CN110655452A - 一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法及应用 - Google Patents

一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法及应用，所述提取方法包括将百香果、葡萄和蓝莓混合料清洗后选取果肉，对果肉进行粉碎、过滤，得滤汁和滤渣，分别对滤汁和滤渣进行提取，合并提取液，减压浓缩，将浓缩液过硅胶柱，无水乙醇洗脱，冷冻干燥，加入葡萄酒曲，酵母发酵，冷冻干燥或二氧化碳超临界萃取，即得。本发明提供的提取方法，其操作简单，原料成本低，分别对百香果、葡萄和蓝莓混合料果肉的汁和渣进行提取，大大提高了产品收率，在提取过程中加入葡萄酒曲进行发酵，进一步提高了产品收率，白皮杉醇的提取量可达到640mg/kg，且本提取方法易于工业化生产。

Description

一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法及 应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法及应用。
背景技术
白皮杉醇是天然提取物芪类物质的一种，是白藜芦醇3位羟基化类似物。药理学研究显示白皮杉醇有许多的药理活性，有抗癌、抗细胞增殖、抗炎、免疫调节抗脂质氧化、抗菌等多种药理活性。研究表明，白皮杉醇还是良好的抗氧化剂和心血管保护剂。随着开发的不断深入，白皮杉醇在保健品、化妆品以及药品等领域得到广泛的应用和认可。
百香果亦被称为鸡蛋果，果实球形或长圆球形，内有黄色果汁和黑色种子，含有蛋白质、脂肪、糖类、多种维生素、氨基酸和白皮杉醇等，营养丰富，酸甜可口，具有柠檬、柑、桔、橙子、草莓、酸梅、菠萝、石榴、香蕉、等水果香味，素有“饮料之王”、“水果味精”的美称，是生产果汁饮料的重要原料和添加剂。可以加工成果汁、果露、果酱、果冻、口含片，主要以加工成果汁食用为主，可制成芳香可口的饮料，还可用来添加在其他饮料中以提高饮料的品质。
目前，从百香果中提取白皮杉醇的专利文献较少，且现有的从百香果中提取白皮杉醇的方法，其提取的白皮杉醇的含量有待于进一步提高。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种成本低，步骤简单，含量高的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为达到上述技术目的，本发明的技术方案：
一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉进行粉碎，过滤，得滤汁和滤渣；
(2)向所述滤汁加入70-95％乙醇，加热回流2-3h，得提取液；
(3)向所述滤渣中加入30-80％乙醇，加热回流3-4h，得粗提液；
(4)将所述提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液；
(5)将所述浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液；
(6)将所述洗脱液进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂；
(7)向所述洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于25-35℃下加入酵母进行发酵25-30天，得发酵液；
(8)将所述发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将所述发酵液进行二氧化碳超临界萃取，得白皮杉醇液体。
作为一种改进，步骤(2)中，所述滤汁与所述70-95％乙醇的重量比为1:2。
作为一种改进，步骤(3)中，所述滤渣与所述30-80％乙醇的重量比为1:3。
作为一种改进，步骤(3)中，所述滤渣中加入30-80％乙醇后，搅拌均匀，于30-70℃超声5-35min，得超声处理液，将所述超声处理液加热回流1-2h。
作为一种改进，步骤(4)中，所述浓缩液的体积为所述提取液和粗提液合并液体积的1/20-1/15。
作为一种改进，所述葡萄酒曲的制备方法是：
a.将葡萄和蓝莓洗净，榨汁，得葡萄蓝莓汁；
b.将大米用温水浸泡6-8h，将浸泡后的大米粉碎成米粉，并用细筛进行过筛；
c.将过筛后的米粉加水拌匀，在曲模中踩成曲坯；
d.在15-20℃下，地面铺上稻皮，把曲坯运入曲室中排列成行，间隔2-3厘米，在曲坯的上表面浇淋20-30％的葡萄蓝莓汁，1-2小时后将曲坯翻转，在曲坯的下表面浇淋20-30％的葡萄蓝莓汁，曲坯盖上稻草，10-15h后翻开稻草，将剩余的葡萄蓝莓汁均匀浇淋至曲坯的上、下表面，盖上稻草；
e.将曲室封闭，温度会逐渐上升，24-30h后曲坯表面出现霉菌斑点，再经30-35小时后，品温升到38-39℃；
f.曲坯品温升至38-39℃时，打开门窗，揭去稻草，排潮降温，并把曲坯上下翻倒一次，拉开间距，以控制微生物生长，使曲坯表面干燥，固定成形；
g.每天翻曲一次，2-3天后关闭门窗，继续养曲3-5天，即得。
由于采用上述技术方案，本发明的有益效果：
