CN108207493B - 一种草腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种草腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用。本发明草腐型食用菌液体菌种培养基，包括以下质量百分比浓度的组分：葡萄糖0.5％～1.0％；草腐型食用菌子实体酶解液0.5％～1.5％；食用菌二次发酵培养料浸提液5.0％～10.0％；油葵饼粕水煮液1.5％～2.5％；酵母浸膏0.05％～0.15％；余量为水。本发明液体培养基营养成分丰富、组成合理，充分满足了草腐型食用菌的生长需要，使菌丝快速萌发生长和占据生长空间，抗杂菌能力增强，活力强，稳定好，菌丝老化慢，显著提高草腐型食用菌液体菌种的制备成功率。

Description

一种草腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种草腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用，属于真菌发酵技术领域。

背景技术

制种是食用菌生产中的关键环节，对产业的发展至关重要，直接关系到最终产品的产量、品质和效益。液体菌种是采用液体培养基经深层培养制得，与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、发菌快、菌龄整齐、便于机械化操作等优点。随着食用菌规模化生产的发展，采用液体培养技术制备液体菌种代替传统的固体菌种，将是食用菌生产发展的重要方向。由于液体菌种对生产工艺及技术条件要求高，并受资金和技术的限制，目前我国仍有相当多食用菌生产企业采用传统固体菌种的栽培模式。工厂化的金针菇、杏鲍菇、真姬菇等木腐型食用菌的液体菌种生产工艺日渐成熟，应用越来越普遍，而草腐型食用菌由于生长特点、栽培方式与木腐菌存在较大差别，与之相适应的液体菌种生产工艺和应用技术尚需进一步创新和提升。

液体菌种质量的好坏对液体接种的难易、菌丝长势、子实体产量和出菇质量等均有很大的影响。草腐型食用菌是以农作物秸秆和腐熟有机肥料为主要原料，分解纤维素能力较强的一类食用菌，如双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇等。目前草腐型食用菌液体菌种生产工艺还不够成熟，应用较少，由于草腐型食用菌对养分吸收利用机理与木腐型食用菌不同，需要根据草腐型食用菌对养分的需求规律开发专用液体培养基，以目前常规液体培养基生产草腐型食用菌菌种，容易出现菌丝生长不适应、抗杂菌能力弱、菌种质量较差、菌丝老化退变快等问题。为解决草腐型食用菌液体菌种质量问题，需要对现有技术进行改进。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，根据草腐菌型食用菌对养分需求的特点，提供一种草腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用，本发明的液体菌种培养基具有成本低、制备方便、抗杂菌能力强、显著提高木腐型食用菌液体菌种的制备成功率等优点。

为实现上述发明目的，本发明一方面提供一种草腐型食用菌液体菌种培养基，包括以下质量百分比浓度的组分：

葡萄糖0.5％～1.0％；

草腐型食用菌子实体酶解液0.5％～1.5％；

食用菌二次发酵培养料浸提液5.0％～10.0％；

油葵饼粕水煮液1.5％～2.5％；

酵母浸膏0.05％～0.15％；

余量为水。

优选的，所述草腐型食用菌液体菌种培养基，包括以下质量百分比浓度的组分：

葡萄糖0.75％；

草腐型食用菌子实体酶解液1.0％；

食用菌二次发酵培养料浸提液7.5％；

油葵饼粕水煮液2.0％；

酵母浸膏0.1％；

余量为水。

所述草腐型食用菌子实体可以选用双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇、大球盖菇的一种或几种的商品子实体和/或残次菇、碎菇。

所述草腐型食用菌子实体酶解液的制备方法：取草腐型食用菌采收后的子实体和/或残次菇、碎菇，用质量百分比浓度为0.4％～0.6％的稀盐水漂洗，沥干水分，放入打浆器中，加4倍重量的水匀浆；向浆液中加入0.2％～0.4％纤维素酶和0.1％～0.2％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52～58℃，持续酶解1.5～2.5h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得草腐型食用菌子实体酶解液。

优选地，稀盐水浓度为0.5％，加入0.3％纤维素酶和0.15％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至55℃，持续酶解2.0h。

本发明制备草腐型食用菌子实体酶解液所用的纤维素酶和木瓜蛋白酶为市售食品级产品，原料成本低廉，获取方便。

所述食用菌二次发酵培养料为：麦秸、稻草、玉米秸秆的一种或几种与鸡粪、猪粪的一种或两种组合，利用二次发酵技术制备的培养料。

所述食用菌二次发酵培养料浸提液的制备方法：将食用菌二次发酵培养料粉碎，按质量比1:6～8的比例加水混合，放入水煮容器中，煮沸20～40min，过滤，滤液即为食用菌二次发酵培养料浸提液。

