CN110426524A - 一种abo血型双判读反定型检测系统和检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种ABO血型双判读反定型检测系统,所述检测系统上设置有一个以上的凹槽,所述凹槽为椭圆浅底状,所述凹槽的边角圆弧和底面圆弧的半径比例为0.07568,所述检测系统的材质为ABS塑料;一种ABO血型双判读反定型检测方法,包括如下步骤:1)全血洗涤;2)提取血型抗原;3)合成荧光纳米粒子胶体溶液;4)血型抗原包被到所述荧光纳米粒子表面;5)荧光信号标记;检测结果可以通过肉眼判读获得或者通过荧光识别仪器判读获得,不仅节省了原料,降低了使用成本,且通过荧光识别仪判读灵敏度高,且有效期长达18个月。
Description
技术领域
本发明涉及一种ABO血型双判读反定型检测系统和检测方法,属于生物科学技术领域。
背景技术
人红细胞表面含有血型抗原物质,而血清中则含有特异性抗体。当含有血型抗原的红细胞遇到与它相对应的抗体时,就会发生使红细胞凝结成团块的反应,简言之,即抗原—抗体反应。ABO血型可分为A、B、AB和O型四种血型。其中A血型的人,红细胞表面含有A抗原,在他们的血清中存在着对抗B抗原的抗体;而B血型的人,红细胞上含有B抗原,血清中存在有对抗A抗原的抗体;AB型的人红细胞上存在有A和B两种抗原,而在血清中既无抗A抗体,也无抗B的抗体;O型血的人红细胞表面上两种抗原都没有,但血清中同时存在有抗A和抗B两种抗体。所以输血前只检测人红细胞表面含有的血型抗原种类是不够的,还必须检测血清中存在的抗体的种类是否与其血型相对应,这样才能保证输血的安全。
目前常用的临床血型反定型鉴定按抗原的类型包括红细胞法和磁性粒子法。红细胞法是指通过已知类型红细胞与受检血清在盐水介质中(试管中或玻片上)出现肉眼可见反应的方法,该方法存在手工劳动强度大、结果受主观偏差影响较大和存在污染的可能、试剂有效期极短、不易保存等问题;磁性粒子法是指将已知种类的血型抗原包被在磁性粒子的表面以代替红细胞进行反定型检测,但是该试剂的保存条件苛刻,在复溶后的稳定性极差,结果不容易判断。
发明内容
本发明的目的在于提出一种双判读模式的反定型检测系统与检测方法,其克服了背景技术中血型检测方法所存在的不足。
为此,本发明采用以下技术方案,
一种ABO血型双判读反定型检测方法,包括如下步骤:
1)合成荧光纳米粒子胶体溶液,所述荧光纳米粒子胶体溶液包括纳米金胶体溶液或纳米银胶体溶液,所述纳米金胶体溶液由谷胱甘肽还原氯金酸制备而得;
2)血型抗原包被到所述荧光纳米粒子表面:先将纳米金胶体溶液或所述纳米银胶体溶液的pH调至7,后将所述纳米金胶体溶液或所述纳米银胶体溶液用稀释液稀释至浓度为0.1%~5%,将所述血型抗原用稀释液稀释至浓度为0.5mg/ml~10mg/ml,后一边剧烈磁力搅拌,一边将稀释后的所述血型抗原分别缓慢加入到pH调至7的所述纳米金胶体溶液或所述纳米银胶体溶液中,形成含有血型抗原-纳米金或血型抗原-纳米银的溶液,将含有所述血型抗原-纳米金或血型抗原-纳米银的溶液离心得到的沉淀物即为包被有血型抗原的纳米金粒子和包被有血型抗原的纳米银粒子;
3)荧光信号标记:将缓冲液加入到荧光微球介质溶液中,漩涡振荡混匀,后加入EDC溶液室温振荡活化,离心弃上清,沉淀物用MES缓冲液复溶,超声分散后加入步骤4)中所述的包被有血型抗原的纳米金粒子或者包被有血型抗原的纳米银粒子,于室温下在旋转培养器上偶联2h后,加入BSA溶液,在旋转培养器上封闭过夜,离心弃上清,沉淀用PBS复溶,重复两次离心和复溶步骤后,得到标记荧光信号的抗原粒子,储存在总成保存液中备用。
优选的,所述检测方法还包括全血洗涤和提取血型抗原。
优选的,所述荧光微球介质为量子点、荧光标记的纳米金和荧光素标记的乳胶微球中的一种。
优选的,所述稀释液的配方为:
优选的,所述总成保存液的配方为:
优选的,所述纳米金粒子的粒径为8-30nm。
优选的,将所述标记荧光信号的抗原粒子加入所述凹槽内,在8~25℃干燥。
优选的,检测结果可以通过肉眼观察获得或者通过荧光识别仪器获得。
另外,本发明还提供一种ABO血型双判读反定型检测系统,其采用上述任一项所述的ABO血型双判读反定型检测方法。
优选的,所述检测系统包括检测卡,所述检测卡上设置有一个以上的凹槽,所述凹槽为椭圆浅底状,所述凹槽的边角圆弧和底面圆弧的半径比例为0.07568;所述检测卡的材质为ABS塑料。