本发明提供的提取方法，其操作简单，原料成本低，分别对百香果、葡萄和蓝莓混合料果肉的汁和渣进行提取，大大提高了产品收率，滤渣在超声波的机械扰动作用，从而加速了滤渣中的成分向乙醇扩散的速度，缩短了提取时间，在提取过程中加入葡萄酒曲进行发酵，进一步提高了产品收率，白皮杉醇的提取量可达到2200mg/kg，且本提取方法易于工业化生产。
附图说明
图1为实施例3的检测结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料10kg，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉与葡萄和蓝莓一起粉碎，过滤，得滤汁和滤渣。
(2)向滤汁加入2倍量的70％乙醇水溶液，加热回流3h，得提取液。
(3)向滤渣中加入3倍量的40％乙醇水溶液，搅拌均匀，于30℃超声35min，得超声处理液，将超声处理液加热回流1h，得粗提液。
(4)将提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液，浓缩液的体积为提取液和粗提液合并液体积的1/15。
(5)将浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液。
(6)将洗脱液于-40℃下进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂。
(7)向洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于25℃下加入酵母进行发酵30天，得发酵液；其中，葡萄酒曲的制备方法是：
a.将葡萄和蓝莓洗净，榨汁，得葡萄蓝莓汁；
b.将大米用温水浸泡6-8h，将浸泡后的大米粉碎成米粉，并用细筛进行过筛；
c.将过筛后的米粉加水拌匀，在曲模中踩成曲坯；
d.在15-20℃下，地面铺上稻皮，把曲坯运入曲室中排列成行，间隔2-3厘米，在曲坯的上表面浇淋20-30％的葡萄蓝莓汁，1-2小时后将曲坯翻转，在曲坯的下表面浇淋20-30％的葡萄蓝莓汁，曲坯盖上稻草，10-15h后翻开稻草，将剩余的葡萄蓝莓汁均匀浇淋至曲坯的上、下表面，盖上稻草；
e.将曲室封闭，温度会逐渐上升，24-30h后曲坯表面出现霉菌斑点，再经30-35小时后，品温升到38-39℃；
f.曲坯品温升至38-39℃时，打开门窗，揭去稻草，排潮降温，并把曲坯上下翻倒一次，拉开间距，以控制微生物生长，使曲坯表面干燥，固定成形；
g.每天翻曲一次，2-3天后关闭门窗，继续养曲3-5天，即得。
(8)将发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将发酵液在50℃、35Mpa下进行二氧化碳超临界萃取2h，得白皮杉醇液体；经检测，白皮杉醇粉剂中白皮杉醇的含量为21.56g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2156mg/kg；白皮杉醇液体中白皮杉醇的含量为21.58g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2158mg/kg。
实施例2
一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料10kg，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉与葡萄和蓝莓一起粉碎，过滤，得滤汁和滤渣。
(2)向滤汁加入2倍量的85％乙醇水溶液，加热回流2.5h，得提取液。
(3)向滤渣中加入3倍量的60％乙醇水溶液，搅拌均匀，于50℃超声20min，得超声处理液，将超声处理液加热回流1.5h，得粗提液。
(4)将提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液，浓缩液的体积为提取液和粗提液合并液体积的1/18。
(5)将浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液。
(6)将洗脱液于-40℃下进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂。
(7)向洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于30℃下加入酵母进行发酵28天，得发酵液；其中，葡萄酒曲的制备方法同实施例1。
(8)将发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将发酵液在45℃、30Mpa下进行二氧化碳超临界萃取3h，得白皮杉醇液体；经检测，白皮杉醇粉剂中白皮杉醇的含量为22.48g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2248mg/kg；白皮杉醇液体中白皮杉醇的含量为22.51g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2251mg/kg。
实施例3