优选地，按质量比1:7的比例加水混合，煮沸30min。

所述油葵饼粕水煮液的制备方法：将油葵饼粕粉碎过50～80目筛，放入水煮容器中，加入8～10倍重量的水，煮沸20～40min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。

优选地，将油葵饼粕粉碎过60目筛，加入9倍重量的水，煮沸30min。

本发明还提供了制备草腐型食用菌液体菌种培养基的方法，包括以下步骤：

(1)按配比计算并称取葡萄糖、草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液、酵母浸膏、水；

(2)将葡萄糖和酵母浸膏溶于适量水中，充分搅拌；再将草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液加入均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容；

(3)灭菌冷却后即得。

所述步骤(3)中，灭菌温度121～125℃，压强0.105～0.135Mpa，时间35～45min。

本发明还提供所述的草腐型食用菌液体菌种培养基在发酵培养草腐型食用菌液体菌种中的应用，方法是：将草腐型食用菌液体菌种培养基冷却到26℃以下，接入食用菌菌种，根据不同菇种生长特性，于22～30℃，通入净化空气进行有氧发酵培养4～7天，即可制得品质优良的液体菌种。

本发明液体菌种培养基所选用的原料具有特点如下：

(1)制备草腐型食用菌子实体酶解液时可选择市售鲜菇，也可利用残次菇、碎菇、菇根作为原料，生产成本低，提高产品附加值和资源利用率。酶解液中含有丰富的还原糖、氨基酸、多肽、维生素、微量元素等生物活性物质，可提高食用菌菌丝的长速、活力和抗逆性。

(2)作物秸秆和畜禽养殖废弃物等食用菌培养料经过二次发酵后，形成了大量的菌体蛋白和利于草腐型食用菌吸收利用的腐殖质复合体等，去除了一些有害物质和有害微生物，成为有利于草腐型食用菌生长的高度选择性基质。通过制备浸提液可以将适宜草腐型食用菌吸收利用的营养成分和生物活性物质提取出来，用于液体菌种的培养，能够起到很好的促进作用。

(3)油葵饼粕是油葵经机械压榨或溶剂浸出提油后的副产物，含有丰富的营养成分，其中维生素、蛋氨酸、烟酸、钙、磷等高于豆粕，但目前利用率不高，造成资源浪费。研究利用其替代豆粕用于食用菌生产具有重要的作用和意义。本发明人经过研究发现将其水煮液用于发酵培养菌种替代豆粕可以取得优良效果，拓展了油葵饼粕的应用范围及降低了食用菌液体菌种培养成本。

本发明具有如下有益效果：

(1)本发明充分利用废弃物，经过加工处理后，用于食用菌液体发酵培养基，极大地降低了成本，且本发明制备工艺简单可控，易于管理和质量控制，利于工业化生产。

(2)本发明液体培养基营养成分丰富，充分满足了草腐型食用菌的生长需要，使菌丝快速萌发生长和占据生长空间，抗杂菌能力增强，活力强，稳定好，菌丝老化慢，显著提高草腐型食用菌液体菌种的制备成功率。

(3)本发明菌种制备时间较常规缩短0～2天，菌丝体干重显著提高，菌丝球大小均匀、表面毛刺多，悬浮性好，结构紧密，而且具有更好的菌种活力，老化速度慢，菌种质量提升明显。

具体实施方式

下面结合以下具体实施方式，对本发明的技术方案及效果做进一步的说明。下述说明用于解释本发明，而非对本发明的限制。下述方法如无特殊说明均为本领域常规方法，所用组分、试剂等如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

一种双孢蘑菇液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖1.0％，草腐型食用菌子实体酶解液1.0％，食用菌二次发酵培养料浸提液5.0％，油葵饼粕水煮液2.5％，酵母浸膏0.05％，其余为水。

按照如下步骤进行制备：

(1)草腐型食用菌子实体酶解液的制备：取双孢蘑菇的碎菇，用质量百分比浓度为0.5％的稀盐水漂洗，沥干水分，放入打浆器中，加4倍重量的水匀浆；向浆液中加入0.3％纤维素酶和0.15％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至55℃，持续酶解2.0h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得草腐型食用菌子实体酶解液。

(2)食用菌二次发酵培养料浸提液的制备：将以麦秸和鸡粪为主料的食用菌二次发酵培养料(二次发酵方法采用本领域常用方法即可)粉碎，按质量比1:7的比例加水混合，放入水煮容器中，煮沸30min，过滤，滤液即为食用菌二次发酵培养料浸提液。

