料，同时应当尽最大努力提高培养料生物转换效率，使培养料充分利用，子实体更加优质高产，有效提高食用菌收益。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高底物浓度发酵玉米浆方法及其产物在食用菌栽培生产中的应用。本发明利用高浓度玉米浆发酵产物促进黑木耳和平菇的生长。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用，所述高浓度玉米浆发酵产物的制备方法，包括以下步骤：

将玉米浆预热，得到预热玉米浆；

将所述预热玉米浆、NaOH和Ca(OH)₂混合后，调节pH值为5.5～6.0，得到预处理玉米浆；

将所述预处理玉米浆、米曲霉种曲、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵混合进行发酵，得到玉米浆发酵液；

将所述玉米浆发酵液依次进行灭酶、冷却和板框过滤，得到所述高浓度玉米浆发酵产物。

优选地，所述玉米浆的浓度为18～22°Bé，所述预热的温度为50～55℃。

优选地，所述调节pH值使用中和剂，所述中和剂是由6重量份氢氧化钠和1重量份氢氧化钙复合组成，所述玉米浆与中和剂的质量比为100：2.0～2.2，所述调节pH值的方式为分步中和，按所述中和剂的质量比添加中和剂，第一步加入氢氧化钠反应20min，第二步加氢氧化钙反应40min。

优选地，所述米曲霉种曲的制备方法包括以下步骤：

(1)斜面试管菌种的制作：将菌种米曲霉YY-21号传试管斜面培养基，恒温培养得到斜面试管菌种；

(2)三角瓶种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比4：1混合，加入混合干料重80～90％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混合均匀，每瓶装湿料20g，厚度为1cm，经高压灭菌后摇匀，置于无菌室，待物料冷却后，接种斜面试管菌种的孢子，恒温培养，待孢子长满曲料，即得到成熟的三角瓶种曲；

(3)种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比7：3混合，加入混合干料重70～85％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混匀，即为曲料，曲料品温达到35℃以下，加入干料重0.1％的三角瓶种曲，在28～32℃条件下培养，培养期间可利用倒盘的方式，调节上、下层曲盘的品温，有结块现象时进行搓曲，待孢子长满，曲料呈现嫩黄绿色时，即为成曲。

优选地，所述预处理玉米浆与米曲霉种曲的用量比为100mL:1.5～2g。

优选地，所述预处理玉米浆、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵的用量比为100mL:0.04～0.05g:0.005～0.009g:0.005～0.009g:0.005～0.009g。

优选地，所述发酵的温度为50～55℃，时间为160～200min。

优选地，包括以下步骤：

将所述高浓度玉米浆发酵产物与栽培培养基混合，得到生长培养基；

将黑木耳菌液或平菇菌液接种到所述生长培养基中，进行培养。

优选地，所述生长培养基中高浓度玉米浆发酵产物的含量为0.5～3wt％。

优选地，所述培养为在23℃避光培养。

本发明提供了一种高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用，所述高浓度玉米浆发酵产物由包括以下步骤的方法制得：将玉米浆预热，得到预热玉米浆；将所述预热玉米浆、NaOH和Ca(OH)₂混合后，调节pH值为5.5～6.0，得到预处理玉米浆；将所述预处理玉米浆、米曲霉种曲、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵混合进行发酵，得到玉米浆发酵液；将所述玉米浆发酵液依次进行灭酶、冷却和板框过滤，得到所述高浓度玉米浆发酵产物。

本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

本发明首先将米曲霉扩大培养制成种曲，在制曲过程中添加玉米浆，诱导菌株适应玉米浆的酸性体系，增强其分解玉米浆蛋白的能力。成熟的米曲霉种曲兼具微生物作用和酶解作用，利用菌群分泌的酶系和自身代谢产物协同作用，提高水解液中小肽等活性物质含量，可抑制杂菌生长，降解玉米浆中的抗营养因子，提高玉米浆的营养价值。以玉米淀粉加工副产物-玉米浆为原料，经过微生物高浓度液体发酵技术制备高浓度玉米浆发酵产物，能够适度降解玉米浆中的大分子蛋白质，使其具有合理的分子量分布，并具有速效、中长效氮源供应营养特征；同时，高浓度玉米浆发酵产物中的营养物质可激活食用菌类自身酶系的合成与分泌，加速对菌包基质中纤维素、木质素的分解，使食用菌菌丝在营养生长初期就能较快吸收平常状态下不能利用的营养物质，加快各种诱导酶的产生，使菌丝健壮，快速进入培养基料分解、吸收、再合成阶段，表现为发菌快、出菇整齐、子实体产量质量提高等有益效果，达到降低食用菌生产原料成本、缩短培养时间、增加产量的目的。能够替代部分黑木耳或平菇传统栽培配方中的氮源，复配栽培袋料，经高温高压灭菌、接种、发菌、开孔和出耳管理等工序进行黑木耳或平菇栽培应用。

附图说明

图1为栽培原始袋料配方中添加高浓度玉米浆发酵产物不同量的试验第20d菌丝生长照片；

图2为栽培原始袋料配方中添加高浓度玉米浆发酵产物不同量的试验第30d菌丝生长照片；

图3为栽培原始袋料配方中添加高浓度玉米浆发酵产物不同量的试验第40d菌丝生长照片；

图4为栽培原始袋料配方中添加高浓度玉米浆发酵产物不同量的试验第50d菌丝生长照片；

图5为栽培原始袋料配方中添加高浓度玉米浆发酵产物不同量的试验的菌丝生长趋势曲线；

图6为高浓度玉米浆发酵产物部分替代栽培原始袋料氮源试验第20d菌丝生长照片；

图7为高浓度玉米浆发酵产物部分替代栽培原始袋料氮源试验第30d菌丝生长照片；

图8为高浓度玉米浆发酵产物部分替代栽培原始袋料氮源试验第40d菌丝生长照片；

图9为高浓度玉米浆发酵产物部分替代栽培原始袋料氮源试验第50d菌丝生长照片；

图10为高浓度玉米浆发酵产物部分替代栽培原始袋料氮源试验菌丝生长趋势曲线；

图11为黑木耳第一潮子实体产量对比图。

具体实施方式

本发明提供了高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用，所述高浓度玉米浆发酵产物由包括以下步骤的方法制得：