一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料10kg，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉与葡萄和蓝莓一起粉碎，过滤，得滤汁和滤渣。
(2)向滤汁加入2倍量的95％乙醇水溶液，加热回流2h，得提取液。
(3)向滤渣中加入3倍量的80％乙醇水溶液，搅拌均匀，于35℃超声30min，得超声处理液，将超声处理液加热回流2h，得粗提液。
(4)将提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液，浓缩液的体积为提取液和粗提液合并液体积的1/20。
(5)将浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液。
(6)将洗脱液于-40℃下进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂。
(7)向洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于35℃下加入酵母进行发酵25天，得发酵液；其中，葡萄酒曲的制备方法同实施例1。
(8)将发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将发酵液在40℃、25Mpa下进行二氧化碳超临界萃取4h，得白皮杉醇液体；经检测，白皮杉醇粉剂中白皮杉醇的含量为22.31g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为22.31mg/kg；白皮杉醇液体中白皮杉醇的含量为2200g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2200mg/kg。
实施例4
一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料10kg(三者重量比为5:2:1)，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉与葡萄和蓝莓一起粉碎，过滤，得滤汁和滤渣。
(2)向滤汁加入2倍量的80％乙醇水溶液，加热回流3h，得提取液。
(3)向滤渣中加入3倍量的70％乙醇水溶液，搅拌均匀，于65℃超声10min，得超声处理液，将超声处理液加热回流1h，得粗提液。
(4)将提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液，浓缩液的体积为提取液和粗提液合并液体积的1/17。
(5)将浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液。
(6)将洗脱液于-40℃下进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂。
(7)向洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于28℃下加入酵母进行发酵30天，得发酵液；其中，葡萄酒曲的制备方法同实施例1。
(8)将发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将发酵液在42℃、27Mpa下进行二氧化碳超临界萃取2.5h，得白皮杉醇液体；经检测，白皮杉醇粉剂中白皮杉醇的含量为21.56g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2156mg/kg；白皮杉醇液体中白皮杉醇的含量为21.53g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2153mg/kg。
实施例5
一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料10kg(三者重量比为5:2:1)，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉与葡萄和蓝莓一起粉碎，过滤，得滤汁和滤渣。
(2)向滤汁加入2倍量的90％乙醇水溶液，加热回流2h，得提取液。
(3)向滤渣中加入3倍量的80％乙醇水溶液，搅拌均匀，于70℃超声8min，得超声处理液，将超声处理液加热回流2h，得粗提液。
(4)将提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液，浓缩液的体积为提取液和粗提液合并液体积的1/16。
(5)将浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液。
(6)将洗脱液于-40℃下进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂。
(7)向洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于35℃下加入酵母进行发酵26天，得发酵液；其中，葡萄酒曲的制备方法同实施例1。