本技术方案与背景技术相比,它具有如下优点:
1、经过大量的手模和3D打印验证,本发明设计的反定型检测系统,所述凹槽为椭圆浅底状,所述凹槽的边角圆弧和底面圆弧的半径比例为0.07568,能使标记荧光信号的抗原粒子有限均匀附着在所述凹槽内,使检测结果易于判读,提高了检测的灵敏度。同时,经过大量的实验证明,所述检测系统的材质采用ABS塑料,其具有耐热耐腐蚀的优点,与PS塑料相比,在相同浓度的标记荧光信号的抗原粒子下,ABS塑料具有较高的粒子包被效率,且具有不易断裂、流行性好、加工性能好、易着色、成本更低和尺寸稳定性好的优点。
2、双判读反定型检测方法制备的自带荧光的纳米金胶体和带荧光标记的抗原粒子,不仅可以肉眼判读,还可以用于荧光分析仪判读,不仅节省了大量的原材料,而且降低了血型检测的成本,稳定性好,有效期长达18个月。
附图说明
图1为检测系统结构图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、特征和优点更加的清晰,以下结合附图及实施例,对本发明的具体实施方式做出更为详细的说明,在下面的描述中,阐述了很多具体的细节以便于充分的理解本发明,但是本发明能够以很多不同于描述的其他方式来实施。因此,本发明不受以下公开的具体实施的限制。
实施例一
如图1所示,本发明还提供一种ABO血型双判读反定型检测系统,所述检测系统包括一种ABO血型双判读反定型检测卡,所述检测卡上设置有一个以上的凹槽,本实施例中所述检测卡上设置有三个凹槽,所述凹槽为椭圆浅底状;所述凹槽的边角圆弧和底面圆弧的半径比例为0.07568,本实施例中所述凹槽的边角圆弧边角半径为19.82mm,所述凹槽的底面圆弧半径为1.5mm。
其中,所述检测卡的材质为ABS塑料。
本发明实施例中,还提供了一种ABO血型双判读反定型检测方法,本实施例将所述方法运用于前述检测系统中,包括如下步骤:
1)全血洗涤,3个离心管中各加入A型全血1ml,3个离心管中各加入B型全血1ml,3个离心管中各加入O型全血1ml,后在每个离心管中加入1ml10mmPBS,摇匀后,放入离心机中以3000rpm的速度离心分离5min。离心后去上清,再次往每只离心管中加入2ml10mmPBS,摇匀后放入离心机以3000rpm的速度离心分离5min。重复以上离心和加入PBS步骤直到上清为无色透明为止;
2)提取血型抗原,每次往步骤1)中的离心管加入2ml提取液(1%Triton X-100和10mm PBS溶液),摇匀后,用3000rpm的速度离心5min。去上清后再次加入2ml提取液(1%Triton X-100和10mm PBS溶液),用3000rpm的速度离心5分钟。重复以上步骤直到上清为无色透明为止,上清为抗原提取物;
3)合成纳米金胶体粒子,用100ml量筒量取100ml超纯水加入到250ml锥形瓶中,将锥形瓶放在磁力搅拌器上,将磁力搅拌器转速调到360rpm,取一个5cm柱形磁力搅拌子放入到锥形瓶中,调整锥形瓶位置使磁力搅拌子平稳转动;称取谷胱甘肽2.0000g加入到锥形瓶中,待谷胱甘肽试剂完全溶解后,称取氯金酸4.0000g加入到锥形瓶中,待氯金酸试剂完全溶解后,称取柠檬酸钠1.0000g加入到锥形瓶中,持续搅拌5min,使所加入试剂完全溶解;在加入试剂完全溶解后,将锥形瓶放入80℃集热式磁力搅拌器中,集热式磁力搅拌器的转速为360rpm,调整锥形瓶位置使搅拌子能够平稳转动;从锥形瓶放入集热式磁力搅拌器时开始计时,加热120min,加热结束后,将锥形瓶从集热式磁力搅拌器中取出,放在磁力搅拌器上用360rpm的速度搅拌直到冷却至室温,得到8-30nm的纳米金胶体,从锥形瓶中取出磁力搅拌子,锥形瓶用橡皮塞密封后放入4℃冰箱中保存;
4)血型抗原包被到所述纳米金粒子表面:先将纳米金胶体溶液的pH调至7,后将所述纳米金胶体溶液用稀释液稀释至浓度为0.1%~5%,将所述血型抗原用稀释液稀释至浓度为0.5mg/ml~10mg/ml,后一边剧烈磁力搅拌,一边将稀释后的所述血型抗原分别缓慢加入到pH调至7的所述纳米金胶体溶液中,形成含有血型抗原-纳米金的溶液,将含有所述血型抗原-纳米金的溶液以3000rpm速度离心5min得到的沉淀物即为包被有血型抗原的纳米金粒子;
优选的,所述稀释液的配方为:
其中,将步骤4)中得到的包被有血型抗原的纳米金粒子加入ABS塑料板的凹槽内,在8~25℃干燥,即得到反定型检测系统。