将玉米浆预热，得到预热玉米浆；

将所述预热玉米浆、NaOH和Ca(OH)₂混合后，调节pH值为5.5～6.0，得到预处理玉米浆；

将所述预处理玉米浆、米曲霉种曲、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵混合进行发酵，得到玉米浆发酵液；

将所述玉米浆发酵液依次进行灭酶、自然冷却和板框过滤，得到所述高浓度玉米浆发酵产物。

本发明将玉米浆预热，得到预热玉米浆。本发明对所述玉米浆的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的来源即可，具体如来自玉米加工厂加工玉米淀粉的副产物，所述玉米浆的浓度优选为18～22°Bé，其主要成分是蛋白质，含量优选为45wt％。

在本发明中，所述预热的温度优选为50～55℃。利用玉米浆自身含有的酸水解蛋白质，使蛋白质达到适度变性，容易被微生物分解利用；搅拌可以使反应更均匀。

在本发明中，所述预热搅拌结束后分步加入中和剂，调节玉米浆的pH为5.5～6.0，进一步为5.6～5.8，有利于米曲霉种曲的生长和酶系的分泌。本发明中，所述中和剂优选为氢氧化钠和氢氧化钙，所述氢氧化钠和氢氧化钙的质量比优选为5～7:1，更优选为6:1。本发明中，所述中和剂优选分步添加，先加氢氧化钠中和，反应20min后再加氢氧化钙反应40min，这样操作能够有效的去除植酸等抗营养因子，而且中和反应速度快，效率高，气泡产生少。在中和时要不停地进行搅拌，以避免局部的碱浓度过高导致分解过度。本发明中所述玉米浆与所述中和剂的质量比优选为100：2.0～2.2。

在本发明中，在所述预处理液中加入米曲霉种曲进行微生物发酵，得到高浓度玉米浆发酵产物。本发明在米曲霉种曲培养基中加入玉米浆原液，能够提高米曲霉种曲在酸性条件下生长和刺激分泌蛋白酶的能力。成熟的米曲霉种曲兼具微生物作用和酶解作用，利用菌株分泌的酶系和自身代谢产物协同作用，提高水解液中小肽等活性物质含量，可抑制杂菌生长，降解玉米浆中的抗营养因子，提高玉米浆营养价值。本发明对米曲霉的来源没有特殊限制，采用本领域中的已知米曲霉即可。在本发明具体实施例中，优选采用米曲霉((Aspergillus oryzae)YY-21号菌株(参见CN106065410A)，该菌株是从朝鲜族酱块中分离、筛选得到，经过筛选诱变高产蛋白酶，有利于玉米浆蛋白的水解。米曲霉(Aspergillusoryzae)YY-21号菌株于2012年7月9日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供了保藏，保藏编号为CGMCC No.6381，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

在本发明中，所述米曲霉种曲的制备方法优选包括以下步骤：

(1)斜面试管菌种的制作：将菌种米曲霉YY-21号传试管斜面培养基，恒温培养得到斜面试管菌种；

(2)三角瓶种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比4：1混合，加入混合干料重80～90％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混合均匀，每瓶装湿料20g，厚度为1cm，经高压灭菌后摇匀，置于无菌室，待物料冷却后，接种斜面试管菌种的孢子，恒温培养，待孢子长满曲料，即得到成熟的三角瓶种曲；

(3)种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比7：3混合，加入混合干料重70～85％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混匀，即为曲料，曲料品温达到35℃以下，加入干料重0.1％的三角瓶种曲，在28～32℃条件下培养，培养期间可利用倒盘的方式，调节上、下层曲盘的品温，有结块现象时进行搓曲，待孢子长满，曲料呈现嫩黄绿色时，即为成曲。

在本发明中，所述预处理玉米浆与米曲霉种曲的用量比优选为100mL:1.5～2g，更优选为100mL:1.7～1.9g。

在本发明中，所述预处理玉米浆、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵的用量比优选为100mL:0.04～0.05g:0.005～0.009g:0.005～0.009g:0.005～0.009g，更优选为100mL:0.043g:0.007g:0.007g:0.007g，所述苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵的作用是使高浓度玉米浆发酵产物营养均衡。

在本发明中，所述发酵的温度优选为50～55℃，时间优选为160～200min，更优选为180min。

在本发明中，所述灭酶的温度优选为90℃。

在本发明中，所述应用优选包括以下步骤：

将所述高浓度玉米浆发酵产物与栽培培养基混合，得到生长培养基；

将黑木耳菌液或平菇菌液接种到所述生长培养基中，进行培养。

在本发明中，所述生长培养基中高浓度玉米浆发酵产物的含量优选为0.5～3wt％。

在本发明中，所述培养优选为在23℃避光培养。

为了进一步说明本发明，下面结合实例对本发明提供的高浓度玉米浆发酵产物及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

调整玉米浆温度至50℃，添加1.7％(w/v)的NaOH(即100mL的玉米浆加1.7g的NaOH)搅拌20min，然后再加入0.3％(w/v)的Ca(OH)₂(即100mL的玉米浆加0.3g的Ca(OH)₂)搅拌40min，调节pH维持在5.5～6.0，得到预处理玉米浆。