(8)将发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将发酵液在48℃、30Mpa下进行二氧化碳超临界萃取2.5h，得白皮杉醇液体；经检测，白皮杉醇粉剂中白皮杉醇的含量为21.61g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2161mg/kg；白皮杉醇液体中白皮杉醇的含量为21.57g，从百香果、葡萄和蓝莓混合料中的提取量为2157mg/kg。
对比例：
对照例
(1)取百香果10kg，用无菌离子水清洗干净，取百香果的果肉粉碎，过滤，得滤汁和滤渣；
(2)向滤汁中加入7倍量的80％丙酮，在250W功率下，微波提取8min，冷却至室温，得提取液；
(3)向滤渣中加入5倍量的100％丙酮，在250W功率下，微波提取6min，冷却至室温，过滤，得粗提液；
(4)将提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液；
(5)将浓缩液通过硅胶柱，并用无水丙酮洗脱，得洗脱液；
(6)将洗脱液于-40℃下进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将洗脱液在45℃、35Mpa下进行二氧化碳超临界萃取3h，得白皮杉醇液体；经检测，白皮杉醇粉剂中白皮杉醇的含量为6.25g，从百香果中的提取量为625mg/kg；白皮杉醇液体中白皮杉醇的含量为6.21g，从百香果中的提取量为621mg/kg。
白皮杉醇的应用
通过上述实施例制得的白皮杉醇液体，可作为食品添加剂添加到各种酒中，配制出对心血管疾病有良好预防作用的新型保健佐餐酒；或将白皮杉醇液体添加至食品中制成降脂、美容和减肥的天然保健食品；或将白皮杉醇液体添加至化妆品中，抑制黑色素生成，起到一定的美容作用。
通过上述实施例制得的白皮杉醇粉剂，可应用于抗白血病、预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管疾病等药物中。
以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.一种从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取百香果、葡萄和蓝莓混合料，用无菌离子水清洗干净，取百香果、葡萄和蓝莓混合料的果肉进行粉碎，过滤，得滤汁和滤渣；
(2)向所述滤汁加入70-95％乙醇，加热回流2-3h，得提取液；
(3)向所述滤渣中加入30-80％乙醇，加热回流3-4h，得粗提液；
(4)将所述提取液和粗提液合并，减压浓缩，得浓缩液；
(5)将所述浓缩液通过硅胶柱，并用无水乙醇洗脱，得洗脱液；
(6)将所述洗脱液进行冷冻干燥，得洗脱液粉剂；
(7)向所述洗脱液粉剂中加入葡萄酒曲，于25-35℃下加入酵母进行发酵25-30天，得发酵液；
(8)将所述发酵液进行冷冻干燥得白皮杉醇粉剂，或将所述发酵液进行二氧化碳超临界萃取，得白皮杉醇液体。
2.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述滤汁与所述70-95％乙醇的重量比为1:2。
3.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述滤渣与所述30-80％乙醇的重量比为1:3。
4.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述滤渣中加入30-80％乙醇后，搅拌均匀，于30-70℃超声5-35min，得超声处理液，将所述超声处理液加热回流1-2h。
5.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述浓缩液的体积为所述提取液和粗提液合并液体积的1/20-1/15。
6.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法，其特征在于，所述葡萄酒曲的制备方法是：
a.将葡萄和蓝莓洗净，榨汁，得葡萄蓝莓汁；
b.将大米用温水浸泡6-8h，将浸泡后的大米粉碎成米粉，并用细筛进行过筛；
c.将过筛后的米粉加水拌匀，在曲模中踩成曲坯；
d.在15-20℃下，地面铺上稻皮，把曲坯运入曲室中排列成行，间隔2-3厘米，在曲坯的上表面浇淋20-30％的葡萄蓝莓汁，1-2小时后将曲坯翻转，在曲坯的下表面浇淋20-30％的葡萄蓝莓汁，曲坯盖上稻草，10-15h后翻开稻草，将剩余的葡萄蓝莓汁均匀浇淋至曲坯的上、下表面，盖上稻草；
e.将曲室封闭，温度会逐渐上升，24-30h后曲坯表面出现霉菌斑点，再经30-35小时后，品温升到38-39℃；
f.曲坯品温升至38-39℃时，打开门窗，揭去稻草，排潮降温，并把曲坯上下翻倒一次，拉开间距，以控制微生物生长，使曲坯表面干燥，固定成形；
g.每天翻曲一次，2-3天后关闭门窗，继续养曲3-5天，即得。
7.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法制得的白皮杉醇粉剂在抗白血病药物中的应用。
8.根据权利要求1所述的从百香果、葡萄和蓝莓混合料中提取白皮杉醇的方法制得的白皮杉醇液体在保健品或化妆品中的应用。
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