其中,检测结果可以通过肉眼判读获得或者通过荧光识别仪器判读获得,肉眼判读检测结果具体如下:在检测系统的凹槽内加入50ul血清,置于摇床或者手动摇匀8min,观察凹槽,出现凝集为阳性,未出现凝集为阴性;荧光仪器判读检测结果具体如下:检测系统的凹槽内包被有A血型抗原的纳米金粒子、B血型抗原的纳米金粒子、和O血型抗原的纳米金粒子,加入50ul血清后,通过荧光识别仪器上的荧光信号强度是否出现阳性。
经过大量的实验证明,一种ABO血型双判读反定型检测方法采用谷胱甘肽还原氯金酸制备纳米金胶体粒子,谷胱甘肽是一种具有生物活性的物质,在制备纳米金胶体粒子的过程中不仅作为还原剂,同时其结构上含有巯基可以调控纳米金粒子的生长尺寸,从而使制备的纳米金胶体粒径在8-30nm,其自带荧光效应,因此将血型抗原包被在8-30nm的纳米金胶体上时,无需额外标记荧光信号,使得血型检测方法更加方便快速。同时谷胱甘肽还是一种良好的分散剂,使得制备的纳米金胶体溶液稳定,不易发生团聚,用其与抗原粒子包被具有更长的保质期。
本发明设计的反定型检测系统不仅可以用肉眼判读,还可以用荧光分析仪判读。
实施例二
如图1所示,一种ABO血型双判读反定型检测卡,所述检测卡上设置有三个凹槽,所述凹槽为椭圆浅底状,所述凹槽的边角圆弧边角半径为19.82mm,所述凹槽的底面圆弧半径为1.5mm。
其中,所述检测系统的材质为ABS塑料。
本发明实施例中,还提供了一种ABO血型双判读反定型检测方法,本实施例将所述方法运用于前述检测系统中,包括如下步骤:
1)全血洗涤,3个离心管中各加入A型全血1ml,3个离心管中各加入B型全血1ml,3个离心管中各加入O型全血1ml,后在每个离心管中加入1ml10mmPBS,摇匀后,放入离心机中以3000rpm的速度离心分离5min。离心后去上清,再次往每只离心管中加入2ml10mmPBS,摇匀后放入离心机以3000rpm的速度离心分离5min。重复以上离心和加入PBS步骤直到上清为无色透明为止;
2)提取血型抗原,每次往步骤1)中的离心管加入2ml提取液(1%Triton X-100和10mm PBS溶液),摇匀后,用3000rpm的速度离心5min。去上清后再次加入2ml提取液(1%Triton X-100和10mm PBS溶液),用3000rpm的速度离心5分钟。重复以上步骤直到上清为无色透明为止,上清为抗原提取物;
3)合成纳米银胶体,用100ml量筒量取100ml超纯水加入到250ml锥形瓶中,将锥形瓶放在磁力搅拌器上,将磁力搅拌器转速调到360rpm,取一个5cm柱形磁力搅拌子放入到锥形瓶中,调整锥形瓶位置使磁力搅拌子平稳转动,称取硝酸银2.0000g加入到锥形瓶中,待硝酸银试剂完全溶解后,称取聚乙烯醇4.0000g加入到锥形瓶中,待聚乙烯醇试剂完全溶解后,称取柠檬酸钠1.0000g加入到锥形瓶中,持续搅拌5min,使所加入试剂完全溶解,在加入试剂完全溶解后,将锥形瓶放入80℃集热式磁力搅拌器中,转速为360rpm,调整锥形瓶位置使搅拌子能够平稳转动,从锥形瓶放入集热式磁力搅拌器时开始计时,加热120分钟,加热结束后,将锥形瓶从集热式磁力搅拌器中取出,放在磁力搅拌器上用360rpm的速度搅拌直到冷却至室温,得到纳米银粒子,从锥形瓶中取出磁力搅拌子,锥形瓶用橡皮塞密封后放入4℃冰箱中保存;
4)血型抗原包被到所述纳米银粒子表面:先将所述纳米银胶体溶液的pH调至7,后将所述纳米银胶体溶液用稀释液稀释至浓度为0.1%~5%,将所述血型抗原用稀释液稀释至浓度为0.5mg/ml~10mg/ml,后一边剧烈磁力搅拌,一边将稀释后的所述血型抗原缓慢加入到pH调至7的所述纳米银胶体溶液中,形成含有血型抗原-纳米银的溶液,将含有所述血型抗原-纳米银的溶液以3000rpm速度离心5min得到的沉淀物即为包被有血型抗原的纳米银粒子;
5)荧光信号标记:将900μl pH6.0浓度为0.05M的MES缓冲液加入到100μl浓度为1%的荧光微球介质溶液中,漩涡振荡混匀,后加入20μl浓度为20mg/ml的EDC溶液并室温振荡活化,后在16℃下以18000rpm速度离心20min,弃上清,沉淀物用1ml pH6.0浓度为0.05M的MES缓冲液复溶,超声分散后加入步骤4)中得到的所述包被有血型抗原的纳米银粒子,使包被有血型抗原的纳米银粒子的最终浓度为200μg/ml,于室温下在旋转培养器上偶联2h后,加入50μl浓度为20%的BSA溶液,在旋转培养器上封闭过夜,后在16℃下以18000rpm速度离心20min,弃上清,沉淀用10mmol的PBS离心复溶,重复两次离心和复溶步骤后,得到标记荧光信号的抗原粒子,储存在总成保存液中备用。