在预处理玉米浆中加入1.5％(w/v)的米曲霉种曲(即100mL的玉米浆加1.5g的米曲霉种曲)进行发酵，温度控制在50℃，反应时间为180min。在反应之后加入苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸铵，苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵，其用量比为100mL:0.043g:0.007g:0.007g:0.007g，反应结束后，升温至90℃，灭酶15min，冷却30min。冷却后进行板框过滤，滤液即为高浓度玉米浆发酵产物，其中米曲霉种曲的制备具体为以下步骤：

(1)斜面试管菌种的制作：将菌种米曲霉YY-21号传试管斜面培养基，恒温培养得到斜面试管菌种；

(2)三角瓶种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比4：1混合，加入混合干料重80～90％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混合均匀，每瓶装湿料20g，厚度为1cm，经高压灭菌后摇匀，置于无菌室，待物料冷却后，接种斜面试管菌种的孢子，恒温培养，待孢子长满曲料，即得到成熟的三角瓶种曲；

(3)种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比7：3混合，加入混合干料重70～85％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混匀，即为曲料，曲料品温达到35℃以下，加入干料重0.1％的三角瓶种曲，在28～32℃条件下培养，培养期间可利用倒盘的方式，调节上、下层曲盘的品温，有结块现象时进行搓曲，待孢子长满，曲料呈现嫩黄绿色时，即为成曲。

1.高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳菌丝生长的影响

1.1高浓度玉米浆发酵产物对平板培养黑木耳菌丝生长的影响

(1)实验设计

高浓度玉米浆发酵产物平板培养黑木耳菌丝体不同处理方式见表1。

表1高浓度玉米浆发酵产物平板培养黑木耳不同处理

(2)实验方法

以PDA固体培养基为基础培养基，分别加入0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％和3％的高浓度玉米浆发酵产物，121℃高压灭菌30min后倒入9cm培养皿中，每皿20mL，每处理3个重复，以不加高浓度玉米浆发酵产物的PDA为对照。在无菌条件下用直径5mm打孔器取菌龄一致的木耳菌块1片，接种在培养皿中央处，23℃避光培养，直至菌丝长满整个培养皿，计算黑木耳菌丝平均生长速度。

(3)计算方法

黑木耳菌丝平均生长速度：P＝(V₁-V₀)/d＝(9cm-0.5cm)/d＝8.5cm/d

(式中：V₁为菌丝长满时菌落直径，为9cm；V₀为初始菌落直径，为0.5cm；d是菌丝长满培养皿的天数)

1.2高浓度玉米浆发酵产物对液体培养黑木耳菌丝的影响

(1)实验设计

高浓度玉米浆发酵产物对液体培养黑木耳不同处理见表2。

表2高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳液体培养不同处理

(2)实验方法

以PDA液体培养基为基础培养基，分别加入0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％和3％的高浓度玉米浆发酵产物，121℃高压灭菌30min，在无菌条件下用直径5mm打孔器取菌龄一致的木耳菌块1片，接种在培养瓶内，在23℃，180r/min，100mL装样量/250mL培养瓶条件下避光培养7d。培养结束，测木耳菌丝平均生物量。

(3)测定方法

培养结束，培养液在4000r/min离心10min，得到的沉淀物即为菌丝，将菌丝用清水反复洗涤后用四层纱布过滤，菌丝置于105℃烘干至恒重，称重，即黑木耳菌丝平均生物量。

2.高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳袋式栽培的影响

2.1实验设计

栽培原始袋料配方：木屑86wt％(栎木粗木屑：桦木细木屑质量比＝7：3)，麸皮10wt％，豆饼粉2wt％，石膏粉1wt％，氧化钙1wt％，栽培原始袋料配方含水量55wt％，pH自然。

方法

根据原始配方将试验分为11组，对照组(E0)为初始配方，实验组(E1-E10)在初始配方(E0)基础上梯度添加高浓度玉米浆发酵产物，E1-10组高浓度玉米浆发酵产物额外添加量分别为0.5wt％、1wt％、1.5wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％。

此试验以等碳氮比且单一种类氮源最高取代量不超过45％为原则，将高浓度玉米浆发酵产物部分取替代袋料中传统氮源，对照组(Q0)，Q1-Q10组梯度设定高浓度玉米浆发酵产物替代量为袋料干基质量的0.5wt％、1wt％、1.5wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％，实验具体复配配方如表3。

表3高浓度玉米浆发酵产物部分替代氮源复配袋料配方(wt％)

2.2菌种扩培

母种扩培培养基装于500mL锥形瓶中(每瓶约装入200mL培养基)，于高温高压灭菌锅121℃下灭菌30min，在无菌室冷却至室温。从活化后的母种斜面中取1cm²大小的活化菌种在超净台上接种于PDA培养基中。将接种完成的摇瓶放置于25℃，150r/min的恒温振荡培养箱中培养10d，成功扩培的液体菌种状态应为小米粥状且菌球多，菌液澄清。

2.3菌丝培养

根据栽培初始配方利用高浓度玉米浆发酵产物部分替代或额外添加复配袋料配方，并装于17×33cm聚丙烯折角袋中，无棉盖体封口，每袋装入栽培料合干料360g(湿重800g)，经高温高压灭菌(121℃，90min)后在无菌室进行冷却并接种，接种量25mL/袋，接种后移入培养室培养，温度为23℃。

2.4取样时期

菌丝生长情况测定：根据预实验，自接种第20天起每10天进行一次数据采集。酶活力及营养成分测定在菌丝满半袋及满袋时进行取样。

2.5出耳管理

待菌丝满袋后熟一个月后进行开孔，用开孔器对每个菌包开90个Y字型口，控制培养室温度15～25℃，湿度70％以上，并每天给予温差刺激与光照刺激，保持通风状态，待子实体成熟后，采收子实体并晾晒。

结果

1.1高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳平板菌丝生长速度的影响

在PDA固体平板培养基中，分别添加0.5vol％、1vol％、1.5vol％、2vol％、2.5vol％和3vol％的玉米浆和高浓度玉米浆发酵产物，均能显著促进黑木耳菌丝的生长(p＜0.05)，菌丝生长曲线成正态分布，但高浓度玉米浆发酵产物比玉米浆效果更好。当高浓度玉米浆发酵产物添加量为1.5vol％时，木耳菌丝生长最快，木耳菌丝浓白、粗壮，日均生长速度为1.23cm/d，是对照的3.08倍.