(3)油葵饼粕水煮液的制备：将油葵饼粕粉碎过50目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸40min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。

(4)液体培养基制备：将葡萄糖和酵母浸膏溶于适量水中(水的用量满足使葡萄糖和酵母浸膏充分溶解即可)，充分搅拌。再将草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液加入，混合均匀，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。

(5)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌40min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。

灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入双孢蘑菇菌种，将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得品质优良的双孢蘑菇液体菌种。

实施例2

一种草菇液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.5％，草腐型食用菌子实体酶解液0.5％，食用菌二次发酵培养料浸提液10.0％，油葵饼粕水煮液1.5％，酵母浸膏0.15％，其余为水；

按照如下步骤进行制备：

(1)草腐型食用菌子实体酶解液的制备：取大球盖菇和草菇采收后剩下的碎菇，用质量百分比浓度为0.4％的稀盐水漂洗，沥干水分，放入打浆器中，加4倍重量的水匀浆；向金针菇浆液中加入0.2％纤维素酶和0.1％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至58℃，持续酶解2.5h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得草腐型食用菌子实体酶解液。

(2)食用菌二次发酵培养料浸提液的制备：将稻草、猪粪为主料的二次发酵培养料(二次发酵方法采用本领域常用方法即可)粉碎，按质量比1:6的比例加水混合，放入水煮容器中，煮沸20min，过滤，滤液即为食用菌二次发酵培养料浸提液。

(3)油葵饼粕水煮液的制备：粉碎过80目筛，放入水煮容器中，加入9倍重量的水，煮沸20min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。

(4)液体培养基制备：将葡萄糖和酵母浸膏溶于适量水中(水的用量满足使葡萄糖和酵母浸膏充分溶解即可)，充分搅拌。再将草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液加入，混合均匀，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。

(5)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌35min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。

灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入草菇菌种，将所述培养基液体温度调整至30℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得品质优良的草菇液体菌种。

实施例3

一种鸡腿菇液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，草腐型食用菌子实体酶解液1.5％，食用菌二次发酵培养料浸提液8.0％，油葵饼粕水煮液2.0％，酵母浸膏0.1％，其余为水；

按照如下步骤进行制备：

(1)草腐型食用菌子实体酶解液的制备：取鸡腿菇子实体采收处理后的残次菇，用质量百分比浓度为0.6％的稀盐水漂洗，沥干水分，放入打浆器中，加4倍重量的水匀浆；向浆液中加入0.4％纤维素酶和0.2％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52℃，持续酶解1.5h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得草腐型食用菌子实体酶解液。

(2)食用菌二次发酵培养料浸提液的制备方法：将以玉米秸秆和鸡粪为主料的食用菌二次发酵培养料(二次发酵方法采用本领域常用方法即可)粉碎，按质量比1:8的比例加水混合，放入水煮容器中，煮沸40min，过滤，滤液即为食用菌二次发酵培养料浸提液。

(3)所述油葵饼粕水煮液的制备方法：将油葵饼粕粉碎过60目筛，放入水煮容器中，加入8倍重量的水，煮沸30min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。

(4)液体培养基制备：将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中(水的用量满足使葡萄糖和酵母浸膏充分溶解即可)，充分搅拌。再将其与草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。

(5)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌45min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。

灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入鸡腿菇菌种，将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得品质优良的液体菌种。

实施例4

一种液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，草腐型食用菌子实体酶解液1.0％，食用菌二次发酵培养料浸提液7.5％，油葵饼粕水煮液2％，酵母浸膏0.1％，其余为水。

制备方法同实施例1。分别按上述实施例的方法接入双孢蘑菇菌种、草菇菌种、鸡腿菇菌种培养发酵制得液体菌种。

对比例1

一种通用型食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：马铃薯8.0％，葡萄糖2.0％，豆粕1.0％，酵母浸膏0.3％，磷酸二氢钾0.06％，硫酸镁0.06％，维生素B₁0.005％，其余为水。

按照如下步骤进行制备：

(1)按比例分别称取马铃薯和豆粕，马铃薯洗净去皮切成小块，与豆粕混合放入水煮容器中，加入9倍重量的水，煮沸30min，过滤，取滤液。

(2)将原料中的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素按上述比例溶于水中，并充分搅拌，直至溶解成半成品溶液。

(3)再将原料中的酵母浸膏按比例加入半成品溶液中，与马铃薯和豆粕水煮液混合并搅拌均匀，制成培养基液体，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。

(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌40min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。

灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下。接入双孢蘑菇菌种：将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养8天即可制得液体菌种。接入草菇菌种：将所述培养基液体温度调整至30℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。接入鸡腿菇菌种：将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。