其中,所述荧光微球介质为量子点、8-30nm的纳米金、荧光标记的纳米金和荧光素标记的乳胶微球中的一种。
其中,所述稀释液的配方为:
其中,所述总成保存液的配方为:
其中,将所述标记荧光信号的抗原粒子加入所述凹槽内,在8~25℃干燥,即得到反定型检测系统。
其中,检测结果可以通过肉眼观察获得或者通过荧光识别仪器获得。
其中,检测结果可以通过肉眼判读获得或者通过荧光识别仪器判读获得,合成的纳米银粒子表面具有长臂位点,这些长臂位点作为修饰点能够结合多种血型抗原,且纳米银稳定,将血型抗原包被到纳米银表面后,可以与多种荧光信号连接,因此将带有荧光信号的纳米银抗原粒子对样本进行检测时不仅可以肉眼判读,还可以用荧光分析仪判读。
肉眼判读检测结果具体如下:在检测系统的凹槽内加入50ul血清,置于摇床或者手动摇匀8min,观察凹槽,出现凝集为阳性,未出现凝集为阴性;荧光仪器判读检测结果具体如下:检测系统的凹槽内包被有荧光标记的A血型抗原粒子、荧光标记的B血型抗原粒子和荧光标记的O血型抗原粒子,加入50ul血清后,通过荧光识别仪器上的荧光信号强度是否出现阳性。
实施例三
采用实施例一中得到反定型检测系统用于实验,规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒。
1、抗原强度评估
分型样品:S1,S2,S3是抗A型参考品,S1含有抗A1抗体,S2含有A2抗体,S3同时含有A1和A2抗体,购买自Millipore,配制为1/64梯度;S4,S5,S6是抗B型参考品,S4含有抗B抗体1/64;S5含有抗B抗体1/64和抗H抗体1/512,S6含有抗B抗体1/128和H抗体1/512,抗体购买自Millipore;S7,S8,S9是抗AB型参考品,含有抗A和抗B抗体,抗体购买自Millipore,配制浓度为1/32,1/64,1/128梯度;
最低检出量参考品:LA是A细胞膜抗原粒子最低检出量参考品,为抗A抗体的1/128稀释产物;LB是B细胞膜抗原粒子最低检出量参考品,为抗B抗体的1/128稀释产物;LH是O细胞膜抗原粒子最低检出量参考品,为抗H抗体的1/128稀释产物。抗A抗体,抗B抗体,抗H抗体均采购自Millipore。
精密性参考品:精密性参考品是抗H的参考品,相当于O型血血清模拟样本。
S1,S2,S3在A测试孔出现凝集现象,现象清晰,B测试孔和Ctl测试孔均不出现凝集;
S4,S5,S6在B测试孔出现凝集现象,现象清晰,A测试孔和Ctl测试孔均不出现凝集;
S7,S8,S9在A测试孔和B测试孔出现凝集现象,现象清晰;
抗原强度评估结果如下表,反应时间为2分钟:
由上表可以看出,规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒的反定型检测系统抗原强度符合设计要求。
2、灵敏度评估
LA参考品在A测试孔2分钟内出现凝集现象,3分钟内凝集强度≥3+;
LB参考品在B测试孔2分钟内出现凝集现象,3分钟内凝集强度≥3+;
LH参考品在Ctl测试孔2分钟内出现凝集现象,3分钟内凝集强度≥3+;
以上结果说明规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒的反定型检测系统灵敏度符合设计要求。
3、特异性/交叉反应评估
筛选了8种不同类型的标本,对反定型检测系统的性能做进一步评价。收集了200份不同类型的全血样本,其中包括新生儿全血50份、59岁以上老人全血50份、肿瘤患者全血50份、高血压患者全血10份、低纤维蛋白原血症患者全血10份、血栓性疾病患者全血10份、红细胞减少症患者全血10份、RF阳性全血10份。
实验结果如下表所示:
实验证实,规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒的反定型检测系统特异性好,新生儿血样本(出生未满28天)、59岁以上人群血样本、肿瘤患者血样本;高血脂、低纤维蛋白原血症及血栓性疾病患者、红细胞溶血或减少症患者标本、类风湿标本等各种类型的全血均不会引起对测试的干扰。
4、批间差评估