1.2高浓度玉米浆发酵产物对木耳摇瓶菌丝生物量的影响

在PDA液体摇瓶培养基中，分别添加0.5vol％、1vol％、1.5vol％、2vol％、2.5vol％和3vol％的玉米浆和高浓度玉米浆发酵产物，考察玉米浆和高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳菌丝生物量的影响。结果表明，玉米浆添加量0.5vol％-1.0vol％、高浓度玉米浆发酵产物添加量0.5vol％-3.0vol％，对木耳菌丝的生长发育有明显的促进作用(p＜0.05)；玉米浆添加量1.5vol％-3.0vol％，对黑木耳菌丝生长有明显的抑制作用；高浓度玉米浆发酵产物添加量为1.5vol％时，木耳菌丝生物量最高，为1.13g/100mL，为对照的1.85倍。

2.高浓度玉米浆发酵产物栽培试验结果

2.1高浓度玉米浆发酵产物添加试验

高浓度玉米浆发酵产物添加栽培黑木耳试验(E0为对照组，E1-E10为实验组)，菌丝生长情况如图1～4所示，图1为20d的黑木耳菌丝生长情况，图2为30d的黑木耳菌丝生长情况，图3为40d的黑木耳菌丝生长情况，图4为50d的黑木耳菌丝生长情况，随着高浓度玉米浆发酵产物添加量的增多，黑木耳菌丝生长的速度呈现出先上上升后下降的趋势，其中E4-E7表现出较明显优势，具体测量菌丝末端距接种口高度趋势如图5所示，准确测量菌丝生长高度后可知，添加高浓度玉米浆发酵产物各组与对照组相比菌丝生长速度均有增加，高浓度玉米浆发酵产物添加量为袋料干基质量的1.0wt％-5.0wt％时，对代料栽培黑木耳菌丝生长显著促进(p＜0.05)。其中高浓度玉米浆发酵产物添加量为袋料干基质量的2.5wt％-3.5wt％时，菌丝生长速度增快明显，因此添加高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳营养生长阶段有一定的促进作用。在第20天时，高浓度玉米浆发酵产物添加量为袋料干基质量的2.5wt％时较其它组有明显的优势，自第30天起高浓度玉米浆发酵产物添加量为袋料干基质量的3.0wt％时生长速度体现出一定的优势，可能是由于不同生长阶段菌丝对不同浓度的氮源敏感度不同导致的。与对照组相比，添加不同含量高浓度玉米浆发酵产物对黑木耳菌丝生长均有一定的促进作用。

2.2高浓度玉米浆发酵产物部分替代传统氮源试验

高浓度玉米浆发酵产物部分替代传统氮源栽培实验(Q0为对照组，Q1-Q10为实验组)，第20d、30d、40d和50d的菌丝生长情况分别如图6～9所示，随着高浓度玉米浆发酵产物替代量的增加，10组黑木耳菌丝呈现出不同的生长速度，其中Q4-Q6较其它组表现出明显优势。分别测量不同天数黑木耳菌丝末端距接种口的高度，实验结果如图10所示，由图10可知，使用高浓度玉米浆发酵产物替代传统氮源组与对照组相比菌丝生长速度均有增加，其中高浓度玉米浆发酵产物为袋料干基质量的2.5wt％-3wt％时菌丝生长最快。

2.3菌丝生长速率对比

分别选取菌丝满袋时的生长天数与对照组(Q0和E0)进行对比，并计算生长速率如表4所示。高浓度玉米浆发酵产物替代氮源量为袋料干基质量的0.5wt％-5.0wt％时，与对照组相比对代料栽培黑木耳菌丝生长显著促进(p＜0.05)。根据表4可看出，高浓度玉米浆发酵产物替代量为3wt％时，黑木耳菌丝生长速度最快，满袋时间为48天，与对照组相比缩短了20％的时间。额外添加高浓度玉米浆发酵产物为袋料干基质量的2.5wt％和3.0wt％时，黑木耳菌丝生长最快，满袋时间均为54天，平均生长速率为0.20cm/d，与对照组相比缩短了17％的时间。因此，利用高浓度玉米浆发酵产物部分替代氮源超过0.5％时，以及额外添加高浓度玉米浆发酵产物，均能一定程度上对黑木耳的菌丝生长产生影响，通过以上的对比可以看出，高浓度玉米浆发酵产物部分替代的促进效果比额外添加高浓度玉米浆发酵产物好，节省的时间也相对较多，成本也有所降低。这可能是由于额外添加氮源改变了基料的碳氮比，所以促进效果被一定程度上的抑制所导致的。

表4高浓度玉米浆发酵产物添加量对菌丝生长速率的影响

2.4产量

黑木耳第一潮子实体产量对比如图11所示，将添加或替代组黑木耳子实体的产量进行对比，当添加或取代含量在1.5wt％-4wt％时，两组产量均比对照组要高，且以替代量为袋料干基质量的2.5wt％或添加量为袋料干基质量的3wt％比例效果尤为明显，与对照组相比有显著性差异(p＜0.10)。替代组高浓度玉米浆发酵产物添加量为袋料干基质量的2.5wt％时，与对照组Q0相比产量增加10.43％。综合上述生长速度指标，替代量为袋料干基质量的2.5wt％或额外添加量为袋料干基质量的3wt％时产量较高。