对比例2

一种食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，食用菌二次发酵培养料浸提液7.5％，油葵饼粕水煮液2.0％，酵母浸膏0.1％，其余为水。

制备方法同实施例1。

接入双孢蘑菇菌种：将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养7天即可制得液体菌种。接入草菇菌种：将所述培养基液体温度调整至30℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。接入鸡腿菇菌种：将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。

对比例3

一种食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，草腐型食用菌子实体酶解液1.0％，油葵饼粕水煮液2.0％，酵母浸膏0.1％，其余为水。

制备方法同实施例1。

接入双孢蘑菇菌种：将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养7天即可制得液体菌种。接入草菇菌种：将所述培养基液体温度调整至30℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。接入鸡腿菇菌种：将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。

对比例4

一种食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，草腐型食用菌子实体酶解液1.0％，食用菌二次发酵培养料浸提液7.5％，豆粕水煮液2.0％，酵母浸膏0.1％，其余为水。

制备方法同实施例1。

接入双孢蘑菇菌种：将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。接入草菇菌种：将所述培养基液体温度调整至30℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种。接入鸡腿菇菌种：将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种。

实验例

分别利用上述实施例和对比例的方法制备双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇的液体菌种，接种量及培养温度等条件均相同。测定培养所需时间、培养菌丝干重、菌丝球形态，并通过检测菌球在固体培养基上的萌发时间、长势、长速等评价液体菌种的活性，比较不同实施例和对照实施例对不同食用菌菌丝生长的影响，结果见表1。

表1不同制备方法对食用菌液体菌种生长的影响

根据上表可以看出，本发明各实施例培养的双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇等草腐型食用菌液体菌种较对比例具有明显的优势，菌种制备时间缩短0～2天，菌丝体干重显著提高，菌丝球大小均匀、表面毛刺多，悬浮性好，结构紧密，而且具有更好的菌种活力，老化速度慢，菌种质量提升明显。

Claims (9)

1.一种草腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，包括以下质量百分比浓度的组分：葡萄糖0.5％～1.0％；草腐型食用菌子实体酶解液0.5％～1.5％；食用菌二次发酵培养料浸提液5.0％～10.0％；油葵饼粕水煮液1.5％～2.5％；酵母浸膏0.05％～0.15％；余量为水；

所述草腐型食用菌子实体酶解液的制备方法为：取草腐型食用菌采收后的子实体和/或残次菇、碎菇，用质量百分比浓度为0.4％～0.6％的稀盐水漂洗，沥干水分，放入打浆器中，加4倍重量的水匀浆；向浆液中加入0.2％～0.4％纤维素酶和0.1％～0.2％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52～58℃，持续酶解1.5～2.5h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得草腐型食用菌子实体酶解液。

2.如权利要求1所述的草腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，所述草腐型食用菌子实体为：双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇、大球盖菇的一种或几种的商品子实体和/或残次菇、碎菇。

3.如权利要求1所述的草腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，所述食用菌二次发酵培养料为：麦秸、稻草、玉米秸秆的一种或几种与鸡粪、猪粪的一种或两种组合，利用二次发酵技术制备的培养料。

4.如权利要求1或3所述的草腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，所述食用菌二次发酵培养料浸提液的制备方法为：将食用菌二次发酵培养料粉碎，按质量比1:6～8的比例加水混合，放入水煮容器中，煮沸20～40min，过滤，滤液即为食用菌二次发酵培养料浸提液。

5.如权利要求1所述的草腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，所述油葵饼粕水煮液的制备方法：将油葵饼粕粉碎过50～80目筛，放入水煮容器中，加入8～10倍重量的水，煮沸20～40min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。

6.制备权利要求1-5任一所述的草腐型食用菌液体菌种培养基的方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)按配比计算并称取葡萄糖、草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液、酵母浸膏、水；

(2)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌；再将草腐型食用菌子实体酶解液、食用菌二次发酵培养料浸提液、油葵饼粕水煮液加入均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容；

(3)灭菌冷却后即得。

7.如权利要求6所述的草腐型食用菌液体菌种培养基的制备方法，其特征是，所述步骤(3)中，灭菌温度121～125℃，压强0.105～0.135Mpa，时间35～45min。

8.权利要求1-5任一所述的草腐型食用菌液体菌种培养基在发酵培养草腐型食用菌液体菌种中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征是，将草腐型食用菌液体菌种培养基冷却到26℃以下，接入食用菌菌种，于22～30℃，通入净化空气进行有氧发酵培养4～7天，即可制得品质优良的液体菌种。