从每种规格的三批产品中各取10人份,每种规格共30人份,用精密性参考品平行检测30次:2分钟内在A测试孔和B测试孔凝集明显,结果均为阳性。结论:规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒的反定型检测系统没有明显的批间差,符合设计要求。
5、外部临床实验评估
选择4家临床单位进行外部的临床评估,共10812例标本,标本来源的性别比例、年龄分布、临床疾病分布情况等指标满足了临床评估对标本来源的广泛性和代表性要求,对照试剂采用两家公司研发的已上市的两种试剂盒。综合4家临床试验结果,统计总体性能评价结果。
由表可见,规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒的反定型检测系统本与已上市的对照试剂盒相比,对试验中所有的静脉全血标本及指尖血标本检测结果完全相符。表明该法不仅准确,而且操作方便快捷,结果易于判读,适合ABO血型的常规检测,尤其适合于流动采血点的血型初筛。
综上所述,结果表明,规格为1T/盒、20T/盒、40T/盒、50T/盒、100T/盒的反定型检测系统准确性、灵敏度、特异性、精密性、批间各项指标的验证结果均达到了设计的要求,能够满足临床实际需要。
实施例四
采用实施例二中得到的反定型检测系统用于肉眼判读和荧光识别仪器判读对比试验。
实施例二中得到的反定型检测系统凹槽内的物质包括以下:标记量子点荧光信号的抗原粒子(黄红色荧光色)、标记荧光素的乳胶微球荧光信号的抗原粒子(紫红色荧光色)、标记8-30nm的纳米金荧光信号的抗原粒子(淡红色荧光色)。
将所述反定型检测系统分为平行2组,各对12个血样(A,B,O,AB各三例)进行检测,将检测结果与对照试剂(某已上市的反定型检测卡)进行比较,2组反定型检测系统分别用肉眼判读和单通道荧光免疫分析仪判读。
标记量子点荧光信号的抗原粒子的反定型检测系统实验结果见下表:
标记荧光素的乳胶微球荧光信号的抗原粒子的反定型检测系统实验结果见下表:
样本 | 对照试剂 | 肉眼判读 | 仪器判读 |
A1 | A | A | A(A孔紫红色) |
A2 | A | A | A(A孔紫红色) |
A3 | A | A | A(A孔紫红色) |
B1 | B | B | B(B孔紫红色) |
B2 | B | B | B(B孔紫红色) |
B3 | B | B | B(B孔紫红色) |
AB1 | AB | AB | AB(A,B孔紫红色) |
AB2 | AB | AB | AB(A,B孔紫红色) |
AB3 | AB | AB | AB(A,B孔紫红色) |
O1 | O | O | O(均无色) |
O2 | O | O | O(均无色) |
O3 | O | O | O(均无色) |
标记8-30nm的纳米金荧光信号的抗原粒子的反定型检测系统实验结果见下表:
由此可见,采用荧光分析仪对血型检测结果进行判读的优点如下:
多色荧光标记可以有利于区分和质控试剂的包被准确性,进一步放置交叉。抗原粒子可分别标记不同颜色的荧光信号物,通过荧光分析仪器判读用于识别对应的抗原粒子。在实际检测过程中,以荧光分析仪进行结果判读的情况下,通过不用颜色荧光的识别,可以有效的减少抗体错误识别的情况,达到包被抗原的有效质控,从而提高检测准确性。此外,相比于肉眼判读,为了能够使检测结果能用肉眼识别,需要使用大量的荧光信号物、抗原粒子和样本,而荧光分析仪具有高的检测灵敏度,即使是微弱的荧光信号,荧光分析仪也可以判读,因此采用荧光分析仪判读节省了成本,不会造成资源浪费。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)合成荧光纳米粒子胶体溶液,所述荧光纳米粒子胶体溶液包括纳米金胶体溶液或纳米银胶体溶液,所述纳米金胶体溶液由谷胱甘肽还原氯金酸制备而得;
2)血型抗原包被到所述荧光纳米粒子表面:先将所述纳米金胶体溶液或所述纳米银胶体溶液的pH调至7,后将所述纳米金胶体溶液或所述纳米银胶体溶液用稀释液稀释至浓度为0.1%~5%,将所述血型抗原用稀释液稀释至浓度为0.5mg/ml~10mg/ml,后一边搅拌,一边将稀释后的所述血型抗原分别缓慢加入到pH调至7的所述纳米金胶体溶液或所述纳米银胶体溶液中,形成含有血型抗原-纳米金或血型抗原-纳米银的溶液,将含有所述血型抗原-纳米金或血型抗原-纳米银的溶液离心得到的沉淀物即为包被有血型抗原的纳米金粒子或包被有血型抗原的纳米银粒子;