使用高浓度玉米浆发酵产物替代氮源可降低黑木耳栽培的成本。高浓度玉米浆发酵产物替代量越多，成本越低。以产量最高的Q5计算，可节约成本0.018元/袋。按照工业生产黑木耳现阶段行情袋产干木耳60g，在高浓度玉米浆发酵产物替代量占袋料干基质量的2.5wt％时预计每个菌包可多采收6.25g(干重)，以工业上每个菌包1400g、含水量55％，木耳单价60元/kg，单个大棚20000袋计算，每个大棚可节约成本360元，增产部分收益7500元，因此一个大棚总收益增加7860元。在额外添加高浓度玉米浆发酵产物黑木耳促进增长试验中，增产效果与氮源替代组相比稍差，且随着高浓度玉米浆发酵产物的添加量越多，成本越高，因此使用高浓度玉米浆发酵产物替代氮源袋料栽培黑木耳是更为合理的方式。

3.高浓度玉米浆发酵产物对平菇菌丝生长的影响

3.1高浓度玉米浆发酵产物对平板培养平菇菌丝生长的影响

(1)实验设计

高浓度玉米浆发酵产物平板培养平菇不同处理方式见表5。

表5高浓度玉米浆发酵产物平板培养平菇不同处理

(2)实验方法

以PDA固体培养基为基础培养基，分别加入0.5vol％、1vol％、1.5vol％、2vol％、2.5vol％和3vol％的高浓度玉米浆发酵产物，121℃高压灭菌30min后倒入9cm培养皿中，每皿20mL，每处理3个重复，以不加高浓度玉米浆发酵产物的PDA为对照。在无菌条件下用直径5mm打孔器取菌龄一致的平菇菌块1片，接种在培养皿中央处，23℃避光培养，直至菌丝长满整个培养皿，计算菌丝平均生长速度。

(3)计算方法

平菇菌丝平均生长速度：P＝(V₁-V₀)/d＝(9cm-0.5cm)/d＝8.5cm/d

(式中：V₁为菌丝长满时菌落直径，为9cm；V₀为对照菌落直径，为0.5cm；d是菌丝长满培养皿的天数)

3.2高浓度玉米浆发酵产物对液体培养平菇菌丝的影响

(1)实验设计

高浓度玉米浆发酵产物对液体培养平菇菌丝体不同处理见表6。

表6高浓度玉米浆发酵产物对平菇液体培养不同处理

(2)实验方法

以PDA液体培养基为基础培养基，分别加入0.5vol％、1vol％、1.5vol％、2vol％、2.5vol％和3vol％的高浓度玉米浆发酵产物，121℃高压灭菌30min，在无菌条件下用直径5mm打孔器取菌龄一致的平菇菌块1片，接种在培养瓶内，在23℃、180r/min、100mL装样量/250mL培养瓶条件下避光培养7d。培养结束，测平菇菌丝平均生物量。

(3)测定方法

培养结束，培养液在4000r/min离心10min，得到的沉淀物即为菌丝，将菌丝用清水反复洗涤后用四层纱布过滤，置于105℃烘干至恒重，称重，即平菇菌丝平均生物量。

3.3高浓度玉米浆发酵产物对平菇袋式栽培的影响

(1)实验设计

以玉米芯为主要原料，辅料选用麸皮、豆粕粉和高浓度玉米浆发酵产物三个因素，以三个水平进行组合，进行栽培培养基优化试验(见表7和表8)，共9个处理，以传统玉米芯(以玉米芯为主料，以麸皮、豆粕为辅料配制培养料)配方作对照CK，每个处理5袋，3次重复。封底聚丙烯栽培袋的规格均为17cm×33cm，每袋干料的总质量均为500g，每袋湿料的总水分均为65％，菌棒装料高度为20cm，用直径为5cm的聚丙烯无棉盖体对菌棒进行封口，121℃高压灭菌60min，冷却至常温进行接种，液体种子接种量20mL/袋菌棒。

表7因素水平表

表8高浓度玉米浆发酵产物袋栽平菇试验方案

(2)实验方法

①高浓度玉米浆发酵产物对平菇生长菌丝的影响

接种后，23℃，避光培养，观察各处理的平菇菌袋菌丝萌发时间、菌丝长势及满袋天数，计算菌丝平均生长速度。

②高浓度玉米浆发酵产物对平菇子实体生长的影响

平菇菌丝满袋后，见光，常规出菇管理，记录各处理的菌袋第一茬现蕾期、转潮间隔期和每茬出菇持续时间。每个处理随机取10袋，统计出菇产量，共采摘三茬，计算生物学效率和成本，进行效益核算。

(3)计算方法

①菌丝平均生长速度测定

平菇菌丝平均生长速度：V＝20cm/d(式中，d为菌丝满袋子的天数。)②生物学效率

3.4高浓度玉米浆发酵产物对平菇瓶式栽培的影响

(1)实验设计

①高浓度玉米浆发酵产物替代部分传统氮源

以玉米芯为主要原料，辅料选用麸皮、豆粕粉和高浓度玉米浆发酵产物三个因素，以三个水平进行组合，进行栽培培养基优化试验(见表9和表10)，共9个处理，以传统玉米芯(以玉米芯为主料，以麸皮、豆粕为辅料配制培养料)配方作对照CK，每个处理5瓶，3次重复。带无菌海绵体盖的聚丙烯栽培瓶的规格均为1400mL(瓶口直径8.5cm，瓶高18cm，瓶底直径10cm)，每瓶干料的总质量均为280g，每瓶湿料的总水分均为65％，每瓶湿料800克，121℃高压灭菌60min，冷却至常温进行接种，液体种子(PDA培养基)接种量10mL/瓶培养基。

表9因素水平表

表10高浓度玉米浆发酵产物瓶栽平菇试验方案

②高浓度玉米浆发酵产物完全替代传统氮源

以玉米芯为主要原料，辅料中不添加麸皮、豆粕粉，只添加高浓度玉米浆发酵产物，设计栽培培养基优化试验，共3个处理(即高浓度玉米浆发酵产物添加量分别占每瓶干基培养料重量的0.5％、1.0％、1.5％)，以传统玉米芯(以玉米芯为主料，以麸皮、豆粕为辅料配制培养料)配方作对照CK，每个处理5瓶，3次重复。带无菌海绵体盖的聚丙烯栽培瓶的规格均为1400mL(瓶口直径8.5cm，瓶高18cm，瓶底直径10cm)，每瓶干料的总重均为280g，每瓶湿料的总水分均为65wt％，每瓶湿料800g，121℃高压灭菌60min，冷却至常温进行接种，液体种子接种量10mL/瓶培养基。

③传统配方中的氮源不做任何改变，只在培养基中额外添加高浓度玉米浆发酵产物

对传统配方的麸皮、豆粕粉不做任何处理，只是在传统配方基础上，额外添加高浓度玉米浆发酵产物，设计栽培培养基优化试验，共3个处理(即高浓度玉米浆发酵产物添加量分别占每瓶干基培养料重量的0.5％、1.0％、1.5％)，以传统玉米芯(以玉米芯为主料，以麸皮、豆粕为辅料配制培养料)配方作对照CK，每个处理5瓶，3次重复。带无菌海绵体盖的聚丙烯栽培瓶的规格均为1400mL(瓶口直径8.5cm，瓶高18cm，瓶底直径10cm)，每瓶干料的总质量均为280g，每瓶湿料的总水分均为65wt％，每瓶湿料800g，121℃高压灭菌60min，冷却至常温进行接种，液体种子接种量10mL/瓶培养基。

(2)实验方法

①高浓度玉米浆发酵产物对平菇菌丝生长的影响

接种后，23℃避光培养，观察各处理栽培瓶中平菇菌丝萌发时间、菌丝长势及满袋天数，计算菌丝平均生长速度等。

②高浓度玉米浆发酵产物对平菇子实体生长的影响

平菇菌丝满瓶后，见光，常规出菇管理，记录各处理的菌瓶第一茬现蕾期、转潮间隔期、每茬出菇持续时间，每个处理随机取10瓶，统计出菇产量，共采摘三茬，计算生物学效率、成本和效益核算。

(3)计算方法

①菌丝平均生长速度测定

平菇菌丝平均生长速度：V＝20cm/d(式中，d为菌丝满瓶的天数。)

②生物学效率

结果

3.1高浓度玉米浆发酵产物对平板培养平菇菌丝生长的影响

实验结果见表11。从表11可以看出：

①与对照相比，在PDA固体培养基中添加0.5vol％、1vol％、1.5vol％、2vol％、2.5vol％和3vol％的高浓度玉米浆发酵产物均能促进菌丝生长。

②与其它配方相比，平菇在高浓度玉米浆发酵产物添加量为1.5vol％时菌丝平均生长速度呈现显著性差异，日均生长速度为1.06cm/d，是对照的1.74倍，平菇菌丝生长旺盛、浓白、粗壮。

表11不同浓度的高浓度玉米浆发酵产物对平板培养平菇菌丝生长速度的影响

3.2高浓度玉米浆发酵产物对液体培养平菇菌丝生长的影响

实验结果见表12。从表12可以看出：

①与对照相比，平菇在所有添加高浓度玉米浆发酵产物的液体培养基中适应性好，菌丝长势均强。高浓度玉米浆发酵产物是以玉米浆为原料，经微生物发酵，通过脱毒、灭酶等多工序制备而成，高浓度玉米浆发酵产物中具有更多的易被平菇菌体吸收的多肽、氨基酸、维生素等生长因子。

②高浓度玉米浆发酵产物添加量为1.5vol％时菌体长势最好，菌丝生物量为0.84g/100mL，是对照的1.62倍。

表12不同浓度的高浓度玉米浆发酵产物对液体培养平菇菌丝平均生物量的影响

3.3高浓度玉米浆发酵产物对平菇袋式栽培的影响

(1)不同配方对平菇菌丝生长的影响

结果见表13。

表13不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对平菇菌丝生长的影响

由表13得知：

①高浓度玉米浆发酵产物各配方菌丝长势、菌丝浓密洁白程度、生长速度有所不同。

②高浓度玉米浆发酵产物各配方菌丝长势、菌丝浓密洁白程度、生长速度均强于对照。

③高浓度玉米浆发酵产物菌丝平均生长速度排序：H＞E＞I＞F＞B＞C>D＞A＞G＞CK

④配方H菌丝满袋所需时间最短，菌丝发菌周期比对照缩短20天，呈现显著性差异。即以0.5％高浓度玉米浆发酵产物代替75％麸皮和50％豆粕添加量，菌丝发菌周期可缩短1/3。

⑤高浓度玉米浆发酵产物配方比对照组发菌时间均短，菌丝均更洁白。

(2)不同配方对平菇出菇周期的影响

结果见表14。由表14得知：

①各高浓度玉米浆发酵产物配方现蕾、转潮间隔、出菇持续时间有所不同。

②一些配方的现蕾、转潮间隔、出菇持续时间强于对照。

③配方H现蕾最早，转潮时间最短，出菇周期最短，比对照提前出菇5天左右。

表14不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对平菇出菇周期的影响

(3)不同配方对平菇菌丝体营养成分含量的影响

各高浓度玉米浆发酵产物配方初始培养料(即未接种的培养基)60℃烘干，粉碎，过40目筛，检测营养成分含量；菌丝满袋时，取各高浓度玉米浆发酵产物配方菌棒样品60℃烘干，粉碎，过40目筛，检测营养成分含量。