3)荧光信号标记:将缓冲液加入到荧光微球介质溶液中,漩涡振荡混匀,后加入EDC溶液室温振荡活化,离心弃上清,沉淀物用MES缓冲液复溶,超声分散后加入步骤4)中所述的包被有血型抗原的纳米银粒子,于室温下在旋转培养器上偶联2h后,加入BSA溶液,在旋转培养器上封闭过夜,离心弃上清,沉淀用PBS复溶,重复两次离心和复溶步骤后,得到标记荧光信号的抗原粒子,储存在总成保存液中备用。
2.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,所述检测方法还包括全血洗涤和提取血型抗原。
3.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,所述荧光微球介质为量子点、荧光标记的纳米金和荧光素标记的乳胶微球中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,所述稀释液的配方为:
5.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,所述总成保存液的配方为:
6.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,所述纳米金粒子的粒径为8-30nm。
7.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,将所述标记荧光信号的抗原粒子加入所述凹槽内,在8~25℃干燥。
8.根据权利要求1所述的一种ABO血型双判读反定型检测方法,其特征在于,检测结果可以通过肉眼判读获得或者通过荧光识别仪器判读获得。
9.一种ABO血型双判读反定型检测系统,其特征在于,采用权利要求1至8任一项所述的ABO血型双判读反定型检测方法。
10.根据权利要求9所述的一种ABO血型双判读反定型检测系统,其特征在于,所述检测系统包括检测卡,所述检测卡上设置有一个以上的凹槽,所述凹槽为椭圆浅底状,所述凹槽的边角圆弧和底面圆弧的半径比例为0.07568;所述检测卡的材质为ABS塑料。
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Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1475805A (zh) * | 2002-08-15 | 2004-02-18 | 陕西西大北美基因股份有限公司 | 磁性荧光微球及其制备方法和采用该磁性荧光微球进行生物分子检测的方法 |
CN201053966Y (zh) * | 2007-05-21 | 2008-04-30 | 四川省迈克科技有限责任公司 | 血型及输血配型快速检测试剂盒 |
CN101245387A (zh) * | 2008-01-22 | 2008-08-20 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种用于dna检测的纳米金信号探针及其制备方法和dna检测的方法 |
CN101832936A (zh) * | 2009-03-10 | 2010-09-15 | 苏州市长三角系统生物交叉科学研究院有限公司 | 一种基于纳米金与核酸结构的比色检测法及其试剂盒 |
CN101864291A (zh) * | 2010-05-26 | 2010-10-20 | 上海大学 | 荧光纳米粒子Ru(bpy)3/SiO2、其制备方法及应用 |
CN103033632A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-10 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | Abo血型反定型胶体金试剂盒及制备方法 |
CN203101407U (zh) * | 2012-12-12 | 2013-07-31 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | Abo血型反定型胶体金试剂盒 |
CN103901197A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-07-02 | 华中科技大学 | 一种癌胚抗原含量检测方法及装置 |