结果见表15。由表15得知：

①各初始高浓度玉米浆发酵产物培养料(即未接种的培养基)的粗纤维含量、粗蛋白含量、粗多糖含量和硒含量有所不同。

②发满菌袋时，各高浓度玉米浆发酵产物配方中菌丝体的粗纤维含量、粗蛋白含量、粗多糖含量和硒含量不同。

③相比各初始培养料(即未接种的培养基)，各配方菌袋发满时，其菌丝体的粗纤维含量都降低，降低幅度排序为：A＞H＞E＞D＞B＞G＞CK＞C＞I＞F。配方A菌丝体粗纤维含量降低幅度最大。

④相比各初始培养料(即未接种的培养基)，各配方菌袋发满时，其菌丝体的粗蛋白含量都增加，增加幅度排序为：H＞G＞F＞D＞B＞C＞A＞E＞CK＞I。配方H菌丝体粗蛋白含量增加幅度最大。

⑤相比各初始培养料(即未接种的培养基)，各配方菌袋发满时，其菌丝体的粗多糖含量都增加，增加幅度排序为：A＞H＞F＞I＞CK＞D＞C＞E＞G＞B。配方A菌丝体粗多糖含量增加幅度最大。

⑥相比各初始培养料(即未接种的培养基)，高浓度玉米浆发酵产物各配方菌袋发满时，其菌丝体的硒含量都增加，增加幅度排序为：H＞A＞F＞CK＞B＞I＞C＞D＞E＞G。配方H菌丝体硒含量增加幅度最大。

表15不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对平菇菌丝体营养成分含量影响

(4)不同配方对平菇生物学效率的影响

结果见表16。由表16得知：

①各配方第1茬、第2茬、第3茬及总生物学效率各不同。

②除了配方D和配方I，其余配方的总生物学效率均比对照高。

③各配方第一茬生物学效率占总生物学效率的45％-55％左右。

④配方H总生物学效率最高，为106.93％，与其他配方比较，呈现显著性差异，比对照增产15.11％。

表16不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对平菇生物学效率的影响

(5)不同配方对第一茬平菇子实体形态特征的影响

结果见表17。由表17得知：

①不同高浓度玉米浆发酵产物配方对第一茬平菇子实体形态特征的影响不同。

②与其他配方相比，配方H对第一茬平菇子实体形态特征的影响最大，单菌棒菇重最大，差异显著。

表17不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对第一茬平菇子实体形态特征的影响

(6)不同配方对平菇栽培生产成本及经济效益的影响

①高浓度玉米浆发酵产物培养料栽培平菇原料成本

主要是玉米芯、麸皮、豆粕和高浓度玉米浆发酵产物的费用。玉米芯价格650元/吨，麸皮价格2000元/吨，豆粕3700元/吨，氧化钙500元/吨，硫酸钙1500元/吨，高浓度玉米浆发酵产物1000元/吨。

②高浓度玉米浆发酵产物培养料栽培平菇经济效益

按平菇年平均销售价格4元/kg计算经济效益。

结果见表18。从表18得知：

不同高浓度玉米浆发酵产物培养料栽培平菇原料成本和经济效益不同；

除配方A外，其他配方均降低了原料成本；

除配方D和I外，其他配方均增加了经济效益；

配方H效益增收率最高，投入产出比最高，每袋节约原料成本9分7厘人民币，每袋效益增加2角8分1厘人民币，投入产出比为1:4.89；

配方I原料成本降低幅度最大，每袋节约原料成本1角1分5厘人民币。

表18不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对平菇栽培原料成本及经济效益影响

(7)不同配方对平菇子实体营养成分含量的影响

采摘第一茬平菇子实体60℃烘干，粉碎，过40目筛，检测营养成分含量。

结果见表19。由表19得知：

①各高浓度玉米浆发酵产物培养料第一茬平菇子实体的粗纤维含量、粗蛋白含量、粗多糖含量和硒含量均不同。

②各高浓度玉米浆发酵产物配方第一茬子实体的粗纤维含量排序为：CK＞F＞I＞E＞C＞B＞G＞A＞H＞D。粗纤维含量最低的是配方D和H，含量分别为16.7％和17.1％，与其他配方相比，差异显著。所以口感最好的是配方D或H，其次为配方A。

③各高浓度玉米浆发酵产物配方第一茬子实体的粗蛋白含量排序为：H＞A＞D＞B＞C＞I＞E＞G＞F＞CK。配方H子实体粗蛋白含量最高，为29.6％，与其他配方相比，有显著性差异。

④各高浓度玉米浆发酵产物配方第一茬子实体的粗多糖含量排序为：C＞A＞G＞H＞E＞D＞B＞F＞CK＞I。配方C子实体粗多糖含量增加幅度最大，为13.9％，与其他配方相比，呈现显著性差异。

⑤各高浓度玉米浆发酵产物配方第一茬子实体的硒含量排序为：D＞C＞E>A＞H＞F＞I＞CK＞G＞B。配方D菌子实体硒含量最高，为0.312μg/100g，与其他配方比较，呈现显著性差异。

表19不同高浓度玉米浆发酵产物培养料配方对平菇子实体营养成分含量影响

3.4高浓度玉米浆发酵产物对平菇瓶式栽培的影响

(1)不同配方对平菇菌丝生长的影响

①菌丝生长速度的顺序为：B'＜G'＜E'＜CK＜I'＜H'＜F'＜D'＜A'＜C'②瓶栽生长速度最快的为配方BT-C’，即以1.5％高浓度玉米浆发酵产物代替75％豆粕添加量，其营养生长阶段菌丝满袋所需时间最短，为35天，发菌周期比CK缩短15天。