CN104360087A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-02-18 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 一种检测Miltenberger血型抗体的方法 |
CN105038771A (zh) * | 2015-05-18 | 2015-11-11 | 汕头大学 | 一种谷胱甘肽-金银合金纳米材料及其制备方法与应用 |
CN207081742U (zh) * | 2017-08-03 | 2018-03-09 | 武汉血液中心 | 一种ABO/Rh血型诊断试纸卡 |
CN109725144A (zh) * | 2019-01-03 | 2019-05-07 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种jmh血型抗原芯片及其在红细胞意外抗体检测中的应用 |
-
2019
- 2019-08-21 CN CN201910772164.9A patent/CN110426524A/zh active Pending
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1475805A (zh) * | 2002-08-15 | 2004-02-18 | 陕西西大北美基因股份有限公司 | 磁性荧光微球及其制备方法和采用该磁性荧光微球进行生物分子检测的方法 |
CN201053966Y (zh) * | 2007-05-21 | 2008-04-30 | 四川省迈克科技有限责任公司 | 血型及输血配型快速检测试剂盒 |
CN101245387A (zh) * | 2008-01-22 | 2008-08-20 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种用于dna检测的纳米金信号探针及其制备方法和dna检测的方法 |
CN101832936A (zh) * | 2009-03-10 | 2010-09-15 | 苏州市长三角系统生物交叉科学研究院有限公司 | 一种基于纳米金与核酸结构的比色检测法及其试剂盒 |
CN101864291A (zh) * | 2010-05-26 | 2010-10-20 | 上海大学 | 荧光纳米粒子Ru(bpy)3/SiO2、其制备方法及应用 |
CN103033632A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-10 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | Abo血型反定型胶体金试剂盒及制备方法 |
CN203101407U (zh) * | 2012-12-12 | 2013-07-31 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | Abo血型反定型胶体金试剂盒 |
CN103901197A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-07-02 | 华中科技大学 | 一种癌胚抗原含量检测方法及装置 |
CN104360087A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-02-18 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 一种检测Miltenberger血型抗体的方法 |
CN105038771A (zh) * | 2015-05-18 | 2015-11-11 | 汕头大学 | 一种谷胱甘肽-金银合金纳米材料及其制备方法与应用 |
CN207081742U (zh) * | 2017-08-03 | 2018-03-09 | 武汉血液中心 | 一种ABO/Rh血型诊断试纸卡 |
CN109725144A (zh) * | 2019-01-03 | 2019-05-07 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种jmh血型抗原芯片及其在红细胞意外抗体检测中的应用 |
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