(2)不同配方对平菇出菇周期的影响

①各高浓度玉米浆发酵产物瓶栽配方现蕾、转潮间隔、出菇持续时间均不同。

②一些配方的现蕾、转潮间隔、出菇持续时间强于对照。

③配方C'现蕾最早，转潮时间最短，出菇周期最短，比对照提前出菇5天左右。

(3)不同配方对平菇生物学效率的影响

①各配方第1茬、第2茬、第3茬及总生物学效率各不同。

②除了配方A'，其余配方的总生物学效率均比对照高。

③各配方第一茬生物学效率占总生物学效率的40％-45％。

④配方C'总生物学效率最高，为97.88％，比对照增产8.14％。

(4)不同配方对第一茬平菇子实体形态特征的影响

得知：

①不同高浓度玉米浆发酵产物配方对第一茬瓶栽平菇子实体形态特征的影响不同，试验组均比对照组效果好。

②配方C'对第一茬的瓶栽平菇子实体形态特征的影响最大，单菌棒鲜菇重最大为127.68g，生物学效率为45.6％。

(5)不同配方对平菇栽培生产成本及经济效益的影响

①高浓度玉米浆发酵产物为培养料栽培平菇的原料成本

主要是玉米芯、麸皮、豆粕和高浓度玉米浆发酵产物的费用。玉米芯2021年6月市场价格650元/吨，麸皮2021年6月市场价格2000元/吨，豆粕2021年6月市场3700元/吨，氧化钙500元/吨，硫酸钙1500元/吨，高浓度玉米浆发酵产物1000元/吨。

②高浓度玉米浆发酵产物为培养料栽培平菇经济效益

按平菇年平均销售价格4元/kg计算经济效益。

不同高浓度玉米浆发酵产物培养料瓶式栽培平菇时，原料成本和经济效益不同；除部分替代配方A'、额外添加配方E外，其他配方均降低了原料成本；所有试验组均增加了经济效益；

配方E'三茬总的效益增收率最高，投入产出比最高，每瓶节约原料成本3分9厘人民币，每瓶效益增加1角8分2厘人民币，原材料投入产出比为1:7.84；

配方I'原料成本降低幅度最大每瓶节约原料成本6分4厘人民币。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种高底物浓度发酵玉米浆产物在食用菌栽培生产中的应用，其特征在于，将高浓度玉米浆发酵产物与栽培培养基混合，得到生长培养基；

将黑木耳菌液接种到所述生长培养基中，进行培养；

培养方式包括：

以PDA固体培养基为基础培养基，加入高浓度玉米浆发酵产物，121℃高压灭菌30 min；在无菌条件下用直径5 mm打孔器取菌块1片，接种在培养瓶内，在23℃、180 r/min、100 mL装样量/250 mL培养瓶条件下避光培养7 d；培养结束后，培养液在4000 r/min离心10 min，得到的沉淀物即为菌丝，将菌丝用清水反复洗涤后用四层纱布过滤，菌丝置于105℃烘干至恒重，称重，即黑木耳菌丝平均生物量；所述高浓度玉米浆发酵产物的含量为1.5vol%；

或根据栽培初始配方利用所述高浓度玉米浆发酵产物部分替代复配袋料配配方，并装于聚丙烯折角袋中，无棉盖体封口，每袋装入栽培料合干料360g，经高温高压灭菌后在无菌室进行冷却并接种，接种量25 mL/袋，接种后移入培养室培养，温度为23℃；待菌丝满袋后熟一个月后进行开孔，用开孔器对每个菌包开90个Y字型口，控制培养室温度15～25℃，湿度70％以上，并每天给予温差刺激与光照刺激，保持通风状态，待子实体成熟后，采收子实体并晾晒；所述高浓度玉米浆发酵产物的替代量为3wt%；

所述高浓度玉米浆发酵产物的制备方法，包括以下步骤：将玉米浆预热，得到预热玉米浆；将所述预热玉米浆、NaOH和Ca(OH)₂混合后，调节pH值为5.5～6.0，得到预处理玉米浆；将所述预处理玉米浆、米曲霉种曲、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵混合进行发酵，得到玉米浆发酵液；将所述玉米浆发酵液依次进行灭酶、冷却和板框过滤，得到所述高浓度玉米浆发酵产物；

所述米曲霉种曲的制备方法包括以下步骤：(1)斜面试管菌种的制作：将菌种米曲霉YY-21号传试管斜面培养基，恒温培养得到斜面试管菌种；(2)三角瓶种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比4：1混合，加入混合干料重80～90％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混合均匀，每瓶装湿料20 g，厚度为1 cm，经高压灭菌后摇匀，置于无菌室，待物料冷却后，接种斜面试管菌种的孢子，恒温培养，待孢子长满曲料，即得到成熟的三角瓶种曲；(3)种曲的制作：将麸皮和豆饼粉按重量比7：3混合，加入混合干料重70～85％的无菌水和10～15％的玉米浆拌合混匀，即为曲料，曲料品温达到35℃以下，加入干料重0 .1％的三角瓶种曲，在28～32℃条件下培养，培养期间利用倒盘的方式，调节上、下层曲盘的品温，有结块现象时进行搓曲，待孢子长满，曲料呈现嫩黄绿色时，即为成曲；

所述预处理玉米浆与米曲霉种曲的用量比为100 mL:1.5～2 g；

所述预处理玉米浆、苯甲酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸铵的用量比为100mL:0 .04～0 .05g:0 .005～0 .009g:0 .005～0 .009g:0 .005～0 .009g。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述玉米浆的浓度为18～22°Bé，所述预热的温度为50～55℃。

3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调节pH值使用中和剂，所述中和剂是由6重量份氢氧化钠和1重量份氢氧化钙复合组成，所述玉米浆与中和剂的质量比为100：2.0～2 .2，所述调节pH值的方式为分步中和，按所述中和剂的质量比添加中和剂，第一步加入氢氧化钠反应20min，第二步加氢氧化钙反应40min。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述发酵的温度为50～55℃，时间为160～200min。

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